一種用于治療椎間盤退行性變的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞復(fù)合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及脂肪干細(xì)胞應(yīng)用領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明提供了一種脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞 用于治療椎間盤退行性變的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 椎間盤退行性變(Degenerative Disc Disease,DDD)是一種自然的衰老過程。隨 著年齡的增長(zhǎng)，椎間盤逐漸失去柔韌性、彈性和減震的功能。椎間盤退行性變的確切機(jī)制還 有待研究，但主要是由于機(jī)械、營(yíng)養(yǎng)、生物等各種因素造成損傷，導(dǎo)致椎間盤細(xì)胞因子減少， 炎癥介質(zhì)增多、基質(zhì)金屬蛋白酶和其它蛋白水解酶含量及活性增加，引起細(xì)胞外基質(zhì)降解， 髓核細(xì)胞數(shù)目減少，進(jìn)而使蛋白多糖、膠原的合成減少，椎間盤類軟骨細(xì)胞賴以生存的內(nèi)環(huán) 境被破壞，不能維持椎間盤內(nèi)應(yīng)有的張力，從而導(dǎo)致椎間盤的退行性變。椎間盤是一封閉結(jié) 構(gòu)，營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)差，退行性變很難自行修復(fù)。
[0003] 腰背痛疾病是目前常見病、多發(fā)病，椎間盤退行性變是腰背痛疾病的主要發(fā)病原 因。據(jù)有關(guān)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，美國(guó)每年因腰背痛疾病就診者，僅次于上呼吸道感染而居第二 位。在英國(guó)，每年2%的人口和25%左右的就業(yè)人員患有腰背痛疾病。
[0004] 椎間盤退行性疾病應(yīng)及時(shí)診斷和治療，阻止病情的進(jìn)展，防止更為嚴(yán)重的后遺癥。 目前，椎間盤退行性疾病的治療方法主要有：（1)非手術(shù)治療，如臥床休息、拉伸牽引、按摩、 針灸理療、藥物治療等;這類治療無法從本質(zhì)上延緩椎間盤退行性變，大多只能短時(shí)間內(nèi)緩 解癥狀；（2)手術(shù)治療，如椎間盤切除、腰椎融合術(shù)、椎間關(guān)節(jié)融合、椎間盤內(nèi)射頻消融等。以 緩解癥狀為目的的非手術(shù)，治療見效較慢，需長(zhǎng)期堅(jiān)持。而以恢復(fù)椎體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性為目的的 外科手術(shù)治療結(jié)果不理想，主要原因有：〇1椎間盤無血管和神經(jīng)支配，陰陽(yáng)靠椎體及其周 圍軟組織通過軟骨終板和外纖維環(huán)的滲透提供；〇2軟骨細(xì)胞以及類軟骨細(xì)胞樣的髓核細(xì) 胞和纖維環(huán)細(xì)胞分裂增生能力較弱，自我修復(fù)能力差;3 ?臨床就診患者一般均處于整個(gè)病 程的晚期，椎間盤的完整性有明顯破壞，退行性變已經(jīng)發(fā)展到不可逆轉(zhuǎn)的程度?，F(xiàn)在臨床上 嚴(yán)重椎間盤退變大多數(shù)采取手術(shù)治療，手術(shù)治療雖然能夠有效的緩解臨床癥狀，但未能從 根本上解決椎間盤本身的病變問題，切除椎間盤還可因脊柱不穩(wěn)而導(dǎo)致退變的進(jìn)一步惡 化。（3)細(xì)胞移植治療:細(xì)胞移植治療是將自體的椎間盤細(xì)胞再移植到退化的椎間盤，延緩 椎間盤的進(jìn)一步退化。但是自體來源的椎間盤細(xì)胞非常有限，無法滿足自體椎間盤細(xì)胞再 植入的要求。
[0005] 干細(xì)胞是一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞，它在一定的環(huán)境下能分化為多種 功能細(xì)胞。一直以來，骨髓都是用作造血祖細(xì)胞組織來源的金標(biāo)準(zhǔn)，但隨著研究與應(yīng)用越來 越多，骨髓來源的干細(xì)胞在臨床使用的不足之處亦越發(fā)突顯，如從采集到臨床使用的過程 耗時(shí)過長(zhǎng)，采集骨髓對(duì)供體本身的傷害，培養(yǎng)成本較高，較低的HLA配型成功率等，制約了其 在臨床治療中的廣泛應(yīng)用。
[0006] 綜上所述，本領(lǐng)域迫切需要一種能夠有效治療椎間盤退行性變的手段。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種能夠有效治療椎間盤退行性變的手段。
[0008] 本發(fā)明的第一方面，提供了一種脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞的用途，所述的脂肪間充質(zhì)祖 細(xì)胞用于制備治療椎間盤退行性變的藥物組合物。
[0009] 在另一優(yōu)選例中，在所述藥物組合物中，所述的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞的濃度為10±5 X106cells/0·5ml〇
[0010] 在另一優(yōu)選例中，所述的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞是傳代培養(yǎng)的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞。
[0011] 在另一優(yōu)選例中，所述的組合物中，所述脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞的含量為1 X 106/ml-l X108/ml〇
[0012] 在另一優(yōu)選例中，所述的組合物的體積為10-100μ1。
[0013] 在另一優(yōu)選例中，在所述組合物中，主要活性成分僅為脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞。
[0014] 在另一優(yōu)選例中，所述的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞是通過SVF培養(yǎng)Ρ3-Ρ10代純化擴(kuò)增獲 得的細(xì)胞。
[0015] 在另一優(yōu)選例中，所述的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞具有分化為骨，軟骨和脂肪的能力。
[0016] 在另一優(yōu)選例中，所述的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞為表達(dá)選自下組的表面標(biāo)記的脂肪間 充質(zhì)祖細(xì)胞:CD29、CD73、CD90、CD49d。
[0017] 在另一優(yōu)選例中，所述的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞為不表達(dá)選自下組的表面標(biāo)記的脂肪 間充質(zhì)祖細(xì)胞:CD34、CD45、CD14、HLA-DR、Actin。
[0018] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物中還包括透明質(zhì)酸。
[0019] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物包括:脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞，和藥學(xué)上可接受的 載體。
[0020] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥學(xué)上可接受的載體為輸液劑載體和/或注射劑載體，優(yōu) 選地選自下組:生理鹽水、葡萄糖鹽水。
[0021] 在另一優(yōu)選例中，所述的治療包括選自下組的一項(xiàng)或多項(xiàng)指標(biāo)改善:生活質(zhì)量(優(yōu) 選通過生活質(zhì)量評(píng)分表評(píng)估），椎間盤厚度(優(yōu)選通過影像學(xué)檢查評(píng)估），疼痛癥狀(優(yōu)選通 過疼痛評(píng)分表評(píng)估）。
[0022] 在另一優(yōu)選例中，所述的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞具有選自下組的任一或多種特征：
[0023] (i)90%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶29;
[0024] (ii)90%以上的細(xì)胞具有表面抗原CD73;
[0025] (iii)90%以上的細(xì)胞具有表面抗原CD49d;
[0026] (iv)90%以上的細(xì)胞具有表面抗原CD90。
[0027]在另一優(yōu)選例中，95%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶29。
[0028]在另一優(yōu)選例中，95%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶73。
[0029]在另一優(yōu)選例中，95%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶49d。
[0030]在另一優(yōu)選例中，95%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶90。
[0031 ] 在另一優(yōu)選例中，95-100% (優(yōu)選98-100%，更優(yōu)選99-100%)的細(xì)胞具有表面抗 原CD29。
[0032] 在另一優(yōu)選例中，95-100% (優(yōu)選98-100%，更優(yōu)選99-100%)的細(xì)胞具有表面抗 原CD73。
[0033] 在另一優(yōu)選例中，95-100% (優(yōu)選98-100%，更優(yōu)選99-100%)的細(xì)胞具有表面抗 原CD49d。
[0034] 在另一優(yōu)選例中，95-100% (優(yōu)選98-100%，更優(yōu)選99-100%)的細(xì)胞具有表面抗 原CD90。
[0035] 在另一優(yōu)選例中，所述的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞具有選自下組的任一或多種特征：
[0036] (v)在細(xì)胞群中，5%以下的細(xì)胞具有表面抗原CD34;
[0037] (vi)在細(xì)胞群中，5 %以下的細(xì)胞具有表面抗原CD45;
[0038] (vii)在細(xì)胞群中，5%以下的細(xì)胞具有表面抗原Actin;
[0039] (vi i i)在細(xì)胞群中，5 %以下的細(xì)胞具有表面抗原HLA-DR;
[0040] (ix)在細(xì)胞群中，5%以下的細(xì)胞具有表面抗原⑶14。
[0041 ]在另一優(yōu)選例中，2%以下的細(xì)胞具有表面抗原⑶34。
[0042]在另一優(yōu)選例中，2%以下的細(xì)胞具有表面抗原⑶45。
[0043]在另一優(yōu)選例中，1 %以下的細(xì)胞具有表面抗原⑶34。
[0044]在另一優(yōu)選例中，1 %以下的細(xì)胞具有表面抗原⑶45。
[0045]在另一優(yōu)選例中，2%以下的細(xì)胞具有表面抗原Actin。
[0046] 在另一優(yōu)選例中，2%以下的細(xì)胞具有表面抗原HLA-DR。
[0047] 在另一優(yōu)選例中，2%以下的細(xì)胞具有表面抗原⑶14。
[0048] 在另一優(yōu)選例中，1%以下的細(xì)胞具有表面抗原Actin。
[0049] 在另一優(yōu)選例中，1%以下的細(xì)胞具有表面抗原HLA-DR。
[0050] 在另一優(yōu)選例中，1 %以下的細(xì)胞具有表面抗原⑶14。
[0051] 在另一優(yōu)選例中，0.01-5% (優(yōu)選0.1-4%，更優(yōu)選1-3%)的細(xì)胞具有表面抗原 CD34〇
[0052] 在另一優(yōu)選例中，0.01-1 % (優(yōu)選0.05-0.5 %，更優(yōu)選0.08-0.2% )的細(xì)胞具有表 面抗原⑶45。
[0053] 在另一優(yōu)選例中，0.01-3% (優(yōu)選0.05-2%，更優(yōu)選0.1-1 % )