一種檢測粘菌素甲烷磺酸鈉中甲醛殘留量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于粘菌素甲燒橫酸鋼中雜質(zhì)的檢測，具體設(shè)及粘菌素甲燒橫酸鋼中甲醒 殘留量的檢測，更具體的設(shè)及一種基于液相色譜儀檢測粘菌素甲燒橫酸鋼中甲醒殘留量的 方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 粘菌素甲燒橫酸鋼是硫酸粘菌素的前體藥物，是硫酸粘菌素引入甲燒橫酸基后的 產(chǎn)物，目的是降低硫酸粘菌素的毒性。因為硫酸粘菌素毒性太大，在美國作為非腸道給藥是 不允許的，一般用于耳朵的局部用藥或口服用于治療腸道感染，經(jīng)化學(xué)修飾后的粘菌素甲 燒橫酸鋼毒性會大大降低，LD50降低了 50倍W上，因此可W作為靜脈給藥。粘菌素甲燒橫 酸鋼是綠脈桿菌感染的首選藥物，可治綠脈桿菌性腦膜炎，也可用于敗血癥、泌尿系統(tǒng)、腹 部及其它手術(shù)后感染。但樣品中甲醒殘留的檢測目前未見報道。
[0003] 甲醒為較高毒性的物質(zhì)，在我國有毒化學(xué)品優(yōu)先控制名單上甲醒高居第二位，甲 醒已經(jīng)被世界衛(wèi)生組織確定為致癌和致崎形物質(zhì)，其可破壞生物細胞蛋白，引起人體過敏、 腸道刺激、食物中毒等疾患。
[0004] 粘菌素甲燒橫酸鋼生產(chǎn)制備過程中會引入甲醒，但目前粘菌素甲燒橫酸鋼中甲醒 殘留量的檢測在中國及EP、USP藥典上均未體現(xiàn)。目前制藥企業(yè)檢測甲醒的方法較多，主要 為己酷丙酬法、鹽酸苯阱法、滴定法，該幾種方法試驗線性關(guān)系差，精度低，不能滿足要求， 而粘菌素甲燒橫酸鋼中甲醒的存在不僅加大了藥物的毒性，降低的藥物的藥效，如果檢測 不準(zhǔn)，甲醒的限量不能保證就不僅僅是劣藥，甚至?xí)蔀槎舅帲颊呤褂弥笊踔習(xí)＜?生命造成不可挽回的局面，因而為嚴格控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證產(chǎn)品安全，粘菌素甲燒橫酸鋼中 甲醒的殘留量的檢測及其合適有效的檢測方法就尤為重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明為解決粘菌素甲燒橫酸鋼中甲醒含量的檢測，提供了一種基于液相色譜儀 檢測粘菌素甲燒橫酸鋼中甲醒殘留量的方法。
[0006] 本發(fā)明為實現(xiàn)其目的采用的技術(shù)方案是：
[0007] 一種檢測粘菌素甲燒橫酸鋼中甲醒殘留量的方法，所述的方法為一種基于液相色 譜儀檢測粘菌素甲燒橫酸鋼中甲醒殘留量的方法包括W下步驟：
[0008] a、制備供試品溶液；精密稱定粘菌素甲燒橫酸鋼1. Og置燒杯中，加lOmL無水己 醇，超聲lOmin后離屯、分離，精密量取5mL上清液置lOmL容量瓶中，并向容量瓶中精密加 入3mL磯酸水溶液，ImL 2, 4-二硝基苯阱無水己醇溶液，并用無水己醇稀釋至刻度，蓋好瓶 塞，用倒轉(zhuǎn)的方式使瓶內(nèi)的液體混合均勻，于30-40°C放置5-lOh ;
[0009] b、制備對照品溶液A ;精密稱定1. Ig甲醒溶液置100血量瓶中，用無水己醇溶解 定容至刻度，所述的甲醒溶液使用前進行滴定；
[0010] C、制備對照品溶液B ;精密量取1. 0血步驟b制備的對照品溶液A，置200血量瓶 中，用無水己醇定容至刻度；
[OCm] t制備對照品溶液C ;精密量取5. OmL步驟C制備的對照品溶液B，置50mL量瓶 中，用無水己醇定容至刻度；
[0012] e、制備對照品溶液：精密量取5. OmL步驟d制備的對照品溶液C，置lOmL量瓶中， 精密加入3mL磯酸水溶液，ImL 2, 4-二硝基苯阱無水己醇溶液，并用無水己醇稀釋至刻度， 蓋好瓶塞，用倒轉(zhuǎn)的方式使瓶內(nèi)的液體混合均勻，于30-40°C放置5-lOh ;
[0013] f、制備空白溶液：精密量取5mL無水己醇，置lOmL量瓶中，精密加入3mL磯酸水溶 液，ImL 2, 4-二硝基苯阱無水己醇溶液，并用無水己醇稀釋至刻度，蓋好瓶塞，用倒轉(zhuǎn)的方 式使瓶內(nèi)的液體混合均勻，于30-40°C放置5-lOh ;
[0014] g、色譜條件；采用Agilent C184. 6*250mm 5. Oum色譜柱，W磯酸溶液：己膳體積 比為50:50為流動相，色譜柱的柱溫控制在25-35°C，流速為1. 0?1. 5血/min,檢測波長為 336皿，進樣量20yL ;
[0015] h、系統(tǒng)適應(yīng)性試驗：打開液相色譜儀，預(yù)熱5min，將對照品溶液連續(xù)進樣3針，要 求甲醒峰峰面積的RSD《2. 0% ;
[0016] i、測定；分別精密量取供試品溶液、對照品溶液、空白溶液各20 注入液相色 譜儀，按步驟g的色譜條件進行測定，記錄色譜圖；
[0017] j、按外標(biāo)法計算出粘菌素甲燒橫酸鋼中甲醒的殘留量。
[001引步驟a、步驟e和步驟f中加入的磯酸水溶液按如下方法制備：精密量取85%磯酸 1血至50血容量瓶中，精密加水稀釋至刻度，即得。
[0019] 步驟a、步驟e和步驟f中加入的2, 4-二硝基苯阱無水己醇溶液按如下方法制備： 稱取2, 4-二硝基苯阱0. 05g至燒杯中，加無水己醇溶解，將溶解后的溶液轉(zhuǎn)移至lOOmL容 量瓶中并加無水己醇溶解定容至刻度，即得。
[0020] 步驟g流動相所用的磯酸溶液按如下方法制備；精密稱定磯酸5. 75g至燒杯中，力口 水溶解，將溶解后的溶液移至lOOOmL容量瓶中并加水稀釋容定至刻度，調(diào)節(jié)抑值至2-3,即 得。
[0021] 所述的步驟a中最佳溫度為30°C，最佳放置時間為化。
[0022] 所述的步驟e中最佳溫度為30°C，最佳放置時間為化。
[0023] 所述的步驟g中色譜柱的最佳柱溫為30°C，最佳流速為1. 0血/min。
[0024] 所述的步驟g流動相所用的磯酸溶液的最佳抑為2. 85。
[0025] 步驟k中外標(biāo)法的計算公式如下；
[0026]
【主權(quán)項】
1. 一種檢測粘菌素甲烷磺酸鈉中甲醛殘留量的方法，其特征在于，所述的方法為一種 基于液相色譜儀檢測粘菌素甲烷磺酸鈉中甲醛殘留量的方法，包括以下步驟： a、 制備供試品溶液：精密稱定粘菌素甲烷磺酸鈉1.Og置燒杯中，加10mL無水乙醇，超 聲lOmin后離心分離，精密量取5mL上清液置10mL容量瓶中，并向容量瓶中精密加入3mL 磷酸水溶液，lmL2, 4-二硝基苯肼無水乙醇溶液，并用無水乙醇稀釋至刻度，蓋好瓶塞，用 倒轉(zhuǎn)的方式使瓶內(nèi)的液體混合均勻，于30-40°C放置5-10h; b、 制備對照品溶液A:精密稱定1.lg甲醛溶液置100mL量瓶中，用無水乙醇溶解定容 至刻度，所述的甲醛溶液使用前進行滴定； c、 制備對照品溶液B:精密量取1.OmL步驟b制備的對照品溶液A，置200mL量瓶中，用 無水乙醇定容至刻度； d、 制備對照品溶液C:精密量取5.OmL步驟c制備的對照品溶液B，置50mL量瓶中，用 無水乙醇定容至刻度； e、 制備對照品溶液：精密量取5.OmL步驟d制備的對照品溶液C，置10mL量瓶中，精密 加入3mL磷酸水溶液，lmL2, 4-二硝基苯肼無水乙醇溶液，并用無水乙醇稀釋至刻度，蓋好 瓶塞，用倒轉(zhuǎn)的方式使瓶內(nèi)的液體混合均勻，于30-40°C放置5-10h; f、 制備空白溶液：精密量取5mL無水乙醇，置10mL量瓶中，精密加入3mL磷酸水溶液， lmL2, 4-二硝基苯肼無水乙醇溶液，并用無水乙醇稀釋至刻度，蓋好瓶塞，用倒轉(zhuǎn)的方式使 瓶內(nèi)的液體混合均勻，于30-40°C放置5-10h; g、 色譜條件：采用AgilentC18 4. 6*250mm5.Oum色譜柱，以磷酸溶液：乙腈體積比 為50:50為流動相，色譜柱的柱溫控制在25-35°C，流速為1. 0?1. 5mL/min，檢測波長為 336nm，進樣量 20yL; h、 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗：打開液相色譜儀，預(yù)熱5min，將對照品溶液連續(xù)進樣3針，要求甲 醛峰峰面積的RSD< 2. 0% ; i、 測定：分別精密量取供試品溶液、對照品溶液、空白溶液各20yL，注入液相色譜儀， 按步驟g的色譜條件進行測定，記錄色譜圖； j、 按外標(biāo)法計算出粘菌素甲烷磺酸鈉中甲醛的殘留量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測粘菌素甲烷磺酸鈉中甲醛殘留量的方法，其特征在 于：步驟a、步驟e和步驟f中加入的磷酸水溶液按如下方法制備：精密量取85%磷酸lmL 至50mL容量瓶中，精密加水稀釋至刻度，即得。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測粘菌素甲烷磺酸鈉中甲醛殘留量的方法，其特征在 于：步驟a、步驟e和步驟f中加入的2, 4-二硝基苯肼無水乙醇溶液按如下方法制備：稱取 2, 4-二硝基苯肼0. 05g至燒杯中，加無水乙醇溶解，將溶解后的溶液轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中 并加無水乙醇溶解定容至刻度，即得。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測粘菌素甲烷磺酸鈉中甲醛殘留量的方法，其特征在 于：步驟g流動相所用的磷酸溶液按如下方法制備：精密稱定磷酸5. 75g至燒杯中，加水溶 解，將溶解后的溶液移至l〇〇〇mL容量瓶中并加水稀釋容定至刻度，調(diào)節(jié)pH值至2-3,即得。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測粘菌素甲烷磺酸鈉中甲醛殘留量的方法，其特征在 于：所述的步驟a中最佳溫度為30 °C，最佳放置時間為7h。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測粘菌素甲烷磺酸鈉中甲醛殘留量的方法，其特征在 于：所述的步驟e中最佳溫度為30 °C，最佳放置時間為7h。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測粘菌素甲烷磺酸鈉中甲醛殘留量的方法，其特征在 于：所述的步驟g中色譜柱的最佳柱溫為30°C，最佳流速為1.OmL/min。
8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種檢測粘菌素甲烷磺酸鈉中甲醛殘留量的方法，其特征在 于：所述的步驟g流動相所用的磷酸溶液的最佳pH為2. 85。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測粘菌素甲烷磺酸鈉中甲醛殘留量的方法，其特征在 于：步驟k中外標(biāo)法的計算公式如下：
式中：A# :供試品溶液甲醛峰的峰面積； :對照品溶液甲醛峰的峰面積； W# :供試品的稱重，單位為g; :對照品的稱重，單位為g; 甲醛對照品的百分含量，單位為％ ;n:稀釋倍數(shù)（n= 0? 00005)。
【專利摘要】一種檢測粘菌素甲烷磺酸鈉中甲醛殘留量的方法，所述的方法為一種基于液相色譜儀檢測粘菌素甲烷磺酸鈉中甲醛殘留量的方法，包括以下步驟：a、制備供試品溶液；b、制備對照品溶液A；c、制備對照品溶液B；d、制備對照品溶液C；e、制備對照品溶液；f、制備空白溶液；g、色譜條件；h、系統(tǒng)適應(yīng)性試驗；i、測定；j、按外標(biāo)法計算出粘菌素甲烷磺酸鈉中甲醛的殘留量。本方法能將甲醛峰與干擾峰完全分離，準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，結(jié)果滿意。
【IPC分類】G01N30-06, G01N30-88
【公開號】CN104569260
【申請?zhí)枴緾N201410841426
【發(fā)明人】周利彩, 蘇曉娜
【申請人】河北圣雪大成制藥有限責(zé)任公司
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2014年12月30日