治療免疫失調(diào)所引起的疾病的醫(yī)藥組合物及茯苓萃取物的制作方法
【專(zhuān)利說(shuō)明】
[0001] 本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2008年6月24日、申請(qǐng)?zhí)枮?00880129698. X、名稱(chēng)為"治療免 疫失調(diào)所引起的疾病的醫(yī)藥組合物及茯苓萃取物"的發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明是有關(guān)一種使用羊毛留烷類(lèi)化合物來(lái)治療免疫失調(diào)所引起的疾病例如過(guò) 敏的新用途。
【背景技術(shù)】
[0003] E型免疫球蛋白（IgE)為免疫球蛋白（或稱(chēng)"抗體"）分子的一種。IgE在人體存 在時(shí)濃度較其它種類(lèi)的免疫球蛋白如IgG、IgM、IgA、IgD等來(lái)得低。IgE -直被認(rèn)為在人 體防御寄生蟲(chóng)的侵襲上扮演相當(dāng)重要的角色，但此角色仍未被明確地樹(shù)立為必要且有益， 尤其在已開(kāi)發(fā)國(guó)家寄生蟲(chóng)的感染并非一項(xiàng)嚴(yán)重的問(wèn)題。不過(guò)其作為一個(gè)即時(shí)性過(guò)敏反應(yīng) 中介者的角色倒是被人所熟悉。這些過(guò)敏反應(yīng)包括過(guò)敏性鼻炎（花粉熱）、氣喘、蕁麻瘆 (urticaria)、食物及藥物過(guò)敏。
[0004] 在由IgE中介引起的過(guò)敏反應(yīng)過(guò)程中，IgE由B細(xì)胞分泌出來(lái)后，會(huì)借助其Fc 部份黏結(jié)到IgE受體上（IgE Fc receptor，F(xiàn)ee RI)。此受體通常存在于嗜堿粒細(xì)胞 (basophils)、肥大細(xì)胞（Mast cells)及朗氏細(xì)胞（Langerhans cell)等細(xì)胞的表面上。 當(dāng)這些細(xì)胞表面的IgE與過(guò)敏原（Allergens)接觸后，會(huì)造成這些黏著IgE的交聯(lián)，從而使 得其下的受體分子亦隨之交聯(lián)，而激發(fā)一些藥物介質(zhì)的釋放。這些介質(zhì)包括組胺、白三烯 (leukotrienes)以及其它造成過(guò)敏性反應(yīng)的物質(zhì)。這些介質(zhì)會(huì)造成過(guò)敏反應(yīng)在病理上的一 些特別癥狀。
[0005] 部份病患若經(jīng)歷過(guò)由IgE引起的部份或全部過(guò)敏狀況，也容易遭遇到一種痛苦的 皮膚癥狀，稱(chēng)為異位性皮膚炎（Atopic dermatitis)。
[0006] 以過(guò)敏疾病中的氣喘為例，氣喘病發(fā)生的免疫反應(yīng)時(shí)間分為立即性氣喘反應(yīng) (immediate asthmatic response)及晚期的氣喘反應(yīng)（late asthmatic response) 〇 急性 反應(yīng)期是指由肥大細(xì)胞釋放發(fā)炎介質(zhì)所引起的反應(yīng)，發(fā)生于與過(guò)敏原接觸后15~30分鐘。 當(dāng)患者再次暴露于相同過(guò)敏原時(shí)，過(guò)敏原會(huì)與肥大細(xì)胞上已結(jié)合的IgE辨識(shí)并結(jié)合，進(jìn)而 促使肥大細(xì)胞活化并將細(xì)胞內(nèi)的顆粒進(jìn)行去粒（degranulation)釋放出許多發(fā)炎物質(zhì)，包 括組胺（histamine)、白三烯、細(xì)胞活素（cytokines)例如IL-2、IL-4、IL-5及GM-CSF，及化 學(xué)趨化因子（chemoattractant factor)等，并導(dǎo)致血管通透性增加及氣管的平滑肌收縮。 這些發(fā)炎介質(zhì)，細(xì)胞活素及趨化因子，不僅影響立即性過(guò)敏反應(yīng)，同時(shí)會(huì)造成晚期的發(fā)炎反 應(yīng)。
[0007] 由嗜酸性粒細(xì)胞（eosinophil)及嗜中性粒細(xì)胞（neutrophil)造成的反應(yīng)稱(chēng)為晚 期反應(yīng)。急性反應(yīng)4-6小時(shí)后，肥大細(xì)胞釋放的細(xì)胞活素及化學(xué)趨化因子會(huì)吸引嗜酸性粒 細(xì)胞及嗜中性粒細(xì)胞等發(fā)炎細(xì)胞浸潤(rùn)。另外，由上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞與纖維母細(xì)胞所分泌 細(xì)胞活素，如Eotaxin，為主要趨化因子也造成嗜酸性粒細(xì)胞或是Th2免疫細(xì)胞移動(dòng)至肺部 支氣管發(fā)炎處。嗜酸性粒細(xì)胞被激活后會(huì)分泌許多發(fā)炎蛋白，如主要堿性蛋白MBP(Major Basic Protein)、嗜伊紅粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白 ECP(Eosinophil Cationic Protein)、嗜酸 性粒細(xì)胞衍生神經(jīng)毒素（Eosinophil Derived Neurotoxin)、嗜酸性粒細(xì)胞過(guò)氧化物酶 EPO (Eosinophil Peroxidase)、白三稀等。這些發(fā)炎蛋白會(huì)刺激呼吸道平滑肌收縮，增加血 管通透性，造成呼吸道水腫。直接傷害呼吸道上皮組織，使上皮細(xì)胞喪失完整性。呼吸道過(guò) 度分泌黏液，阻塞或造成呼吸道管徑狹窄，并導(dǎo)致嗜中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)及肥大細(xì)胞去顆?；?作用，增加嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，加重氣喘嚴(yán)重性。
[0008] 本案申請(qǐng)人于中國(guó)臺(tái)灣發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)案第92113393號(hào)（公開(kāi)號(hào)200425900,2004 年12月1日公開(kāi)）揭示了一種用以提升人體免疫力的醫(yī)藥組合物，此組合物含羊毛甾烷 (lanostane)類(lèi)化合物作為有效成分。該發(fā)明也提供一種提升人體免疫力的茯苓萃取物，包 含5-60重量％的羊毛留烷類(lèi)化合物且實(shí)質(zhì)上不含開(kāi)環(huán)羊毛留烷（secolanostane)類(lèi)化合 物。該萃取物是萃取自多孔菌科植物茯苓菌（Porea cocos (Schw) Wolf)的代謝產(chǎn)物或發(fā)酵 產(chǎn)物或茯苓菌菌絲。
[0009] 治療過(guò)敏的物質(zhì)或方法，不僅是相關(guān)領(lǐng)域研宄者也是所有人所關(guān)心的課題。至目 前為止并未發(fā)現(xiàn)羊毛留烷在治療過(guò)敏上具有效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的主要目的是提供一種使用羊毛留烷類(lèi)化合物來(lái)治療免疫失調(diào)所引起的 疾?。ɡ邕^(guò)敏）的新用途。
[0011] 本發(fā)明的另一目的是提供一種含有羊毛留烷類(lèi)化合物作為治療免疫失調(diào)所引起 的疾?。ɡ邕^(guò)敏）的有效成分的醫(yī)藥組合物。
[0012] 本發(fā)明的還有另一目的是提供一種使用羊毛留烷類(lèi)化合物來(lái)治療免疫失調(diào)所引 起的疾?。ɡ邕^(guò)敏）的方法。
[0013] 本發(fā)明所提供的一種治療患有免疫失調(diào)所引起的疾?。ɡ邕^(guò)敏）的哺乳類(lèi)動(dòng)物 (例如人類(lèi)）的醫(yī)藥組合物，包含治療該疾病有效量作為有效成分的具下列化學(xué)式（I)的羊 毛甾烷或其醫(yī)藥上可接受的鹽：
[0014]
[0015]其中札為11 或CH3;R2S0C0CH3、= 0或0H;馬為11 或OH ;R4S-C( = CH2)-C(CH3)2Ra， 其中艮為H或0H，或-CH = C (CH 3) -Rb，其中Rb為CH3或CH 20H出5為H或OH ;及R6為CH3或 ch2oh〇
[0016] 本發(fā)明也提供一種使用具上述化學(xué)式（I)的羊毛留烷或其醫(yī)藥上可接受的鹽作 為活性成分在制備一種治療哺乳類(lèi)動(dòng)物患有免疫失調(diào)所引起的疾病的藥物的用途。
[0017] 較佳的，該過(guò)敏為過(guò)敏性鼻炎、過(guò)敏性結(jié)膜炎、過(guò)敏性氣喘、異位性皮膚炎、食道過(guò) 敏、異位性濕瘆、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。更佳的，該過(guò)敏為過(guò)敏性氣喘。
[0018] 較佳的，該羊毛甾烷（I)具有具下列化學(xué)式：
[0019]
[0020] 較佳的，本發(fā)明的組合物其含有0. 1-60重量％的羊毛留烷（I)或其醫(yī)藥上可接受 的鹽。
[0021] 本發(fā)明作為治療過(guò)敏的醫(yī)藥組合物等的給藥方法，一般來(lái)說(shuō)，可以用片劑、丸劑、 軟膠囊劑、硬膠囊劑、微粒劑、散劑、顆粒劑等形式經(jīng)口給藥。另外，作為液體制劑，水溶性制 劑可以經(jīng)口給藥，也可以非經(jīng)口給藥。作為非口服制劑給藥時(shí)，可以將本發(fā)明的治療過(guò)敏的 醫(yī)藥組合物等分散于乙醇或水等合適的可溶試劑中，然后以噴霧劑、洗劑、軟膏劑、酊劑、乳 劑、針劑等劑型來(lái)使用。
[0022] 較佳的，本發(fā)明的組合物為口服的。
[0023] 本發(fā)明的又一目的是使用茯苓萃取物作為該羊毛留烷（I)的來(lái)源，該茯苓萃取物 包含1-60重量％的具前述式（I)的羊毛留烷且實(shí)質(zhì)上不含開(kāi)環(huán)羊毛甾烷。
[0024] 較佳的，該茯苓萃取物是由包含下列步驟的方法所制備：
[0025] a)以水、甲醇、乙醇或它們的混合溶劑萃取茯苓菌的代謝物，茯苓菌的發(fā)酵產(chǎn)物或 茯苓菌菌絲；
[0026] b)濃縮步驟a)萃取所獲得的液體；
[0027] c)將步驟a)所獲得的濃縮物導(dǎo)入硅膠管柱；
[0028] d)以低極性洗脫劑（eluent)洗脫該硅膠管柱，及收集所產(chǎn)生的洗脫液（eluate); 及
[0029] e)濃縮步驟d)的洗脫液。
[0030] 較佳的，從步驟e)所獲得的洗脫液的濃縮物以硅膠薄層層析法分析具有層析值 (Rf)彡0. 1，其中以紫外光燈及碘作檢測(cè)，展開(kāi)液為二氯甲烷：甲醇=96:4。
[0031] 較佳的，步驟a)的萃取所使用的溶劑為95%酒精。
[0032] 較佳的，步驟a)包含以沸水萃取茯苓菌的代謝物，茯苓菌的發(fā)酵產(chǎn)物或茯苓菌菌 絲；加入堿至該萃取水溶液至其pH值9-11 ;分離出該堿性水溶液；加入酸至該堿性水溶液 至其pH值4-7,以產(chǎn)生沉淀物；分離出該沉淀物；再用酒精萃取該沉淀物，并分離出萃取液 體。
[0033] 較佳的，步驟b)的濃縮物被進(jìn)一步以體積比為1:1的95%v/v甲醇水溶液及正己 烷的兩相溶劑萃取；分離出甲醇層及濃縮該甲醇層，所獲得的濃縮物被用作為步驟c)的硅 膠管柱的進(jìn)料。
[0034] 較佳的，步驟d)的低極性洗脫劑為體積比為96. 5:3. 5的二氯甲烷及甲醇的混合 溶劑。