包含齊多夫定和多粘菌素的組合的制作方法
【專利說明】包含齊多夫定和多粘菌素的組合
[0001] 本發(fā)明涉及抗逆轉(zhuǎn)錄病毒劑與抗微生物劑組合用于，特別地通過殺死臨床潛伏的 與微生物感染相關(guān)的微生物，治療微生物感染的用途。
[0002] 在抗生素引入之前，患有急性微生物感染（例如結(jié)核病或肺炎）的病人具有較低 的生存機(jī)會(huì)。例如，結(jié)核病的死亡率約為50%。盡管二十世紀(jì)四十年代和五十年代抗微生物 劑的引入迅速地改變了這種情況，但是細(xì)菌通過逐步獲得對(duì)普遍使用的抗生素的耐受作出 響應(yīng)。目前，世界上每個(gè)國(guó)家均具有耐抗生素的細(xì)菌。確實(shí)，在美國(guó)超過70%的引起醫(yī)院獲 得性感染的細(xì)菌可抵抗至少一種主要的通常用于抗感染的抗微生物劑OVatore TfeKiers DrugDiscovery,1, 895-910 (2002) )〇
[0003] -種解決日益嚴(yán)重的細(xì)菌耐受問題的方法是開發(fā)新類別的抗微生物劑。然而，直 到2000年利奈唑胺的引入，超過37年沒有新類別的抗生素上市。此外，甚至新類別抗生素 的開發(fā)僅提供臨時(shí)的解決方案，而且確實(shí)已經(jīng)有某些細(xì)菌對(duì)利奈唑胺耐受的報(bào)道 357，1179 (2001)和 LMcet，358，207-208 (2001))。
[0004] 為了開發(fā)更長(zhǎng)期的細(xì)菌耐受問題的解決方案，很明顯需要替代方法。一種這樣的 替代方法是盡可能地使給予細(xì)菌發(fā)展對(duì)重要抗生素的耐受的機(jī)會(huì)最小化。因此，可采取的 策略包括限制抗生素用于治療非急性感染的使用，以及控制為了促進(jìn)生長(zhǎng)而給動(dòng)物飼喂抗 生素。
[0005] 然而，為了更加有效地解決問題，獲得對(duì)細(xì)菌產(chǎn)生對(duì)抗生素劑的耐受的實(shí)際機(jī)制 的理解是必要的。完成此，需要首先考慮當(dāng)前的抗生素劑是如何工作以殺死細(xì)菌的。
[0006] 抗微生物劑靶向細(xì)菌代謝的主要組分。例如，內(nèi)酰胺（例如青霉素和頭孢菌 素）抑制細(xì)胞壁合成，而其它劑抑制多元范圍的靶，例如DNA旋轉(zhuǎn)酶（喹諾酮類）和蛋白質(zhì) 合成（例如大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類、四環(huán)素類和惡唑烷酮類）?？刮⑸飫?duì)其有效的生 物的范圍是多種多樣的，這取決于哪種生物嚴(yán)重依賴于被抑制的代謝步驟。此外，對(duì)細(xì)菌的 作用可可從僅僅抑制生長(zhǎng)（例如抑菌作用，可如參見劑如四環(huán)素類）到完全殺死（例如殺 菌作用，可參如見抗微生物劑如青霉素）之間變化。
[0007] 細(xì)菌已經(jīng)在地球上生長(zhǎng)了超過三十億年，并且在那個(gè)時(shí)代，需要響應(yīng)大量的環(huán)境 應(yīng)激。因此可能并不意外細(xì)菌發(fā)展了看起來無窮種的可響應(yīng)抗生素劑強(qiáng)加于它們的代謝應(yīng) 激的機(jī)制。確實(shí)，通過其細(xì)菌可產(chǎn)生耐受的機(jī)制包括多種策略：藥物的失活，作用位點(diǎn)的修 飾，細(xì)胞壁滲透壓的修飾，靶酶的過度產(chǎn)生和被抑制步驟的旁路。然而，已經(jīng)觀察到了對(duì)具 體的試劑出現(xiàn)耐受的速度差異很大，這取決于多種因素例如試劑的作用機(jī)制（不管試劑的 殺滅方式是時(shí)間依賴型還是濃度依賴型），抵抗細(xì)菌群的效能和可利用的血清濃度的量級(jí) 和持續(xù)時(shí)間。
[0008] 已經(jīng)提出（Scimce，264，388-393 (1994))靶向單一酶的劑（例如利福平）是最 易于發(fā)展耐受的。此外，最適度以下水平的抗微生物劑與細(xì)菌接觸越長(zhǎng)，越可能出現(xiàn)耐受。
[0009] 此外，現(xiàn)在已知許多微生物感染包括表型耐抗微生物劑的細(xì)菌亞群U Antimicrob.Chemother. ,4, 395-404 (1988);J.Med.Microbiol.,38, 197-202 (1993);J.Bacteriol.,182, 1794-1801 (2000);ibid.182, 6358-6365 (2000); ibid.183, 6746-6751 (2001);FEMSMicrobiol.Lett.,202, 59-65 (2001);和 13，34-40 (2005))。似乎有若干類型的這樣的表型性耐受細(xì) 菌，包括耐藥株（persisted)、靜止期細(xì)菌以及生物膜深處的那些。然而，這些類型的每一 種均表征為與相同條件下對(duì)數(shù)期細(xì)菌相比其低的生長(zhǎng)速率。營(yíng)養(yǎng)饑餓和高細(xì)胞密度也是這 樣的細(xì)菌的常見特征。
[0010] 盡管在其慢速生長(zhǎng)狀態(tài)耐抗微生物劑，但是表型性耐受細(xì)菌與遺傳型耐受的那些 不同之處在于當(dāng)恢復(fù)到快速生長(zhǎng)期時(shí)（例如更容易獲得營(yíng)養(yǎng)時(shí)）其恢復(fù)對(duì)抗微生物劑的易 感性。
[0011] 感染中表型性耐受細(xì)菌的存在導(dǎo)致需要延長(zhǎng)抗微生物劑的過程，包括多倍劑量。 這是因?yàn)槟褪艿?、緩慢增殖的?xì)菌提供了當(dāng)條件允許時(shí)可轉(zhuǎn)換到快速生長(zhǎng)期（從而有效地 重新開始感染）的"潛伏"生物池。多倍劑量通過逐步殺光轉(zhuǎn)換到"活化"形式的"潛伏"細(xì) 菌隨時(shí)間推移解決該問題。
[0012] 然而，通過給予延長(zhǎng)過程的抗微生物劑來處理"潛伏"細(xì)菌造成其自身問題。艮P， 細(xì)菌在最適度以下濃度的抗微生物物劑中延長(zhǎng)暴露可導(dǎo)致遺傳型耐受細(xì)菌的出現(xiàn)，遺傳型 耐受細(xì)菌可然后在甚至高濃度的該抗微生物劑存在下快速增殖。
[0013] 抗微生物劑的長(zhǎng)過程比較短過程更可能促進(jìn)遺傳型耐受的出現(xiàn)，原因在于非增殖 細(xì)菌會(huì)傾向于存活，并且有趣地，可能有增強(qiáng)的突變?yōu)槟褪艿哪芰Γ?^roc.他以. "似，92，11736-11740 (1995); 萬aderio丄，179，6688-6691 (1997);和 Antimicrob.AgentsChemother.,44, 1771-1777 (2000))〇
[0014] 綜上所述，對(duì)抗細(xì)菌耐受問題的新方法可以為基于其殺死"潛伏"微生物的能力篩 選和開發(fā)抗微生物劑。這樣的劑的產(chǎn)生會(huì)允許，除了別的之外，縮短微生物感染治療的化療 方案，因此減小微生物遺傳型耐受發(fā)生的頻率。
[0015] 最近，已經(jīng)有關(guān)于抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物，齊多夫定當(dāng)與慶大霉素組合時(shí)作為抗微生 物劑是有活性的報(bào)道。因此，Dol6ans_Jordheim A.等人公開（Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2011 0ct;30(10):1249-56)齊多夫定（AZT)對(duì)一些腸細(xì)菌具有殺菌作用，然 而可誘發(fā)大腸桿菌的耐受。這些耐受與胸苷激酶基因的各種修飾有關(guān)。此外，觀察到AZT 與兩種氨基糖苷類抗生素阿米卡星和慶大霉素在抗腸細(xì)菌方面的加和或協(xié)同作用。
[0016] 因此，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中提供了齊多夫定與選自粘菌素及多粘菌素B的 抗微生物多粘菌素的組合用于治療微生物感染的用途。
[0017] 在本發(fā)明進(jìn)一步的實(shí)施方案中提供了用于治療微生物感染，優(yōu)選殺死臨床上潛伏 的與微生物感染相關(guān)的微生物的藥物組合物，其包含齊多夫定和肽例如選自粘菌素及多粘 菌素B的多粘菌素，以及藥學(xué)上可接受的載體。
[0018] 本發(fā)明還基于與任一種單獨(dú)給予時(shí)相比本文所述組合的活性大幅改善這一意外 發(fā)現(xiàn)。此外，該組合已出人意料地顯示對(duì)于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（即增殖）和/或臨床潛伏的微生 物表現(xiàn)出協(xié)同抗微生物活性。本發(fā)明組合的出人意料的生物學(xué)活性提供了縮短化療方案的 機(jī)會(huì)，并且可導(dǎo)致與使用該組合相關(guān)的微生物耐受的出現(xiàn)減少。
[0019] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了齊多夫定和選自粘菌素及多粘菌素B的多粘 菌素，或其藥學(xué)上可接受的鹽用于制造治療微生物感染，優(yōu)選地殺死臨床上潛伏的與微生 物感染相關(guān)的微生物的藥物的用途。
[0020] 在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供治療微生物感染，優(yōu)選地殺死臨床上潛伏的 與微生物感染相關(guān)的微生物的方法，其包括組合給予哺乳動(dòng)物，包括人，齊多夫定和選自粘 菌素及多粘菌素B的多粘菌素或其藥學(xué)上可接受的鹽。
[0021] 如本文所使用的，術(shù)語"組合"涵蓋分開和連續(xù)給予抗逆轉(zhuǎn)錄病毒劑和抗微生物劑 二者。例如，當(dāng)連續(xù)給予該劑時(shí)，可首先給予齊多夫定或肽。當(dāng)同時(shí)給予時(shí)，該劑可以以相 同或者不同的藥物組合物給予。輔助治療，即將一種劑用作主要治療，而另一劑用于輔助該 主要治療，也是本發(fā)明的實(shí)施方案。
[0022] 根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步的實(shí)施方案，提供了包含齊多夫定和選自粘菌素及多粘菌素B 的多粘菌素的產(chǎn)品，作為用于在特別地通過殺死臨床上潛伏的與微生物感染相關(guān)的微生物 治療微生物感染中同時(shí)、分開或貫序使用的組合制劑。
[0023] 還提供了包含齊多夫定和選自粘菌素及多粘菌素B的多粘菌素，以及藥學(xué)上可接 受的輔藥、稀釋劑或載體的藥物組合物。這樣的組合物可用于治療微生物感染，特別地用于 殺死臨床上潛伏的與這樣的感染相關(guān)的微生物。
[0024] 本發(fā)明組合可用于治療微生物感染。特別地其可用于殺死增殖的和/或臨床上潛 伏的與微生物感染相關(guān)的微生物。因此本文提到的治療微生物感染包括殺死增殖的和/或 臨床上潛伏與這樣的感染相關(guān)的微生物。優(yōu)選地，本發(fā)明組合用于殺死臨床上潛伏的與微 生物感染相關(guān)的微生物。
[0025] 如本文所使用的，"殺死"意指通過代謝活動(dòng)的缺乏評(píng)估的活力的喪失。
[0026] 如本文所使用的，"臨床上潛伏的微生物"意指代謝上有活性的但生長(zhǎng)速率低于感 染性疾病表現(xiàn)閾值的微生物。感染性疾病表現(xiàn)的閾值是指在其之下宿主中無感染性疾病癥 狀的生長(zhǎng)速率閾值。
[0027] 臨床上潛伏的微生物的代謝活性可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種方法確定； 例如，通過測(cè)量微生物中的mRNA水平或確定其尿苷攝取速率。在這方面，當(dāng)與處于對(duì)數(shù)生 長(zhǎng)條件下的微生物（體外或體內(nèi)）相比時(shí)，臨床上潛伏的微生物具有減少的但仍舊顯著的 下列水平： (I) mRNA (例如 mRNA 水平的 0.0001 - 50%，例如 1-30, 5-25 或 10-20%);和 / 或 (II) 尿苷（例如[3H]尿苷）攝取（例如[3H]尿苷攝取水平的0? 0005-50%，例如1-40， 15-35 或 20-30%)。
[0028] 臨床上潛伏的微生物通常具有許多可識(shí)別的特征。例如，它們可為能存活的，但不 可培養(yǎng)；即它們通常不能通過標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)技術(shù)檢測(cè)，但是通過諸如肉湯稀釋計(jì)數(shù)法、顯微鏡 法等技術(shù)或諸如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的分子技術(shù)而可檢測(cè)和可定量。另外，臨床上潛伏的微生 物為表型性耐受的，因而對(duì)常規(guī)抗微生物劑的生物靜力學(xué)效應(yīng)是敏感的（在對(duì)數(shù)期）（即 傳統(tǒng)抗微生物劑對(duì)微生物的最小抑菌濃度（MIC)基本不變）；但是具有急劇下降的藥物誘 導(dǎo)的致死的易感性（例如任何給定的傳統(tǒng)抗微生物劑對(duì)微生物的最小殺微生物濃度（例如 最小殺菌濃度，MBC)與MIC的比率為10或更大）。
[0029] 如本文所使用的，術(shù)語"微生物"意指真菌和細(xì)菌。本文提及的"微生物的"、"抗微 生物的"、"抗微生物地"會(huì)相應(yīng)解釋。例