1.一種雙酶共固定化方法,其特征在于,向含有待固定化的α-乙酰乳酸脫羧酶和脯氨酸內(nèi)切酶的緩沖溶液中加入氯化鈣溶液,在設(shè)定溫度下充分反應(yīng),離心分離,洗滌,得到形成具有納米花結(jié)構(gòu)的固定化酶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙酶共固定化方法,其特征在于,所述固定化酶的結(jié)構(gòu)為α-乙酰乳酸脫羧酶-磷酸鈣-脯氨酸內(nèi)切酶,其中磷酸鈣為載體,每毫克載磷酸鈣可固定化酶的含量為0.92-47.68mg。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的雙酶共固定化方法,其特征在于,所述緩沖溶液為磷酸鹽緩沖溶液,所述磷酸鹽緩沖溶液的濃度為4mmol/L,在所述磷酸鹽緩沖溶液中,α-乙酰乳酸脫羧酶和脯氨酸內(nèi)切酶的總濃度為0.1-4.8mg/ml,優(yōu)選為2.4mg/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的雙酶共固定化方法,其特征在于,所述氯化鈣溶液的濃度為0.1-0.5mol/L,優(yōu)選為0.1-0.3mol/L,進(jìn)一步優(yōu)選為0.2mol/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的雙酶共固定化方法,其特征在于,所述緩沖溶液與所述氯化鈣溶液的體積比為1:1-200:1,優(yōu)選為30:1-80:1,進(jìn)一步優(yōu)選為50:1。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的雙酶共固定化方法,其特征在于,所述設(shè)定溫度為0-60℃,優(yōu)選為0-40℃;反應(yīng)時(shí)間為1-24小時(shí),優(yōu)選為4-18小時(shí),進(jìn)一步優(yōu)選為12小時(shí)。
7.一種如權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的雙酶共固定化方法制備得到的固定化酶。
8.一種如權(quán)利要求7所述的固定化酶在啤酒生產(chǎn)過程中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用,其特征在于,所述固定化酶在啤酒生產(chǎn)過程中的清酒的最后過濾階段添加。