本發(fā)明涉及一種用于制備塔格糖的組合物以及一種從果膠制備塔格糖的方法，更具體地，涉及一種編碼來(lái)源于嗜熱微生物的嗜熱果糖4-差向異構(gòu)酶的基因以及一種使用該酶從果膠制備塔格糖的方法。

背景技術(shù)：

塔格糖是d-果糖的差向異構(gòu)體，具有與蔗糖幾乎無(wú)法區(qū)分的天然甜味和與蔗糖相似的物理性質(zhì)。塔格糖是天然甜味劑，其在諸如牛奶、奶酪和可可等食物中以及諸如蘋(píng)果和柑橘的甜果中少量地存在。塔格糖的卡路里值為1.5kcal/g，是蔗糖的三分之一，血糖指數(shù)(gi)為3，是蔗糖的5％。塔格糖具有類(lèi)似于蔗糖的甜味和各種健康益處。在這方面，當(dāng)應(yīng)用于各種各樣的產(chǎn)品時(shí)，塔格糖可以用作能夠滿(mǎn)足味道和健康的替代甜味劑。

已知可以通過(guò)化學(xué)(催化反應(yīng))方法或生物(異構(gòu)化酶反應(yīng))方法(在2009年7月31日公開(kāi)的韓國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)2009-0082774)從半乳糖制備塔格糖。為了經(jīng)濟(jì)地生產(chǎn)作為上述反應(yīng)原料的半乳糖，已經(jīng)研究開(kāi)發(fā)含有半乳糖的各種原料、獲得半乳糖的方法以及使用原料生產(chǎn)塔格糖的方法。乳糖已用作半乳糖的最具代表性原料。然而，乳糖或含乳糖的產(chǎn)品的價(jià)格是不穩(wěn)定的，這取決于全球市場(chǎng)中原乳和乳糖的生產(chǎn)量、供應(yīng)和需求等。這種價(jià)格波動(dòng)破壞了生產(chǎn)塔格糖的原料的穩(wěn)定供應(yīng)。

特別地，2012年左右，全球乳糖價(jià)格大幅上漲主要是由于中國(guó)經(jīng)濟(jì)快速增長(zhǎng)，含有乳糖的脫脂奶粉和全脂奶粉的需求快速增長(zhǎng)，并且由于地球暖化導(dǎo)致乳制品生產(chǎn)國(guó)的年產(chǎn)奶量下降。這種原料的價(jià)格波動(dòng)使得塔格糖難以穩(wěn)定生產(chǎn)。因此，需要使用普通糖(蔗糖、葡萄糖、果糖等)制備塔格糖的新方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

[技術(shù)問(wèn)題]

過(guò)去，使用從各種生物資源分解的半乳糖，例如作為可溶性副產(chǎn)物的乳清滲透物作為除了乳糖之外的食物原料，以及作為植物生物質(zhì)的落葉松，來(lái)產(chǎn)生塔格糖。

然而，在穩(wěn)定的原料供應(yīng)和投資效率方面，沒(méi)有合適的原料可以商業(yè)化生產(chǎn)或接近商業(yè)化。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種用于從普通糖類(lèi)制備塔格糖的組合物，其比來(lái)自半乳糖制備塔格糖的現(xiàn)有方法更適合于工業(yè)應(yīng)用，以及一種制備塔格糖的方法。

具體地，本發(fā)明的目的在于提供一種新型酶蛋白，其功能在現(xiàn)有技術(shù)中尚未闡明，其具有d-果糖4-差向異構(gòu)酶活性，并且能夠以高產(chǎn)率從果糖制備塔格糖，一種編碼其的基因，一種使用其制備塔格糖的組合物以及一種從果糖制備塔格糖的方法。

[技術(shù)方案]

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式提供一種用于從果糖制備塔格糖的組合物，其包括：具有序列號(hào)1至序列號(hào)7的氨基酸序列的蛋白質(zhì)或表達(dá)該蛋白質(zhì)的微生物。

本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式提供一種從果糖制備塔格糖的方法，其包括：使本發(fā)明的組合物與果糖反應(yīng)。

[有益效果]

本發(fā)明可以提供一種生產(chǎn)塔格糖的方法，該方法是經(jīng)濟(jì)的并且具有高產(chǎn)率，其使用普通原料果糖，通過(guò)開(kāi)發(fā)新的d-果糖4-差向異構(gòu)酶，其具有在4號(hào)碳處差向異構(gòu)果糖而生產(chǎn)塔格糖的活性。

此外，本發(fā)明可以提供一種生產(chǎn)塔格糖的方法，該方法是經(jīng)濟(jì)的并且具有高產(chǎn)率，其使用普通原料果糖代替具有劇烈價(jià)格波動(dòng)的乳糖，從而降低生產(chǎn)成本。

通常地，由于本領(lǐng)域眾所周知，果糖可以由葡萄糖或蔗糖在工業(yè)上生產(chǎn)，本發(fā)明中提出的原料不僅包括果糖，而且包括完全或部分含有果糖的原料，以致可以確保更經(jīng)濟(jì)的生產(chǎn)。也就是說(shuō)，本發(fā)明包括通過(guò)淀粉、粗糖或蔗糖的酶轉(zhuǎn)化來(lái)生產(chǎn)塔格糖。

此外，本發(fā)明可以從果糖生產(chǎn)塔格糖，這確保了作為今天重要的食品材料引起廣泛關(guān)注的塔格糖的有效大量生產(chǎn)。

附圖說(shuō)明

圖1a至圖1g表示用于表達(dá)來(lái)源于每個(gè)嗜溫微生物的七種d-果糖4-差向異構(gòu)酶的重組載體的切割圖。

圖2a至圖2g表示描繪了使用果糖作為底物通過(guò)d-果糖4-差向異構(gòu)酶反應(yīng)制備來(lái)源于每個(gè)嗜熱微生物的塔格糖的七種途徑的hplc圖。

圖3a至圖3g表示描繪了來(lái)源于每個(gè)嗜熱微生物的七種d-果糖4-差向異構(gòu)酶的活性根據(jù)溫度的圖。

圖4a至圖4g表示描繪了來(lái)源于每個(gè)嗜熱微生物的七種d-果糖4-差向異構(gòu)酶的活性根據(jù)ph變化的圖。

圖5a至圖5g表示描繪了來(lái)源于每個(gè)嗜熱微生物的七種d-果糖4-差向異構(gòu)酶的活性根據(jù)金屬離子種類(lèi)的圖。

圖6a至圖6g表示來(lái)源于七種嗜熱微生物中的每一種的序列號(hào)1至序列號(hào)7所示的蛋白質(zhì)的氨基酸序列。

具體實(shí)施方式

在下文中，將基于具體實(shí)施方式更詳細(xì)地描述本發(fā)明。本發(fā)明不旨在作為實(shí)施方式的限制。在本技術(shù)領(lǐng)域或相關(guān)領(lǐng)域中具有普通知識(shí)的本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的細(xì)節(jié)描述將在此省略。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“n位碳(以下稱(chēng)為cn)”是指根據(jù)iupac命名法定義的碳位置，其中n為1以上的整數(shù)。例如，“4位碳處差異化”表示為“c4-差向異構(gòu)化”。

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式提供了一種用于從果糖制備塔格糖的組合物，其包括：具有序列號(hào)1至序列號(hào)7所示的氨基酸序列的蛋白質(zhì)或表達(dá)該蛋白質(zhì)的微生物。

一般地，單糖可以分為醛己糖和酮己糖。醛己糖是指具有六個(gè)碳原子且在其一端具有醛基的醛糖。醛己糖的實(shí)例包括葡萄糖、半乳糖、阿洛糖、古洛糖、阿卓糖、甘露糖、托洛糖和艾杜糖，但不限于此。

此外，酮己糖是指具有六個(gè)碳原子和酮基的單糖。酮己糖的實(shí)例包括果糖、塔格糖、阿洛酮糖和山梨糖，但不限于此。特別地，果糖用作酮己糖。如本文所用，除非另有說(shuō)明，果糖和塔格糖都是指d-果糖和d-塔格糖。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，序列號(hào)1至序列號(hào)7所示的氨基酸序列可以是具有通過(guò)在4號(hào)碳處差向異構(gòu)化果糖來(lái)生產(chǎn)塔格糖的活性的酶。

特別地，本發(fā)明人利用屬于嗜熱菌rhodothermus屬、thermoanaerobacter屬、thermotoga屬和dictyoglomus屬的微生物。由于從嗜熱微生物產(chǎn)生的酶與從嗜溫微生物產(chǎn)生的酶具有相同的功能，因此可以在極端條件(高溫等)下穩(wěn)定地進(jìn)行反應(yīng)，可以防止嗜溫微生物的污染，能增加溶解度低的材料在基底中的溶解性，并且可以提高反應(yīng)速率，由嗜熱微生物產(chǎn)生的酶可以克服嗜溫酶的工業(yè)缺點(diǎn)。本發(fā)明人從上述嗜熱微生物中篩選果糖4-差向異構(gòu)酶，然后在其天然基因中最終鑒定出能夠?qū)⒐寝D(zhuǎn)化為塔格糖的新型多核苷酸。本發(fā)明通過(guò)合成優(yōu)化以有效過(guò)表達(dá)蛋白質(zhì)的多核苷酸序列，將多核苷酸插入重組載體并表達(dá)酶，從而提供將果糖轉(zhuǎn)化為塔格糖的酶。

可以通過(guò)包含編碼具有上述序列的蛋白質(zhì)的基因的重組載體來(lái)轉(zhuǎn)化序列號(hào)1至序列號(hào)7所示的氨基酸序列。

用于轉(zhuǎn)化的微生物的實(shí)例包括大腸桿菌(escherichia.coli，以下簡(jiǎn)稱(chēng)大腸桿菌(e.coli))、谷氨酸棒桿菌(corynebacterumglutamicum)、米曲霉(aspergillusoryzae)或枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)等。由大腸桿菌轉(zhuǎn)化的微生物的實(shí)例可以包括escherichiacolibl21(de3)-pet21a-rm(登錄號(hào)：kccm11576p)、escherichiacolibl21(de3)-pet21a-tam(登錄號(hào)：kccm11577p)、escherichiacolibl21(de3)-pet21a-tas(登錄號(hào)：kccm11578p)、escherichiacolibl21(de3)-pet21a-tax(登錄號(hào)：kccm11579p)、escherichiacolibl21(de3)-pet21a-tp(登錄號(hào)：kccm11580p)、escherichiacolibl21(de3)-pet21a-tl(登錄號(hào)：kccm11581p)、和escherichiacolibl21(de3)-pet21a-dt(登錄號(hào)：kccm11582p)，其在2014年10月6日保藏于韓國(guó)微生物保藏中心(kccm)(361-221hongje1-dong，seodaemun-gu，首爾，韓國(guó))，登錄號(hào)分別為kccm11576p、kccm11577p、kccm11578p、kccm11579p、kccm11580p、kccm11581p和kccm11582p。

特別地，在一個(gè)實(shí)施方式中，具有序列號(hào)1所示的氨基酸序列的蛋白質(zhì)可以是來(lái)源于海洋紅嗜熱鹽菌(rhodothermusmarinus)的酶。

該蛋白質(zhì)可以具有55kda至60kda的分子量、50℃至90℃的最佳活性溫度和6.0至9.0的最佳活性ph。

更特別地，最佳活性溫度可以為60℃至80℃，最佳活性ph可以為7.0-9.0。

特別地，在一個(gè)實(shí)施方式中，具有序列號(hào)2所示的氨基酸序列的蛋白質(zhì)可以是來(lái)源于嗜石油棲熱袍菌(thermotogapetrophila)的酶。

該蛋白質(zhì)可以具有55kda至58kda的分子量、50℃至90℃的最佳活性溫度和7.0至9.0的最佳活性ph。

更特別地，最佳活性溫度可以為70℃至90℃。

特別地，在一個(gè)實(shí)施方式中，具有序列號(hào)3所示的氨基酸序列的蛋白質(zhì)可以是來(lái)源于萊廷格氏棲熱袍菌(thermotogalettingae)的酶。

該蛋白質(zhì)可以具有55kda至58kda的分子量、50℃至90℃的最佳活性溫度和7.0至9.0的最佳活性ph。

更特別地，最佳活性溫度可以為60℃至80℃。

特別地，在一個(gè)實(shí)施方式中，具有序列號(hào)4所示的氨基酸序列的蛋白質(zhì)可以是來(lái)源于馬特拉尼氏熱厭氧桿菌(thermoanaerobactermathranii)的酶。

蛋白質(zhì)可以具有55kda至58kda的分子量、50℃至90℃的最佳活性溫度和7.0至10.0的最佳活性ph。

更特別地，最佳活性溫度可以為70℃至90℃，最佳活性ph可以為8.0至10.0。

特別地，在一個(gè)實(shí)施方式中，具有序列號(hào)5所示的氨基酸序列的蛋白質(zhì)可以是來(lái)源于膨脹網(wǎng)球菌(dictyoglomusturgidum)的酶。

該蛋白質(zhì)可以具有55kda至58kda的分子量、50℃至90℃的最佳活性溫度和7.0至9.0最佳活性ph。

更特別地，最佳活性溫度可以為60℃至80℃。

特別地，在一個(gè)實(shí)施方式中，具有序列號(hào)6所示的氨基酸序列的蛋白質(zhì)可以是來(lái)源于解木聚糖熱厭氧菌(thermoanaerobacteriumxylanolyticum)的酶。

該蛋白質(zhì)可以具有53kda至58kda的分子量、50℃至90℃的最佳活性溫度和6.0至9.0的最佳活性ph。

更特別地，最佳活性溫度可以為60℃至80℃，最佳活性ph可以為6.0至8.0。

特別地，在一個(gè)實(shí)施方式中，具有序列號(hào)7所示的氨基酸序列的蛋白質(zhì)可以是來(lái)源于嗜鐵熱厭氧桿菌(thermoanaerobactersiderophilus)的酶。

該蛋白質(zhì)可以具有55kda至58kda的分子量、50℃至80℃的最佳活性溫度和7.0至10.0的最佳活性ph。

更特別地，最佳活性溫度可以為60℃至80℃，最佳活性ph可以為8.0至10.0。

本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種從果糖制備塔格糖的方法，其包括：使根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方式中任一項(xiàng)的組合物與果糖反應(yīng)。

特別地，該反應(yīng)可以在50℃至80℃下進(jìn)行。

此外，該反應(yīng)可以在ph6.0至9.0下進(jìn)行。

此外，該反應(yīng)可以通過(guò)進(jìn)一步添加鎂離子、鋅離子、鎳離子、鈷離子、鐵離子、錳離子或其混合物來(lái)進(jìn)行。

此外，作為底物，果糖可以以5％(w/v)至60％(w/v)的濃度存在。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式，果糖可以從蔗糖或葡萄糖獲得。作為結(jié)果，本發(fā)明可以提供使用普通廉價(jià)的原料如葡萄糖、果糖和蔗糖等以高產(chǎn)率生產(chǎn)塔格糖的方法，其能夠大量生產(chǎn)塔格糖。

因此，本發(fā)明還可以包括在根據(jù)本發(fā)明的任一實(shí)施方式的組合物與果糖反應(yīng)之前水解蔗糖或異構(gòu)化葡萄糖以產(chǎn)生果糖。

水解中使用的酶可以是選自由β-d-果糖苷酶(其包括β-呋喃果糖苷酶)，轉(zhuǎn)化酶，糖酶等；蔗糖酶、α-葡糖苷酶和α-d-葡萄糖水解酶所組成的組中的至少一種，但不限于此。

異構(gòu)化葡萄糖的酶的實(shí)例可以包括葡萄糖異構(gòu)酶和磷酸葡糖異構(gòu)酶，但不限于此。

實(shí)施例

實(shí)施例1、產(chǎn)生d-果糖4-差向異構(gòu)酶的重組微生物的制備

使用限制酶ndei和xhoi，將編碼來(lái)源于七種嗜熱微生物的表1中所示的序列號(hào)1至序列號(hào)7(圖6a至圖6g)所示的氨基酸序列的多核苷酸插入表達(dá)載體pet21a(novagen)中的限制性位點(diǎn)，從而制備重組載體pet21a-rm、pet21a-tam、pet21a-tas、pet21a-tax、pet21a-tp、pet21a-tl和pet21a-dt(圖1a至圖1g)。將重組載體進(jìn)行熱休克法(sambrook和russell：分子克隆。)以轉(zhuǎn)化大腸桿菌bl21(de3)(invitrogen)，從而制備重組微生物。

表1

嗜熱微生物列表

將轉(zhuǎn)化的重組微生物接種到5mllb-氨芐青霉素培養(yǎng)基(difco)中，通過(guò)在37℃和180rpm下?lián)u動(dòng)培養(yǎng)直至600nm下的吸光度(od)達(dá)到1.5，然后接種到500mllb-氨芐青霉素培養(yǎng)基中。然后，向所得物質(zhì)中加入5mm乳糖，以誘導(dǎo)目標(biāo)酶的過(guò)表達(dá)，然后在37℃的振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)條件在37℃和180rpm下保持16小時(shí)。然后，將所得物質(zhì)在離心機(jī)中以4000rpm離心分離20分鐘，以?xún)H收集重組微生物。

由此制得的重組微生物命名為escherichiacolibl21(de3)-pet21a-rm(登錄號(hào)：kccm11576p)、escherichiacolibl21(de3)-pet21a-tam(登錄號(hào)：kccm11577p)、escherichiacolibl21(de3)-pet21a-tas(登錄號(hào)：kccm11578p)、escherichiacolibl21(de3)-pet21a-tax(登錄號(hào)：kccm11579p)、escherichiacolibl21(de3)-pet21a-tp(登錄號(hào)：kccm11580p)、escherichiacolibl21(de3)-pet21a-tl(登錄號(hào)：kccm11581p)、和escherichiacolibl21(de3)-pet21a-dt(登錄號(hào)：kccm11582p)，其在2014年10月6日保藏于韓國(guó)微生物保藏中心(kccm)(361-221hongje1-dong，seodaemun-gu，首爾，韓國(guó))，登錄號(hào)分別為kccm11576p、kccm11577p、kccm11578p、kccm11579p、kccm11580p、kccm11581p和kccm11582p。

實(shí)施例2、d-果糖4-差向異構(gòu)酶的純化和性質(zhì)鑒定

2-1、d-果糖4-差向異構(gòu)酶的純化

將實(shí)施例1中收集的七種微生物溶解在裂解緩沖液(50mmk-磷酸鹽)中，然后使用超聲處理器在4℃下破壞10分鐘。將破碎的液體在振蕩培養(yǎng)箱中在60℃下進(jìn)行熱處理30分鐘，然后以13000rpm離心分離10分鐘以得到上清液。將獲得的上清液應(yīng)用到用裂解緩沖液平衡的q-sepharosedeae，隨后順序流動(dòng)50mmk-磷酸鹽和含有200mmnacl的緩沖溶液，從而純化想要的蛋白質(zhì)。洗脫的蛋白質(zhì)用緩沖溶液透析用于酶活性評(píng)估(50mmk-磷酸鹽，ph7)，然后將其用于下一個(gè)實(shí)驗(yàn)。此外，將七種純化的d-果糖4-差向異構(gòu)酶，rm、tam、tas、tax、tp、tl和dt進(jìn)行十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(sds-page)，發(fā)現(xiàn)其分子量分別約為58kda、56kda、56kda、55kda、56kda、57kda和57kda。

2-2、d-果糖4-差向異構(gòu)酶根據(jù)溫度和ph的變化的活性分析

為了鑒定實(shí)施例2-1中純化的七種d-果糖4-差向異構(gòu)酶根據(jù)ph和溫度的變化的活性，在不同的ph和溫度下使酶與果糖底物反應(yīng)。

通過(guò)在每個(gè)ph和溫度范圍內(nèi)使50mm果糖、1mg/ml酶和0.1mmniso4反應(yīng)來(lái)進(jìn)行活性測(cè)量，隨后用冰將反應(yīng)產(chǎn)物驟冷，然后通過(guò)hplc分析。使用sugarsp0810(shodex)柱在80℃下進(jìn)行hplc分析，同時(shí)以0.6ml/min的流速流動(dòng)作為流動(dòng)相的水，然后使用差示折射率檢測(cè)器檢測(cè)塔格糖以分析塔格糖生產(chǎn)率。

首先，為了根據(jù)溫度變化評(píng)估酶在ph7下的活性，在40℃至90℃下測(cè)量塔格糖生產(chǎn)率。作為結(jié)果，在七種酶中，兩種酶tam和tp在80℃顯示最大轉(zhuǎn)化率，而五種酶rm、tas、tax、tl和dt在70℃顯示最大轉(zhuǎn)化率(圖3a至圖3g)。

此外，為了根據(jù)ph變化來(lái)評(píng)估酶的活性，分別使用50mm醋酸鈉ph4-6、50mmk-磷酸鹽ph6-8和50mmtris-hclph7至ph9的緩沖溶液在70℃下測(cè)定塔格糖生產(chǎn)率。作為結(jié)果，證實(shí)了酶在不同的ph值下表現(xiàn)出最大的活性，特別是ph7至ph9下的高活性。

具體地，tax在ph7下表現(xiàn)出高活性，tp、tl、rm和dt在ph8下表現(xiàn)出高活性，并且tas和tam在ph9下表現(xiàn)出高活性。此外，在對(duì)應(yīng)于上述ph值的緩沖溶液中，證實(shí)了tris-hcl緩沖液表現(xiàn)出最大的活性(圖4a至圖4g)。

從圖5a至圖5g可以看出，證實(shí)了實(shí)施例2-1的酶可以從果糖生成塔格糖。

2-3、d-果糖4-差向異構(gòu)酶的金屬離子需求分析

已知以前已知的差向異構(gòu)酶(阿洛酮糖3-差向異構(gòu)酶)和異構(gòu)酶(葡萄糖異構(gòu)酶、阿拉伯糖異構(gòu)酶)需要金屬離子。進(jìn)行評(píng)價(jià)以確定金屬離子是否對(duì)實(shí)施例2-1中獲得的d-果糖4-差向異構(gòu)酶具有影響。

實(shí)施例2-1中純化的七種蛋白質(zhì)用金屬離子通過(guò)1mmniso4、nicl2、cucl2、mncl2、cacl2、znso4、mgso4、mgcl2、feso4、nacl、licl、kcl或cocl2處理，由此測(cè)量酶活性。作為對(duì)照組，七種酶未用金屬離子處理。金屬離子處理酶與未處理酶的酶活性比較示于圖5a至圖5g中。

如圖5a至圖5g中所示，證實(shí)了實(shí)施例2-1的酶由于添加鎳離子和鈷離子而增加了活性，這表明需要金屬離子。特別地，證實(shí)了niso4提供最大的活性。

實(shí)施例3、從果糖制備塔格糖

在實(shí)施例2中選擇的最佳酶反應(yīng)條件下測(cè)量塔格糖生產(chǎn)率。具體地，使實(shí)施例2-1中純化的1mg/mld-果糖-4-差向異構(gòu)酶與20g/l(濃度約110mm)果糖在反應(yīng)溫度下反應(yīng)，例如對(duì)于兩種酶tam和tp在80℃下、對(duì)于5種酶rm、tas、tax、tl和dt在70℃下在0.1mm硫酸鎳下、對(duì)于tax在ph7下，對(duì)于tp、tl、rm和dt在ph8下、以及對(duì)于tas和tam在ph9下，使用對(duì)應(yīng)于每個(gè)ph值制備的50mmtris-hcl緩沖溶液。

通過(guò)與實(shí)施例2-2相同的方法(圖2a至圖2g)進(jìn)行hplc分析。從反應(yīng)產(chǎn)生的塔格糖量確定從果糖到塔格糖的轉(zhuǎn)化率。結(jié)果示于表2。

表2

將上述反應(yīng)后的溶液(塔格糖和果糖的混合溶液)進(jìn)行脫色(使用活性炭)、離子交換純化、色譜法和結(jié)晶工藝，從而收獲最終的結(jié)晶塔格糖。

<110>cj第一制糖株式會(huì)社

<120>用于制備塔格糖的組合物以及從果膠制備塔格糖的方法

<130>p15-5068

<150>kr10/20140143703

<151>2014-10-22

<160>7

<170>kopatentin2.0

<210>1

<211>519

<212>prt

<213>海洋紅嗜熱鹽菌（rhodothermusmarinus）

<400>1

metvalthrvalleuglnthrleuleuglnargproargproleuala

151015

gluileaspargalaalaleualaargpheleuthraspleuilearg

202530

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leualapropheaspalalys

515

<210>2

<211>481

<212>prt

<213>嗜石油棲熱袍菌（thermotogapetrophila）

<400>2

metvalleulysvalphelysasphispheglyargglytyrgluval

151015

tyrglulyssertyrargglulysaspserleuserphepheleuthr

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505560

phephecysgluargasnhisgluasnleugluvalleuarglystyr

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pheproaspleulysprovalargalaglyleuargalaserphegly

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465470475480

gly

<210>3

<211>489

<212>prt

<213>萊廷格氏棲熱袍菌（thermotogalettingae）

<400>3

metalagluasnilevalglulyspheglulysleuphelysglylys

151015

tyrlysiletyrtyrserserilearglysleuglulysserphephe

202530

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lysargilecysglulysphegluglylyslysileglyargileasn

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aspleuaspileleumetcysprothrasnasptyrasncyslysval

65707580

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seralailetrpglyilephegluserglytyrgluglygluphegly

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165170175

tyrgluglytyrsermettyrthrvalaspproserasphisvallys

180185190

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210215220

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ilephevalthrtyrvalaspalailegluhisvalvallyscystyr

245250255

glualailelysasnthrlyslysasnpheaspphegluvalserile

260265270

aspgluthrserileprothrserproleualahisilepheileval

275280285

hisgluleuargargargglyvalasppheglnthrleualaleuarg

290295300

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305310315320

valleuglusergluleusermethiscysgluilevallysserleu

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glylyshisleugluleuleulysasn

485

<210>4

<211>482

<212>prt

<213>馬特拉尼氏熱厭氧桿菌（thermoanaerobactermathranii）

<400>4

metvalglulysserileleuglulysleuthrasppheleuleuasn

151015

hisserphevalleutyrproasnserleuarglysleulysgluasp

202530

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leuthrlysgluasnphelysleuthrserprotyrphevalgluasp

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lysasnvallysgluileaspphetyrleuasnleutyrproleuser

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phegluasntyrleuileleulysasnpheglyileserprothrpro

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cysargglnlysserserpheglythrglyaspargleuglyleuval

100105110

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130135140

lysaspalaleuleulysvalileleuglyvalleuglualaglytyr

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leuleuargalaileglualaglytyrthrmettyrthrleuaspval

180185190

sergluleuleuthrlysileleuaspileserserasnglnvalmet

195200205

glnileserproglnserlysgluileileglualaphelysglylys

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lysileserileserglugluglutyrthrilearggluaspgluleu

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tyrlysseralaleuiletyrglulysalametasnphevalglulys

245250255

valtyrserileleulysglulysvallysasppheaspleugluile

260265270

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275280285

valalaglutyrleuhislyslysglyileaspphetrpserleuala

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lysasnlyslysleuphetyrgluleutyrlysilealaleuasnasn

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asnasn

<210>5

<211>485

<212>prt

<213>膨脹網(wǎng)球菌（dictyoglomusturgidum）

<400>5

metleulysleuleuasngluserleulysproleuserilepheile

151015

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202530

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ileleutyrpheserserprotyrphesergluasplyslysileglu

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glythrasnpheleuvalasnleutyrproleuasnphegluasntyr

65707580

glnlysleulysgluileileproileserprolysvalcysasplys

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lysileserpheglythrglyaspargleuglyleuilethrserala

100105110

glnleuseralaleulysglutyraspleupheproileleualagln

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glnserproarggluleuilelysthrlysargaspphelysaspval

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leuleulysseralametglyvalleugluthrglytyrthrglylys

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alaileaspalaglytyrthrmettyrthrleuaspileseraspphe

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ileglulysilelysaspleuserglulysalaleulysglulystyr

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glulysvalserserpheserlyslysileileasplystyralagly

210215220

lysargvallysileseraspgluglutyrphegluleusertyrasn

225230235240

gluleucyslysseralailevaltyrglulysalaleuserpheval

245250255

glumetvaltyrgluileleulysserlysleuserglupheaspile

260265270

gluvalserileaspgluglygluargaspthrthrprogluasphis

275280285

phephevalalaglnpheleuhisasplysglyileaspphelysser

290295300

leualaprolyspheproglyglupheglnlysglyileasptyrile

305310315320

glyaspilelysgluphegluargalaleulyslyshistyralaleu

325330335

thrlysalaleugluglytyrargleuserleuhisserglyserasp

340345350

lyspheseriletyrlysilephetyrlysilethrgluglyasnphe

355360365

hisilelysthrserglythrsertrpleuglualavallysvalile

370375380

alalysphepheproaspleuphevalgluleutyrglnilealaleu

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lysaspasnvalargglnleuphehisilesertyrglyvalleuleu

435440445

aspglulysarglysgluiletyraspleuleuasnglnlysglulys

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gluhistyrglntyrvalsergluasnilelyslyshisleulysasn

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485

<210>6

<211>482

<212>prt

<213>解木聚糖熱厭氧菌（thermoanaerobacteriumxylanolyticum）

<400>6

metvalglyasnvalserservalleulysgluserglypheglnile

151015

tyrproaspserleuarglysleuglygluasnthrtyrilepheval

202530

vallyslysglnlysglulysmetileglyileleuserasnaspglu

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leulysleulysgluprotyrphesergluasnlyslysileserasp

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serpheglythrglyaspargleuglyleualathralaalaglnleu

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leuasnvalglypheglyglyhisleuvalsergluaspgluleuleu

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lysseralavalalatyrglualaalametlysphevalglulysval

245250255

asnaspileleulysglulysleuasnasppheaspleugluileser

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ileaspgluglyglylysvalthrthrleugluasphisleupheval

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asngluphegluarggluleulyslyshistyraspleuthrlysleu

325330335

ileglyglytyrlysleuserleuhisserglyserasplyspheser

340345350

iletyrlysilepheserglnthrthrglulysasnphehisilelys

355360365

thrserglythrsertrpleuglnalavalasnleuiletyrlysser

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asplysgluphetyrarggluleutyrlysilealaleuserasnleu

385390395400

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lysaspgluprogluleuaspasnserglupheileileargproglu

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glylysgluilelysaspmetleutyrasptyrgluglugluhistyr

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lysmetvalseraspasnilegluasnhisleulysgluilephetyr

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glulys

<210>7

<211>483

<212>prt

<213>嗜鐵熱厭氧桿菌（thermoanaerobactersiderophilus）

<400>7

metlysglugluleuserasptyrleuleulysasnserpheleuleu

151015

tyrproaspserpheargargleuarggluaspvaltyrilepheval

202530

alalyslysaspserasplyslysileglyleuleuthrasnglyasn

354045

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leuglyphetyrileasnleutyrproleuthrtyrgluasntyrleu

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ileleulysaspasnpheglyileserprovalthrcyslysglulys

859095

alaserpheglythrglyaspargleuglyleualathrproalahis

100105110

ilelysalaleulysasntyrasnvalpheprovalleualaglngln

115120125

serproarggluleuvallysthrhisargaspphelysaspvalphe

130135140

leulysvalileleuglyvalleuglualaglytyralaglyglytyr

145150155160

glyalaaspalaasphisilelysaspglulystyrleuilegluala

165170175

ileaspalaglytyrthrmettyrthrleuaspleuseraspleuleu

180185190

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195200205

serleuserserglnserarggluileileaspargphelysglylys

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leutyrlysseralaleuthrtyrglulysalametlysphevalglu

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lysvaltyrglyileleulysaspargleuglnhispheaspleuglu

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ileserileaspgluglyglulysaspthrthrvalgluasphisile

275280285

phevalalaglutyrleuhisarglysglyileaspphetrpserleu

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305310315320

aspilelyslysphethrserglyleulyslyshistyrpheleuser

325330335

lyslysleuglyglytyrlysleuserleuhisserglyserasplys

340345350

pheseriletyrlysilepheasngluilethrgluglyasnphehis

355360365

ilelysthrserglythrsertrpleuglnalaileasnileilephe

370375380

gluargasplysaspleupheasnaspleutyrlysilealaleuasp

385390395400

asnleuglugluserlyslysalatyrlysvalleuileaspargasp

405410415

asppheproglnthrileglnthrgluaspserglnileleuleulys

420425430

progluilelysglnleuphehisilesertyrglyvalleuleuasp

435440445

gluargarglysgluiletyrgluvalleuasnlystyrglugluglu

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histyrgluphevalserlysasnilegluasnhisleulysgluile

465470475480

pheasnile