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一種蝎毒耐熱合成肽及其用途的制作方法

文檔序號:11412970閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種蝎毒耐熱合成肽,其特征在于:基因全序列見序列表SEQ ID No.1。

2.一種蝎毒耐熱合成肽制備方法,其特征在于:

(1)蝎毒耐熱肽的氨基酸序列測定

1)將BmK蝎毒的冷凍干粉復(fù)溶、離心,取上清液,、100℃隔水加熱,取出,離心取上清液,即為蝎毒耐熱組分提取液,先后用截留分子量為50kDa和30kDa濾膜的離心超濾管,對蝎毒耐熱組分提取液進行離心超濾,取上槽液,得到蝎毒耐熱肽提取液(見附圖1、2)。用Superdex Peptide 10/300GL分子篩柱子(Optimum Separation range(peptides)M,100-7000Da)對樣品進行粗分,用HPLC對樣品進行細分,色譜條件為,色譜柱:Zorbax SB-C18 4.6*2505μm(AgilentUSA),流動相:A液:乙腈/水:2:98(含三氟乙酸0.1%);B液:乙腈/水:98:2(含三氟乙酸0.08%);0–40%B大約3-6個柱體積,40–100%B 0.5-1個柱體積,100%B1-3個柱體積;流速:0.8ml/min;紫外檢測器,檢測波長為:280nm/258nm/214nm。;

2)凍干的多肽樣品重新溶解于Nano-RPLC Buffer A中,在線Nano-RPLC液相色譜在EksigentnanoLC-UltraTM 2D系統(tǒng)(AB SCIEX)進行,溶解后的樣品以2μL/min的流速上樣到C18預(yù)柱上(100μm×3cm,C18,3μm,),保持流速沖洗脫鹽10min。質(zhì)譜采用TripleTOF 5600系統(tǒng)(AB SCIEX)結(jié)合納升噴霧III離子源(AB SCIEX,USA),質(zhì)譜采集到的原始wiff圖譜文件,采用Protein Pilot Software v.4.5(AB SCIEX,USA)軟件進行數(shù)據(jù)加工處理,得到蝎毒耐熱合成肽見序列表SEQ ID No.1;

(2)用固相化學(xué)合成方法制備蝎毒耐熱合成肽;

(3)高效液相色譜(HPLC)純化在多肽合成過程中會產(chǎn)生一些與目標肽結(jié)構(gòu)類似的雜肽,色譜條件如下:色譜柱:Inertsil ODS-SP 4.6mm*250mm,含0.1%三氟乙酸乙腈-含0.1%三氟乙酸水,紫外檢測器,檢測波長為214nm;

(4)用質(zhì)譜技術(shù)對合成多肽進行結(jié)構(gòu)確認,檢索分析,檢出蝎毒耐熱合成肽的氨基酸序列見序列表SEQ ID No.1。

3.權(quán)利要求1所述的蝎毒耐熱合成肽在制備抗癲癇、阿爾茨海默病或帕金森病藥物中的應(yīng)用。

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