一種小極性達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜配糖體的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種小極性達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜配糖體的制備方法。其中，制備方法涉及蒸柜蒸制、超聲波提取、高分子絮凝澄清、大孔吸附樹脂柱層析、離子交換樹脂柱層析、濃縮干燥等步驟。該方法與現(xiàn)有技術(shù)比較，其優(yōu)點(diǎn)在于應(yīng)用蒸柜蒸制技術(shù)進(jìn)行高效環(huán)保炮制，應(yīng)用超聲波提取技術(shù)進(jìn)行高效率與低能耗提取，應(yīng)用高分子絮凝沉淀技術(shù)對大分子雜質(zhì)進(jìn)行處理，應(yīng)用經(jīng)典柱層析技術(shù)進(jìn)行分離純化。使用本發(fā)明提供的方法能實(shí)現(xiàn)小極性達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜配糖體的高效率、高質(zhì)量、低成本和規(guī)?；a(chǎn)。
【專利說明】-種小極性達(dá)巧燒型四環(huán)H瞄配糖體的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥有效成分的提取、純化【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說是一種W人參、H走、 西洋參等為原料制備小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體主要存在于五加科(Araliaceae)人參屬（Panax Linn) 植物中，通常稱為人參皂巧（ginsenosidesKH走[P. notoginseng 炬urk.) F. H. Qien]、 人參（P. ginseng C. A. Meyer)和西洋參（P. quenquefolius )是工業(yè)化生產(chǎn)小極性達(dá)瑪 焼型四環(huán)H聰配糖體的重要天然原料。
[0003] W達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰（damarrane tetracyclic trite;rpenoid)為基本骨架的植 物配糖體（plant glycosides)具有提高免疫力、保護(hù)也腦血管和改善性功能等多方面的 生理活性?，F(xiàn)代藥理藥效學(xué)研究表明，許多大極性或中等極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體是 通過在人體內(nèi)代謝形成極性更小的達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體來發(fā)揮其生理活性的。隨著 對小極性達(dá)瑪焼型配糖體研究的深入，其在醫(yī)藥衛(wèi)生、保健食品和功能化妝品行業(yè)的應(yīng)用 也越來越廣泛。因此，開發(fā)小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體現(xiàn)代化生產(chǎn)技術(shù)，對于形成優(yōu)勢 產(chǎn)業(yè)，培育龍頭企業(yè)，促進(jìn)小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體醫(yī)藥健康產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和中藥現(xiàn) 代化具有重要的意義。實(shí)現(xiàn)小極性達(dá)瑪焼型配糖體的產(chǎn)業(yè)化將會掀起醫(yī)藥健康產(chǎn)業(yè)新興的 革命。目前，制備小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的方法主要有化學(xué)合成及降解、物理炮制 和生物發(fā)酵等?；瘜W(xué)方法和生物手段技術(shù)要求嚴(yán)格，生產(chǎn)成本高、周期長且對環(huán)境會造成污 染。物理炮制方法具有操作簡便、周期短、成本低、環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)，故本發(fā)明采用此方法來進(jìn)行 小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的制備。
[0004] 中藥炮制是根據(jù)中醫(yī)藥理論，按照中醫(yī)辨證施治用藥的需要和藥物自身的性質(zhì)對 中藥材所采取的加工處理技術(shù)，歷史上又稱炮炙、修治、修制、修事、治削等。中藥炮制是我 國傳統(tǒng)中醫(yī)藥體系在藥物方面的特色和優(yōu)勢，傳統(tǒng)的炮制方法有蒸制、酒制、黃精汁制等。 在本發(fā)明中，我們通過蒸制，改變藥性，應(yīng)用現(xiàn)代化的生產(chǎn)工藝，分離純化有效部位，得到小 極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是應(yīng)用物理炮制方法，結(jié)合現(xiàn)代化的生產(chǎn)工藝，提供一種從植物原 料中提取小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的工業(yè)化制備方法，該方法設(shè)計(jì)科學(xué)合理、質(zhì)量 可控、易于規(guī)?；a(chǎn)；且收率高、產(chǎn)品純度高、環(huán)境友好、節(jié)約能源、生產(chǎn)成本低。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了 W下技術(shù)方案： 一種小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的制備方法，包括如下步驟： 步驟（1)，蒸柜蒸制；將富含大極性或中等極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的植物原料 粉碎，過l〇-14mm篩，用純化水潤制1-2小時(shí)后，蒸制10-12小時(shí)，取出后干燥，得到富含小 極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的原料； 步驟（2)，超聲波提??；將步驟（1)得到的富含小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的原 料粉碎，過20-40目篩后，用原料5-10倍量質(zhì)量濃度為70-98%的己醇超聲提取3次，每次 0. 5-2小時(shí)，過濾，提取液減壓濃縮至無醇味，回收己醇，得濃縮液； 步驟（3)，高分子絮凝澄清；將步驟（2)得到的濃縮液加水稀釋1. 5-3倍，得到稀釋 液，將稀釋液加熱至7〇-9(TC，加入稀釋液體積1-3%的高分子絮凝劑液B組分，攬拌均勻， 然后加入稀釋液體積1-3%高分子絮凝劑液A組分，攬拌均勻，再于60-9(TC下控溫?cái)埌?10-40min，放置，冷卻至室溫，離也，上清液存入儲罐，不溶物用水?dāng)埌瑁^濾，濾液存入儲 罐；所述的高分子絮凝劑液A組分所使用的絮凝劑包括但不僅限于101果汁澄清劑、甲殼 素、ZTC天然澄清劑、明膠、稼酸或蛋清；所述的高分子絮凝劑液B組分所使用的絮凝劑包括 但不僅限于101果汁澄清劑、甲殼素、ZTC天然澄清劑、明膠、稼酸或蛋清；但高分子絮凝劑 液A組分與高分子絮凝劑液B組分所使用的絮凝劑不相同； 步驟（4)，大孔吸附樹脂柱層析；在層析柱中均勻裝入大孔吸附樹脂，樹脂經(jīng)預(yù)處理活 化后，自頂部將步驟（3)儲罐中的液體加入層析柱中，用水洗脫至洗脫液無色無味后，用質(zhì) 量濃度為70-98%己醇洗脫，每小時(shí)洗脫流量為柱體積的2-8倍，用薄層層析檢測，至洗脫液 無達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體特征斑點(diǎn)，即停止洗脫，將己醇洗脫液存入儲罐； 步驟（5)，離子交換樹脂柱層析；在層析柱中均勻裝入離子交換樹脂，樹脂經(jīng)預(yù)處理活 化后，將步驟（4)得到的己醇洗脫液自頂部粟入，用質(zhì)量濃度為70-98%己醇洗脫，每小時(shí)洗 脫流量為柱體積的2-8倍，用薄層層析檢測，至洗脫液無達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體特征斑 點(diǎn)，即停止洗脫，收集洗脫液； 步驟（6)，濃縮干燥；將步驟（5)得到的洗脫液濃縮，干燥，即得到小極性達(dá)瑪焼型四環(huán) H聰配糖體產(chǎn)品。
[0007] 本發(fā)明技術(shù)方案中步驟（1)所述的富含大極性或中等極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖 體的植物原料包括但不限于人參、H走或西洋參該些富含大極性或中等極性達(dá)瑪焼型四環(huán) H聰配糖體的植物地下部分和地上部分。
[0008] 進(jìn)一步，優(yōu)選的是步驟（1)中所述的干燥采用熱風(fēng)循環(huán)干燥箱，所述的蒸制采用全 自動控溫控壓蒸柜蒸制。
[0009] 進(jìn)一步，優(yōu)選的是于步驟（1)中取粉碎好的原料，用純化水W 1:0. 5-1的料液質(zhì)量 比潤制1-2小時(shí)，放入蒸柜中W l〇〇-12(TC的溫度蒸制8-12小時(shí)。
[0010] 本發(fā)明技術(shù)方案中步驟（3)所述的高分子絮凝劑液A組分的制備方法為取絮凝 齊U，邊攬拌邊加入純化水至完全溶解，放置，過濾，取濾液，即得；所述的高分子絮凝劑液B 組分的制備方法為取絮凝劑，邊攬拌邊加入質(zhì)量濃度為0. 5-2. 5%的冰醋酸至其完全溶解， 放置，過濾，取濾液，即得。
[0011] 進(jìn)一步，優(yōu)選的是步驟（4)中所述的大孔吸附樹脂為聚苯己帰型大孔吸附樹脂。
[0012] 本發(fā)明技術(shù)方案中步驟（4)中所述的大孔吸附樹脂樹脂的預(yù)處理方法為；將大孔 吸附樹脂置于沉淀缸內(nèi)，用水浸泡，過濾，后再加入質(zhì)量濃度75-98%己醇，己醇液面高出大 孔吸附樹脂2-5畑1，攬拌均勻，放置15-3化，裝入層析柱，用2-5倍柱體積質(zhì)量濃度75-98% 的己醇沖洗，然后用水洗凈大孔吸附樹脂上的己醇，用質(zhì)量濃度為3-5%鹽酸溶液洗涂，鹽 酸溶液的用量為2-5倍柱體積，接著用水洗至中性，再W質(zhì)量濃度為3-5%氨氧化軸溶液洗 涂，氨氧化軸溶液用量為2-5倍柱體積，最后再用水洗至中性即得。
[0013] 進(jìn)一步，優(yōu)選的是步驟（5)中所述離子交換樹脂柱層析所用的離子交換樹脂包括 強(qiáng)酸型離子交換樹脂或弱酸型離子交換樹脂。
[0014] 本發(fā)明技術(shù)方案中步驟（5)中所述樹脂預(yù)處理活化方法為；將離子交換樹脂置于 沉淀缸內(nèi)，用質(zhì)量濃度為75-98%己醇浸泡15-3化，攬拌均勻，裝入層析柱，然后加入質(zhì)量濃 度為75-98%己醇洗涂，75-98%己醇洗涂用量為2-5倍柱體積，然后用去離子水洗凈離子交 換樹脂上的己醇后，用質(zhì)量濃度為2-8%鹽酸溶液洗涂，鹽酸溶液的用量為2-6倍柱體積，接 著用水洗至中性，再W質(zhì)量濃度為3-8%氨氧化軸溶液洗涂，氨氧化軸溶液用量為3-6倍柱 體積，最后用水洗至中性，待用。
[0015] 進(jìn)一步，優(yōu)選的是步驟（6)所述的濃縮方式采用膜濃縮設(shè)備；所述的干燥方式為 噴霧干燥。
[0016] 質(zhì)量檢測；應(yīng)用薄層層析（化0和高壓液相色譜（冊LC)分析檢測方法，分析小極 性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的組成與含量，建立指紋圖譜分析方法，對植物原料和上述提 取步驟進(jìn)行質(zhì)量檢測。
[0017] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其有益效果為： 1.本發(fā)明首次將蒸制技術(shù)應(yīng)用于小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的生產(chǎn)中，不僅提高 了生物轉(zhuǎn)移率，而且安全可控，操作簡單，炮制時(shí)間短、節(jié)約能源、對環(huán)境友好。特別有利于 將大極性或中等極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體轉(zhuǎn)化為小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體。
[0018] 2.本發(fā)明首次將超聲波提取技術(shù)應(yīng)用于小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的生產(chǎn) 中，不僅提取率高、雜質(zhì)少，而且縮短提取時(shí)間、節(jié)約能源、對環(huán)境友好。特別有利于極性大、 對熱和酸不穩(wěn)定的配糖體物質(zhì)的提取。
[0019] 3.本發(fā)明首次選用適宜提取小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的高分子絮凝劑。該 技術(shù)能有效地去除提取液中的多糖、蛋白質(zhì)、樹膠等大分子雜質(zhì)和重金屬，回收率達(dá)95% W 上，與傳統(tǒng)醇沉法相比較，除雜效果明顯，操作簡單、低成本。
[0020] 4.本發(fā)明首次在小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的提取中應(yīng)用膜分離和膜濃縮 技術(shù)。該技術(shù)與高分子絮凝劑配合使用，在室溫下進(jìn)行，能有效去除大分子雜質(zhì)和重金屬， 提高濃縮效率，防止小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體受熱降解，保證產(chǎn)品質(zhì)量。較傳統(tǒng)工藝 速度快、效率高，節(jié)約能源。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0021] 圖1. 1為H走根莖小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的娃膠G薄層層析圖，其中，1 為人參皂巧R拆，2為人參皂巧化4,3為H走根莖小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體； 圖1. 2為H走根莖小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的反相娃膠化-8薄層層析圖，其 中，11為人參皂巧Rgg，12為人參皂巧化4,13為H走根莖小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體； 圖2為H走根莖小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的高壓液相色譜指紋圖譜； 圖3.1為人參根小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的娃膠G薄層層析圖，其中，21為人參 皂巧R拆，22為人參皂巧化4,23為人參根莖小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體； 圖3. 2為人參根小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的反相娃膠化-8薄層層析圖，其中， 31為人參皂巧Rge，32為人參皂巧化4, 33為人參根莖小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體； 圖4為人參根莖小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的高壓液相色譜圖。
[0022] 圖5. 1為西洋參根小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的娃膠G薄層層析圖，其中，41 為人參皂巧Rge，42為人參皂巧化4,43為西洋參根莖小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體； 圖5. 2為西洋參根小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的反相娃膠化-8薄層層析圖，其 中，51為人參皂巧Rgg，52為人參皂巧化4, 53為西洋參根莖小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖 體； 圖6為西洋參根莖小極性達(dá)瑪焼型四環(huán)H聰配糖體的高壓液相色譜圖。
[0023]

【具體實(shí)施方式】
[0024] 為了更好地理解本發(fā)明的內(nèi)容，W下W結(jié)合實(shí)施例作進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明的 內(nèi)容并不局限于此。
[0025] 本發(fā)明所用試劑、儀器等基本情況如下表1 ; 表1

【權(quán)利要求】
1. 一種小極性達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜配糖體的制備方法，其特征在于包括如下步驟： 步驟（1)，蒸柜蒸制：將富含大極性或中等極性達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜配糖體的植物原料 粉碎，過l〇-14mm篩，用純化水潤制1-2小時(shí)后，蒸制10-12小時(shí)，取出后干燥，得到制含小 極性達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜配糖體的原料； 步驟（2)，超聲波提取：將步驟（1)得到的富含小極性達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜配糖體的原 料粉碎，過20-40目篩后，用原料5-10倍量質(zhì)量濃度為70-98%的乙醇超聲提取3次，每次 0. 5-2小時(shí)，過濾，提取液減壓濃縮至無醇味，回收乙醇，得濃縮液； 步驟（3)，高分子絮凝澄清：將步驟（2)得到的濃縮液加水稀釋1. 5-3倍，得到稀釋 液，將稀釋液加熱至70-90°C，加入稀釋液體積1-3%的高分子絮凝劑液B組分，攪拌均勻， 然后加入稀釋液體積1-3%高分子絮凝劑液A組分，攪拌均勻，再于60-9(TC下控溫?cái)嚢?10-40min，放置，冷卻至室溫，離心，上清液存入儲罐，不溶物用水?dāng)嚢瑁^濾，濾液存入儲 罐；所述的高分子絮凝劑液A組分所使用的絮凝劑包括101果汁澄清劑、甲殼素、ZTC天然 澄清劑、明膠、鞣酸或蛋清；所述的高分子絮凝劑液B組分所使用的絮凝劑包括101果汁澄 清劑、甲殼素、ZTC天然澄清劑、明膠、鞣酸或蛋清；但高分子絮凝劑液A組分與高分子絮凝 劑液B組分所使用的絮凝劑不相同； 步驟（4)，大孔吸附樹脂柱層析：在層析柱中均勻裝入大孔吸附樹脂，樹脂經(jīng)預(yù)處理活 化后，自頂部將步驟（3)儲罐中的液體加入層析柱中，用水洗脫至洗脫液無色無味后，用質(zhì) 量濃度為70-98%乙醇洗脫，每小時(shí)洗脫流量為柱體積的2-8倍，用薄層層析檢測，至洗脫液 無達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜配糖體特征斑點(diǎn)，即停止洗脫，將乙醇洗脫液存入儲罐； 步驟（5)，離子交換樹脂柱層析：在層析柱中均勻裝入離子交換樹脂，樹脂經(jīng)預(yù)處理活 化后，將步驟（4)得到的乙醇洗脫液自頂部泵入，用質(zhì)量濃度為70-98%乙醇洗脫，每小時(shí)洗 脫流量為柱體積的2-8倍，用薄層層析檢測，至洗脫液無達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜配糖體特征斑 點(diǎn)，即停止洗脫，收集洗脫液； 步驟（6)，濃縮干燥：將步驟（5)得到的洗脫液濃縮，干燥，即得到小極性達(dá)瑪烷型四環(huán) 三萜配糖體產(chǎn)品。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小極性達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜配糖體的制備方法，其特征在于步 驟（1)所述的富含大極性或中等極性達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜配糖體的植物原料包括人參、三七 或西洋參這些富含大極性或中等極性達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜配糖體的植物地下部分和地上部 分。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小極性達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜配糖體的制備方法，其特征在于步 驟（1)中所述的干燥采用熱風(fēng)循環(huán)干燥箱，所述的蒸制采用全自動控溫控壓蒸柜蒸制。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小極性達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜配糖體的制備方法，其特征在于步 驟（1)中取粉碎好的原料，用純化水以1:0. 5-1的料液質(zhì)量比潤制1-2小時(shí)，放入蒸柜中以 100-120°C的溫度蒸制8-12小時(shí)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小極性達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜配糖體的制備方法，其特征在于步 驟（3)所述的高分子絮凝劑液A組分的制備方法為取絮凝劑，邊攪拌邊加入純化水至完全 溶解，放置，過濾，取濾液，即得；所述的高分子絮凝劑液B組分的制備方法為取絮凝劑，邊 攪拌邊加入質(zhì)量濃度為0. 5-2. 5%冰醋酸溶液至其完全溶解，放置，過濾，取濾液，即得。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小極性達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜配糖體的制備方法，其特征在于步 驟（4)中所述的大孔吸附樹脂為聚苯乙烯型大孔吸附樹脂。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小極性達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜配糖體的制備方法，其特征在于步 驟（4)中所述的大孔吸附樹脂樹脂的預(yù)處理方法為：將大孔吸附樹脂置于沉淀缸內(nèi)，用水 浸泡，過濾后再加入質(zhì)量濃度75-98%乙醇，乙醇液面高出大孔吸附樹脂2-5cm，攪拌均勻， 放置15-36h，裝入層析柱，用2-5倍柱體積質(zhì)量濃度75-98%的乙醇沖洗，然后用水洗凈大孔 吸附樹脂上的乙醇，用質(zhì)量濃度為3-5%鹽酸溶液洗滌，鹽酸溶液的用量為2-5倍柱體積，接 著用水洗至中性，再以質(zhì)量濃度為3-5%氫氧化鈉溶液洗滌，氫氧化鈉溶液用量為2-5倍柱 體積，最后用水洗至中性即得。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小極性達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜配糖體的制備方法，其特征在于步 驟（5)中所述離子交換樹脂柱層析所用的離子交換樹脂包括強(qiáng)酸型離子交換樹脂或弱酸型 離子交換樹脂。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小極性達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜配糖體的制備方法，其特征在于 步驟（5)中所述樹脂預(yù)處理活化方法為：將離子交換樹脂置于沉淀缸內(nèi)，用質(zhì)量濃度為 75-98%乙醇浸泡15-36h，攪拌均勻，裝入層析柱，然后加入質(zhì)量濃度為75-98%乙醇洗滌， 75-98%乙醇洗滌用量為2-5倍柱體積，然后用去離子水洗凈離子交換樹脂上的乙醇后，用 質(zhì)量濃度為2-8%鹽酸溶液洗滌，鹽酸溶液的用量為2-6倍柱體積，接著用水洗至中性，再以 質(zhì)量濃度為3-8%氫氧化鈉溶液洗滌，氫氧化鈉溶液用量為3-6倍柱體積，最后用水洗至中 性，待用。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小極性達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜配糖體的制備方法，其特征在于 步驟（6)所述的濃縮方式采用膜濃縮設(shè)備；所述的干燥方式為噴霧干燥。
【文檔編號】C07J17/00GK104447932SQ201410604627
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年10月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月30日
【發(fā)明者】陳榮潔, 曾恕芬, 任楊帆, 鄭立雄, 陳金東 申請人:云南維和藥業(yè)股份有限公司