本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種銀杏葉水溶性膳食纖維的提取方法。

背景技術(shù)：

銀杏屬裸子植物銀杏科銀杏屬落葉喬木植物，為亞熱帶、溫帶樹種，在我國(guó)廣泛栽培，是我國(guó)主要的經(jīng)濟(jì)樹種之一。研究發(fā)現(xiàn)銀杏制劑有對(duì)防治心腦血管疾病、老年癡呆癥和對(duì)抗血小板活化因子的作用，目前已經(jīng)研制開發(fā)了銀杏植物藥制劑、功能性食品、保健品和化妝品等諸多產(chǎn)品，表現(xiàn)出明顯的經(jīng)濟(jì)優(yōu)勢(shì)。目前的銀杏制劑產(chǎn)品多以銀杏白果為活性物質(zhì)，而其他部位的利用則較少。

事實(shí)上已有研究表明，銀杏葉也具有很高的藥用價(jià)值，如活血止痛、澀腸止瀉、斂肺平喘等。銀杏葉營(yíng)養(yǎng)豐富，主要有黃酮類、萜類、酚類、生物堿等，且含有較多水溶性膳食纖維，是一種藥食同源物質(zhì)。膳食纖維根據(jù)其溶解性分為水溶性膳食纖維(SDF)和非水溶性膳食纖維(DF)。其中SDF對(duì)人體生理功能大于DF，SDF具有廣泛的營(yíng)養(yǎng)保健功效，可以預(yù)防肥胖病、心臟病、糖尿病等疾病，SDF可以被腸道中的微生物徹底分解，產(chǎn)生各種短鏈脂肪酸，對(duì)直腸癌和結(jié)腸癌的預(yù)防與治療有一定的效果，SDF有利于雙歧桿菌等有益菌的生長(zhǎng)繁殖，可改善胃腸功能。隨著人們生活水平的提高，各類“文明病”的不斷出現(xiàn)，使得膳食纖維的重要性逐漸被人們所認(rèn)識(shí)，如何安全高效地制備可溶性膳食纖維產(chǎn)品，越來(lái)越受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的重視。因此，如何進(jìn)一步有效開發(fā)銀杏葉的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，開發(fā)更多的銀杏葉制劑產(chǎn)品，可進(jìn)一步擴(kuò)大銀杏產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種銀杏葉水溶性膳食纖維的提取方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中銀杏葉提取物開發(fā)較差的問題。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所述的銀杏葉水溶性膳食纖維的提取方法，包括如下步驟：

(1)取干燥的銀杏葉粉碎，過篩，加入水為提取劑，并加入纖維素酶和果膠酶的復(fù)合酶劑進(jìn)行酶法提取，得到提取液；

(2)將所得提取液過濾，取濾液經(jīng)減壓濃縮得到濃縮液，取濃縮液醇沉得到沉淀物，即得到所述銀杏葉水溶性膳食纖維。

所述步驟(1)中，所述酶法提取步驟為調(diào)節(jié)pH值4.5-5.5，控制酶解溫度45℃-55℃進(jìn)行酶解。

所述步驟(1)中，所述纖維素酶的添加量為所述銀杏葉原料質(zhì)量的0.6-1.0wt％，并優(yōu)選0.8wt％；所述果膠酶的添加量為所受銀杏葉原料質(zhì)量的0.5-0.8wt％，并優(yōu)選0.6wt％。

所述步驟(1)中，所述提取劑水的體積與所述銀杏葉原料的質(zhì)量比例為15ml/g-30ml/g，并優(yōu)選20ml/g。

所述步驟(1)中，所述調(diào)節(jié)pH值的步驟為采用水楊酸調(diào)節(jié)。

所述步驟(2)中，所述提取液過濾的步驟是采用將提取液于真空度0.08MPa-0.10MPa和溫度15℃-30℃條件下，采用中速濾紙過濾，得濾液。

所述步驟(2)中，所述的減壓濃縮步驟是指將所得濾液在真空度0.08MPa-0.10MPa和溫度50℃-60℃條件下濃縮至初始濾液體積的1/3，得濃縮液。

所述步驟(2)中，所述醇沉步驟為將濃縮液加3-5倍體積的90-95wt％的乙醇進(jìn)行醇沉36h-48h。

所述步驟(2)中，還包括將所得沉淀物進(jìn)行冷凍干燥的步驟，所述冷凍干燥的條件為在真空度小于20Pa，冷阱溫度-50℃～-60℃條件下干燥殆盡。

本發(fā)明還公開了由所述方法提取得到的銀杏葉水溶性膳食纖維。

本發(fā)明所述銀杏葉水溶性膳食纖維的提取方法采用纖維素酶和果膠酶為復(fù)合酶制劑，以銀杏葉為原料、以水為提取劑進(jìn)行酶解提取水溶性膳食纖維，不僅操作簡(jiǎn)便、廉價(jià)、無(wú)毒，且提取的水溶性膳食纖維可作為新的天然綠色食品添加劑添加到乳制品、飲料等食品中，既增加了產(chǎn)品的保健功能，也為銀杏葉的綜合開發(fā)利用提供廣闊的市場(chǎng)前景。本發(fā)明所述方法提取水溶性膳食纖維的轉(zhuǎn)移率大于90％，所得提取產(chǎn)物中，水溶性膳食纖維純度大于85％，且提取重現(xiàn)性較好。

附圖1-4顯示的本發(fā)明所述銀杏葉水溶性膳食纖維(SDF)與VC的保健性能對(duì)比，本發(fā)明所述方法提取得到的銀杏葉水溶性膳食纖維，可有效清除·OH、O₂^-自由基、并且對(duì)DPPH和NO₂^-具有較好的清除效率，本發(fā)明所述方法制得的銀杏葉水溶性膳食纖維(SDF)的保健效果要優(yōu)于VC的效果。

附圖說明

為了使本發(fā)明的內(nèi)容更容易被清楚的理解，下面根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例并結(jié)合附圖，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，其中，

圖1為本發(fā)明所述銀杏葉水溶性膳食纖維(SDF)和VC對(duì)·OH的清除效果對(duì)比；

圖2為本發(fā)明所述銀杏葉水溶性膳食纖維(SDF)和VC對(duì)O₂^-自由基的清除效果對(duì)比；

圖3為本發(fā)明所述銀杏葉水溶性膳食纖維(SDF)和VC對(duì)DPPH的清除效果對(duì)比；

圖4為本發(fā)明所述銀杏葉水溶性膳食纖維(SDF)和VC對(duì)NO₂^-的清除效果對(duì)比。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明下述實(shí)施例中水溶性膳食纖維的檢測(cè)采用苯酚-硫酸法，具體包括：

1、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：用移液管精確移取0.00、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20mL(100μg/mL)的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液于具塞試管中，用去離子水補(bǔ)充至2.00mL，加1.00mL 6％苯酚溶液，然后迅速滴加5.00mL濃硫酸，搖勻，冷卻至室溫，在490nm波長(zhǎng)下測(cè)其吸光度，以吸光度(Y)為縱坐標(biāo)，以葡萄糖濃度(X)為橫坐標(biāo)作圖，得到線性回歸方程y＝0.0564x+0.0167；R²＝0.9987；

2、樣品檢測(cè)：準(zhǔn)確稱取可溶性膳食纖維樣品0.25g，用溫水溶解，定量轉(zhuǎn)入250mL容量瓶中，定容，搖勻，用移液管準(zhǔn)確移取上述溶液25.00mL于250mL容量瓶中，去離子水定容，搖勻。準(zhǔn)確移取稀釋后溶液1.00mL于具塞試管中，加離子水補(bǔ)充至2.00mL，加入1.00mL 6％苯酚溶液，搖勻，然后迅速移取5.00mL濃硫酸于具塞試管中，搖勻，測(cè)吸光度，根據(jù)回歸方程，計(jì)算水溶性膳食纖維產(chǎn)品純度。

實(shí)施例1

本實(shí)施例所述銀杏葉水溶性膳食纖維的提取方法，包括如下步驟：

(1)將銀杏葉烘干破碎過50目篩，取粉碎后的銀杏葉1kg，加入20L水為提取劑混勻，隨后加入纖維素酶8g和果膠酶6g，混勻后以水楊酸調(diào)節(jié)溶液pH值為4.8，控制溫度50℃，進(jìn)行復(fù)合酶解60min，得到提取液，經(jīng)檢驗(yàn)提取液中水溶性膳食纖維轉(zhuǎn)移率為95.10％；

(2)將提取液在真空度0.08MPa、溫度25℃條件下，采用中速濾紙過濾，得濾液；將濾液在真空度0.09MPa、溫度60℃條件下濃縮至初始濾液體積的1/3，得濃縮液；將濃縮液加4倍體積95wt％的乙醇溶液進(jìn)行醇沉處理48h；醇沉后，去除上清液，沉淀部分置于冷凍干燥機(jī)在真空度小于20Pa，冷阱溫度-50℃條件下干燥殆盡，得銀杏葉水溶性膳食纖維產(chǎn)品。

經(jīng)檢測(cè)，所述銀杏葉水溶性膳食纖維產(chǎn)品的膳食纖維純度為88.62％。

實(shí)施例2

本實(shí)施例所述銀杏葉水溶性膳食纖維的提取方法，包括如下步驟：

(1)將銀杏葉烘干破碎過50目篩，取粉碎后的銀杏葉1kg，加入25L水為提取劑混勻，隨后加入纖維素酶9g和果膠酶7g，混勻后以水楊酸調(diào)節(jié)溶液pH值為5.0，控制溫度48℃，進(jìn)行復(fù)合酶解55min，得到提取液，經(jīng)檢驗(yàn)提取液中水溶性膳食纖維轉(zhuǎn)移率為94.56％；

(2)將提取液在真空度0.09MPa、溫度25℃條件下，采用中速濾紙過濾，得濾液；將濾液在真空度0.08MPa、溫度60℃條件下濃縮至初始濾液體積的1/3，得濃縮液；將濃縮液加3倍體積90wt％的乙醇溶液進(jìn)行醇沉處理44h；醇沉后，去除上清液，沉淀部分置于冷凍干燥機(jī)在真空度小于20Pa，冷阱溫度-55℃條件下干燥殆盡，得銀杏葉水溶性膳食纖維產(chǎn)品。

經(jīng)檢測(cè)，所述銀杏葉水溶性膳食纖維產(chǎn)品的膳食纖維純度為86.60％。

實(shí)施例3

本實(shí)施例所述銀杏葉水溶性膳食纖維的提取方法，包括如下步驟：

(1)將銀杏葉烘干破碎過50目篩，取粉碎后的銀杏葉1kg，加入28L水為提取劑混勻，隨后加入纖維素酶7g和果膠酶6.5g，混勻后以水楊酸調(diào)節(jié)溶液pH值為5.2，控制溫度52℃，進(jìn)行復(fù)合酶解65min，得到提取液，經(jīng)檢驗(yàn)提取液中水溶性膳食纖維轉(zhuǎn)移率為93.80％；

(2)將提取液在真空度0.10MPa、溫度25℃條件下，采用中速濾紙過濾，得濾液；將濾液在真空度0.10MPa、溫度50℃條件下濃縮至初始濾液體積的1/3，得濃縮液；將濃縮液加5倍體積95wt％的乙醇溶液進(jìn)行醇沉處理40h；醇沉后，去除上清液，沉淀部分置于冷凍干燥機(jī)在真空度小于20Pa，冷阱溫度-60℃條件下干燥殆盡，得銀杏葉水溶性膳食纖維產(chǎn)品。

經(jīng)檢測(cè)，所述銀杏葉水溶性膳食纖維產(chǎn)品的膳食纖維純度為87.26％。

實(shí)施例4

本實(shí)施例所述銀杏葉水溶性膳食纖維的提取方法，包括如下步驟：

(1)將銀杏葉烘干破碎過50目篩，取粉碎后的銀杏葉1kg，加入15L水為提取劑混勻，隨后加入纖維素酶6g和果膠酶8g，混勻后以水楊酸調(diào)節(jié)溶液pH值為4.5，控制溫度55℃，進(jìn)行復(fù)合酶解60min，得到提取液，經(jīng)檢驗(yàn)提取液中水溶性膳食纖維轉(zhuǎn)移率為91.38％；

(2)將提取液在真空度0.10MPa、溫度15℃條件下，采用中速濾紙過濾，得濾液；將濾液在真空度0.08MPa、溫度50℃條件下濃縮至初始濾液體積的1/3，得濃縮液；將濃縮液加4倍體積95wt％的乙醇溶液進(jìn)行醇沉處理36h；醇沉后，去除上清液，沉淀部分置于冷凍干燥機(jī)在真空度小于20Pa，冷阱溫度-55℃條件下干燥殆盡，得銀杏葉水溶性膳食纖維產(chǎn)品。

經(jīng)檢測(cè)，所述銀杏葉水溶性膳食纖維產(chǎn)品的膳食纖維純度為83.59％。

實(shí)施例5

本實(shí)施例所述銀杏葉水溶性膳食纖維的提取方法，包括如下步驟：

(1)將銀杏葉烘干破碎過50目篩，取粉碎后的銀杏葉1kg，加入30L水為提取劑混勻，隨后加入纖維素酶10g和果膠酶5g，混勻后以水楊酸調(diào)節(jié)溶液pH值為5.5，控制溫度45℃，進(jìn)行復(fù)合酶解60min，得到提取液，經(jīng)檢驗(yàn)提取液中水溶性膳食纖維轉(zhuǎn)移率為91.43％；

(2)將提取液在真空度0.08MPa、溫度30℃條件下，采用中速濾紙過濾，得濾液；將濾液在真空度0.10MPa、溫度55℃條件下濃縮至初始濾液體積的1/3，得濃縮液；將濃縮液加4倍體積95wt％的乙醇溶液進(jìn)行醇沉處理48h；醇沉后，去除上清液，沉淀部分置于冷凍干燥機(jī)在真空度小于20Pa，冷阱溫度-55℃條件下干燥殆盡，得銀杏葉水溶性膳食纖維產(chǎn)品。

經(jīng)檢測(cè)，所述銀杏葉水溶性膳食纖維產(chǎn)品的膳食纖維純度為83.18％。

對(duì)比例1

本對(duì)比例所述銀杏葉水溶性膳食纖維的提取方法與實(shí)施例1相同，其區(qū)別僅在于所述步驟(1)中采用HCl調(diào)節(jié)pH值。

經(jīng)檢測(cè)，所述銀杏葉水溶性膳食纖維產(chǎn)品的膳食纖維純度為58.27％。顯然，上述實(shí)施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而并非對(duì)實(shí)施方式的限定。對(duì)于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動(dòng)。這里無(wú)需也無(wú)法對(duì)所有的實(shí)施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或變動(dòng)仍處于本發(fā)明創(chuàng)造的保護(hù)范圍之中。