專利名稱：噻吩并噠嗪類化合物及其制備方法、藥物組合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物化學(xué)，具體涉及噻吩并噠嗪類化合物及其制備方法、以及含有它們的藥物組合物以及其用途。
背景技術(shù)：
癌癥是人類健康的一大威脅，人類的大多數(shù)腫瘤都是由外界環(huán)境因素造成的，全世界每年死于癌癥的人數(shù)已不少于500萬。雖然現(xiàn)在已有一些治療辦法，如外科手術(shù)、放療、化療等可使病人獲愈，但治愈率不高。用化學(xué)藥物預(yù)防及治療癌癥，目前是制服腫瘤的最有效方法之一。
噻吩并噠嗪類化合物或其噻吩類似物的某些化合物顯示有抗腫瘤的特性。
霍夫曼—拉羅奇公司的WO2005105808中的公開了一種噻吩并噠嗪類化合物作為IKK抑制劑，
美國的Amgen公司在WO2007124181中公開了一種噻吩并噠嗪類化合物作為酪氨酸激酶中的p38蛋白酶的抑制劑，
Smithkline Beecham公司在WO 03029241中的公開了一種2—脲基噻吩類化合物，在WO 03028731中的公開了一種3—脲基噻吩化合物，與噻吩并噠嗪類化合物類似，作為CHK1抑制劑。阿斯利康(瑞典)有限公司的WO 2005066163中的公開了一種3—脲基噻吩改進化合物也作為CHK1抑制劑。
用化學(xué)藥物預(yù)防及治療癌癥，目前有酪氨酸激酶的受體、非受體抑制劑，其靶點有VEGFR、EGFR、HER2、SRC、JAK及TEK等；還有蘇氨酸—絲氨酸激酶抑制劑，靶點有MEK、JNK、c-MET、AKT、PIM、TIE、PLK等。本發(fā)明所描述的化合物是腫瘤及一類蛋白質(zhì)激酶抑制劑，包括細胞周期檢驗點激酶(Checkpoint kinase，CHK1/CHK2)。
通過對細胞周期關(guān)卡調(diào)控研究發(fā)現(xiàn)，封閉CHK1的表達能夠逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞耐藥，從而提高腫瘤細胞對DNA損傷治療的敏感度，可大大提高抗癌藥物的活性。另外也可以利用大多數(shù)腫瘤通過p53突變特異性消除G1/S關(guān)卡來獲得腫瘤選擇性藥物。本發(fā)明提供了一種新的噻吩并噠嗪類化合物，作為新型腫瘤及生長因子相關(guān)的蛋白激酶(包括CHK1、CHK2)抑制劑，不但具有一定的抗腫瘤作用，且還能夠增強其它抗腫瘤藥物的抗腫瘤療效。
發(fā)明內(nèi)容
按照本發(fā)明，申請人發(fā)現(xiàn)了新的化合物，這些化合物從而具有抗細胞增殖(例如抗癌)的活性，因此可用于治療人體或動物。本發(fā)明還涉及制備所述化合物的方法、包含它們的藥物組合物及其它們在制備用于溫血動物如人體中產(chǎn)生抗細胞增殖效應(yīng)的藥物中的用途。
本發(fā)明包括這類化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或前藥，及根據(jù)本發(fā)明，申請人也提供了藥物組合物以及使用這類化合物治療癌癥的方法。
預(yù)期這些性質(zhì)在治療以下與細胞周期停滯和細胞增殖相關(guān)的疾病中具有有用的價值癌癥(實體瘤和白血病)、纖維增殖性及分化性疾病、牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、卡波濟氏肉瘤、急性和慢性腎病、粉瘤、動脈粥樣硬化、動脈再狹窄、自身免疫性疾病、急慢性炎癥、骨病和視網(wǎng)膜血管增生性眼病。
根據(jù)本發(fā)明的一方面，提供了式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物，
其中R1和R2各自獨立地為H或C1-4的烷基； R3為含N、S或O的飽和或不飽和的六元環(huán)或五元環(huán)，及其光學(xué)異構(gòu)體； R4為任意位置單取代或雙取代的鹵代苯基。
優(yōu)選地，R1＝R2＝H。
優(yōu)選地，R3為含N、S或O的飽和六元環(huán)，及其光學(xué)異構(gòu)體。
優(yōu)選地，R3為六氫吡啶基、四氫吡喃基、四氫噻喃基、四氫吡咯基、四氫呋喃基、或四氫噻吩基，及其光學(xué)異構(gòu)體。
優(yōu)選地，R3為六氫吡啶基，及其光學(xué)異構(gòu)體。
優(yōu)選地，R4為單取代的鹵代苯基。
優(yōu)選地，R4為
其中，X表示F、Cl、Br、I。
最好，式(I)化合物選自 2-(4-氟苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-四氫吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-四氫吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-四氫噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-四氫噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(2-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(4-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(S-3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(R-3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-四氫呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-四氫呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-四氫噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-四氫噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(2-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(S-3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(R-3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺。
優(yōu)選地，R3為吡啶基、α-吡喃基、γ-吡喃基、α-噻喃基、γ-噻喃基、吡咯基、呋喃基、或噻吩基，及其光學(xué)異構(gòu)體。
最好，式(I)化合物選自 2-(4-氟苯基)-4-(3-吡啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-吡啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-吡啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-α-吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-α-吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-α-吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-α-噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-α-噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-α-噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(2-吡啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(4-吡啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-吡啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-吡啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(2-吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(3，5-二氯苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種藥物組合物，包括治療有效量的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物、以及藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的藥物組合物可以以溶液、混懸液、氣霧劑或干粉等形式局部給藥，如肺部、頭部、結(jié)腸等；或者進行系統(tǒng)給藥，如，以片劑、粉劑等形式口服給藥，或以溶液或混懸液形式腸胃外給藥，或者皮下給藥，或以栓劑形式直腸給藥，或者經(jīng)皮給藥。
根據(jù)本發(fā)明的又一方面，提供了式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物在制備用于治療或預(yù)防腫瘤性疾病的藥物中的用途。其中，所述腫瘤性疾病包括子宮頸瘤，頭部和頸部腫瘤，乳腺、卵巢、肺非小細胞、胰腺、結(jié)腸、前列腺或其它組織的癌癥，以及白血病和淋巴瘤、中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤以及其它腫瘤如黑素瘤、纖維肉瘤和骨肉瘤。
根據(jù)本發(fā)明的再一方面，提供了式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物在制備用于治療或預(yù)防增生性疾病的藥物中的用途。其中，所述增生性疾病包括自身免疫性疾病、炎癥、神經(jīng)性疾病和心血管疾病。
根據(jù)本發(fā)明的一方面，提供了式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物在制備用于限制人或動物細胞增殖的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物在制備用于抑制腫瘤及生長因子相關(guān)激酶的藥物中的用途。
對于上述用途，給藥劑量取決于所用化合物、給藥方式、所需治療和所顯示的疾病。
根據(jù)本發(fā)明的最后一方面，提供了式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物的方法，該方法包括 在堿存在下，用草酸二烷基酯處理式A的化合物
接著用肼處理，生成式B的化合物
用磷酰氯處理式B的化合物，生成式C的化合物
并且使式C的化合物與如下化合物R3CH2反應(yīng)，生產(chǎn)式D的化合物，
接著與胺NHR1R2反應(yīng)，再去R3上的保護基及加堿處理，生成式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物，
其中R為C1-4的烷基，并且R1和R2各自獨立地為H或C1-4的烷基；R3為含N、S或O的飽和或不飽和的六元環(huán)或五元環(huán)，及其光學(xué)異構(gòu)體；R4為任意位置單取代或雙取代的鹵代苯基。
下面介紹本發(fā)明的合成工藝
2-(4-氯苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺合成工藝。
其中，式A化合物可以通過本技術(shù)領(lǐng)域已知的常規(guī)化學(xué)方法制備或直接從市場上購買。獲得A化合物后，在堿諸如合成中常用的堿LDA(二異丙胺基鋰)以及常用的有機溶劑如四氫呋喃存在下，與草酸二烷基酯如草酸二乙酯進行縮合反應(yīng)生成化合物Y，由于LDA的存在，該反應(yīng)需要在低溫下進行。其中，堿LDA本領(lǐng)域的技術(shù)人員可容易制得，一般現(xiàn)用現(xiàn)制，且在低溫下制備和使用。
接著化合物Y與肼如H2NNH2在醇溶劑中進行肼解反應(yīng)生成式B化合物。
式B化合物用磷酰氯處理發(fā)生酰化反應(yīng)生成式C化合物。
在以上三步中參考了霍夫曼—拉羅奇公司的WO2005105808中的噻吩并噠嗪類化合物中間體的合成方法。
通過本技術(shù)領(lǐng)域已知的常規(guī)化學(xué)方法制備帶有Boc保護基團的R3CH2化合物，并在催化劑諸如PdCl2(dppf)，溶劑諸如磷酸鹽/1，4-二氧六環(huán)存在下，加熱(反應(yīng)溫度為80～90℃)，將式C化合物與帶有Boc保護基團的R3CH2化合物進行反應(yīng)，反應(yīng)時間過夜，可以制得式D化合物。其中，進行該反應(yīng)時，化合物R3CH2需要先用9-BBN進行加成處理，參考了在Tetrahedron Letters 45(2004)，p6125-6128中Suzuki-Miyaura偶聯(lián)反應(yīng)。
利用常規(guī)方法，將式D化合物在密閉環(huán)境中與化合物HNR1R2進行氨解反應(yīng)，反應(yīng)溶劑可為1，4—二氧六環(huán)，加熱(反應(yīng)溫度為80℃)，反應(yīng)時間過夜，之后在酸性條件下除去R3上的Boc保護基，得到式(I)的酸式鹽，加堿調(diào)節(jié)pH值制得式(I)的化合物。
上述制備過程中所用到的原料可以從市場上直接購得或可以通過本技術(shù)領(lǐng)域已知的常規(guī)方法制備。
具體實施例方式 下面，通過以下實例來對本發(fā)明作進一步具體說明，但并不僅限于以下實施例和實施例中的工藝參數(shù)范圍。
其中，式(I)化合物的結(jié)構(gòu)通過核磁共振(NMR)和質(zhì)譜技術(shù)(MS)確認；質(zhì)子核磁共振化學(xué)位移值用δ標(biāo)度來測量，峰多重性表示如下s，單峰；m，多重峰。中間體一般均通過質(zhì)譜法和NMR進行了表征。
實施例12-(4-氯苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺第一步、5-溴-噻吩-3-甲酸的合成
12.6g噻吩-3-甲酸、96ml醋酸加入250ml反應(yīng)燒瓶中，室溫攪拌溶解后再加入8ml氫溴酸，反應(yīng)液迅速變?yōu)榈S色，室溫下分批加入27g過溴吡啶鹽，加入完畢，室溫攪拌反應(yīng)，HPLC跟蹤反應(yīng)進程，反應(yīng)結(jié)束后傾倒入冰水中，攪拌約30分鐘，抽濾得白色粉末狀固體，熱水重結(jié)晶，抽濾、烘干后得5-溴-噻吩-3-甲酸晶體10.8g，HPLC測含量為92％。
12.5g噻吩-3-甲酸、83ml醋酸加入500ml反應(yīng)燒瓶中，室溫攪拌溶解為無色透明液，5.4mlBr2溶于100ml醋酸置于恒壓滴液漏斗，室溫下逐滴滴加到反應(yīng)燒瓶中，控制溫度25℃以下，滴加完畢，室溫反應(yīng)過夜，次日，將反應(yīng)液傾倒入冰水中，攪拌約30分鐘，抽濾得白色粉末狀固體，熱水重結(jié)晶，抽濾、烘干后得5-溴-噻吩-3-甲酸(白色晶體)10g，HPLC測含量為66％ 第二步、5-溴-噻吩-3-甲酸乙酯的合成
18.5g上步所得5-溴-噻吩-3-甲酸、150無水乙醇、5ml濃硫酸投入500ml三口燒瓶中，加熱回流反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸干溶劑，加入100ml乙酸乙酯和200ml飽和食鹽水，攪拌，靜止分層，分液，水層用25ml×2乙酸乙酯反萃取2次，合并有機相，轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，加入10％碳酸鈉溶液，調(diào)PH≈8，分液，有機相用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鎂干燥過夜，次日抽濾，減壓蒸干溶劑得5-溴-噻吩-3-甲酸乙酯(淡黃色油狀液)15g。
第三步、對氯苯硼酸的合成
70.6g對溴氯苯投入2000ml四口反應(yīng)燒瓶，接機械攪拌，兩個恒壓滴液漏斗和溫度探頭，在氬氣保護下加入588.3ml甲苯和147ml四氫呋喃，室溫攪拌溶解為無色透明液，量取102.9ml硼酸三異丙酯、176.4ml正丁基鋰(2.5M in hexane)溶液分別置于兩個恒壓滴液漏斗中，降溫，當(dāng)內(nèi)溫低于-78℃時，逐滴滴加正丁基鋰溶液至反應(yīng)燒瓶中，控制滴加速度，保持內(nèi)溫低于-78℃，滴加完畢，保溫反應(yīng)1h，然后逐滴滴加硼酸三異丙酯至反應(yīng)燒瓶中，控制內(nèi)溫低于-78℃，滴加完畢，保溫反應(yīng)1h，撤離冷卻，自然升溫至-20℃時，加入360.4ml2.2M的鹽酸溶液，溫度升至10℃左右，靜止分層，分液，水相用58.8ml×2甲苯反萃取，合并有機相，用飽和食鹽水洗滌至中性，得無色透明液，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓蒸干大部分溶劑，析出白色固體，抽濾得對氯苯硼酸晶體48g。
第四步、5-(4-氯苯基)噻吩-3-甲酸乙酯的合成
稱量10.5g5-溴-噻吩-3-甲酸乙酯、6g對氯苯硼酸、1.5gPd[P(Ph)3]4、7.5g碳酸鈉和347ml溶劑[甲苯水乙醇(V/V)＝421]依次加入500ml三口燒瓶中，加熱，回流反應(yīng)約3h，TLC跟蹤反應(yīng)進展，反應(yīng)完畢，冷卻至室溫，分層，分液，水相用甲苯35ml×2反萃取，合并有機相，用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥過夜，次日抽濾，減壓蒸干溶劑得淡黃色粘稠液，放置后凝結(jié)成固體，用無水乙醇重結(jié)晶得5-(4-氯苯基)-3-噻吩甲酸乙酯晶體8.6g。
1HNMR(500MHz，DMSO)，δ 8.30(s，1H)，7.81(s，1H)，7.72(m，2H)，7.46(m，2H)，4.27(m，2H)，1.30(m，3H) 第五步、5-(4-氯苯基)-2-乙氧乙二?；?噻吩-3-甲酸乙酯的合成
LDA制備氬氣保護下將252.6ml四氫呋喃，79mlN，N-二異丙基胺投入1000ml三口燒瓶，302.8ml正丁基鋰(1.6M in hexane)溶液置于500ml恒壓滴液漏斗，當(dāng)內(nèi)溫小于-20℃時逐滴滴加到反應(yīng)燒瓶中，劇烈放熱反應(yīng)，控制滴加速度，使內(nèi)溫保持在-20℃～-30℃之間，滴加完畢，自然升至室溫，直接做下列縮合反應(yīng)。
縮合反應(yīng)28.7g 5-(4-氯苯基)噻吩-3-甲酸乙酯，1084ml四氫呋喃，29.7ml草酸二乙酯投入2000ml四口燒瓶中，接機械攪拌，500ml恒壓滴液漏斗和溫度計探頭，室溫攪拌溶解為淡黃色透明液，將上述制備的LDA溶液在氬氣保護下轉(zhuǎn)移到500ml恒壓滴液漏斗中，降溫，當(dāng)內(nèi)溫低于-78℃時，逐滴滴加LDA溶液至反應(yīng)燒瓶中，控制滴加速度，保持內(nèi)溫低于-78℃，滴加完畢，TLC跟蹤反應(yīng)進程，反應(yīng)結(jié)束后，加入2.2M的鹽酸溶液，調(diào)PH≈3，反應(yīng)液顏色由紅棕色變?yōu)榻埸S色，溫度升至0℃左右，再加入氯化鈉固體，攪拌溶解后靜止分層，分液，水層用143.5ml×2四氫呋喃反萃取，合并有機相，用飽和食鹽水洗滌兩次后，用稀碳酸鈉溶液調(diào)PH≈8，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓蒸干溶劑得黃色粘稠液，室溫放置逐漸凝結(jié)成固體，用乙醇重結(jié)晶后得5-(4-氯苯基)-2-乙氧乙二?；?噻吩-3-甲酸乙酯純品(桔黃色晶體)25.5g。
1HNMR(500MHz，CD3Cl)，δ 7.61(s，1H)，7.59(m，2H)，7.42(m，2H)，4.37(m，4H)，1.39(m，6H)。
第六步、2-(4—氯苯基)-4-氧代-4，5-二氫-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯的合成
3.0g 5-(4-氯苯基)-2-乙氧乙二?；?噻吩-3-甲酸乙酯晶體，45ml無水乙醇投入100ml反應(yīng)燒瓶中，室溫攪拌為黃色懸浮液，0.75ml水合肼置于恒壓滴液漏斗中，攪拌約10min后滴加入反應(yīng)燒瓶中，黃色懸浮液溶解為透明清夜，開啟加熱，設(shè)定溫度為70℃，隨著溫度升高，燒瓶中逐漸析出黃色固體，且反應(yīng)液越來越粘稠，保溫反應(yīng)1h，冷卻至室溫，抽濾，所得淡黃綠色固體用混合溶液(正己烷二氯甲烷＝11)15ml×2和(甲醇二氯甲烷＝11)15ml×2各洗滌兩次，減壓烘干得2-(4-氯苯基)-4-氧代-4，5-二氫-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯2.75g。
第七步、4-氯-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯的合成
1.5g2-(4-氯苯基)-4-氧代-4，5-二氫-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯，22.5ml三氯氧磷加入100ml三口燒瓶中，設(shè)定溫度為95℃，保溫反應(yīng)3h，逐漸溶解為深紅棕色溶液，反應(yīng)完畢，冷卻至室溫，減壓蒸干溶劑得棕褐色粘稠液，加入四氫呋喃和飽和食鹽水?dāng)嚢?，析出很多黃色固體，過濾，將濾液靜止分層，分液，反萃取，合并有機相后用稀碳酸氫鈉溶液調(diào)PH≈9，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液用活性炭回流脫色，得淡黃綠色透明液，減壓蒸干后得4-氯-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(淡綠色絮狀固體)1.0g。
1HNMR(500MHz，CD3Cl)，δ 7.74(m，3H)，7.59(m，2H)，4.65(m，2H)，1.55(m，3H)。HRMS(high resolution MS)MW＝351.98。
第八步、N-Boc-3-亞甲基哌啶的合成
22.14g甲基三苯基碘化膦、135ml甲苯投入500ml三口燒瓶中，室溫攪拌為乳白色懸浮液，5.31g叔丁醇鉀加入后，燒瓶中很快變?yōu)榻埸S色懸浮液，6.0g N-Boc—3—哌啶酮溶于66ml甲苯置于恒壓滴液漏斗，氬氣保護下室溫滴加到反應(yīng)燒瓶中，有明顯放熱現(xiàn)象，控溫在30℃左右，滴加完畢后TLC跟蹤反應(yīng)進展，反應(yīng)結(jié)束后，抽濾，濾液用200ml×2飽和食鹽水洗滌，再用1M稀鹽酸調(diào)PH≈3，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，得淡黃色透明液，拌硅膠過柱，(洗脫液石油醚乙酸乙酯＝151)得淡黃色油狀液4.2g。
1HNMR(400MHz，CD3Cl)，δ 4.83(s，1H)，4.76(s，1H)，3.89(s，2H)，3.45(m，2H)，2.26(m，2H)1.64(s，2H)，1.51(s，9H)。
第九步、4-(1-叔丁氧羰基-3-哌啶甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯的合成
稱量0.4gN-Boc-3-亞甲基哌啶在氬氣保護下投入50ml三口燒瓶中，降溫至0℃，用注射器移取12ml 9-BBN(0.5M in THF)溶液注入反應(yīng)燒瓶中，保溫約30min后自然升至室溫，反應(yīng)2h，在線減壓蒸干溶劑(25℃)，往反應(yīng)燒瓶中加入20ml1，4-二氧六環(huán)，0.05gPdCl2(dppf)，0.32g磷酸鉀和0.36g 4-氯-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯，加熱，保持內(nèi)溫90℃，反應(yīng)過夜，次日，將反應(yīng)液冷卻至室溫，加入50ml冰水和50ml乙酸乙酯，攪拌約15min，靜止分層，分液，水層用乙酸乙酯反萃取3次，合并有機相，用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液拌硅膠，過柱(乙酸乙酯石油醚＝15)得桔黃色粘稠液0.6g，加入2ml乙醇放入冰箱中析晶，得到4-(1-叔丁氧羰基-3-哌啶甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯固體0.3g。
1HNMR(400MHz，DMSO)，δ 8.90(s，1H)，8.03(m，2H)，7.63(m，2H)，4.54(m，2H)，3.73(s，2H)，3.32(m，2H)，3.28(m，1H)，2.82(m，2H)，2.09(s，1H)，1.78(s，1H)，1.64(s，1H)，1.44(m，3H)，1.39(s，1H)，1.32(s，9H)。
MS(EI)515(M+)，486，458，442，414，334，332，306，304，149，57。
第十步、4-(1-叔丁氧羰基-3-哌啶甲基)-2-(4-氯苯基)-7-氨甲?；绶圆2，3-d]噠嗪的合成
0.3g 4-(1-叔丁氧羰基-3-哌啶甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯，5ml 1，4-二氧六環(huán)和5ml氨水加入25ml密封管中，加熱，外溫保持在80℃，反應(yīng)過夜，次日，冷卻至室溫，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯，振蕩，靜止分層，分液，水層用乙酸乙酯反萃取2次，合并有機相，用1M鹽酸溶液調(diào)PH≈3，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液拌硅膠過柱(乙酸乙酯石油醚＝15)得到4-(1-叔丁氧羰基-3-哌啶甲基)-2-(4-氯苯基)-7-氨甲酰基噻吩并[2，3-d]噠嗪固體0.22g。
1HNMR(500MHz，CDCl3)，δ 8.10(s，1H)，7.77(m，2H)，7.66(s，1H)，7.48(m，2H)，5.90(s，1H)，4.05(s，1H)，3.88(m，1H)，3.31(m，1H)，3.21(m，1H)，2.81(m，2H)，2.28(s，1H)，1.81(s，1H)，1.67(s，3H)，1.39(s，9H)。
MS(ESI)487(M+1)。
第十一步、2-(4-氯苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺鹽酸鹽的合成
200mg 4-(1-叔丁氧羰基-3-哌啶甲基)-2-(4-氯苯基)-7-氨甲?；绶圆2，3-d]噠嗪，4ml乙酸乙酯加入25ml單口燒瓶中，溶解為淡黃色透明溶液，加入4ml 3M鹽酸溶液，即變成白色懸浮液，30℃保溫反應(yīng)1h，白色懸浮液液變?yōu)橥该魅芤?，點板跟蹤反應(yīng)進展，反應(yīng)完畢，減壓蒸干溶劑得2-(4-氯苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺鹽酸鹽固體100mg。
1HNMR(500MHz，DMSO)，δ 9.51(m，1H)，9.09(m，1H)，8.79(s，1H)，8.66(s，1H)，8.29(s，1H)，8.08(m，2H)，7.62(m，2H)，3.45(m，2H)，3.4(m，1H)，3.17(m，1H)，2.79(m，2H)，2.52(m，1H)，1.81(m，2H)，1.77(m，1H)，1.42(m，1H)。
MS(ESI)387(M+1)。
第十二步、2-(4-氯苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺的合成
100mg 2-(4-氯苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺鹽酸鹽加入25ml單口燒瓶中，加入5ml水，滴加碳酸鈉溶液，調(diào)pH＝9～10，攪拌30min，用乙酸乙酯萃取，洗滌，減壓蒸干溶劑得到2-(4-氯苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺70mg。
實施例2 2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺
第一步 3-溴甲基四氫吡喃(24.75g，0.138mol)中加入DMPU(225ml)、FeCl3(0.75g)、CuCl(0.3g)，慢慢滴入Et2Zn(106.8ml)，40～45℃保溫反應(yīng)45min，制得鋅試劑。
4-氯-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(30g)中，加入THF(810ml)和PdCl2(dppf)(5.09g)，然后把上述制備得到的鋅試劑溶液滴入該THF溶液中，保溫反應(yīng)(45℃)4h。將反應(yīng)液倒入飽和食鹽水中，攪拌15min，抽濾，分液，THF萃取(500ml)水相兩次，合并有機相，飽和食鹽水(500ml×3)洗滌，無水Na2SO4干燥，溶劑蒸干得到4-(3-四氫吡喃甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(25g)。
MS(ESI)417(M+1) 第二步 4-(3-四氫吡喃甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(3g)，5ml 1，4-二氧六環(huán)和5ml氨水加入25ml密封管中，加熱，外溫保持在80℃，反應(yīng)過夜，次日，冷卻至室溫，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯，振蕩，靜止分層，分液，水層用乙酸乙酯反萃取2次，合并有機相，用1M鹽酸溶液調(diào)PH≈3，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液拌硅膠過柱得到2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺固體(2g)。
MS(ESI)388(M+1) 實施例3 2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺
第一步 3-溴甲基四氫噻喃(24.75g，0.138mol)中加入DMPU(225ml)、FeCl3(0.75g)、CuCl(0.3g)，慢慢滴入Et2Zn(106.8ml)，40～45℃保溫反應(yīng)45min，制得鋅試劑。
4-氯-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(30g)中，加入THF(810ml)和PdCl2(dppf)(5.09g)，然后把上述制備得到的鋅試劑溶液滴入該THF溶液中，保溫反應(yīng)(45℃)4h。將反應(yīng)液倒入飽和食鹽水中，攪拌15min，抽濾，分液，THF萃取(500ml)水相兩次，合并有機相，飽和食鹽水(500ml×3)洗滌，無水Na2SO4干燥，溶劑蒸干得到4-(3-四氫噻喃甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(25g)。
MS(ESI)433(M+1) 第二步 4-(3-四氫噻喃甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(3g)，5ml 1，4-二氧六環(huán)和5ml氨水加入25ml密封管中，加熱，外溫保持在80℃，反應(yīng)過夜，次日，冷卻至室溫，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯，振蕩，靜止分層，分液，水層用乙酸乙酯反萃取2次，合并有機相，用1M鹽酸溶液調(diào)PH≈3，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液拌硅膠過柱得到2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺固體(2g)。
MS(ESI)404(M+1) 實施例4 2-(4-氯苯基)-4-(2-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺
第一步 N-Boc-2-溴甲基哌啶(24.75g，0.138mol)中加入DMPU(225ml)、FeCl3(0.75g)、CuCl(0.3g)，慢慢滴入Et2Zn(106.8ml)，40～45℃保溫反應(yīng)45min，制得鋅試劑。
4-氯-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(30g)中，加入THF(810ml)和PdCl2(dppf)(5.09g)，然后把上述制備得到的鋅試劑溶液滴入該THF溶液中，保溫反應(yīng)(45℃)4h。將反應(yīng)液倒入飽和食鹽水中，攪拌15min，抽濾，分液，THF萃取(500ml)水相兩次，合并有機相，飽和食鹽水(500ml×3)洗滌，無水Na2SO4干燥，溶劑蒸干得到2-(4-氯苯基)-4-(N-Boc-2-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(25g)。
MS(ESI)516(M+1) 第二步 2-(4-氯苯基)-4-(N-Boc-2-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(3g)，5ml 1，4-二氧六環(huán)和5ml氨水加入25ml密封管中，加熱，外溫保持在80℃，反應(yīng)過夜，次日，冷卻至室溫，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯，振蕩，靜止分層，分液，水層用乙酸乙酯反萃取2次，合并有機相，用1M鹽酸溶液調(diào)PH≈3，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液拌硅膠過柱得到2-(4-氯苯基)-4-(N-Boc-2-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺固體(2g)。
MS(ESI)487(M+1) 第三步 200mg 4-(N-Boc-2-哌啶甲基)-2-(4-氯苯基)-7-氨甲?；绶圆2，3-d]噠嗪，4ml乙酸乙酯加入25ml單口燒瓶中，溶解為淡黃色透明溶液，加入4ml 3M鹽酸溶液，即變成白色懸浮液，30℃保溫反應(yīng)1h，白色懸浮液液變?yōu)橥该魅芤?，點板跟蹤反應(yīng)進展，反應(yīng)完畢，減壓蒸干溶劑得2-(4-氯苯基)-4-(N-Boc-2-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺鹽酸鹽固體100mg。
MS(ESI)423(M+1) 第四步 100mg 2-(4-氯苯基)-4-(N-Boc-2-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺鹽酸鹽加入25ml單口燒瓶中，加入5ml水，滴加碳酸鈉溶液，調(diào)pH＝9～10，攪拌30min，用乙酸乙酯萃取，洗滌，減壓蒸干溶劑得到2-(4-氯苯基)-4-(2-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺70mg。
MS(ESI)387(M+1) 實施例5 2-(4-氯苯基)-4-(4-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺
第一步 N-Boc-4-溴甲基哌啶(24.75g，0.138mol)中加入DMPU(225ml)、FeCl3(0.75g)、CuCl(0.3g)，慢慢滴入Et2Zn(106.8ml)，40～45℃保溫反應(yīng)45min，制得鋅試劑。
4-氯-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(30g)中，加入THF(810ml)和PdCl2(dppf)(5.09g)，然后把上述制備得到的鋅試劑溶液滴入該THF溶液中，保溫反應(yīng)(45℃)4h。將反應(yīng)液倒入飽和食鹽水中，攪拌15min，抽濾，分液，THF萃取(500ml)水相兩次，合并有機相，飽和食鹽水(500ml×3)洗滌，無水Na2SO4干燥，溶劑蒸干得到2-(4-氯苯基)-4-(N-Boc-4-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(25g)。
MS(ESI)515(M+1) 第二步 2-(4-氯苯基)-4-(N-Boc-4-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(3g)，5ml 1，4-二氧六環(huán)和5ml氨水加入25ml密封管中，加熱，外溫保持在80℃，反應(yīng)過夜，次日，冷卻至室溫，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯，振蕩，靜止分層，分液，水層用乙酸乙酯反萃取2次，合并有機相，用1M鹽酸溶液調(diào)PH≈3，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液拌硅膠過柱得到2-(4-氯苯基)-4-(N-Boc-4-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺固體(2g)。
MS(ESI)487(M+1) 第三步 200mg 4-(N-Boc-4-哌啶甲基)-2-(4-氯苯基)-7-氨甲?；绶圆2，3-d]噠嗪，4ml乙酸乙酯加入25ml單口燒瓶中，溶解為淡黃色透明溶液，加入4ml 3M鹽酸溶液，即變成白色懸浮液，30℃保溫反應(yīng)1h，白色懸浮液液變?yōu)橥该魅芤?，點板跟蹤反應(yīng)進展，反應(yīng)完畢，減壓蒸干溶劑得2-(4-氯苯基)-4-(4-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺鹽酸鹽固體100mg。
MS(ESI)423(M+1) 第四步 2-(4-氯苯基)-4-(4-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺鹽酸鹽加入25ml單口燒瓶中，加入5ml水，滴加碳酸鈉溶液，調(diào)pH＝9～10，攪拌30min，用乙酸乙酯萃取，洗滌，減壓蒸干溶劑得到2-(4-氯苯基)-4-(4-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺70mg。
MS(ESI)387(M+1) 實施例6 2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺
第一步 N-Boc-3-溴甲基四氫吡咯(24.75g，0.138mol)中加入DMPU(225ml)、FeCl3(0.75g)、CuCl(0.3g)，慢慢滴入Et2Zn(106.8ml)，40～45℃保溫反應(yīng)45min，制得鋅試劑。
4-氯-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(30g)中，加入THF(810ml)和PdCl2(dppf)(5.09g)，然后把上述制備得到的鋅試劑溶液滴入該THF溶液中，保溫反應(yīng)(45℃)4h。將反應(yīng)液倒入飽和食鹽水中，攪拌15min，抽濾，分液，THF萃取(500ml)水相兩次，合并有機相，飽和食鹽水(500ml×3)洗滌，無水Na2SO4干燥，溶劑蒸干得到2-(4-氯苯基)-4-(N-Boc-3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(25g)。
MS(ESI)502(M+1) 第二步 2-(4-氯苯基)-4-(N-Boc-3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(3g)，5ml 1，4-二氧六環(huán)和5ml氨水加入25ml密封管中，加熱，外溫保持在80℃，反應(yīng)過夜，次日，冷卻至室溫，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯，振蕩，靜止分層，分液，水層用乙酸乙酯反萃取2次，合并有機相，用1M鹽酸溶液調(diào)PH≈3，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液拌硅膠過柱得到2-(4-氯苯基)-4-(N-Boc-3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺固體(2g)。
MS(ESI)473(M+1) 第三步 200mg 4-(N-Boc-3-四氫吡咯甲基)-2-(4-氯苯基)-7-氨甲?；绶圆2，3-d]噠嗪，4ml乙酸乙酯加入25ml單口燒瓶中，溶解為淡黃色透明溶液，加入4ml 3M鹽酸溶液，即變成白色懸浮液，30℃保溫反應(yīng)1h，白色懸浮液液變?yōu)橥该魅芤海c板跟蹤反應(yīng)進展，反應(yīng)完畢，減壓蒸干溶劑得2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺鹽酸鹽固體100mg。
MS(ESI)409(M+1) 第四步 2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺鹽酸鹽加入25ml單口燒瓶中，加入5ml水，滴加碳酸鈉溶液，調(diào)pH＝9～10，攪拌30min，用乙酸乙酯萃取，洗滌，減壓蒸干溶劑得到2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺70mg。
MS(ESI)373(M+1) 實施例7 2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺
第一步 3-溴甲基四氫呋喃(24.75g，0.138mol)中加入DMPU(225ml)、FeCl3(0.75g)、CuCl(0.3g)，慢慢滴入Et2Zn(106.8ml)，40～45℃保溫反應(yīng)45min，制得鋅試劑。
4-氯-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(30g)中，加入THF(810ml)和PdCl2(dppf)(5.09g)，然后把上述制備得到的鋅試劑溶液滴入該THF溶液中，保溫反應(yīng)(45℃)4h。將反應(yīng)液倒入飽和食鹽水中，攪拌15min，抽濾，分液，THF萃取(500ml)水相兩次，合并有機相，飽和食鹽水(500ml×3)洗滌，無水Na2SO4干燥，溶劑蒸干得到4-(3-四氫呋喃甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(25g)。
MS(ESI)403(M+1) 第二步 4-(3-四氫呋喃甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(3g)，5ml 1，4-二氧六環(huán)和5ml氨水加入25ml密封管中，加熱，外溫保持在80℃，反應(yīng)過夜，次日，冷卻至室溫，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯，振蕩，靜止分層，分液，水層用乙酸乙酯反萃取2次，合并有機相，用1M鹽酸溶液調(diào)PH≈3，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液拌硅膠過柱得到2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺固體(2g)。
MS(ESI)374(M+1) 實施例8 2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺
第一步 3-溴甲基四氫噻吩(24.75g，0.138mol)中加入DMPU(225ml)、FeCl3(0.75g)、CuCl(0.3g)，慢慢滴入Et2Zn(106.8ml)，40～45℃保溫反應(yīng)45min，制得鋅試劑。
4-氯-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(30g)中，加入THF(810ml)和PdCl2(dppf)(5.09g)，然后把上述制備得到的鋅試劑溶液滴入該THF溶液中，保溫反應(yīng)(45℃)4h。將反應(yīng)液倒入飽和食鹽水中，攪拌15min，抽濾，分液，THF萃取(500ml)水相兩次，合并有機相，飽和食鹽水(500ml×3)洗滌，無水Na2SO4干燥，溶劑蒸干得到4-(3-四氫噻吩甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(25g)。
MS(ESI)419(M+1) 第二步 4-(3-四氫噻吩甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(3g)，5ml 1，4-二氧六環(huán)和5ml氨水加入25ml密封管中，加熱，外溫保持在80℃，反應(yīng)過夜，次日，冷卻至室溫，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯，振蕩，靜止分層，分液，水層用乙酸乙酯反萃取2次，合并有機相，用1M鹽酸溶液調(diào)PH≈3，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液拌硅膠過柱得到2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺固體(2g)。
MS(ESI)389(M+1) 實施例9 2-(4-氯苯基)-4-(3-吡啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺
第一步 3-溴甲基吡啶(24.75g，0.138mol)中加入DMPU(225ml)、FeCl3(0.75g)、CuCl(0.3g)，慢慢滴入Et2Zn(106.8ml)，40～45℃保溫反應(yīng)45min，制得鋅試劑。
4-氯-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(30g)中，加入THF(810ml)和PdCl2(dppf)(5.09g)，然后把上述制備得到的鋅試劑溶液滴入該THF溶液中，保溫反應(yīng)(45℃)4h。將反應(yīng)液倒入飽和食鹽水中，攪拌15min，抽濾，分液，THF萃取(500ml)水相兩次，合并有機相，飽和食鹽水(500ml×3)洗滌，無水Na2SO4干燥，溶劑蒸干得到4-(3-吡啶甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(25g)。
MS(ESI)410(M+1) 第二步 4-(3-吡啶甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(3g)，5ml 1，4-二氧六環(huán)和5ml氨水加入25ml密封管中，加熱，外溫保持在80℃，反應(yīng)過夜，次日，冷卻至室溫，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯，振蕩，靜止分層，分液，水層用乙酸乙酯反萃取2次，合并有機相，用1M鹽酸溶液調(diào)PH≈3，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液拌硅膠過柱得到2-(4-氯苯基)-4-(3-吡啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺固體(2g)。
MS(ESI)381(M+1) 實施例10 2-(4-氯苯基)-4-(3-α-吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺
第一步 3-溴甲基吡喃(24.75g，0.138mol)中加入DMPU(225ml)、FeCl3(0.75g)、CuCl(0.3g)，慢慢滴入Et2Zn(106.8ml)，40～45℃保溫反應(yīng)45min，制得鋅試劑。
4-氯-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(30g)中，加入THF(810ml)和PdCl2(dppf)(5.09g)，然后把上述制備得到的鋅試劑溶液滴入該THF溶液中，保溫反應(yīng)(45℃)4h。將反應(yīng)液倒入飽和食鹽水中，攪拌15min，抽濾，分液，THF萃取(500ml)水相兩次，合并有機相，飽和食鹽水(500ml×3)洗滌，無水Na2SO4干燥，溶劑蒸干得到4-(3-α-吡喃甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(25g)。
MS(ESI)412(M+1) 第二步 4-(3-α-吡喃甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(3g)，5ml 1，4-二氧六環(huán)和5ml氨水加入25ml密封管中，加熱，外溫保持在80℃，反應(yīng)過夜，次日，冷卻至室溫，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯，振蕩，靜止分層，分液，水層用乙酸乙酯反萃取2次，合并有機相，用1M鹽酸溶液調(diào)PH≈3，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液拌硅膠過柱得到2-(4-氯苯基)-4-(3-α-吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺固體(2g)。
MS(ESI)383(M+1) 實施例11 2-(4-氯苯基)-4-(3-α-噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺
第一步 3-溴甲基噻喃(24.75g，0.138mol)中加入DMPU(225ml)、FeCl3(0.75g)、CuCl(0.3g)，慢慢滴入Et2Zn(106.8ml)，40～45℃保溫反應(yīng)45min，制得鋅試劑。
4-氯-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(30g)中，加入THF(810ml)和PdCl2(dppf)(5.09g)，然后把上述制備得到的鋅試劑溶液滴入該THF溶液中，保溫反應(yīng)(45℃)4h。將反應(yīng)液倒入飽和食鹽水中，攪拌15min，抽濾，分液，THF萃取(500ml)水相兩次，合并有機相，飽和食鹽水(500ml×3)洗滌，無水Na2SO4干燥，溶劑蒸干得到4-(3-α-噻喃甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(25g)。
MS(ESI)428(M+1) 第二步 4-(3-α-噻喃甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(3g)，5ml 1，4-二氧六環(huán)和5ml氨水加入25ml密封管中，加熱，外溫保持在80℃，反應(yīng)過夜，次日，冷卻至室溫，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯，振蕩，靜止分層，分液，水層用乙酸乙酯反萃取2次，合并有機相，用1M鹽酸溶液調(diào)PH≈3，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液拌硅膠過柱得到2-(4-氯苯基)-4-(3-α-噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺固體(2g)。
MS(ESI)399(M+1) 實施例12 2-(4-氯苯基)-4-(2-吡啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺
第一步 2-溴甲基吡啶(24.75g，0.138mol)中加入DMPU(225ml)、FeCl3(0.75g)、CuCl(0.3g)，慢慢滴入Et2Zn(106.8ml)，40～45℃保溫反應(yīng)45min，制得鋅試劑。
4-氯-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(30g)中，加入THF(810ml)和PdCl2(dppf)(5.09g)，然后把上述制備得到的鋅試劑溶液滴入該THF溶液中，保溫反應(yīng)(45℃)4h。將反應(yīng)液倒入飽和食鹽水中，攪拌15min，抽濾，分液，THF萃取(500ml)水相兩次，合并有機相，飽和食鹽水(500ml×3)洗滌，無水Na2SO4干燥，溶劑蒸干得到4-(2-吡啶甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(25g)。
MS(ESI)410(M+1) 第二步 4-(2-吡啶甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(3g)，5ml 1，4-二氧六環(huán)和5ml氨水加入25ml密封管中，加熱，外溫保持在80℃，反應(yīng)過夜，次日，冷卻至室溫，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯，振蕩，靜止分層，分液，水層用乙酸乙酯反萃取2次，合并有機相，用1M鹽酸溶液調(diào)PH≈3，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液拌硅膠過柱得到2-(4-氯苯基)-4-(2-吡啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺固體(2g)。
MS(ESI)381(M+1) 實施例13 2-(4-氯苯基)-4-(4-吡啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺
第一步 4-溴甲基吡啶(24.75g，0.138mol)中加入DMPU(225ml)、FeCl3(0.75g)、CuCl(0.3g)，慢慢滴入Et2Zn(106.8ml)，40～45℃保溫反應(yīng)45min，制得鋅試劑。
4-氯-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(30g)中，加入THF(810ml)和PdCl2(dppf)(5.09g)，然后把上述制備得到的鋅試劑溶液滴入該THF溶液中，保溫反應(yīng)(45℃)4h。將反應(yīng)液倒入飽和食鹽水中，攪拌15min，抽濾，分液，THF萃取(500ml)水相兩次，合并有機相，飽和食鹽水(500ml×3)洗滌，無水Na2SO4干燥，溶劑蒸干得到4-(4-吡啶甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(25g)。
MS(ESI)410(M+1) 第二步 4-(4-吡啶甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(3g)，5ml 1，4-二氧六環(huán)和5ml氨水加入25ml密封管中，加熱，外溫保持在80℃，反應(yīng)過夜，次日，冷卻至室溫，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯，振蕩，靜止分層，分液，水層用乙酸乙酯反萃取2次，合并有機相，用1M鹽酸溶液調(diào)PH≈3，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液拌硅膠過柱得到2-(4-氯苯基)-4-(4-吡啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺固體(2g)。
MS(ESI)381(M+1) 實施例14 2-(4-氯苯基)-4-(3-吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺
第一步 3-溴甲基吡咯(24.75g，0.138mol)中加入DMPU(225ml)、FeCl3(0.75g)、CuCl(0.3g)，慢慢滴入Et2Zn(106.8ml)，40～45℃保溫反應(yīng)45min，制得鋅試劑。
4-氯-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(30g)中，加入THF(810ml)和PdCl2(dppf)(5.09g)，然后把上述制備得到的鋅試劑溶液滴入該THF溶液中，保溫反應(yīng)(45℃)4h。將反應(yīng)液倒入飽和食鹽水中，攪拌15min，抽濾，分液，THF萃取(500ml)水相兩次，合并有機相，飽和食鹽水(500ml×3)洗滌，無水Na2SO4干燥，溶劑蒸干得到4-(3-吡咯甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(25g)。
MS(ESI)398(M+1) 第二步 4-(3-吡咯甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(3g)，5ml 1，4-二氧六環(huán)和5ml氨水加入25ml密封管中，加熱，外溫保持在80℃，反應(yīng)過夜，次日，冷卻至室溫，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯，振蕩，靜止分層，分液，水層用乙酸乙酯反萃取2次，合并有機相，用1M鹽酸溶液調(diào)PH≈3，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液拌硅膠過柱得到2-(4-氯苯基)-4-(3-吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺固體(2g)。
MS(ESI)369(M+1) 實施例15 2-(4-氯苯基)-4-(3-呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺
第一步 3-溴甲基呋喃(24.75g，0.138mol)中加入DMPU(225ml)、FeCl3(0.75g)、CuCl(0.3g)，慢慢滴入Et2Zn(106.8ml)，40～45℃保溫反應(yīng)45min，制得鋅試劑。
4-氯-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(30g)中，加入THF(810ml)和PdCl2(dppf)(5.09g)，然后把上述制備得到的鋅試劑溶液滴入該THF溶液中，保溫反應(yīng)(45℃)4h。將反應(yīng)液倒入飽和食鹽水中，攪拌15min，抽濾，分液，THF萃取(500ml)水相兩次，合并有機相，飽和食鹽水(500ml×3)洗滌，無水Na2SO4干燥，溶劑蒸干得到4-(3-呋喃甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(25g)。
MS(ESI)399(M+1) 第二步 4-(3-呋喃甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(3g)，5ml 1，4-二氧六環(huán)和5ml氨水加入25ml密封管中，加熱，外溫保持在80℃，反應(yīng)過夜，次日，冷卻至室溫，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯，振蕩，靜止分層，分液，水層用乙酸乙酯反萃取2次，合并有機相，用1M鹽酸溶液調(diào)PH≈3，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液拌硅膠過柱得到2-(4-氯苯基)-4-(3-呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺固體(2g)。
MS(ESI)370(M+1) 實施例16 2-(4-氯苯基)-4-(3-噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺
第一步 3-溴甲基噻吩(24.75g，0.138mol)中加入DMPU(225ml)、FeCl3(0.75g)、CuCl(0.3g)，慢慢滴入Et2Zn(106.8ml)，40～45℃保溫反應(yīng)45min，制得鋅試劑。
4-氯-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(30g)中，加入THF(810ml)和PdCl2(dppf)(5.09g)，然后把上述制備得到的鋅試劑溶液滴入該THF溶液中，保溫反應(yīng)(45℃)4h。將反應(yīng)液倒入飽和食鹽水中，攪拌15min，抽濾，分液，THF萃取(500ml)水相兩次，合并有機相，飽和食鹽水(500ml×3)洗滌，無水Na2SO4干燥，溶劑蒸干得到4-(3-噻吩甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(25g)。
MS(ESI)415(M+1) 第二步 4-(3-噻吩甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(3g)，5ml 1，4-二氧六環(huán)和5ml氨水加入25ml密封管中，加熱，外溫保持在80℃，反應(yīng)過夜，次日，冷卻至室溫，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯，振蕩，靜止分層，分液，水層用乙酸乙酯反萃取2次，合并有機相，用1M鹽酸溶液調(diào)PH≈3，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液拌硅膠過柱得到2-(4-氯苯基)-4-(3-噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺固體(2g)。
MS(ESI)386(M+1) 實施例17 2-(4-氯苯基)-4-(2-吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺
第一步 2-溴甲基吡咯(24.75g，0.138mol)中加入DMPU(225ml)、FeCl3(0.75g)、CuCl(0.3g)，慢慢滴入Et2Zn(106.8ml)，40～45℃保溫反應(yīng)45min，制得鋅試劑。
4-氯-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(30g)中，加入THF(810ml)和PdCl2(dppf)(5.09g)，然后把上述制備得到的鋅試劑溶液滴入該THF溶液中，保溫反應(yīng)(45℃)4h。將反應(yīng)液倒入飽和食鹽水中，攪拌15min，抽濾，分液，THF萃取(500ml)水相兩次，合并有機相，飽和食鹽水(500ml×3)洗滌，無水Na2SO4干燥，溶劑蒸干得到4-(2-吡咯甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(25g)。
MS(ESI)398(M+1) 第二步 4-(2-吡咯甲基)-2-(4-氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(3g)，5ml 1，4-二氧六環(huán)和5ml氨水加入25ml密封管中，加熱，外溫保持在80℃，反應(yīng)過夜，次日，冷卻至室溫，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯，振蕩，靜止分層，分液，水層用乙酸乙酯反萃取2次，合并有機相，用1M鹽酸溶液調(diào)PH≈3，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液拌硅膠過柱得到2-(4-氯苯基)-4-(2-吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺固體(2g)。MS(ESI)369(M+1) 實施例18 2-(3，5-二氯苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺
第一步 稱量10.5g 5-溴-噻吩-3-甲酸乙酯、6g 3，5-二氯苯硼酸、1.5gPd[P(Ph)3]4、7.5g碳酸鈉和347ml溶劑[甲苯水乙醇(V/V)＝421]依次加入500ml三口燒瓶中，加熱，回流反應(yīng)約3h，TLC跟蹤反應(yīng)進展，反應(yīng)完畢，冷卻至室溫，分層，分液，水相用甲苯35ml×2反萃取，合并有機相，用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥過夜，次日抽濾，減壓蒸干溶劑得淡黃色粘稠液，放置后凝結(jié)成固體，用無水乙醇重結(jié)晶得5-(3，5-二氯苯基)-3-噻吩甲酸乙酯晶體8.6g。
第二步 LDA制備氬氣保護下將252.6ml四氫呋喃，79ml N，N-二異丙基胺投入1000ml三口燒瓶，302.8ml正丁基鋰(1.6M in hexane)溶液置于500ml恒壓滴液漏斗，當(dāng)內(nèi)溫小于-20℃時逐滴滴加到反應(yīng)燒瓶中，劇烈放熱反應(yīng)，控制滴加速度，使內(nèi)溫保持在-20℃～-30℃之間，滴加完畢，自然升至室溫，直接做下列縮合反應(yīng)。
縮合反應(yīng)28.7g 5-(3，5-二氯苯基)噻吩-3-甲酸乙酯，1084ml四氫呋喃，29.7ml草酸二乙酯投入2000ml四口燒瓶中，接機械攪拌，500ml恒壓滴液漏斗和溫度計探頭，室溫攪拌溶解為淡黃色透明液，將上述制備的LDA溶液在氬氣保護下轉(zhuǎn)移到500ml恒壓滴液漏斗中，降溫，當(dāng)內(nèi)溫低于-78℃時，逐滴滴加LDA溶液至反應(yīng)燒瓶中，控制滴加速度，保持內(nèi)溫低于-78℃，滴加完畢，TLC跟蹤反應(yīng)進程，反應(yīng)結(jié)束后，加入2.2M的鹽酸溶液，調(diào)PH≈3，反應(yīng)液顏色由紅棕色變?yōu)榻埸S色，溫度升至0℃左右，再加入氯化鈉固體，攪拌溶解后靜止分層，分液，水層用143.5ml×2四氫呋喃反萃取，合并有機相，用飽和食鹽水洗滌兩次后，用稀碳酸鈉溶液調(diào)PH≈8，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓蒸干溶劑得黃色粘稠液，室溫放置逐漸凝結(jié)成固體，用乙醇重結(jié)晶后得5-(3，5-二氯苯基)-2-乙氧乙二?；?噻吩-3-甲酸乙酯純品(桔黃色晶體)25.5g。
第三步 3.0g 5-(3，5-二氯苯基)-2-乙氧乙二酰基-噻吩-3-甲酸乙酯晶體，45ml無水乙醇投入100ml反應(yīng)燒瓶中，室溫攪拌為黃色懸浮液，0.75ml水合肼置于恒壓滴液漏斗中，攪拌約10min后滴加入反應(yīng)燒瓶中，黃色懸浮液溶解為透明清夜，開啟加熱，設(shè)定溫度為70℃，隨著溫度升高，燒瓶中逐漸析出黃色固體，且反應(yīng)液越來越粘稠，保溫反應(yīng)1h，冷卻至室溫，抽濾，所得淡黃綠色固體用混合溶液(正己烷二氯甲烷＝11)15ml×2和(甲醇二氯甲烷＝11)15ml×2各洗滌兩次，減壓烘干得2-(3，5-二氯苯基)-4-氧代-4，5-二氫-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯2.75g。
第四步 1.5g 2-(3，5-二氯苯基)-4-氧代-4，5-二氫-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯，22.5ml三氯氧磷加入100ml三口燒瓶中，設(shè)定溫度為95℃，保溫反應(yīng)3h，逐漸溶解為深紅棕色溶液，反應(yīng)完畢，冷卻至室溫，減壓蒸干溶劑得棕褐色粘稠液，加入四氫呋喃和飽和食鹽水?dāng)嚢瑁龀龊芏帱S色固體，過濾，將濾液靜止分層，分液，反萃取，合并有機相后用稀碳酸氫鈉溶液調(diào)PH≈9，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液用活性炭回流脫色，得淡黃綠色透明液，減壓蒸干后得4-氯-2-(3，5-二氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(淡綠色絮狀固體)1.0g。
第五步 N-Boc-3-溴甲基哌啶(0.55g)中加入DMPU(5ml)、FeCl3(0.017g)、CuCl(0.007g)，慢慢滴入Et2Zn(2.5ml)，40～45℃保溫反應(yīng)45min，制得鋅試劑。
4-氯-2-(3，5-二氯苯基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(30g)中，加入THF(18ml)和PdCl2(dppf)(0.12g)，然后把上述制備得到的鋅試劑溶液滴入該THF溶液中，保溫反應(yīng)(45℃)4h。將反應(yīng)液倒入飽和食鹽水中，攪拌15min，抽濾，分液，THF萃取(80ml)水相兩次，合并有機相，飽和食鹽水(80ml×3)洗滌，無水Na2SO4干燥，溶劑蒸干得到2-(3，5-二氯苯基)-4-(N-Boc-3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(0.5g) 第六步 2-(3，5-二氯苯基)-4-(N-Boc-3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酸乙酯(0.5g)，1.0ml 1，4-二氧六環(huán)和1.0ml氨水加入5ml密封管中，加熱，外溫保持在80℃，反應(yīng)過夜，次日，冷卻至室溫，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯，振蕩，靜止分層，分液，水層用乙酸乙酯反萃取2次，合并有機相，用1M鹽酸溶液調(diào)PH≈3，最后用飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液拌硅膠過柱得到2-(3，5-二氯苯基)-4-(N-Boc-3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺固體(0.3g)。
第七步 200mg 2-(3，5-二氯苯基)-4-(N-Boc-3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺，4ml乙酸乙酯加入25ml單口燒瓶中，溶解為淡黃色透明溶液，加入4ml 3M鹽酸溶液，即變成白色懸浮液，30℃保溫反應(yīng)1h，白色懸浮液液變?yōu)橥该魅芤?，點板跟蹤反應(yīng)進展，反應(yīng)完畢，減壓蒸干溶劑得2-(3，5-二氯苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺鹽酸鹽固體100mg。
第八步 100mg 2-(3，5-二氯苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺鹽酸鹽加入25ml單口燒瓶中，加入5ml水，滴加碳酸鈉溶液，調(diào)pH＝9～10，攪拌30min，用乙酸乙酯萃取，洗滌，減壓蒸干溶劑得到2-(4-氯苯基)-4-(4-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺70mg。
MS(ESI)421(M+1) 實施例19 藥物制劑的制備 1、注射劑 (1)處方
(2)制備 按處方量稱取化合物II置于配料缸內(nèi)，加入20萬ml左右的注射用水將其完全溶解，再加入處方量氯化鈉溶解完全后繼續(xù)加注射用水至全量，調(diào)節(jié)溶液PH值至4.0～5.0之間，加入250g活性碳吸附30分鐘后用脫碳濾棒脫碳，再用鈦濾棒精濾至澄明后灌裝成250ml/瓶，115℃水浴滅菌30分鐘后即得。
2、片劑 (1)處方
(2)制備 稱取處方量化合物XXXIII、淀粉和羥丙纖維素置于沸騰制粒機料斗內(nèi)，開主風(fēng)將物料預(yù)熱至38℃～45℃預(yù)混5分鐘，噴入5％聚維酮K30水溶液適量制粒，制粒完成后控制物料溫度至55℃～60℃干燥10分鐘后出料，整粒后與羧甲淀粉鈉、硬脂酸鎂混勻后壓片即得。
3、膠囊劑 (1)處方
(2)制備 按處方量稱取化合物XXXXIV、乳糖、羧甲淀粉鈉和微粉硅膠置于混合機內(nèi)混合60分鐘使其混合均勻，再加入處方量硬脂酸鎂混合10分鐘后出料，用普通明膠膠殼填充即得。
對以上制備得到的部分化合物進行了體外與體內(nèi)抗腫瘤活性試驗。其中體外采用了SRB，MTT法測得細胞毒性；作用時間為72h。具體活性數(shù)據(jù)見表一；化合物對小鼠S180肉瘤的生長抑制作用見表二；化合物對人結(jié)腸癌HT-99裸小鼠移植瘤的療效見表三。
表一 化合物的體外抗癌活性檢測IC50(μM) 表二、化合物對小鼠S180結(jié)腸癌的生長抑制作用 N＝7 -X±SD 說明ip腹腔注射給藥。
表三 化合物對人結(jié)腸癌HT-99裸小鼠移植瘤的療效
d0第一次給藥時間；dn給藥后第17天；RTV相對腫瘤體積； 對照組n＝10，治療組n＝6。
ip腹腔注射給藥 iv血管注射給藥 GCT為對照藥吉西他濱 ADR為對照藥阿霉素 CPT-11為對照藥伊立替康 從上表中可以看出，本發(fā)明化合物本身不但有一定的抗腫瘤作用，且還能夠增強細胞毒抗腫瘤藥物如吉西他濱、CPT-11、ADR等的抗腫瘤療效。
本發(fā)明通過上面的實施例進行舉例說明，但是，應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明并不限于這里所描述的特殊實例和實施方案。在這里包含這些特殊實例和實施方案的目的在于幫助本領(lǐng)域中的技術(shù)人員實踐本發(fā)明。任何本領(lǐng)域中的技術(shù)人員很容易在不脫離本發(fā)明精神和范圍的情況下進行進一步的改進和完善，因此本發(fā)明只受到本發(fā)明權(quán)利要求的內(nèi)容和范圍的限制，其意圖涵蓋所有包括在由附錄權(quán)利要求所限定的本發(fā)明精神和范圍內(nèi)的備選方案和等同方案。
權(quán)利要求
1、式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物，
其中
R1和R2各自獨立地為H或C1-4的烷基；
R3為含N、S或O的飽和或不飽和的六元環(huán)或五元環(huán)，及其光學(xué)異構(gòu)體；
R4為任意位置單取代或雙取代的鹵代苯基。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物，其中，R1＝R2＝H。
3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物，其中，R3為含N、S或O的飽和六元環(huán)或五元環(huán)，及其光學(xué)異構(gòu)體。
4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物，其中，R3為六氫吡啶基、四氫吡喃基、四氫噻喃基、四氫吡咯基、四氫呋喃基、或四氫噻吩基，及其光學(xué)異構(gòu)體。
5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物，其中，R3為六氫吡啶基，及其光學(xué)異構(gòu)體。
6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物，其中，R4為單取代的鹵代苯基
其中，X表示F、Cl、Br、I。
7、根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物，其中，R3為吡啶基、α-吡喃基、γ-吡喃基、α-噻喃基、γ-噻喃基、吡咯基、呋喃基、或噻吩基，及其光學(xué)異構(gòu)體。
8、根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物，其中，式(I)化合物選自
2-(4-氟苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-四氫吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-四氫吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-四氫噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-四氫噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(2-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(4-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(S-3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(R-3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-四氫呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-四氫呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-四氫噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-四氫噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(2-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(S-3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(R-3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-四氫呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-吡啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-吡啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-吡啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-α-吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-α-吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-α-吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-α-噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-α-噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-α-噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(2-吡啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(4-吡啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-吡啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-吡啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-噻喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-吡喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-4-(3-噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-溴苯基)-4-(3-噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(2-吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-吡咯甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-噻吩甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N-甲基甲酰胺；
2-(4-氯苯基)-4-(3-呋喃甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-N，N-二甲基甲酰胺；
2-(3，5-二氯苯基)-4-(3-哌啶甲基)-噻吩并[2，3-d]噠嗪-7-甲酰胺。
9、藥物組合物，包括權(quán)利要求1～8中任一的權(quán)利要求所述的治療有效量的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物、以及藥學(xué)上可接受的載體。
10、權(quán)利要求1～8中任一項權(quán)利要求的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物在制備用于治療或預(yù)防腫瘤性疾病的藥物、治療或預(yù)防增生性疾病的藥物、限制人或動物細胞增殖的藥物、抑制腫瘤及生長因子相關(guān)激酶的藥物中的用途。
11、根據(jù)權(quán)利要求10所述的用途，其中，所述腫瘤性疾病包括子宮頸瘤，頭部和頸部腫瘤，乳腺、卵巢、肺非小細胞、胰腺、結(jié)腸、前列腺或其它組織的癌癥，以及白血病和淋巴瘤、中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤以及其它腫瘤如黑素瘤、纖維肉瘤和骨肉瘤。
12、根據(jù)權(quán)利要求10所述的用途，其中，所述增生性疾病包括自身免疫性疾病、炎癥、神經(jīng)性疾病和心血管疾病。
13、制備權(quán)利要求1～8中任一所述的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物的方法，該方法包括
在堿存在下，用草酸二烷基酯處理式A的化合物
接著用肼處理，生成式B的化合物
用磷酰氯處理式B的化合物，生成式C的化合物
并且使式C的化合物與如下化合物R3CH2反應(yīng)，生產(chǎn)式D的化合物，
接著與胺NHR1R2反應(yīng)，再去R3上的保護基及加堿處理，生成式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物，
其中R為C1-4的烷基，并且R1和R2各自獨立地為H或C1-4的烷基；R3為含N、S或O的飽和或不飽和的六元環(huán)或五元環(huán)，及其光學(xué)異構(gòu)體；R4為任意位置單取代或雙取代的鹵代苯基。
全文摘要
本發(fā)明涉及噻吩并噠嗪類化合物式(I)或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物，其中R1和R2各自獨立地為H或C1-4的烷基；R3為含N、S或O的飽和或不飽和的六元環(huán)或五元環(huán)，及其光學(xué)異構(gòu)體；R4為任意位置單取代或雙取代的鹵代苯基。本發(fā)明還提供了上述化合物的制備方法、含有它們的藥物組合物以及它們的用途，特別是抗腫瘤的用途。
文檔編號C07D495/04GK101481380SQ20091000033
公開日2009年7月15日 申請日期2009年1月6日 優(yōu)先權(quán)日2008年1月8日
發(fā)明者吳章桂 申請人:浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠, 吳章桂