[0035] 較佳的，該茯苓萃取物包含5-35重量％的羊毛留烷（I)。
[0036] 本發(fā)明的醫(yī)藥組成物可以進一步含有稀釋劑、賦形劑或載體。
[0037] 實施本發(fā)明的最侔方式
[0038] 本發(fā)明以卵白蛋白（ovalbumin, OVA)作為過敏原讓小鼠致敏后，由小鼠體內出現(xiàn) OVA專一性IgE抗體而確認動物已被誘導為氣喘疾病癥狀。實驗期間，各組分別喂予茯 苓萃取物及其純化的羊毛留烷類化合物，一個月后對氣喘小鼠測試肺部氣道高反應性測試 (Airway hyperresponsiveness)，作為判定小鼠氣喘程度的重要指標。本發(fā)明也對小鼠支 氣管肺泡灌洗液各類免疫細胞檢測觀察各類免疫細胞是否受到影響，特別是嗜中性粒細胞 及嗜酸性粒細胞是否受到影響。本發(fā)明也以趨化因子（Eotaxin)作為重要觀察因子，觀察 細胞活素的分泌是否有重大變化。上述三項藥理或發(fā)炎物質觀察（呼吸道阻力，發(fā)炎細胞 及趨化因子（Eotaxin))顯示萃取物及其純化的羊毛留烷類化合物是很好的氣喘預防/治 療性的藥物。
[0039] 本發(fā)明所揭示的可用于治療患有過敏的哺乳類動物（例如人類）的茯苓萃取 物，其一合適的制備方法與前述中國臺灣發(fā)明專利公開號200425900所揭示的方法相 同，包括利用傳統(tǒng)萃取法萃取茯苓得到粗萃取物，再經由層析法，分成極性小的羊毛甾烷 (lanostane)類部位（以二氯甲烷：甲醇（96:4)為洗脫劑）和極性大的開環(huán)羊毛甾烷 (secolanostane)類部位（以二氯甲燒：甲醇（90:10或0:100)為洗脫劑）。其中，利用硅膠 薄層層析法，顯示出羊毛留烷（lanostane)類部位的所在位置，即展開溶媒為二氯甲烷一 甲醇（96:4)時，層析值（Rf)為彡0. 1 ;至于開環(huán)羊毛甾燒（secolanostane)類成分，貝1J層 析值小于〇. 1。用硅膠管柱層析法可進一步分離該羊毛留烷類部位，其中洗脫劑使用二氯甲 烷：甲醇（97:3至95:5)，分離出數(shù)種羊毛留烷（lanostane)類化合物。
[0040] 本發(fā)明將借助以下實施例被進一步了解，以下實施例僅為說明之用而非用于限制 本發(fā)明范圍。
[0041] 本說明書所提及的百分比及份量除非另外指明否則皆以重量為基準。而各百分比 范圍的總和為100%。
[0042] 實施例1
[0043] 以云南產茯苓30公斤，磨成粉后，利用120L酒精（濃度95 % )萃取24小時， 及過濾分離。再重復前述萃取及固液分離三次。合并濾液，并將其濃縮后得干燥萃取物 265.2克。再利用一兩相萃取劑（己烷：95%甲醇=1:1)對該干燥萃取物進行萃取。取 出甲醇層并加予濃縮后得到干燥固體246. 9克。利用硅膠管柱層析對該干燥固體進行 分尚，該硅膠管柱填充有該干燥固體重量1〇_40倍的硅膠，是購自Merck公司，Silica gel 60, 70-230mesh。以二氯甲燒/甲醇混合液作為洗脫劑（eluent)，依序以96:4、 90:10、0:100比例的混合液進行洗脫，洗脫液（eluate)以硅膠薄層層析法（Thin Layer Chromatography)(紫外光燈及碘作檢測，展開液為二氯甲燒：甲醇=96:4)檢測成分，將相 同成分合并。
[0044] 以二氯甲烷一甲醇（96:4)混合液進行硅膠管柱層析，可得到屬PCM部份78克， PCM部份依上述硅膠薄層層析法可明顯看到6個跡點。以二氯甲烷：甲醇（90:10)及 (0:100)洗脫劑層析合并可得到PCW部份168克。
[0045] PCM部份進一步以二氯甲烷：甲醇（96. 5:3. 5)作為洗脫劑進行硅膠管柱層析（同 上述硅膠管柱），進一步分離可得純化的羊毛留烷（lanostane)類成分K1(K1-1及K1-2)、 K2 (K2-1及K2-2)、K3、K4、K4a、K4b、K5、K6a及K6b。詳細分離步驟及鑒定分析數(shù)據(jù)請參見 中國臺灣發(fā)明專利公開號200425900。
[0046] 上述的K1至K6b化合物，其結構如下：
[0047]
約15重量％的羊毛留烷化合物K1至K6b。
[0050]
[0051] 實施例2
[0052] 茯苓藥材100公斤以800公斤水煮沸3小時后，靜置冷卻至50°C，以5N NaOH調 節(jié)溶液至pH 11，再攪拌溶液3小時。接著以離心機分離液體和固體，固體再以800公斤水 加入，同上述方法，以NaOH調至pH 11、攪拌和離心機分離，去掉固體。合并兩次液體，在 50°C將液體真空濃縮至100公斤溶液，再加入3N HC1至pH 6. 5,產生沉淀物。分離出該沉 淀物，再以40L H20清洗，接著以離心機分離出沉淀物，加入8L水噴霧干燥（spray dry)，得 到約380g粉末。再以4L酒精萃取該粉末三次，合并萃取液并濃縮可得238. 9克酒精萃取 物（PCE)，再經過HPLC分離該萃取物，每克該萃取物可得主成分為K2185. 93mg、K320. 34mg、 K415. 82mg及少量成分K14. 52mg，即萃取物每克約含226. 07mg羊毛留烷（lanostanes)。
[0053] 實施例3
[0054] 以茯苓萃取物及其純化的羊毛留烷類化合物治療氣喘小鼠的實驗
[0055] 本實施例以卵白蛋白（ovalbumin, OVA)作為過敏原讓小鼠致敏后，由小鼠體內 出現(xiàn)OVA專一性IgE抗體而確認動物已被誘導為氣喘疾病癥狀。實驗期間，各組分別喂 予茯苓萃取物及其純化的羊毛留烷類化合物，一個月后對氣喘小鼠測試肺部氣道高反應性 (Airway hyperresponsiveness)，作為判定小鼠氣喘程度的重要指標。本實施例也對小鼠 支氣管肺泡灌洗液各類免疫細胞檢測觀察各類免疫細胞是否受到影響，特別是嗜中性粒細 胞及嗜酸性粒細胞是否受到影響。本實施例也以趨化因子（Eotaxin)作為重要觀察因子， 觀察細胞活素的分泌是否有重大變化。
[0056] 實驗方法：
[0057] (1)實驗動物：純種BALB/c雌鼠，小鼠喂予顆粒狀飼料并令其自由攝食。動物房 室溫維持在19~24°C而相對濕度則保持50~70%。本批實驗動物的操作物依照輔仁大 學動物實驗小組的規(guī)范進行。BALB/c小鼠共分為10組，每組8只。
[0058] (2)氣喘小鼠模式建立：引用2006年Sy所發(fā)表的文章的步驟以OVA作為過敏原讓 10 組BALB/c 小鼠致敏[Sy, L. B et al, Propolis extracts exhibit an immunoregulatory activity in an OVA-sensitized airway inflammatory animal model.Int Immunopharm.，6:1053-1060 (2006)]。分別配制 10 及 30 y g/ml OVA (Albumin, chicken egg，A_5503，Sigma)配合 2mg 氫氧化錯（Aluminum hydroxide, 77161，Pierce)作為 佐劑，每只小鼠腹腔注射量為〇. 2毫升，于BALB/c小鼠8和10周齡時注射。在第二 次腹腔注射時同時搭配吸入劑（inhalation，IH)，使用超音波噴霧化儀器（DeVibiss Pulmo-Aide，5650D，USA)，將8ml的2 % OVA溶液噴霧化，進行20分鐘，使小鼠在密閉容器中 自然吸入過敏原，使小鼠能在自然狀況下經由呼吸道吸入過敏原，借以誘發(fā)呼吸道黏膜的 過敏反應。
[0059] (3)動物分組：前述10組OVA致敏的氣喘小鼠被分成：不治療的氣喘組（As);喂食 實施例 2 的茯苓萃取物 PCE 及純化物 Kl、K2、K3 的 1PCE，1K1、1K2、1K3、2PCE、2K1、2K2、2K3 的劑量組；及藥物對照組（Pred組）。劑量組中的1PCE組表示每只動物每天給予0. 0372mg 實施例2的酒精萃取物PCE，2PCE組表示每只動物每天給予2倍1PCE組劑量（0. 0744mg); 1K1、1K2及1K3組表示每只動物每天分別給予0. 0087mg的K1、K2、K3 ;而2K1、2K2、2K3組表 示每只動物每天分別給予〇. 〇174mg的K1、K2、K3。藥物對照組（Pred組）的動物在其被致 死前連續(xù)五天喂食潑尼松龍（Prednisolone)，每只動物每天給予0? lmg的Prednisolone。 PCE、K1、K2、K3及Prednisolone等藥物被溶于酒精，每只動物以管喂方式給予0. 4mL。
[0060] (4)氣道高反應性測試：
[0061] 氣道高反應性（Airway hyperresponsiveness，AHR)的增加，和氣喘嚴重程度呈正 相關