本發(fā)明涉及多糖的制備領域，具體是一種辣椒多糖的制備方法。
背景技術：
辣椒中含有多種有效成分如辣椒紅素、辣椒堿、辣椒多糖、有機酸和維生素等。研究發(fā)現(xiàn)辣椒中的多糖不僅具有抗癌、抗衰老、抗炎和抗病毒等多方面的功能，而且具有較好的抗氧化能力。
目前，辣椒多糖的提取方法有乙醇回流輔以超聲波提取，木瓜蛋白酶處理除蛋白；辣椒渣脫脂后酶處理，再進行水浸提，除蛋白和超濾等方法。但這些傳統(tǒng)方法都存在提取率較低、純度不高等缺點。
超臨界CO2萃取技術使用CO2作為超臨界萃取流體，具有流程簡單，臨界點容易達到，無毒、無臭、無污染、不易燃、易去除、價廉、使用安全、抑菌，一般情況下不與被萃取物發(fā)生反應等優(yōu)點，提取率高，在食品、醫(yī)藥等領域應用廣泛。
目前，現(xiàn)有的辣椒多糖提取方法中，沒有關于利用超臨界CO2萃取技術提取制備辣椒多糖的相關報道。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種提取率及純度高的辣椒多糖的制備方法，克服了傳統(tǒng)方法存在的提取率較低、純度不高等缺點，以解決上述背景技術中提出的問題。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：
一種辣椒多糖的制備方法，包括以下步驟：
(1)將干紅辣椒去籽，粉碎后過15～25目篩，導入超臨界CO2萃取釜中，封釜，排除空氣，通入攜帶劑，萃取3～4h，分離萃取液；
(2)向萃取液中加入其1/4體積的三氯乙酸除蛋白，3000r/min轉(zhuǎn)速下離心8～12min，取最上層清液；
(3)上層清液用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.4～7.6，加熱回流，用0.8～1.2％硅藻土脫色，抽濾，得抽濾液；
(4)抽濾液在78～82℃水浴中濃縮至原體積的1/3，再加入3～5倍體積的95％乙醇，攪拌均勻后，3000r/min轉(zhuǎn)速下離心8～12min，沉淀分別用無水乙醇和乙醚洗滌，真空干燥，得辣椒多糖粗制品；
(5)配制1％w/v的辣椒多糖粗制品，3000r/min離心8～12min除去不溶物，上清液用NaOH調(diào)節(jié)pH至7.4～7.6，加入0.2wt％的堿性蛋白酶溶液，48～52℃下酶解3.5～4.5h，10000r/min轉(zhuǎn)速下離心8～12min；
(6)上清液通過弱酸型陽離子交換樹脂柱吸附，冰水洗至澄清，再用8wt％的(NH4)2SO4溶液洗脫，得洗脫液；
(7)洗脫液蒸餾水透析22～26h，透析液在78～82℃的水浴中進行濃縮，加3～5倍體積的95％乙醇，攪拌均勻后，3000r/min轉(zhuǎn)速離心8～12min，沉淀再分別用無水乙醇和乙醚洗滌，真空干燥，得辣椒多糖精制品。
作為本發(fā)明進一步的方案：所述步驟(1)中，萃取溫度44.0～44.3℃，萃取壓力22.0～22.4MPa。
作為本發(fā)明再進一步的方案：所述步驟(1)中，攜帶劑為蒸餾水，用量為410～420.0ml/kg。
與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是：
本發(fā)明采用超臨界CO2萃取技術提取辣椒多糖后，堿性蛋白酶處理去除蛋白質(zhì)，再經(jīng)過離子交換層析純化精制，去蛋白效果好，提取率及純度高，采用724弱酸型陽離子交換樹脂層析，可以去除一些帶負電和不帶電的雜質(zhì)，分離純化效果更佳。
具體實施方式
下面將結合本發(fā)明實施例，對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。
試劑：超臨界萃取系統(tǒng)(美國STF-100)、透析袋(Sigma)、724弱酸型陽離子交換樹脂(安徽三星樹脂)，堿性蛋白酶(碧云天)、常規(guī)化學試劑均購自北京鼎國生物技術有限公司。
實施例1
辣椒多糖的制備方法，包括以下步驟：
(1)將干朝天椒去籽，粉碎后過15目篩，導入超臨界CO2萃取釜中，封釜，排除空氣，通入攜帶劑，萃取4h，萃取溫度44.1℃，萃取壓力22.0MPa，分離萃取液；其中，攜帶劑為蒸餾水，用量為410ml/kg；
(2)向萃取液中加入其1/4體積的三氯乙酸除蛋白，3000r/min轉(zhuǎn)速下離心8min，取最上層清液；
(3)上層清液用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.6，加熱回流，用0.8％硅藻土脫色，抽濾，得抽濾液；
(4)抽濾液在82℃水浴中濃縮至原體積的1/3，再加入5倍體積的95％乙醇，攪拌均勻后，3000r/min轉(zhuǎn)速下離心12min，沉淀分別用無水乙醇和乙醚洗滌，真空干燥，得辣椒多糖粗制品；稱重，辣椒多糖提取率達到4.6％；
(5)配制1％w/v的辣椒多糖粗制品，3000r/min離心12min除去不溶物，上清液用NaOH調(diào)節(jié)pH至7.6，加入0.2wt％的堿性蛋白酶溶液，48℃下酶解4.5h，10000r/min轉(zhuǎn)速下離心12min；
(6)上清液通過弱酸型陽離子交換樹脂柱吸附，冰水洗至澄清，再用8wt％的(NH4)2SO4溶液洗脫，得洗脫液；
(7)洗脫液蒸餾水透析26h，透析液在78℃的水浴中進行濃縮，加5倍體積的95％乙醇，攪拌均勻后，3000r/min轉(zhuǎn)速離心12min，沉淀再分別用無水乙醇和乙醚洗滌，真空干燥，得辣椒多糖精制品。
經(jīng)硫酸-蒽酮比色測定，辣椒多糖的純度達到90.8％。
實施例2
辣椒多糖的制備工藝，步驟如下：
(1)將干大金條辣椒去籽后，粉碎成20目，導入超臨界CO2萃取釜中，封釜，排除空氣，通入攜帶劑；取條件為：萃取溫度44.0℃，萃取壓力22.4MPa；攜帶劑為蒸餾水，用量為415.0ml/kg，萃取3.5h；
(2)向萃取液中加入1/4體積的三氯乙酸除蛋白，3000r/min轉(zhuǎn)速下離心10min，取最上層清液；
(3)上清液用1mol/L NaOH調(diào)pH至7.5，加熱回流，用1％硅藻土脫色，抽濾；
(4)抽濾液在80℃水浴濃縮至原體積的1/3，再加入4倍體積的95％乙醇，攪拌均勻后，3000r/min轉(zhuǎn)速下離心10min，沉淀分別用無水乙醇和乙醚洗滌，真空干燥，得辣椒多糖粗制品；稱重，辣椒多糖提取率達到4.7％；
(5)配制1w/v％的辣椒多糖粗制品，3000r/min離心10min除去不溶物，上清液用1mol/L NaOH調(diào)pH至7.5，加入0.2wt％的堿性蛋白酶，50℃下酶解4h，10000r/min轉(zhuǎn)速下離心10min；
(6)上清液通過724弱酸型陽離子交換樹脂柱吸附，冰水洗至澄清，再用8％(NH4)2SO4溶液洗脫，流速為1.5ml/min，得洗脫液；
(7)洗脫液蒸餾水透析24h，透析液80℃水浴濃縮，加4倍體積的95％乙醇，攪拌均勻后，3000r/min轉(zhuǎn)速下離心10min，沉淀再分別用無水乙醇和乙醚洗滌，真空干燥，即得辣椒多糖精制品。
經(jīng)硫酸-蒽酮比色測定，辣椒多糖的純度達到91.3％。
實施例3
辣椒多糖的制備方法，包括以下步驟：
(1)將干小米椒去籽，粉碎后過25目篩，導入超臨界CO2萃取釜中，封釜，排除空氣，通入攜帶劑，萃取3h，萃取溫度44.3℃，萃取壓力22.2MPa，分離萃取液；其中，攜帶劑為蒸餾水，用量為420.0ml/kg。
(2)向萃取液中加入其1/4體積的三氯乙酸除蛋白，3000r/min轉(zhuǎn)速下離心8min，取最上層清液；
(3)上層清液用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.4，加熱回流，用1.2％硅藻土脫色，抽濾，得抽濾液；
(4)抽濾液在82℃水浴中濃縮至原體積的1/3，再加入3倍體積的95％乙醇，攪拌均勻后，3000r/min轉(zhuǎn)速下離心8min，沉淀分別用無水乙醇和乙醚洗滌，真空干燥，得辣椒多糖粗制品；稱重，辣椒多糖提取率達到4.8％；
(5)配制1％w/v的辣椒多糖粗制品，3000r/min離心12min除去不溶物，上清液用NaOH調(diào)節(jié)pH至7.4，加入0.2wt％的堿性蛋白酶溶液，52℃下酶解3.5h，10000r/min轉(zhuǎn)速下離心12min；
(6)上清液通過弱酸型陽離子交換樹脂柱吸附，冰水洗至澄清，再用8wt％的(NH4)2SO4溶液洗脫，得洗脫液；
(7)洗脫液蒸餾水透析26h，透析液在82℃的水浴中進行濃縮，加3倍體積的95％乙醇，攪拌均勻后，3000r/min轉(zhuǎn)速離心12min，沉淀再分別用無水乙醇和乙醚洗滌，真空干燥，得辣椒多糖精制品。
經(jīng)硫酸-蒽酮比色測定，辣椒多糖的純度達到91.5％。
對于本領域技術人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實施例的細節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點來看，均應將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。