技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種雙順反子表達(dá)載體及其構(gòu)建方法與應(yīng)用，具體是一種用來高效、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染二氫葉酸還原酶營養(yǎng)缺陷型突變CHO細(xì)胞株(CHO/dhfr?)的雙順反子表達(dá)載體，其是在pIRES質(zhì)粒上分別插入S100a6啟動子、目的基因和dhfr基因構(gòu)建而成。本發(fā)明通過使用低溫誘導(dǎo)型啟動子和構(gòu)建雙順反子載體，弱化dhfr基因的表達(dá)，使目的基因僅僅通過兩或三輪的加壓篩選，在低濃度MTX下獲得足夠的拷貝數(shù)，同時利用誘導(dǎo)啟動子的性質(zhì)，在生產(chǎn)過程中降低溫度，最大限度增加重組蛋白的產(chǎn)量。

技術(shù)研發(fā)人員：萬曉春;李俊鑫;劉綠艷;任曉虎;周啟明
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院;深圳先進(jìn)技術(shù)研究院;深圳市疾病預(yù)防控制中心;深圳市南山區(qū)人民醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：2016.05.03
技術(shù)公布日：2017.11.10