本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體來說，涉及到一種吉祥草中的化合物及其制備與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

吉祥草為百合科植物吉祥草屬的全草。主要分布在我國華東、中南、西南各省區(qū)，在貴州、湖南、云南、廣西、四川等苗族人口主要聚居區(qū)，對吉祥草的使用都較廣泛，是我國西南苗族地區(qū)常用的傳統(tǒng)草藥之一。味甘，性涼，具有清肺止咳、涼血止血、解毒利咽等功效，民間常用于治療支氣管炎、肺炎、肺結(jié)核、陰虛哮喘、吐血、咯血、黃疸、治跌打損傷、扭挫傷、遺精、急驚風(fēng)、日翳、疳積、肝癌、膽結(jié)石、風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疼痛、水腫等病癥。吉祥草在中醫(yī)臨床中應(yīng)用廣泛，近年來對吉祥草化學(xué)和藥理的深入研究，對認(rèn)識吉祥草及其成分多方面的藥理作用及臨床傳統(tǒng)應(yīng)用提供了理論依據(jù)。

現(xiàn)代科學(xué)研究證明，吉祥草中含有甾體類、黃酮類、木脂素類、萜類、有機(jī)酸、揮發(fā)油等多種化學(xué)成分。其藥理作用主要表現(xiàn)在抗溶血、止咳、化痰及抗炎作用、殺滅釘螺作用、cAMP磷酸二酯酶抑制作用、降血糖作用、鎮(zhèn)痛等作用。目前，吉祥草大部分的功效都得到了相關(guān)物質(zhì)基礎(chǔ)的支持，但在抗真菌活性還有所欠缺，有待進(jìn)行深入的研究。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對上述問題，通過實(shí)驗(yàn)與研究，本發(fā)明提供了一種吉祥草中的化合物及其制備與應(yīng)用。

本發(fā)明所述的吉祥草中的化合物命名為3,8-二羥基-β-蒎烯，分子式為：C₁₀H₁₆O₂，結(jié)構(gòu)式如下：

本發(fā)明所述的吉祥草中的化合物3,8-二羥基-β-蒎烯的制備方法，所述方法具體為：取吉祥草干燥全草，用95％的乙醇加熱回流提取，提取液減壓濃縮至無醇味，得浸膏；取浸膏，用水混懸后依次用石油醚、乙酸乙酯萃??；取乙酸乙酯萃取物，拌樣后上硅膠柱層析，用氯仿-甲醇(50:1→2:1)進(jìn)行梯度洗脫，收集氯仿-甲醇(30:1)洗脫部分，用Sephadex LH-20凝膠柱層析分離，收集氯仿-甲醇(1:1)部分，經(jīng)硅膠柱色譜分離，用石油醚-丙酮(20:1→5:1)進(jìn)行梯度洗脫，收集石油醚-丙酮(10:1)洗脫部分，濃縮回收溶劑，得到3,8-二羥基-β-蒎烯。

本發(fā)明所述的吉祥草中的化合物3,8-二羥基-β-蒎烯的應(yīng)用，所述化合物3,8-二羥基-β-蒎烯用于抗真菌藥物的制備。

附圖說明

圖1：表示3,8-二羥基-β-蒎烯的結(jié)構(gòu)式。

圖2：表示3,8-二羥基-β-蒎烯的MS質(zhì)譜圖。

圖3：表示3,8-二羥基-β-蒎烯的¹H-NMR和¹³C-NMR數(shù)據(jù)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體的實(shí)施例對本發(fā)明所述的制備方法做進(jìn)一步說明，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于此。

實(shí)施例1

取吉祥草干燥全草5kg，用95％的乙醇30L加熱回流提取3次，每次2h，提取液減壓濃縮至無醇味，得浸膏650g；取浸膏，用2.5L水混懸后依次用2.5L石油醚、2.5L乙酸乙酯萃取兩次；取乙酸乙酯萃取物173g，拌樣后上硅膠柱層析，用氯仿-甲醇進(jìn)行梯度洗脫，比例依次為：50:1、40:1、30:1、20:1、10:1、2:1，收集氯仿-甲醇(30:1)洗脫部分，用Sephadex LH-20凝膠柱層析分離，收集氯仿-甲醇(1:1)部分，經(jīng)硅膠柱色譜分離，用石油醚-丙酮進(jìn)行梯度洗脫，比例依次為：20:1、15:1、10:1、5:1，收集石油醚-丙酮(10:1)洗脫部分，濃縮回收溶劑，得到3,8-二羥基-β-蒎烯7mg。

實(shí)施例2

取吉祥草干燥全草5kg，用95％的乙醇40L加熱回流提取3次，每次3h，提取液減壓濃縮至無醇味，得浸膏680g；取浸膏，用3L水混懸后依次用3L石油醚、3L乙酸乙酯萃取兩次；取乙酸乙酯萃取物188g，拌樣后上硅膠柱層析，用氯仿-甲醇進(jìn)行梯度洗脫，比例依次為：50:1、35:1、30:1、25:1、15:1、5:1、2:1，，收集氯仿-甲醇(30:1)洗脫部分，用Sephadex LH-20凝膠柱層析分離，收集氯仿-甲醇(1:1)部分，經(jīng)硅膠柱色譜分離，用石油醚-丙酮進(jìn)行梯度洗脫，比例依次為：20:1、15:1、10:1、5:1，收集石油醚-丙酮(10:1)洗脫部分，濃縮回收溶劑，得到3,8-二羥基-β-蒎烯9mg。

吉祥草單萜化合物3,8-二羥基-β-蒎烯:無色油狀；(c 0.68,CHCl₃)；¹H and ¹³C-NMR(CDCl₃),見圖3；HR-EIMS m/z:168.1150[M+H]⁺(100)；(calcd for C₁₀H₁₆O₂,168.1148)，見圖2。

藥理實(shí)驗(yàn)

吉祥草單萜化合物3,8-二羥基-β-蒎烯對白色念珠菌的體外抑制作用。用生理鹽水將白色念珠菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC90028制備成濃度為0.5麥?zhǔn)蠁挝?，再用RPMIl640液體培養(yǎng)基按1：2000比例進(jìn)行稀釋，用作接種菌液；參照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員酵母菌的液體培養(yǎng)基稀釋法抗真菌藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)方案(NCCLS M27-A2方法)，將受試菌株分組并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，陰性對照組加入1mLRPMll640液體培養(yǎng)基；生長對照組加入0.9mL接種菌液及0.1mLRPMI l640液體培養(yǎng)基；藥物組分別加入0.9mL的接種菌液和經(jīng)用RPMIl640液體培養(yǎng)基稀釋的不同濃度吉祥草單萜化合物3,8-二羥基-β-蒎烯供試液0.1mL(終濃度：12.5、25、50、100、200、400mg·L^-1)，輕輕混和并蓋上帶孔的蓋子，放入35℃溫箱，培養(yǎng)48h。參考NCCLS的M27-A2的常量法判讀MIC結(jié)果，即培養(yǎng)基清亮所對應(yīng)的最低藥物濃度判定為MIC，讀取吉祥草單萜化合物3,8-二羥基-β-蒎烯對白色念珠菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC90028的MIC值。

經(jīng)試驗(yàn)，陰性對照組均未見生長現(xiàn)象，生長對照組生長良好，藥物組吉祥草單萜化合物3,8-二羥基-β-蒎烯對ATCC90028菌株的最小抑菌濃度(MIC)為200mg·L^-1，因此，化合物3,8-二羥基-β-蒎烯具有抗真菌作用。