專(zhuān)利名稱(chēng)：抗血栓形成化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的抗血栓形成化合物、其制備方法、含有所述化合物作為活性組分的藥物組合物、以及所述化合物在制備藥物中的應(yīng)用。
絲氨酸蛋白酶是在血凝級(jí)聯(lián)中起重要作用的酶。這組蛋白酶的成員有例如凝血酶、胰蛋白酶、Ⅶa因子、Ⅸa因子、Ⅹa因子、Ⅺa因子、Ⅻa因子、和C蛋白。
凝血酶是血凝級(jí)聯(lián)中最后的絲氨酸蛋白酶。凝血酶的主要功能是將血纖維蛋白原裂解以生成血纖維蛋白單體，血纖維蛋白單體會(huì)交聯(lián)以形成不溶性凝膠。此外，凝血酶通過(guò)活化該交聯(lián)前期中的Ⅴ和Ⅷ因子來(lái)調(diào)節(jié)其自身生成。凝血酶在細(xì)胞水平上也具有重要作用，在細(xì)胞水平上凝血酶作用于特異性受體，以引起血小板聚集、內(nèi)皮細(xì)胞活化以及成纖維細(xì)胞增殖。因此凝血酶在止血和血栓形成中起中樞調(diào)節(jié)作用。因?yàn)槟敢种苿┛赡芫哂袕V泛醫(yī)療應(yīng)用，因此人們?cè)谠擃I(lǐng)域作了大量研究。
Ⅹa因子-另一重要絲氨酸蛋白酶催化凝血酶原轉(zhuǎn)化成凝血酶。
在絲氨酸蛋白酶合成抑制劑、更具體說(shuō)是凝血酶合成抑制劑的開(kāi)發(fā)中，芐脒部分是其中一個(gè)關(guān)鍵結(jié)構(gòu)。其模擬它的天然底物的堿性氨基酸Arg和Lys的質(zhì)子化側(cè)鏈。人們已經(jīng)對(duì)具有芐脒部分的化合物作了廣泛和反復(fù)研究。在這類(lèi)凝血酶抑制劑當(dāng)中，一種非常有效的代表性化合物是氨基酸衍生物Na-(2-萘基磺?；?-甘氨?；?4-脒基苯基丙氨酸哌啶(NAPAP)(Stürzebecher,J.等人，Thromb.Res.29,635-642,1983)。然而，NAPAP的特性對(duì)于治療應(yīng)用沒(méi)有吸引力例如，該化合物具有低的凝血酶特異性，并且溶解性很差。此后制備了NAPAP的衍生物，例如EP0236163中公開(kāi)的N-烷基取代衍生物，或EP0558961、Proc.Am.Pept.Symp.,13th(60LXAW)；94；pp.643-5(Stiiber,W.等人，Pept:Chem.,Struct.Biol.,)、Proc.Int.Symp.Controlled Release Bioact.Mater.(PCRMEY,10220178)；94；Vol.21st；pp.712-12(Walter,E.等人)、和EP0513543中公開(kāi)的糖肽衍生物。然而，雖然與NAPAP相比這些衍生物具有改善的藥理特性，但是所有這些由NAPAP衍生的化合物仍然僅具有直接凝血酶抑制劑活性，并且具有有限的血漿半衰期和快的清除速度(因此僅在很短時(shí)間內(nèi)表現(xiàn)出其抗凝血酶活性)。
現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，式(Ⅰ)化合物或其可藥用鹽或其前藥是有效的多用途抗血栓形成劑 其中R1是苯基、萘基、1,2,3,4-四氫萘基、(異)喹啉基、四氫(異)喹啉基、3,4-二氫-1H-異喹啉基、苯并二氫吡喃基、或樟腦基，所述基團(tuán)可選擇性地被一個(gè)或多個(gè)選自(1-8C)烷基或(1-8C)烷氧基的取代基取代；R2和R3獨(dú)立地為H或(1-8C)烷基；R4是(1-8C)烷基或(3-8C)環(huán)烷基；或者R3和R4與它們所連的氮原子形成可選擇性地包含另外的雜原子的非芳香(4-8)元環(huán)，該環(huán)可選擇性地被(1-8C)烷基或SO2-(1-8C)烷基取代；Q是鏈長(zhǎng)為10-70個(gè)原子的間隔基；Z是包含2-6個(gè)單糖單元的帶負(fù)電荷的低聚糖殘基，其中的負(fù)電荷由帶正電荷的抗衡離子抵消。
本發(fā)明化合物具有抗凝血酶活性，但是本發(fā)明化合物的結(jié)構(gòu)可選擇性地被修飾，因此本發(fā)明化合物具有可調(diào)節(jié)的、由非介導(dǎo)的直接抗凝血酶(Ⅱa因子)活性和抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)介導(dǎo)的抗Ⅹa活性組成的混合特性。因此本發(fā)明化合物是雙重抑制劑。本發(fā)明化合物具有長(zhǎng)的血漿半衰期，因此與NAPAP或其上述衍生物相比，本發(fā)明化合物具有延長(zhǎng)的抗凝血酶活性。此外，本發(fā)明化合物可避免血小板因子4(PF4)的抵消作用。低毒性也是本發(fā)明化合物的優(yōu)點(diǎn)。
EP 0649854中公開(kāi)了另一種雙重抑制劑。與本發(fā)明化合物不同，除了表現(xiàn)出AT-Ⅲ介導(dǎo)的抗Ⅹa活性之外，在該文獻(xiàn)中公開(kāi)的結(jié)合糖化合物還表現(xiàn)出間接的、AT-Ⅲ介導(dǎo)的抗凝血酶活性。
本發(fā)明化合物可用于治療和預(yù)防凝血酶介導(dǎo)的以及與凝血酶有關(guān)的疾病。包括其中凝結(jié)級(jí)聯(lián)被激活的多種血栓形成和前血栓形成病癥，例如但不限于深度靜脈血栓形成、肺栓塞、血栓靜脈炎、血栓形成或栓塞所致的動(dòng)脈閉塞、血管成形術(shù)或血栓溶解期間或之后的動(dòng)脈再閉塞、動(dòng)脈損傷或侵襲性心臟操作后的再狹窄、手術(shù)后靜脈血栓形成或栓塞、急性或慢性動(dòng)脈粥樣硬化、中風(fēng)、心肌梗塞、癌癥和癌轉(zhuǎn)移、和神經(jīng)變性疾病。本發(fā)明化合物還可在體外血循環(huán)、例如透析和手術(shù)所需的體外循環(huán)中用作抗凝血?jiǎng)?br> 本發(fā)明化合物的混合特性可通過(guò)改變低聚糖殘基Z的性質(zhì)和間隔基Q的長(zhǎng)度來(lái)調(diào)節(jié)。因此可獲得一定范圍的性質(zhì)。
在本發(fā)明化合物中，具有2-6個(gè)糖單元、帶有負(fù)電荷的所有低聚糖殘基都是適用的。合適的本發(fā)明化合物是其中Z是硫酸化或磷酸化低聚糖殘基的化合物。低聚糖殘基Z優(yōu)選衍生自本身具有AT-Ⅲ介導(dǎo)的抗Ⅹa活性的低聚糖，例如在EP 0454220和EP 0529715中公開(kāi)的糖。特別優(yōu)選的低聚糖殘基是五聚糖殘基。Z最優(yōu)選具有式(Ⅱ)所示結(jié)構(gòu) 其中R5獨(dú)立地為OSO3-或(1-8C)烷氧基。
其它優(yōu)選的本發(fā)明化合物是其中R1是苯基、4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯基或萘基的式Ⅰ化合物。在優(yōu)選的化合物中，NR3R4代表哌啶基。R2優(yōu)選為H。
對(duì)于本發(fā)明化合物的抗血栓形成活性來(lái)說(shuō)，間隔基的化學(xué)結(jié)構(gòu)的重要性不大或不重要，然而，其不能是完全的剛性結(jié)構(gòu)。高柔順性間隔基比其它基團(tuán)更合適。
此外，出于合成方面的原因，某些間隔基比其它間隔基更合適。
易于使用的合適的間隔基具有例如式(Ⅲ)所示結(jié)構(gòu)-[(CH2)2O]m-[(CH2)n-NR3-C(O)]p-W-(CH2)s-(Ⅲ)其中W是-[1,4-亞苯基-NR3-C(O)]q-(CH2)r-S-或-(CH2)t-S-(CH2)u-[O(CH2)2]v-O-(CH2)w-C(O)-NR3-；且R3獨(dú)立地為H或(1-8C)烷基；m=1-12；n=1-8；p=0-4；q=0或1；r=1-8；s=1-8；t=1-8；u=1-8；v=1-12；w=1-8；總的原子數(shù)是10-70；-[(CH2)2O]m-部分是末端，Q通過(guò)該部分連接在Z上。優(yōu)選的間隔基如下-[(CH2)2O]5-(CH2)2-NH-C(O)-CH2-S-CH2-；-[(CH2)2O]5-(CH2)2-NH-C(O)-CH2-S-(CH2)2-[O(CH2)2]3-O-CH2-C(O)-NH-(CH2)4-；和-[(CH2)2O]3-(CH2)2-NH-C(O)-1,4-亞苯基-NH-C(O)-CH2-S-CH2-。
在描述式(Ⅰ)化合物時(shí)使用下述定義。
術(shù)語(yǔ)(1-8C)烷基表示具有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、己基和辛基。甲基和乙基是優(yōu)選的烷基。
術(shù)語(yǔ)(1-8C)烷氧基表示具有1-8個(gè)碳原子的烷氧基，其中的烷基部分具有如上所述的含義。甲氧基是優(yōu)選的烷氧基。
術(shù)語(yǔ)(3-8C)環(huán)烷基表示具有3-8個(gè)碳原子的環(huán)烷基，它們是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基或環(huán)辛基。環(huán)戊基和環(huán)己基是優(yōu)選的環(huán)烷基。
間隔基的長(zhǎng)度是指間隔基的原子數(shù)目，所述原子數(shù)目是沿著Z和該分子的肽部分之間的最短鏈計(jì)數(shù)的，不包括連接到間隔基上的低聚糖Z的氧原子。
術(shù)語(yǔ)“前藥”是指其中脒基部分的氨基被保護(hù)、例如被羥基或(1-6C)烷氧基羰基保護(hù)的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明化合物是這樣制得的通過(guò)本領(lǐng)域的公知方法用半胱氨酸或賴(lài)氨酸將NAPAP(或NAPAP類(lèi)似物)在甘氨酸位點(diǎn)上衍化，然后將所得化合物(a)偶聯(lián)到低聚糖-間隔基殘基上，或者(b)偶聯(lián)到間隔基上，然后用硫醇衍化，之后再偶聯(lián)到低聚糖殘基上。可使用任意合適的低聚糖，例如文獻(xiàn)中記載的低聚糖(例如EP 0454220和EP 0529715中記載的低聚糖，但是并不限于這些來(lái)源)，或市售低聚糖。可通過(guò)例如Buijsman,R.等人描述的方法(Abstracts of papers,9thEuropean Carbohydrate Symposium Utrecht 1997,Abstract A150)在適當(dāng)時(shí)刻將低聚糖磷酸化?？衫缡褂迷贓P0649854中描述的方法將間隔基偶聯(lián)到低聚糖上。
上述制備本發(fā)明化合物的方法中的步驟-肽偶聯(lián)可通過(guò)用于偶聯(lián)或縮合肽片段的本領(lǐng)域公知方法來(lái)進(jìn)行，例如疊氮化物方法、混合酐方法、活化酯方法，或優(yōu)選地碳化二亞胺方法，尤其是還加入催化和外消旋抑制化合物例如N-羥基琥珀酰亞胺和N-羥基苯并三唑的方法。The Peptides,Analysis,Synthesis,Biology,Vol3,E.Gross和J.Meienhofer,eds(Academic Press,New York,1981)。
在合成期間可用N-保護(hù)基將化合物中的胺官能團(tuán)保護(hù)，所述N-保護(hù)基表示通常用來(lái)在肽化學(xué)中保護(hù)α-氨基的基團(tuán)，例如叔丁氧基羰基(Boc)、芐氧基羰基(Z)、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)或鄰苯二甲酰基(Phth)。根據(jù)保護(hù)基的性質(zhì)，可通過(guò)不同方法除去保護(hù)基。通常在酸性條件下、在清除劑存在下進(jìn)行脫保護(hù)。上述The Peptides,Analysis,Synthesis,Biology,Vol 3中記載了氨基保護(hù)基及其除去方法的綜述。
可以以游離堿形式存在的本發(fā)明化合物可以以可藥用鹽的形式從反應(yīng)混合物中分離出來(lái)。所述可藥用鹽可通過(guò)用有機(jī)酸或無(wú)機(jī)酸處理式(Ⅰ)游離堿來(lái)制得，所述酸有例如HCl、HBr、HI、H2SO4、H3PO4、乙酸、丙酸、乙醇酸、馬來(lái)酸、丙二酸、甲磺酸、富馬酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、抗壞血酸等。
本發(fā)明化合物具有手性碳原子，因此可以以純對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體混合物、含有非對(duì)映異構(gòu)體的混合物的形式獲得。獲得純對(duì)映異構(gòu)體的方法在本領(lǐng)域內(nèi)是眾所周知的，例如將用旋光性酸和外消旋混合物獲得的鹽結(jié)晶，或者使用手性柱的色譜法。對(duì)于非對(duì)映異構(gòu)體，可使用正相或反相柱。
本發(fā)明化合物可腸內(nèi)給藥或非胃腸道給藥。本發(fā)明化合物和組合物的準(zhǔn)確劑量和使用方案必然取決于對(duì)其施用藥物的具體個(gè)體的需要、疾病嚴(yán)重程度、或臨床醫(yī)師的需要和判斷。非胃腸道給藥需要的劑量通常比更依賴(lài)于吸收的其它給藥方法所需要的劑量低。然而，對(duì)于人，日劑量?jī)?yōu)選為0.001-100mg/kg體重、更優(yōu)選為0.01-10mg/kg體重。
用本發(fā)明化合物制備的藥物也可在急性抗凝血治療中用作佐藥。在這種情況下，將該藥物與用于治療這種病癥的其它化合物一起給藥。
與可藥用輔料、例如在標(biāo)準(zhǔn)參考書(shū)-Gennaro等人的Remington′sPharmaceutical Sciences(第18版，Mack Publishing Company,1990，尤其參見(jiàn)第8部分藥物制劑及其制備)中記載的藥物輔料混合的本發(fā)明化合物可壓制成固體劑量單位，例如丸劑、片劑，或可加工成膠囊或栓劑。利用可藥用液體，本發(fā)明化合物還可以以溶液劑、懸浮劑、乳劑的形式使用，例如用作注射劑、或噴霧劑如鼻內(nèi)噴霧劑。
為了制備劑量單位例如片劑，可考慮使用常規(guī)添加劑例如填充劑、著色劑、聚合粘合劑等。通?？墒褂貌挥绊懟钚曰衔锕δ艿乃锌伤幱锰砑觿？膳c本發(fā)明組合物一起給藥的合適載體包括以適當(dāng)量使用的乳糖、淀粉、纖維素衍生物等、或它們的混合物。
通過(guò)下述實(shí)施例進(jìn)一步舉例說(shuō)明本發(fā)明。實(shí)施例所用縮寫(xiě)DMAP=N,N-二甲基氨基吡啶TEA=三乙胺Z=芐氧基羰基Ac=乙?；鵐MTr=一甲氧基三苯甲游基Bn=芐基DCHA=二環(huán)己基銨EDCI=1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽HOBt=1-羥基苯并三唑DiPEA=二異丙基乙胺Pyr=吡啶基TEG=四甘醇HEG=六甘醇APA=脒基苯基丙氨酸Cys=半胱氨酸化合物編號(hào)是指在結(jié)構(gòu)式圖表中的化合物。4-O-(4-O-(2,3,4,6-四-)-O-乙?；?α-D-吡喃葡萄糖基)-2,3,6-三-O-乙?；?α-D-吡喃葡萄糖基)-2,3,6-三-O-乙酰基-α/β-D-吡喃葡萄糖基三氯亞氨逐乙酸酯(4)在攪拌下，向麥芽三糖(1)(2.0g,4.0mmol)的吡啶(100mL)溶液中加入乙酸酐(6.2mL,65mmol)和催化量的DMAP(0.79g,6.5mmol)。5小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物倒入碳酸氫鈉水溶液(1M,250mL)中，用乙酸乙酯(200mL)萃取3次。合并有機(jī)層，用硫酸鎂干燥并真空濃縮。通過(guò)柱色譜法(石油醚/乙酸乙酯，1/1-0/1,v/v)將產(chǎn)物純化，獲得了(2)，為白色泡沫狀物(產(chǎn)率為91％,3.5g)。通過(guò)用0.1M乙酸肼的二甲基甲酰胺溶液(34mL,3.4mmol)將2(3.0g,3.1mmol)處理1小時(shí)，來(lái)實(shí)現(xiàn)端基異構(gòu)脫乙?；?。將該反應(yīng)混合物真空濃縮，然后用乙酸乙酯(50mL)稀釋?zhuān)锰妓釟溻c溶液(1M,3×25mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)并濃縮。通過(guò)硅膠柱色譜法(石油醚/乙酸乙酯，3/2-1/0,v/v)將產(chǎn)物純化，獲得了(3)(產(chǎn)率為92％,2.7g)。將化合物3(2.7g,3.1mmol)溶于二氯甲烷(15mL)，加入三氯乙腈(1.7mL)和催化量的碳酸銫(0.2g,0.62mmol)。1小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物過(guò)濾，將濾液減壓濃縮。通過(guò)柱色譜法(石油醚/乙酸乙酯/TEA,50/49/1-0/99/1,v/v/v)將粗產(chǎn)物4純化，獲得了純4，為白色泡沫狀物(1.9g,91％)。N-芐氧基羰基-1-氨基六甘醇4-O-(4-O-(2,3,4,6-四-O-乙?；?α-D-吡喃葡萄糖基)-2,3,6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-2,3,6-三-O-乙?；?β-D-吡喃葡萄糖(6)在氬氣流下、在活化分子篩4(250mg)存在下，將供體4(0.69g,0.76mmol)和受體5(0.31g,0.76mmol)在二氯甲烷(1.5mL)中的溶液攪拌1小時(shí)。將該溶液冷卻至-20℃，向該反應(yīng)混合物中滴加三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯(15μL)在二氯甲烷(0.6mL)中的溶液。10分鐘后，TLC分析(5％甲醇的二氯甲烷溶液)表明存在一個(gè)產(chǎn)物。將碳酸氫鈉固體(0.3g)加到該反應(yīng)混合物中，攪拌10分鐘，然后過(guò)濾。將濾液用二氯甲烷(50mL)稀釋?zhuān)缓笥锰妓釟溻c水溶液(1M,2×25ml)洗滌，干燥(硫酸鎂)，并真空濃縮。通過(guò)硅膠色譜法(0-4％甲醇的乙酸乙酯溶液)將殘余物純化，獲得了純6(0.57g，產(chǎn)率為56％)。N-芐氧基羰基-1-氨基六甘醇4-O-(4-O-(α-D-吡喃葡萄糖基)-α-D-吡喃葡萄糖基)-β-D-吡喃葡萄糖(7)用叔丁鉀(43mg,10mg/mmol Ac)的甲醇(15mL)溶液處理化合物6(0.57g,0.43mmol)。1小時(shí)后，TLC分析(乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水，5/7/4/1.6,v/v/v/v)表明6完全轉(zhuǎn)化成了7。用Dowex50WX4-H+樹(shù)脂將該反應(yīng)混合物中和。通過(guò)過(guò)濾除去樹(shù)脂，將濾液減壓濃縮，獲得了7(0.37g，產(chǎn)率為95％)，無(wú)需進(jìn)一步純化直接使用。N-芐氧基羰基-1-氨基六甘醇4-O-(4-O-(α-D-吡喃葡萄糖基-2,3,4,6-四(磷酸二芐酯))-α-D-吡喃葡萄糖基-2,3,6-三(磷酸二芐酯))-β-D-吡喃葡萄糖2,3,6-三(磷酸二芐酯)(9)將1H-四唑(54mg,0.77mmol)的乙腈(1mL)溶液加到7(86mg,95μmol)和8(450mg,1.4mmol)在乙腈/二噁烷(2/1,v/v,2ml)內(nèi)的混合物中。在20℃攪拌1小時(shí)后，用冰浴將該反應(yīng)混合物冷卻，加入叔丁基過(guò)氧化氫(0.75mL)。繼續(xù)攪拌45分鐘，TLC分析表明存在一個(gè)主要產(chǎn)物。通過(guò)硅膠柱色譜法(100/0-95/5，二氯甲烷/甲醇，v/v)純化，獲得了純9(311mg，產(chǎn)率為92％)。1-氨基六甘醇4-O-(4-O-(α-D-吡喃葡萄糖基2,3,4,6-四磷酸酯)-α-D-吡喃葡萄糖基2,3,6-三磷酸酯)-β-D-吡喃葡萄糖2,3,6-三磷酸酯)(10)將化合物9(311mg,87μmol)溶于含有少量乙酸的叔丁醇/水(6/1,v/v,20mL)中。在連續(xù)氫氣流下、在10％Pd/C(100mg)存在下，將該溶液攪拌。3小時(shí)后，通過(guò)過(guò)濾除去Pd/C催化劑，將濾液真空濃縮。進(jìn)行Dowex50WX4-Na+離子交換，獲得了10(179mg，產(chǎn)率為98％)。N-2-萘磺酰基-S-4-一甲氧基三苯甲游基-(L)-半胱氨酸(12)在攪拌下，向市售S-4-一甲氧基三苯甲游基-(L)-半胱氨酸(11)(0.34g,1mmol)、二噁烷(5mL)和10％碳酸鈉水溶液(5mL)的混合物中加入2-萘磺酰氯(0.25g,1.1mmol)。攪拌1小時(shí)后，加入5％檸檬酸水溶液(50mL)將該反應(yīng)混合物酸化，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并有機(jī)層，干燥(硫酸鎂)并減壓濃縮。通過(guò)硅膠色譜法(甲醇/二氯甲烷/三乙胺，0/99/1-4/95/1,v/v/v)將該粗產(chǎn)物純化，獲得了12(產(chǎn)率為76％,0.44g)。N-2-萘磺?；?S-2-吡啶亞磺?；?(L)-半胱氨酸(14)將三氟乙酸和三異丙基甲硅烷在二氯甲烷中的溶液(1/1/18,v/v/v)加到化合物12(0.44g,0.76mmol)中。攪拌20分鐘后，將該混合物倒入水中，并用二氯甲烷(2×50mL)萃取。合并有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。通過(guò)與甲苯共蒸發(fā)除去該粗混合物中的微量三氟乙酸。將所得游離硫醇13再溶于異丙醇(2.5mL)，并滴加到AldrithiolTM(1.7g,7.6mmol)在異丙醇/2N乙酸水溶液(1/1,v/v,20ml)中的溶液內(nèi)。1小時(shí)后，TLC分析表明已經(jīng)反應(yīng)完全，將該混合物減壓濃縮。通過(guò)與甲苯共蒸發(fā)除去該殘余物中的微量乙酸。將該粗產(chǎn)物溶于丙酮(10mL)，向該溶液中加入二環(huán)己基胺(0.3mL)，化合物14以DCHA-鹽的形式從該反應(yīng)混合物中沉淀出來(lái)。分離出該沉淀物，溶于乙酸乙酯(50mL)，用5％檸檬酸水溶液(2×30mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(硫酸鎂)，并減壓濃縮，獲得了純14(產(chǎn)率為55％,0.25g)。N(N(Nα-2-萘磺?；?S-2-吡啶亞磺?；?(L)-半胱氨?；?-(D,L)-4-脒基苯基丙氨酰基)哌啶(16)向N-((D,L)-4-脒基苯基丙氨?；?哌啶二鹽酸鹽(15)(0.13g,0.39mmol)和半胱氨酸衍生物14(0.16g,0.39mmol)在二甲基甲酰胺(2mL)內(nèi)的溶液中加入HOBt(58mg,0.42mmol)、EDCI(82mg,0.42mmol)和N-乙基嗎啉(110μL,0.78mmol)。攪拌16小時(shí)后，將該混合物用二氯甲烷(20mL)稀釋?zhuān)缓笥盟?2×10mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(硫酸鎂)，并真空濃縮。將該殘余物通過(guò)硅膠柱色譜法(首先是10-20％甲醇的二氯甲烷溶液以除去雜質(zhì)，然后是乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水(16/7/1.6/4,v/v/v/v)以釋放產(chǎn)物)純化，然后通過(guò)Sephadex LH-20凝膠過(guò)濾(洗脫劑甲醇/二氯甲烷，4/1,v/v)進(jìn)行純化，獲得了均質(zhì)16(70％,0.19g)。麥芽三糖十磷酸酯18與肽16的縮合偶聯(lián)向麥芽三糖十磷酸酯18(21mg,9.8μmol)在0.1M Na2HPO4緩沖液(1.0mL,pH7.5)內(nèi)的溶液中加入N-羥基琥珀酰亞氨基-2-溴乙酸酯的甲醇(1mL)溶液。攪拌2小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物施加到Sephadex G25柱上，用10％乙腈(在水中)洗脫。合并合適的級(jí)分，并在低溫下(25℃)減壓濃縮，獲得了化合物19。將NAPAP類(lèi)似物16(10mg,15μmol)溶于甲醇(1mL)和0.1M Na2HPO4緩沖液(0.75mL,pH7.0)的混合物中，通過(guò)通入氦氣和聲處理來(lái)脫氣。向該溶液中加入三丁基膦(4.1μL,16μmol)，將該反應(yīng)混合物在氬氣氛下攪拌。1小時(shí)后，HPLC分析(LichrospherRP18-柱)表明2-吡啶亞磺?；淹耆呀?，將化合物19在二甲基甲酰胺(0.25mL)和0.1MNa2HPO4緩沖液(0.50mL,pH7.0)中的溶液加到該反應(yīng)混合物中。將該混合物攪拌3小時(shí)，然后通過(guò)凝膠過(guò)濾(Fractogel HW-40，洗脫劑0.15M TEAB)純化該粗混合物。將合適的級(jí)分濃縮，并進(jìn)行Dowex50WX-Na+離子交換，冷凍干燥后獲得了均勻偶聯(lián)物Ⅰ(10.1mg，產(chǎn)率為47％)。通過(guò)半制備HPLC柱色譜法(LiChrospherRP18-柱，梯度洗脫17.5％-22.5％CH3CN(在0.05M TEAA水溶液中))將這兩種非對(duì)映異構(gòu)體分離，獲得了非對(duì)映異構(gòu)體Ⅰ-a(保留時(shí)間28.6分鐘)和非對(duì)映異構(gòu)體Ⅰ-b(保留時(shí)間33.0分鐘)。通過(guò)凝膠過(guò)濾(SephadexG-25 DNA-級(jí)Superfine)將這兩種非對(duì)映異構(gòu)體脫鹽，用Dowex 50WX4-Na+離子交換樹(shù)脂轉(zhuǎn)化成Na+-型。非對(duì)映異構(gòu)體Ⅰ-a:1H NMR(D2O,600MHz,HH-COSY)麥芽三糖(還原末端)4.65(bs,1H,H1),3.85(m,1H,H2),4.35(m,1H,H3),3.76(m,1H,H4)；5.50(bs,1H,H1′),4.18(m,1H,H2′),4.10(m,1H,H4′)；(非還原末端)5.71(bs,1H,H1"),4.09(m,1H,H2"),4.45(m,1H,H3"),4.15(m,1H,H4")；3.95-3.84(H5，麥芽三糖)；間隔基3.65-3.51(m,22H,OCH2HEG),3.35(m,2H,CH2NH2),3.15(s,2H,SCH2(O))；肽8.31(s,1H,HaromNAS),8.06-7.67(m,6H,HaromNAS),7.70,7.17(2xd,4H,HaromAPA,J=7.8 Hz),4.28(m,1H,αCHAPA),3.91(m,1H,αCH Cys),3.30-3.04(m,4H,CH2N哌啶),2.82-2.62(m,3H,βCH2Cys,βCH APA),2.57(m,1H,βCH′APA),1.45-1.25(m,6H,CH2哌啶)；ES-MS:[M-3H]3-724.1,[M-2H]2-1086.7.非對(duì)映異構(gòu)體Ⅰ-b:1H NMR(D2O,600MHz,HH-COSY)麥芽三糖(還原末端)3.80(m,1H,H2),4.32(m,1H,H3),3.89(m,1H,H4)；5.49(bs,1H,H1′),4.22(m,1H,H2′),4.11(m,1H,H4′)；(非還原末端)5.70(bs,1H,H1"),4.22(m,1H,H2"),4.52(m,1H,H3"),4.24(m,1H,H4")；3.91-3.84(H5，麥芽三糖)；間隔基3.63-3.52(m,22H,OCH2HEG),3.35(t,2H,CH2NH2),3.17(AB,2H,SCH2(O))；肽 8.35(s,1H,HaromNAS),8.07-7.65(m,6H,HaromNAS),7.77,7.22(2xd,4H,HaromAPA,J=7.8Hz),4.62(t,1H,αCH APA,JαCH,βCH=7.3Hz),4.05(m,1H,αCH Cys),3.05-3.00(m,4H,CH2N哌啶),2.85-2.67(m,4H,βCH2Cys,βCH2APA),1.88-1.24(m,6H,CH2哌啶)；ES-MS:[M-3H]3-724.0,[M-2H]2-1086.2.N-羥基琥珀酰亞氨基-14-S-2-吡啶亞磺?；?14-巰基-3,6,9,12-四氧雜十四烷酸酯(22)將間隔物20(0.75,2.4mmol)(P.Westerduin等人，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1996,35,3,p331-333)和AldrithiolTM(2.6g,12.1mmol)溶于二氯甲烷(20mL)，并用正丁基胺(4mL)處理。攪拌2小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物真空濃縮，再溶于二氯甲烷(50mL)，用5％檸檬酸水溶液(2×50mL)洗滌。將有機(jī)層干燥，并減壓濃縮。通過(guò)硅膠柱色譜法(甲醇/乙酸/二氯甲烷，0/1/99-6/1/93,v/v/v)將殘余物純化，獲得了純21(0.80g，產(chǎn)率為88％)。將化合物21(0.80g,2.1mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，將N-羥基琥珀酰亞胺(0.26g,2.3mmol)和EDCI(0.45mg,2.3mmol)加到該溶液中。1小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物用二氯甲烷(50mL)稀釋?zhuān)帽?20mL)洗滌3次，干燥(硫酸鎂)并濃縮，獲得了22(0.98g，產(chǎn)率為98％)，無(wú)需純化直接使用。Nε-叔丁氧基羰基-Nα-苯磺?；?(L)-賴(lài)氨酸(24)使用23和苯磺酰氯作為原料，按照制備12所采用的方法進(jìn)行制備(0.86g，產(chǎn)率為75％)。Nε-(14-S-2-吡啶亞磺?；?14-巰基-3,6,9,12-四氧雜十四烷?；?-Nα-苯磺?；?(L)-賴(lài)氨酸(26)用3 N HCl(在乙酸乙酯中)處理化合物24(0.86g,2.2mmol)。15分鐘后，將該反應(yīng)混合物真空濃縮。通過(guò)與甲苯共蒸發(fā)除去殘余物中的微量酸。將粗產(chǎn)物25溶于二噁烷/水(4/1,v/v,2.5mL)中，向該溶液中加入化合物22(0.98g,2.1mmol)和DiPEA(1.1mL,6.6mmol)。1小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物用二氯甲烷(100mL)稀釋?zhuān)?％檸檬酸水溶液(2×50mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(硫酸鎂)，并真空濃縮。通過(guò)硅膠柱色譜法(0-10％甲醇/乙酸乙酯)將殘余油狀物純化，獲得了均質(zhì)26(0.95g，產(chǎn)率為67％)。N(N(Nε-(14-S-2-吡啶亞磺?；?14-巰基-3,6,9,12-四氧雜十四烷?；?-Nα-苯磺?；?(L)-賴(lài)氨?；?-(D,L)-4-脒基苯基丙氨?；?哌啶(27)使用26和15作為原料，按照制備16所采用的方法進(jìn)行制備(87mg，產(chǎn)率為70％)。麥芽三糖十磷酸酯18與肽27的縮合偶聯(lián)(Ⅱ)使用18和27作為原料，按照制備Ⅰ所采用的方法進(jìn)行制備。通過(guò)半制備HPLC(LiChrospherRP18-柱)純化粗產(chǎn)物Ⅱ。然后通過(guò)凝膠過(guò)濾(Sephadex G-25 DNA-級(jí)Superfine)脫鹽，用Dowex 50 WX4-Na+離子交換樹(shù)脂轉(zhuǎn)化成Na+-型，冷凍干燥后獲得了純Ⅱ，為白色蓬松固體(8.5mg，按18計(jì)算產(chǎn)率為23％。)1H NMR(D2O,600MHz,HH-COSY)麥芽三糖(還原末端)4.67(m,1H,H1),4.07(m,1H,H2),4.40(m,1H,H3),4.06(m,1H,H4)；5.49(bs,1H,H1′),4.24(m,1H,H2′),4.66(m,1H,H3′),4.10(m,1H,H4′)；(非還原末端)5.73(bs,1H,H1"),4.17(m,1H,H2"),4.38(m,1H,H3"),4.22(m,1H,H4")；3.95-3.82(H5，麥芽三糖)；間隔基4.03,4.02(2xs,2H,OCH2C(O)),3.73-3.59(m,36H,OCH2TEG,HEG),3.38(t,2H,CH2NH2),3.27,3.26(2xs,2H,SCH2(O)),2.75(2xt,2H,CH2S)；肽7.81-7.52(m,5H,HaromBS),7.79,7.76,7.42,7.41,(4xd,4H,HaromAPA),4.87,4.66(2xt,1H,αCH APA,JαCH,βCH=7.4Hz),4.07(m,1H,αCH Lys),3.37-3.73(m,8H,εCH2Lys,βCH2APA,CH2N哌啶)，1.96-1.46(m,12H,CH2哌啶，β/γ,δCH2Lys)；ES-MM+3H]3+801.2,[M+2H]2+1200.8.部分保護(hù)的五糖30將已知的五糖29(53mg,49μmol)(R.C.Buijsman等人，Chem.Eur.J.1996,2,12,p1572-1577)溶于二甲基甲酰胺(0.25mL)和水(1mL)中，并用N-(芐氧基羰基氧基)琥珀酰亞胺(18mg,72μmol)和N-乙基嗎啉(18.6mL)處理。攪拌15分鐘后，TLC分析(乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水，5/7/1.6/4,v/v/v/v)表明反應(yīng)已完全，將該反應(yīng)混合物直接置于RP-18柱上，用水/甲醇(90/10-60/40)洗脫。合并適當(dāng)?shù)募?jí)分，濃縮至小體積，置于在水中的Dowex 50 WX4-H+離子交換柱上。將洗脫液真空濃縮，獲得了純30(54mg，產(chǎn)率為91％)。硫酸化五糖32將化合物30(54mg,45μmol)溶于二甲基甲酰胺(1mL)。加入三乙胺三氧化硫復(fù)合物(0.51g，對(duì)于每一羥基是5當(dāng)量)，將該混合物在氮?dú)夥障掠?5℃攪拌16小時(shí)。然后將該混合物冷卻至0℃，加入碳酸氫鈉水溶液(對(duì)于每當(dāng)量三乙胺三氧化硫復(fù)合物是5當(dāng)量)。將該混合物攪拌1小時(shí)，濃縮至小體積，并置于Sephadex G-25柱上，用10％乙腈(在水中)洗脫。合并適當(dāng)?shù)募?jí)分，濃縮至小體積，然后過(guò)Dowex 50 WX4(Na+形式)柱，用水洗脫。將洗脫液濃縮，再溶于0.2N鹽酸(1mL)中，在4℃放置16小時(shí)。用0.1N氫氧化鈉溶液將該反應(yīng)混合物中和，在Sephadex G-25柱上脫鹽，用10％乙腈(在水中)洗脫。獲得了均質(zhì)的31。將化合物31溶于含有幾滴乙酸的叔丁醇/水(6/1,v/v,20mL)中。在連續(xù)氫氣流下、在10％Pd/C(100mg)存在下，將該溶液攪拌。3小時(shí)后，通過(guò)過(guò)濾除去Pd/C催化劑，將濾液真空濃縮。獲得了純32(60mg，產(chǎn)率為60％)。五糖32與肽16的縮合偶聯(lián)將五糖32(15mg,6.5μmol)溶于0.1M NaH2PO4緩沖液(2mL,pH7.5)，向該溶液中加入sulfo-SIABTM(16mg,33μmol)溶液。在暗處攪拌3小時(shí)后，HPLC分析(單Q陰離子交換)表明反應(yīng)已完全，用Superdex 30柱(10％乙腈(在水中))純化粗產(chǎn)物34。合并合適的級(jí)分，并在低溫下(25℃)減壓濃縮。向NAPAP類(lèi)似物16(9mg,14μmol)在甲醇(1mL)和0.1M Na2HPO4緩沖液(0.75mL,pH7.0)的混合物中的溶液內(nèi)(使用前通過(guò)通入氦氣和聲處理來(lái)脫氣)加入三丁基膦(3.9μL,15μmol)。在氬氣氛下攪拌1小時(shí)后，HPLC分析(LichrospherRP18-柱)表明2-吡啶亞磺?；淹耆呀狻⒀苌奈逄?4在二甲基甲酰胺(0.25mL)和0.1M Na2HPO4緩沖液(0.50mL,pH7.0)中的溶液加到該反應(yīng)混合物中，并將該混合物攪拌3小時(shí)。將該粗產(chǎn)物置于Sephadex G-50柱上，用10％乙腈(在水中)洗脫。合并合適的級(jí)分，濃縮至小體積，用Superdex 30柱脫鹽，用10％甲醇(在水中)洗脫。濃縮并冷凍干燥，獲得了偶聯(lián)物Ⅲ，為白色固體(9mg，產(chǎn)率為52％)。1H NMR(D2O,600MHz,HH-COSY):δ3.60,3.53,3.43(3xs,9H,CH3OE,G,H)；環(huán)D:5.53(m,1H,H1),4.15(m,1H,H2),4.58(m,1H,H3),3.56(m,1H,H4),3.92(m,1H,H5),4.26,4.13(2xm,2H,H6,H6′)；環(huán)E:4.70(d,1H,H1,J1,2=8.1Hz,),4.21(m,1H,H2),3.62(m,1H,H3),3.92(m,1H,H4),3.74(m,1H,H5)；環(huán)F:5.39(d,1H,H1,J1,2=3.8Hz),4.22(m,1H,H2),4.56(m,1H,H3),3.83(t,1H,H4,J3,4=J4,5=9.8Hz),4.12(m,1H,H5)；環(huán)G:5.15(bs,1H,H1),4.35(m,1H,H2),3.76(m,1H,H3),4.21(m,1H,H4),4.80(m,1H,H5)；環(huán)H:5.10(d,1H,H1,J1,2=3.6Hz),4.31(m,1H,H2),4.54(m,1H,H3),4.21(m,1H,H4)；間隔基7.51,7.53,7.13,712(4xd,4H,HaromSIAB),3.73(m,2H,CH2CH2NH2),3.66(m,12H,OCH2TEG),3.31(m,2H,CH2NH2)；肽8.27,8.22(2xs,1H,HaromNAS),7.98-7.60(m,6H,HaromNAS),7.71,7.64,7.46,7.44(4xd,4H,HaromAPA),4.60,4.45(2xt,1H,αCH APA,JαCH,βCH=6.6Hz),4.00,3.97(2xm,1H,αCH Cys),3.10-2.85(m,4H,CH2N哌啶),2.82-2.70(m,3H,βCH2Cys,βCH APA),2.61(m,1H,βCH′APA),1.55-1.15(m,6H,CH2哌啶)；ES-MS:[M-H]-2680.6
使用類(lèi)似方法，制得了下述化合物 通過(guò)下述測(cè)試方法測(cè)定本發(fā)明化合物的生物活性。Ⅰ．抗凝血酶分析凝血酶(Ⅱa因子)是血凝級(jí)聯(lián)中的因子。
通過(guò)分光光度法測(cè)定由凝血酶導(dǎo)致的產(chǎn)色底物s-2238水解的速率來(lái)評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物的抗凝血酶活性。使用在緩沖系統(tǒng)中進(jìn)行的抗凝血酶活性分析來(lái)評(píng)價(jià)測(cè)試化合物的IC50值。測(cè)試介質(zhì)氨丁三醇-NaCl-聚乙二醇6000(TNP)緩沖液參照化合物12581(Kabi)載體TNP緩沖液可用二甲亞砜、甲醇、乙醇、乙腈或叔丁醇促進(jìn)溶解，這些溶劑在最終的反應(yīng)混合物中高達(dá)2.5％的濃度下沒(méi)有不利作用。技術(shù) 試劑*1．氨丁三醇-NaCl(TN)緩沖液該緩沖液組分氨丁三醇(Tris) 6.057g(50mmol)NaCl5.844g(100mmol)水至1升在37℃用HCl(10mmol/升)將該溶液的pH調(diào)節(jié)至7.4。2．TNP緩沖液將聚乙二醇6000溶于該TN緩沖液，使其濃度為3g/升。3．S-2238溶液將一瓶S-2238(25mg；Kabi Diagnostica,Sweden)溶于20mlTN緩沖液，使其濃度為1.25mg/ml(2mmol/升)。4．凝血酶溶液人凝血酶(16000nKat/瓶；Centraal Laboratorium voorBloedtransfusie,Amsterdam,The Netherlands)溶于TNP緩沖液，獲得了濃度為835nKat/ml的貯備液。
使用前立即用TNP緩沖液將該溶液稀釋至濃度為3.34nKat/ml。*-使用的所有組分都是分析級(jí)-對(duì)于水溶液使用超純水(Mili-Q質(zhì)量)制備測(cè)試化合物和參照化合物溶液將測(cè)試化合物和參照化合物溶于Mili-Q水，以獲得濃度為10-2mol/升的貯備液。用載體將每一濃度進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)垣@得10-3、10-4和10-5mol/升的濃度。在該分析中使用包括貯備液在內(nèi)的稀釋液(在反應(yīng)混合物中的終濃度分別為3×10-3；10-3；3×10-4；10-4；3×10-5；10-5；3×10-6；和10-6mol/升)。操作在室溫用吸量管將0.075ml和0.025ml測(cè)試化合物或參照化合物溶液或載體置于微量滴定板的孔中，分別用0.115ml和0.0165mlTNP緩沖液將這些溶液稀釋。向每一孔中加入等分試樣的0.030mlS-2238溶液，在振搖條件下將該微量滴定板在恒溫箱(Amersham)中于37℃預(yù)加熱和預(yù)保溫10分鐘。預(yù)保溫后，通過(guò)向每一孔中加入0.030ml凝血酶溶液來(lái)使S-2238開(kāi)始水解。將該微量滴定板在37℃保溫(振搖30秒)。保溫后1分鐘，用動(dòng)力學(xué)微量滴定板讀數(shù)器(Twinreaderplus,Flow Laboratories)在405nm測(cè)定每一樣本的吸光度，在90分鐘期間內(nèi)每2分鐘測(cè)定一次。
所有數(shù)據(jù)均用LOTUS-MEASURE收集在IBM個(gè)人計(jì)算機(jī)中。對(duì)于所有化合物濃度(以mol/升反應(yīng)混合物表示)以及空白，將反應(yīng)時(shí)間(min)對(duì)吸收度作圖。反應(yīng)評(píng)價(jià)對(duì)于每一終濃度，由測(cè)定圖計(jì)算最大吸收度。依據(jù)Hafner等人的方法(Arzneim-Forsch./Drug Res.1977；27(Ⅱ)；1871-3)使用對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)化分析計(jì)算IC50-值(使空白的最大吸收度抑制50％的終濃度，以μmol/升表示)。抗凝血酶活性
Ⅱ．抗Ⅹa因子分析活化因子Ⅹ(Ⅹa)是血凝級(jí)聯(lián)中的因子。
通過(guò)分光光度法測(cè)定由Ⅹa導(dǎo)致的產(chǎn)色底物s-2222水解的速率來(lái)評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物的抗Ⅹa活性。使用在緩沖系統(tǒng)中進(jìn)行的抗Ⅹa活性分析來(lái)評(píng)價(jià)測(cè)試化合物的IC50值。
下述操作和測(cè)試條件一般與上述抗凝血酶分析類(lèi)似。不同之處如下。參照化合物芐脒載體TNP緩沖液可用二甲亞砜、甲醇、乙醇、乙腈或叔丁醇促進(jìn)溶解，這些溶劑在最終的反應(yīng)混合物中高達(dá)1％(對(duì)于DMSO)和2.5％(對(duì)于其它溶劑)的濃度下沒(méi)有不利作用。技術(shù) 試劑*3．S-2222溶液將一瓶S-2222(15mg；Kabi Diagnostica,Sweden)溶于10ml水，使其濃度為1.5mg/ml(2mmol/升)。4．Ⅹa溶液牛Ⅹa因子人(Bovine Factor Ⅹa Human)(71nKat/瓶；KabiDiagnostica)溶于10ml TNP緩沖液，然后用30ml TNP緩沖液進(jìn)一步稀釋?zhuān)節(jié)舛葹?.77nkat/ml。稀釋液必須臨用現(xiàn)配。操作替代S-2238溶液(在抗凝血酶分析中)，在該分析中將S-2222溶液加到每一孔中?？耿鷄因子活性
結(jié)構(gòu)式圖表1
結(jié)構(gòu)式圖表2
結(jié)構(gòu)式圖表3
結(jié)構(gòu)式圖表4
結(jié)構(gòu)式圖表5
權(quán)利要求
1．式(Ⅰ)化合物或其可藥用鹽或其前藥 其中R1是苯基、萘基、1,2,3,4-四氫萘基、(異)喹啉基、四氫(異)喹啉基、3,4-二氫-1H-異喹啉基、苯并二氫吡喃基、或樟腦基，所述基團(tuán)可選擇性地被一個(gè)或多個(gè)選自(1-8C)烷基或(1-8C)烷氧基的取代基取代；R2和R3獨(dú)立地為H或(1-8C)烷基；R4是(1-8C)烷基或(3-8C)環(huán)烷基；或者R3和R4與它們所連的氮原子形成可選擇性地包含另外的雜原子的非芳香(4-8)元環(huán)，該環(huán)可選擇性地被(1-8C)烷基或SO2-(1-8C)烷基取代；Q是鏈長(zhǎng)為10-70個(gè)原子的間隔基；Z是包含2-6個(gè)單糖單元的帶負(fù)電荷的低聚糖殘基，其中的負(fù)電荷由帶正電荷的抗衡離子抵消。
2．權(quán)利要求1的化合物，其中Z衍生自本身具有AT-Ⅲ介導(dǎo)的抗-Ⅹa活性的低聚糖。
3．權(quán)利要求2的化合物，其中Z是五糖殘基。
4．權(quán)利要求3的化合物，其中Z具有式(Ⅱ)所示結(jié)構(gòu) 其中R5獨(dú)立地為OSO3-或(1-8C)烷氧基。
5．權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其中R1是苯基、4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯基或萘基；R2是H；且NR3R4代表哌啶基。
6．權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的化合物，其中Q具有式(Ⅲ)所示結(jié)構(gòu)-[(CH2)2O]m-[(CH2)n-NR3-C(O)]p-W-(CH2)s- (Ⅲ)其中W是-[1,4-亞苯基-NR3-C(O)]q-(CH2)r-S-或-(CH2)t-S-(CH2)u-[O(CH2)2]v-O-(CH2)w-C(O)-NR3-；且R3獨(dú)立地為H或(1-8C)烷基；m=1-12；n=1-8；p=0-4；q=0或1；r=1-8；s=1-8；t=1-8；u=1-8；v=1-12；w=1-8；總的原子數(shù)是10-70；且-[(CH2)2O]m-部分是末端，Q通過(guò)該部分連接在Z上。
7．權(quán)利要求6的化合物，其中Q選自-[(CH2)2O]5-(CH2)2-NH-C(O)-CH2-S-CH2-；-[(CH2)2O]5-(CH2)2-NH-C(O)-CH2-S-(CH2)2-[O(CH2)2]3-O-CH2-C(O)-NH-(CH2)4-；和-[(CH2)2O]3-(CH2)2-NH-C(O)-1,4-亞苯基-NH-C(O)-CH2-S-CH2-。
8．包含權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的化合物和可藥用輔料的藥物組合物。
9．用于治療的權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的化合物。
10．權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的化合物在制備用于治療或預(yù)防血栓形成或其它與凝血酶有關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(Ⅰ)化合物或其可藥用鹽或其前藥:其中R
文檔編號(hào)A61P7/02GK1305494SQ99807399
公開(kāi)日2001年7月25日 申請(qǐng)日期1999年6月11日 優(yōu)先權(quán)日1998年6月17日
發(fā)明者J·E·M·巴斯坦, C·A·A·范博凱爾, R·C·比杰斯曼, C·M·德里夫－特龍普 申請(qǐng)人:阿克佐諾貝爾公司, 萊頓大學(xué)