一種二氫辣椒素人工半抗原、人工抗原及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明請求保護一種二氫辣椒素人工半抗原、人工抗原及其制備方法。二氫辣椒素人工半抗原分子結(jié)構(gòu)式見式Ⅰ，人工抗原的分子結(jié)構(gòu)式見式2。本發(fā)明通過將N-(4-羥基-3-甲氧基芐基)壬酰胺的酚羥基進行修飾，提供的二氫辣椒素人工半抗原既最大程度保留了二氫辣椒素類物質(zhì)的特征結(jié)構(gòu)，可作為抗原決定簇，又具有可以與載體蛋白發(fā)生偶聯(lián)的活性基團。由此得到的特異性二氫辣椒素人工抗原可免疫獲得親和力高，靈敏度高，特異性強的二氫辣椒素抗體?？捎糜谑秤弥参镉椭卸淅苯匪氐拿庖邫z測。
【專利說明】一種二氫辣椒素人工半抗原、人工抗原及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種二氫辣椒素人工半抗原、人工抗原及其制備方法，屬于免疫化學

【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 近年來，把非正常食用油（俗稱地溝油）摻入合格食用油中以獲取利益的行為屢 禁不止，嚴重威脅著消費者的健康，成為當前我國食品安全領(lǐng)域亟須解決的問題。
[0003] 國家科技部、工商總局、質(zhì)檢總局、食品藥品監(jiān)管局、糧食局以及中國疾控中心等 7部位聯(lián)合攻關(guān)地溝油鑒定方法，主要包括：重金屬含量、多環(huán)芳烴、膽固醇、3-氯丙二醇及 其酯、粘度、電導率、介電常數(shù)等，但由于地溝油來源多、成分復雜，現(xiàn)有檢測方法不能實現(xiàn) 對通過白土吸附脫色、水洗、真空高溫脫臭等精煉處理，摻入正常食用油進行銷售的新型地 溝油進行識別，迄今仍缺乏能夠有效鑒別方法。
[0004] 我國傳統(tǒng)飲食習慣及口味愛好中辣椒是使用量較大、應(yīng)用范圍廣泛的調(diào)味品，二 氫辣椒素是引起辣味的主要化學成分，主要存在于辣椒屬植物的果實及種子中。二氫辣 椒素具有脂溶性、強穩(wěn)定性好、沸點高等性質(zhì)，而餐飲行業(yè)的泔水油是地溝油的主要來源之 一，目前地溝油加工方法很難完全去除具有以上性質(zhì)的化合物。正常食用油基本不含二 氫辣椒素，而接觸過辣椒的餐廚廢棄油脂難以避免地含有這類成分，因此二氫辣椒素能夠 作為鑒別餐廚廢棄油脂的特征指標?，F(xiàn)有二氫辣椒素的檢測方法主要是高效液相色譜法 (HPLC)、液質(zhì)聯(lián)用法（LC-MS)，需要對樣品進行稀釋、過濾、提取、凈化，操作復雜、繁瑣、檢測 成本高、周期長，無法滿足大批量樣品快速篩查，尤其是現(xiàn)場快速檢測的要求。免疫分析是 基于抗原、抗體的特異性反應(yīng)的一種分析方法，在醫(yī)學上已廣泛應(yīng)用于微量物質(zhì)的檢測。免 疫分析具有特異性強、靈敏度高、分析容量大、方便快捷、成本低廉等優(yōu)點，近年來得到迅速 發(fā)展。
[0005] 建立免疫分析方法，首先必須制備出對二氫辣椒素特異性強、親和力高的抗體。由 于二氫辣椒素分子量較小，不具備刺激機體產(chǎn)生針對二氫辣椒素抗原決定簇的特異性抗 體，作為小分子抗原其必須與大分子載體偶聯(lián)后才具有免疫原性。要實現(xiàn)與大分子物質(zhì)的 偶聯(lián)，半抗原分子上必須具備能共價結(jié)合到載體上的活性集團（如氨基、羧基、羥基和巰基 等）。影響免疫分析方法的關(guān)鍵因素在于特異的抗原和抗體，因此獲得一種可免疫獲得特異 性好，親和力高的辣椒素抗體的抗原具有十分重要的意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的發(fā)明目的是提供一種新型的二氫辣椒素人工半抗原、人工抗原及其制備 方法。
[0007] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案。
[0008] 本發(fā)明提供的二氫辣椒素人工半抗原化合物，具有式I所示的分子結(jié)構(gòu)：
[0009]

【權(quán)利要求】
1. 二氫辣椒素人工半抗原化合物，其特征在于：它具有式I所示的分子結(jié)構(gòu)：
其化學名稱為（E)-4-[2-甲氧基-4-(壬酰胺甲基）苯氧基]-4-氧-2-丁烯酸。
2. 二氫辣椒素人工抗原化合物，其分子結(jié)構(gòu)式如式II所示：
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的二氫辣椒素人工抗原，其特征在于：所述載體蛋白為牛血清 白蛋白BSA、卵清白蛋白OVA或鑰孔血藍蛋白KLH。
4. 權(quán)利要求1所述的二氫辣椒素人工半抗原的合成方法，其特征在于：以N-(4-羥 基-3-甲氧基芐基）壬酰胺與順丁烯二酸酐為原料經(jīng)酯縮合反應(yīng)合成二氫辣椒素人工半抗 jS即仆,會物T.會成路結(jié)加下.
5. 權(quán)利要求4所述的二氫辣椒素人工半抗原的合成方法，其特征在于：包括以下步驟： 將摩爾比為I: (1. 2?1. 5) : (0. 12?0. 15)的N- (4-羥基-3-甲氧基芐基）壬酰胺、順丁烯 二酸酐和N，N'_二環(huán)己基碳二亞胺（DCC)于二氯甲烷中室溫攪拌反應(yīng)，然后置于冰浴中，在 〇_5°C條件下，將4-二甲氨基吡啶的二氯甲烷溶液緩慢滴加到上述溶液中，所述的N- (4-羥 基-3-甲氧基芐基）壬酰胺和4-二甲氨基吡啶的摩爾比為1: (0. 12?0. 15)，撤去水浴，室 溫反應(yīng)5-7h，后處理得到二氫辣椒素人工半抗原II。
6. 權(quán)利要求2所述的二氫辣椒素人工抗原的制備方法，其特征在于：它是將二氫辣椒 素人工半抗原通過Ν，Ν'-二環(huán)己基碳二亞胺與N-羥基琥珀酰亞胺（NHS)活化后，再與載體 蛋白進行偶聯(lián)得到。
7. 權(quán)利要求6所述的二氫辣椒素人工抗原的制備方法，其特征在于：包括以下具體步 驟： (1) 將二氫辣椒素人工半抗原在N，N-二甲基甲酰胺（DMF)與N-羥基琥珀酰亞胺的混 合溶液中室溫反應(yīng)1-2小時，然后加入Ν，Ν' -二環(huán)己基碳二亞胺的N，N-二甲基甲酰胺溶 液，室溫反應(yīng)4-6小時,靜置過夜,取上清液即活化的二氫辣椒素人工半抗原溶液； (2) 將上清液滴加到載體蛋白濃度大于等于2mg/mL的載體蛋白的磷酸鹽緩沖液中，室 溫反應(yīng)12-14h，其中：所述步驟（1)中的二氫辣椒素人工半抗原與載體蛋白的摩爾比大于 5:1，然后透析得到二氫辣椒素人工抗原，即化合物II。
8. 權(quán)利要求2所述的二氫辣椒素人工抗原化合物在制備二氫辣椒素特異性抗體中的 應(yīng)用。
9. 權(quán)利要求2所述的二氫辣椒素人工抗原化合物在食用植物油中二氫辣椒素免疫檢 測中的應(yīng)用。
10. 二氫辣椒素特異性抗體，它是由權(quán)利要求2所述的二氫辣椒素人工抗原經(jīng)動物免 疫得到的可與二氫辣椒素發(fā)生特異性免疫反應(yīng)的球蛋白。
【文檔編號】C07K16/16GK104447383SQ201410673353
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月21日
【發(fā)明者】李培武, 馬飛, 張奇, 楊青青, 丁小霞, 張良曉 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學院油料作物研究所