專利名稱：2,3－二氫－1－茚酮類對26s和20s蛋白酶體的抑制的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種用一類2,3-二氫-1-茚酮組合物來抑制細(xì)胞增殖的方法，而這些組合物以前從未想到過會有此用途。作為細(xì)胞增殖抑制劑，該組合物可用于治療癌癥、心血管疾病、例如再狹窄、宿主移植排斥、痛風(fēng)及其它增生性疾病，而且還可作為自體免疫疾病的潛在治療劑，這些自體免疫疾病包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、狼瘡、Ⅰ型糖尿病、多發(fā)性硬化及類似病癥。
多催化性蛋白酶(multicatalytic proteinase)或者蛋白酶體(proteasome)是負(fù)責(zé)絕大多數(shù)細(xì)胞蛋白質(zhì)的ATP-依賴性蛋白水解的一種高度保守的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。20S(700KDa)的蛋白酶體含有至少五種不同的蛋白水解活性，這些活性具有一種新型的涉及活性位點上的蘇氨酸殘基的機(jī)制(Coux,O.,Tanaka,K.和Goldberg,A.1996生化年鑒(Ann.Rev.Biochem.)65:801-47)。
已從古細(xì)菌嗜酸熱原體中結(jié)晶到了20S的蛋白酶體(Lowe,J.,Stock,D.,Jap.B.,Zwickl,P.,Bauminster,W.,及Huber,R.1995科學(xué)(Science)268:533-539)。古細(xì)菌20S的蛋白酶體含有14個拷貝的兩種截然不同的亞單位，α和β，這形成了由4個串疊的環(huán)組成的圓椎結(jié)構(gòu)。頂端和底端的環(huán)含有7個α亞單位，而內(nèi)部的環(huán)含有7個β亞單位。在此含有蛋白水解活性位點結(jié)構(gòu)的中間有孔，而且注定要降解的蛋白將經(jīng)過這條通道。由于在進(jìn)化中這些不同亞單位的數(shù)量增加了，所以真核的20S蛋白酶體比古細(xì)菌的要復(fù)雜得多，但根據(jù)其同源性還是可以將這些亞單位按照古細(xì)菌的α和β命名法來分類。因此真核復(fù)合體的四元結(jié)構(gòu)與由兩個α和兩個β環(huán)組成的古細(xì)菌的復(fù)合體是相似的。但是，與主要具有類糜蛋白酶蛋白水解活性的古細(xì)菌蛋白酶體(Dahlmann,B.,Kopp,F.,Kuehn,L.,Niedel,B.,Pfeifer,G.1989歐洲分子生物學(xué)協(xié)會通訊(FEBSLett.)251:125-131,Seemuller,E.Lupas,A.,Zuhl,F.,Zwickl,P及Baumeister,W.1995 FEBS Lett.359:173；及Lowe,J.Stock,D.,Jap,B.,Zwickl,P,Baunuinster,W.及Huber,R.1995 Science 268:533-539)不同，真核蛋白酶體至少含有五種可識別的蛋白酶活性。它們分別被稱作類糜蛋白酶、類胰蛋白酶和肽谷氨酰-肽水解。另外兩種活性還未被描述，一種偏愛裂解支鏈氨基酸羧基端的肽鍵，另外一種則裂解小的中性氨基酸之間的鍵(Orlowski,M.1990 Biochemistry 29:10289-10297)。
雖然20S的蛋白酶體包括蛋白酶解核心，但除非它在其結(jié)構(gòu)的任一端與19S帽形成復(fù)合物，否則它不能在體內(nèi)降解蛋白質(zhì)，其結(jié)構(gòu)本身含有多種ATP酶活性。該更大的結(jié)構(gòu)被稱作26S蛋白酶體，并且它能夠快速地降解那些通過加上數(shù)個8.5KDa多肽即遍在蛋白后被確定要降解的蛋白質(zhì)。
蛋白質(zhì)遍在蛋白化的第一步是通過在遍在蛋白分子羧基端甘氨酸殘基上加上ATP從而產(chǎn)生高能的硫酯中間體而使遍在蛋白分子活化。這一步由遍在蛋白活化酶E1催化。然后遍在蛋白被轉(zhuǎn)移到遍在蛋白結(jié)合酶E2的活性半胱氨酸殘基上。E2酶將遍在蛋白粘附到將要降解的底物蛋白質(zhì)的賴氨酸殘基的E-氨基上。這個過程在有些情況下還需要遍在蛋白連接酶E3。遍在蛋白與先前結(jié)合的遍在蛋白部分的賴氨酸殘基的再一次結(jié)合形成了多遍在蛋白鏈并在底物蛋白質(zhì)周圍形成了遍在蛋白架子。26S蛋白酶體識別多遍在蛋白化的底物蛋白質(zhì)并將其降解，多遍在蛋白鏈從復(fù)合體中釋放，而且遍在蛋白就被再循環(huán)了。
使蛋白質(zhì)遍在蛋白化然后降解的原因目前正在研究之中。很明顯這一定是高度調(diào)控的系列事件，這是由于特定蛋白質(zhì)降解的關(guān)鍵時間控制對許多的細(xì)胞周期功能是非常重要的。已經(jīng)假設(shè)了一些信號，但大部分都集中在底物本身的內(nèi)部結(jié)構(gòu)序列上。一種這類的假設(shè)是“N-末端原則”，即蛋白質(zhì)的氨基末端殘基決定了其半壽期。其它的蛋白質(zhì)例如含有高度保守氨基酸的被稱之為“破壞盒”的短序列的細(xì)胞周期素(Cyclin)對降解也似乎是必要的。而且由富含脯氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸和蘇氨酸的區(qū)域組成的“PEST”序列似乎起到了降解信號的作用。據(jù)信這種內(nèi)部序列在蛋白質(zhì)底物及其特定的遍在蛋白化結(jié)構(gòu)兩者之間起到了識別元件的作用。
已有對于抑制蛋白酶體蛋白水解活性的兩種類型的抑制劑的描述。已有報道特定的肽醛類能夠抑制與蛋白酶體相關(guān)的糜蛋白酶活性(Vinitsky,A.,Michaud,C.,Powers,J.及Orlowski,M.1992生物化學(xué)(Biochemistry)3l:9421-9428；Tsubuki,S.,Hiroshi,K.,Saito,Y.,Miyashita,N.,Inomata,M.,及Kawashima,S.,1993生化生物物理研究(Biochem.Biophys.Res.Commun.)196:1195-1201；Rock,K,I.,Gramm,C.,Rothstein,L.,ClarkK.,Stein,R.,Dick,L.,Hwang,D.和Goldberg,A.L.1994細(xì)胞(Cell)78:761-771)。它們是N-乙酰-L-亮氨酰(leucinyl)-L-亮氨酰(leucinal)-正亮氨醛(ALLN)及一種其Ki為0.14微摩爾/升的緊密相關(guān)的化合物,N-乙酰-L-亮氨酰-L-亮氨酰-甲硫氨醛(LLM)。這種類型的最強(qiáng)抑制劑是一種結(jié)構(gòu)相關(guān)的化合物，N-芐酯基-L-亮氨酰-L-亮氨酰-L-正纈氨醛(MG115)，其Ki為0.021微摩爾/升。雖然這些肽醛對蛋白酶體的類糜蛋白酶的蛋白水解活性的抑制是最有效的，仔細(xì)研究發(fā)現(xiàn)它們是非特異性的蛋白酶抑制劑。最近的報道中描述了一系列相當(dāng)強(qiáng)的二肽抑制劑，其IC50值在體外在10-100納摩爾/升的范圍內(nèi)(Iqbal,M.,Chatterjee,S.,Kauer,J.C.,Das,M.,Messina,P.,Freed,B.,Biazzo,W.及Siman,R.1995 J.Med.Chem 38:2276-2277)及一系列來源于α-酮羰基和硼酸酯(boronic ester)刺激的二肽的具有相似強(qiáng)度的體外抑制劑(Iqbal,M.,Chatteriee,S.,Kaner,J.C.,Mallamo,J.P,.Messina,P.A.,Reibodt,A.,及Siman,R.1996 Bioorg.Med.Chem.Lett6:287-290)。
其它的報道中描述了能特異性地抑制蛋白酶體活性的一類化合物(Fenteany,G.,Standaert,R.F.,Lane,W.S.,Chai,S.,Corey,E.J.,及Schreiber,S.L.,1995 Science 268:726-731)。Lactacystin是一種特異性地抑制蛋白酶體復(fù)合物的蛋白水解活性的鏈霉菌代謝物。最初發(fā)現(xiàn)該分子具有誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系軸突生長的功能(Omura等,1991J.Antibiot.44:113)，后來發(fā)現(xiàn)它能抑制多種類型的細(xì)胞的增殖(Fenteany等1994 Proc.Nat′l.Acad.Sci USA 91:3358)。用放射性同位素標(biāo)記的lactacystin進(jìn)行結(jié)合研究(Fenteany等，1995 Science 268:726-731)已發(fā)現(xiàn)了結(jié)合位點及作用機(jī)制。這些研究已證實lactocystin是不可逆地結(jié)合到位于蛋白酶體p亞單位的蘇氨酸殘基上。另外還研究了基于lactacystin結(jié)構(gòu)的一系列類似物(Fenteany等，1995 Science 268:726-731)。這些研究指出β-內(nèi)酯結(jié)構(gòu)對其抑制活性是必需的。
現(xiàn)在已經(jīng)清楚地知道蛋白酶體是一種主要的溶酶體外蛋白水解系統(tǒng)，它涉及到許許多多各種各樣的細(xì)胞功能，例如細(xì)胞分裂、抗原加工和短壽調(diào)節(jié)蛋白例如轉(zhuǎn)錄因子、致癌基因產(chǎn)物及細(xì)胞周期素的降解(見Ciechanover,A.1994 Cell 79:13-21綜述)。該蛋白酶體的基本水解是催化將蛋白質(zhì)蛋白水解為小肽的反應(yīng)。然而還證明了遍在蛋白-蛋白酶體途徑可以催化將大的無活性前體變成活性蛋白質(zhì)的蛋白水解加工。資料最多的例子涉及到轉(zhuǎn)錄因子NF-KB的活化(Palombella,V.J.,Rando,O.J.,Goldberg,A.L.,和Maniatis,T.1994 Cell 78:773-785)。NF-KB的活性形式是由p65和p50亞單位組成的雜合二體。后者以非活性前體的形式存在于細(xì)胞的胞質(zhì)中，即p105，它是p50的105KDa的多肽前體。將p105蛋白水解加工為p50是經(jīng)過遍在蛋白-蛋白酶體途徑發(fā)生的。另外，加工過的p50和p65復(fù)合體與抑制蛋白一起存留于胞質(zhì)中。通過起始使IKB完全降解的信號途徑發(fā)炎信號使NF-KB活化，而且也刺激使p105加工成p50。因此這兩條都是通過遍在蛋白-蛋白酶體途徑支配的蛋白水解過程都需要信號誘導(dǎo)的NF-KB的活化。引起p105接著蛋白水解產(chǎn)生p50的原因還不知道，但是已有假設(shè)認(rèn)為p50的構(gòu)象使其不能被進(jìn)一步加工并使其與26S復(fù)合物脫離。
事實上蛋白酶體在NF-κB的活化中起到了關(guān)鍵作用，這種作用現(xiàn)在可通過使用蛋白酶體的蛋白水解抑制而在臨床上得到應(yīng)用。對細(xì)菌、真菌或病毒感染后的發(fā)炎反應(yīng)的研究發(fā)現(xiàn)在某些疾病中活性NF-κB的正常功能對人體健康來說可能是決定性的。因此NB-κB活化的抑制可能會因其阻止細(xì)胞因子分泌的能力而在ARDS(急性呼吸窘迫綜合癥)或AIDS的治療中有潛在的應(yīng)用性。由于NB-κB的活化對血管生成是必需的。故蛋白酶體抑制劑在這些與異常新血管生成有關(guān)的疾病的治療中可能會具有應(yīng)用性。
起初p53是作為一種癌蛋白被描述的，但此后卻發(fā)現(xiàn)其參與了許多的細(xì)胞過程(參見Ko,L.J.和Proves,C.1996 Genes Dev.10,1054-1072綜述)。研究發(fā)現(xiàn)在多種血細(xì)胞生成細(xì)胞系中通過多種不同的刺激，包括DNA損傷、病毒感染及生長因子的去除p53能誘導(dǎo)細(xì)胞程序性死亡。然而，注意到一點是重要的，即細(xì)胞程序性死亡能以p53-依賴性的方式例如糖皮質(zhì)激素的作用誘導(dǎo)。p53的誘導(dǎo)導(dǎo)致細(xì)胞生長被阻止在細(xì)胞周期的G1期以及誘導(dǎo)通過細(xì)胞程序性死亡的細(xì)胞死亡。這兩種功能都使得p53能夠控制DNA損傷因而能夠在細(xì)胞分裂時減少DNA變異的增殖。通過誘導(dǎo)細(xì)胞周期素依賴性激酶抑制劑p21,p53能移將細(xì)胞阻止在G1期，接著p21引起過磷酸化形式的或視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤基因產(chǎn)物的累積。據(jù)信在DNA損傷后p53在細(xì)胞中起到校驗點的作用，它首先導(dǎo)致細(xì)胞分裂的停止和細(xì)胞程序性死亡。已知p53降解是通過遍在蛋白-蛋白酶體途徑進(jìn)行的，而且p53降解的停止是誘導(dǎo)細(xì)胞程序性死亡的一種可能模式。蛋白酶體抑制劑的其它可能的應(yīng)用可能在由異常細(xì)胞增殖所引起的疾病的治療上。
已有許多資料證明遍在蛋白-蛋白酶體途徑對細(xì)胞周期素的可調(diào)型破壞是關(guān)鍵的，細(xì)胞周期素控制從有絲分裂中退出并使細(xì)胞進(jìn)入到細(xì)胞循環(huán)的下一期中。因此通過使用蛋白酶體抑制劑抑制細(xì)胞周期素的降解就可以阻止生長。所以蛋白酶體抑制劑的其它潛在用途是在來自于加速的細(xì)胞分裂所導(dǎo)致的疾病的治療上。這些疾病包括癌癥、心血管疾病例如心肌炎、血管成形術(shù)后的再狹窄，腎病例如狼瘡、多囊性腎病，真菌感染，皮膚疾病例如牛皮癬、異常傷口愈合、瘢痕瘤，免疫疾病例如自體免疫、哮喘，和過敏，急性和延遲性過敏、移植物對宿主疾病、移植排斥及神經(jīng)免疫疾病例如多發(fā)性硬化癥和急性播散性腦脊髓炎。
本發(fā)明的目的之一是提供一種方法用于在哺乳動物中抑制細(xì)胞的增殖，該方法中使用治療有效量的迄今未知的組合物，該組合物具有抑制細(xì)胞增殖的特性。
本發(fā)是的目的之一是提供一種方法用于由細(xì)胞快速分裂導(dǎo)致的疾病的有效治療。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種方法通過抑制蛋白酶體抑制劑的降解來進(jìn)行增殖疾病的治療。
本發(fā)明的另一個目的是用治療有效量的組合物來在人體中抑制細(xì)胞增殖疾病。
在一個實施方案中，本發(fā)明的方法是抑制哺乳動物中細(xì)胞的增殖，包括將治療有效量的具有下面通式的化合物對哺乳動物進(jìn)行給藥
化合物中，R1-R4分別選自氫、鹵素、羥基、硫羥、低級烷基、取代的低級烷基、鏈烯基、炔基、烷基鏈烯基、烷基炔基、烷氧基、烷基硫代、?；⒎佳趸?、氨基、酰氨基、羧基、芳基、取代的芳基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜環(huán)、雜烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)雜烷基、硝基或氰基。
R5-R9分別選自氫、鹵素、羥基、硫羥、氧代、低級烷基、取代的低級烷基、鏈烯基、炔基、烷基鏈烯基、烷基炔基、烷氧基、烷基硫代、?；?、芳氧基、氨基、酰氨基、羧基、芳基、取代的芳基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜環(huán)、雜烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)雜烷基、硝基或氰基；X選自氫、-D1,-D2,-E,-D1-E,-D2-E,-D1-D2或具有下式的化合物
其中D1和D2分別選自具有下式的化合物
或氫、鹵素、羥基、硫羥、低級烷基、取代的低級烷基、炔基、烷基鏈烯基、烷基炔基、烷氧基、烷基硫代、?；?、芳氧基、氨基、酰氨基、羧基、芳基、取代的芳基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜環(huán)、雜烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基，或者烷基環(huán)雜烷基；其中E選自
或氫、鹵素、羥基、硫羥、低級烷基、取代的低級烷基、炔基、烷基鏈烯基、烷基炔基、烷氧基、烷基硫代、?；⒎佳趸?、烷基硫代、?；⒎佳趸?、氨基、酰氨基、羧基、芳基、取代的芳基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜環(huán)、雜烷基、取代的環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基，或者烷基環(huán)雜烷基。
當(dāng)D1,D2和/或E選自包括包含取代基R10-R14,J1和J2的化合物時，則R10-R14分別選自氫、鹵素、羥基、硫羥、氧代、低級烷基、取代的低級烷基、鏈烯基、炔基、烷基鏈烯基、烷基炔基、烷氧基、烷基硫代、?；?、芳氧基、氨基、酰氨基、羧基、芳基、取代的芳基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜環(huán)、雜烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)雜烷基、硝基，或氰基，而且J1和J2則分別選自N-R15,CR16R17,O,S-(O)0-2,P-(O)0-3，其中R15-R17可以分別選自氫、鹵素、羥基、氧代、硫羥、低級烷基、取代的低級烷基、炔基、烷基鏈烯基、烷基炔基、烷氧基、烷基硫代、?；?、芳氧基、氨基、酰氨基、羧基、芳基、取代的芳基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜環(huán)、雜烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)雜烷基，或氰基。
當(dāng)以治療有效量給藥時，該組合物可用于治療哺乳動物優(yōu)選治療人的細(xì)胞增殖疾病、感染疾病以及免疫疾病。
附圖中，
圖1是用RAW細(xì)胞提取物的抗-IκBα抗體所進(jìn)行的Western印跡免疫反應(yīng)實驗，該細(xì)胞提取物預(yù)先以表1和2中的化合物173和187處理過。
圖2是對RAW細(xì)胞提取物的抗P50抗體進(jìn)行的Western印跡免疫反應(yīng)實驗，其中該細(xì)胞提取物在與其LPS接觸之前已預(yù)先用表1和2中所述的化合物187處理過；和圖3是用RAW細(xì)胞制備的核提取物進(jìn)行的凝膠遷移率移動實驗，其中該核提取物在與其LPS接觸之前已預(yù)先用表1和2中所述的化合物187進(jìn)行過處理。
本發(fā)明是用于抑制哺乳動物尤其是人的細(xì)胞增殖疾病、感染疾病、以及免疫疾病的方法，方法中使用具有下列通式的組合物
組合物中，R1-R4分別選自氫、鹵素、羥基、硫羥、低級烷基、取代的低級烷基、鏈烯基、炔基、烷基鏈烯基、烷基炔基、烷氧基、烷基硫代、?；?、芳氧基、氨基、酰氨基、羧基、芳基、取代的芳基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜環(huán)、雜烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)雜烷基、硝基或氰基。
組合物中，R5-R9分別選自氫、鹵素、羥基、硫羥、氧代、低級烷基、取代的低級烷基、鏈烯基、炔基、烷基鏈烯基、烷基炔基、烷氧基、烷基硫代、酰基、芳氧基、氨基、酰氨基、羧基、芳基、取代的芳基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜環(huán)、雜烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)雜烷基、硝基或氰基；X選自氫、-D1,-D2,-E,-D1-E,-D2-E,-D1-D2或具有下式的化合物
其中D1和D2分別選自具有下式的化合物
或氫、鹵素、羥基、硫羥、低級烷基、取代的低級烷基、炔基、烷基鏈烯基、烷基炔基、烷氧基、烷基硫羥、酰基、芳氧基、氨基、酰氨基、羧基、芳基、取代的芳基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜環(huán)、雜烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基，或者烷基環(huán)雜烷基；其中E選自
或氫、鹵素、羥基、硫羥、低級烷基、取代的低級烷基、炔基、烷基鏈烯基、烷基炔基、烷氧基、烷基硫代、酰基、芳氧基、烷基硫代、酰基、芳氧基、氨基、酰氨基、羧基、芳基、取代的芳基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜環(huán)、雜烷基、取代的環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基，或者烷基環(huán)雜烷基。
在上述化合物中，R5-R9分別選自氫、鹵素、羥基、硫羥、氧代、低級烷基、取代的低級烷基、鏈烯基、炔基、烷基鏈烯基、烷基炔基、烷氧基、烷基硫代、?；?、芳氧基、氨基、酰氨基、羧基、芳基、取代的芳基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜環(huán)、雜烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、烷基環(huán)雜烷基、硝基或氨基。
當(dāng)D1,D2和/或E選自包括包含取代基R10-R14,J1和J2的化合物時，則R10-R14分別選自氫、鹵素、羥基、硫羥、氧代、低級烷基、取代的低級烷基、鏈烯基、炔基、烷基鏈烯基、烷基炔基、烷氧基、烷基硫代、?；⒎佳趸?、氨基、酰氨基、羧基、芳基、取代的芳基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜環(huán)、雜烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)雜烷基、硝基，或氰基，而且J1和J2則分別選自N-R15,CR16R17,O,S-(O)0-2,P-(O)0-3,其中R15-R17可以分別選自氫、鹵素、羥基、氧代、硫羥、低級烷基、取代的低級烷基、炔基、烷基鏈烯基、烷基炔基、烷氧基、烷基硫代、?；?、芳氧基、氨基、酰氨基、羧基、芳基、取代的芳基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜環(huán)、雜烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)雜烷基，或氰基。
下面的術(shù)語用以描述用于本發(fā)明方法中化學(xué)組合物中的各組分。各術(shù)語的定義如下“鹵素”指氟、溴、氯和碘原子。
“羥基”指-OH基團(tuán)。
“氧代”指=O基團(tuán)。
“硫羥”或“巰基”指-SH和-S(O)0-2基團(tuán)。
“低級烷基”指環(huán)式、支鏈或直鏈形式的1到10個碳原子的烷基。該術(shù)語進(jìn)一步的實例例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基(或2-甲基丙基)、環(huán)丙基甲基、異戊基、正戊基、己基等等。
“取代的低級烷基”指含有一個或多個前述的基團(tuán)的低級烷基，這些基團(tuán)包括羥基、硫羥、烷基硫代、鹵素、烷氧、氨基、酰氨基、羧基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)、環(huán)雜烷基、取代的環(huán)雜烷基、?；Ⅳ然?、芳基、取代的芳基、芳氧基、雜芳基、取代的雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、烷基鏈烯基、烷基炔基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)雜烷基、氰基。這些基團(tuán)可結(jié)合到低級烷基部分的任何一個原子上。
“鏈烯基”指-CR′=CR＂CR，其中R′,R″,R分別選自氫、鹵素、低級烷基、取代的低級烷基、?；⒎蓟?、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基等等。
“炔基”指-C≡C-R′；其中R′選自氫、鹵素、低級烷基、取代的低級烷基、?；⒎蓟?、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基等等。
“烷基鏈烯基”指-R-CR′=CRR″″，其中R是低級烷基或取代的低級烷基，R′,R,R″″分別選自氫、鹵素、低級烷基、取代的低級烷基、?；?、芳基、取代的芳基、雜芳基或如下所定義的取代的雜芳基。
“烷基炔基指-RC≡CR′基團(tuán)，其中R是低級烷基或取代的低級烷基，R′為鹵素、低級烷基、取代的低級烷基、?；?、芳基、取代的芳基、雜芳基或如下所定義的取代的雜芳基。
“烷氧基”指-OR基團(tuán)，其中R是低級烷基，取代的低級烷基、?；?、芳基、取代的芳基、芳烷基、取代的芳烷基、雜烷基、雜芳基烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、或如下所定義的取代的環(huán)雜烷基。
“烷基硫代”指-SR,-S(O)n=1-2-R基團(tuán)，其中R為低級低級烷基、取代的低級烷基、芳基、取代的芳基芳烷基或如下所定義的取代的芳烷基。
“?；敝窩(O)R基團(tuán)，其中R為氫、低級烷基、取代的低級烷基、芳基、取代的芳基和如下所定義的等。
“芳氧基”指-OAr，其中Ar是芳基、取代的芳基、雜芳基或如下所定義的取代的雜芳基。
“氨基”指NRR′基團(tuán)，其中R和R′分別可以是氫、低級烷基、取代的低級烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、環(huán)烷基、如下所定義的取代的雜芳基。
“酰氨基”指-C(O)NRR1，其中R和R′分別為氫，低級烷基，取代的低級烷基，芳基，取代的芳基，雜芳基，如下定義的取代的雜芳基。
“羧基”指-C(O)OR，其中R分別可以是氫、低級烷基、取代的低級烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基等等。
“芳基”或“Ar”指具有至少一個芳香環(huán)(例如，苯基或二苯基)或至少含一個芳香環(huán)的多重稠環(huán)(例如，1,2,3,4-四氫萘基、萘基、蒽基、或者菲基)的芳香碳環(huán)基團(tuán)。
“取代的芳基”指任選被一個或多個官能團(tuán)取代的芳基，這些取代基例如鹵素、低級烷基、低級烷氧基、低級烷基硫代、三氟甲基、氨基、酰氨基、羧基、羥基、芳基、芳氧基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜芳基、硝基、氰基、烷基硫代、硫羥、硫酰氨基等等。
“雜環(huán)”指具有單環(huán)(例如，嗎啉代、吡啶基或呋喃基)或多稠環(huán)(例如，萘吡啶基、喹喔啉基、喹啉基(quinolinyl)或苯并噻吩基)并且在環(huán)中具有至少一個雜原子例如N、O或S的飽和、不飽和或芳香的碳環(huán)基團(tuán)，它可選被或不被例如鹵素、低級烷基、低級烷氧基、低級烷基硫代、三氟甲基、氨基、酰氨基、羧基、羥基、芳基、芳氧基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜芳基、硝基、氰基、烷基硫代、硫羥、硫酰氨等等。
“雜芳基”或“雜芳(hetar)”是指至少其中有一個是芳香性的雜環(huán)的雜環(huán)。
“取代的雜芳基”指可選地被單個或多個的一種或多種官能團(tuán)取代的雜環(huán)，這些官能團(tuán)例如鹵素、低級烷基、低級烷氧基、低級烷基硫代、三氟甲基、氨基、酰氨、羧基、羥基、芳基、芳氧基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜芳基、硝基、氰基、烷基硫代、硫羥、硫酰氨等。
“芳烷基”指-R-Ar基團(tuán)，其中Ar是芳香基，而R是低級烷基或取代的低級烷基。芳基任選未被取代或被以下官能團(tuán)取代，這些官能團(tuán)例如有，鹵素、低級烷基、烷氧基、烷基硫代、三氟甲基、氨基、酰氨基、羧基、羥基、芳基、芳氧基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜芳基、硝基、氰基、烷基硫代、硫羥、硫酰氨等。
“雜烷基”指-R-Het基團(tuán)，Het是雜環(huán)而且R是低級烷基基團(tuán)。雜環(huán)基任選為未取代的或被例如鹵素、低級烷基、低級烷氧基、低級烷基硫代、三氟甲基、氨基、酰氨基、羧基、羥基、芳基、芳氧基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜芳基、硝基、氰基、烷基硫代、硫羥基、硫酰氨基等等所取代。
“雜芳烷基”指-R-Het Ar基團(tuán)，其中Het Ar是雜芳基而R是低級烷基或取代的低級烷基。雜芳烷基任選未被取代或被例如鹵素、低級烷基、取代的低級烷基、烷氧基、烷基硫代、硫羥基、硫酰氨基等。
“環(huán)烷基”是指含有3到15個碳原子的二價環(huán)和多環(huán)的烷基。對多環(huán)基團(tuán)而言，它可以是其中遠(yuǎn)端環(huán)之一可以是芳香的多稠合環(huán)(例如2,3-二氫化茚基、四氫化萘、等等…)。
“取代的環(huán)烷基”指含有一個或多個取代基的環(huán)烷基。這些取代基例如鹵素、低級烷基、取代的低級烷基、烷氧基、烷基硫代、硫羥、硫酰氨基等。
“環(huán)雜烷基”指其一個或多個環(huán)碳原子被雜原子(例如，N,O,S和P)取代的環(huán)烷基。
“取代的環(huán)雜烷”指本文所定義的含有一或多個取代基的環(huán)雜烷基團(tuán)，這些取代基例如鹵素、低級烷基、低級烷氧基、低級烷基硫代、三氟甲基、氨基、酰氨基、羧基、羥基、芳基、芳氧基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜芳基、硝基、氰基、烷基硫代、硫羥基、硫酰氨基等。
“烷基環(huán)烷基”指-R-環(huán)烷基，其中環(huán)烷基是環(huán)烷基基團(tuán)。而R是低級烷基或取代的低級烷基。環(huán)烷基基團(tuán)可選地是未取代的或被鹵素、低級烷基、低級烷基硫代、三氟甲基、氨基、酰氨基、羧基、羥基、芳基、芳氧基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜芳基、硝基、氰基、烷基硫代、硫羥基、硫酰氨基等取代。
“氨基酸”指D-或L-異構(gòu)形式的天然存在或人工合成的α氨基酸，優(yōu)選是天然存在的氨基酸，即丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸或纈氨酸。
一般說來，如果出現(xiàn)于組合物中，D1、D2和E可能是氨基酸。常常優(yōu)選親脂性氨基酸。一般而言，氨基酸的簡寫根據(jù)歐洲生物化學(xué)雜志(Eur.J.Biochem),159,9(1984)所述的IUPAC-IUB生化命名聯(lián)合委員會的命名。
優(yōu)選R3為甲氧基，-D1是亮氨酸，-D2是亮氨酸，而E是NR′R＂。最優(yōu)選-D1是L-亮氨酸，D2是D-亮氨酸，而E選自芐胺、L-2,3-二氫化茚基胺、N,N′-二芐胺、2,6-二氟芐胺、4-甲氧基芐胺、胡椒基胺、NH2和甘氨酰胺。
在一個優(yōu)選的組合物中，R3是甲氧基，D1是亮氨酸，D2是亮氨酸，E是芐胺。在另一優(yōu)選組合物中，R3是甲氧基，D1是亮氨酸，D2是亮氨酸，E是1-2,3-二氫化茚基胺。在再一種優(yōu)選組合物中，R3是甲氧基，D1是亮氨酸，D2是亮氨酸，E是N,N-二芐基胺。在另外一種優(yōu)選的組合物中，R3是甲氧基，D1是亮氨酸，D2是亮氨酸，E是2,6-二氟芐基胺。
在這些優(yōu)選組合物中，進(jìn)一步優(yōu)選D1是L-亮氨酸而且D2是D-亮氨酸。本發(fā)明的治療方法中可能有用的已知化合物公開于下面的表1中。
表1
<p>
本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以理解本文所描述的化合物的立體異構(gòu)體以及包括本文所指出的構(gòu)成化合物的異構(gòu)體和立體異構(gòu)體成分都落入本發(fā)明的治療方法所用的化合物的范圍之內(nèi)。
如果本發(fā)明的方法中的化合物含有堿基，則可以制備酸加成鹽。該化合物的酸加成鹽可在合適的溶劑中以標(biāo)準(zhǔn)方法由母體化合物和過量酸制備，這些酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、馬來酸、琥珀酸、或甲磺酸。如果終產(chǎn)物含酸性基團(tuán)，則可以制備陽離子鹽。通常是用過量的堿性試劑對母體化合物進(jìn)行處理，這些堿性試劑例如含有適當(dāng)陽離子的氫氧化物、碳酸鹽或醇鹽?？伤幱名}中陽離子的實例例如有Na+、K+、Ca2+和NH4+。這些化合某些特定形式的內(nèi)鹽或兩性離子也是可以接受的。
上述的化合物可用于治療需要這種治療的哺乳動物尤其是人的細(xì)胞增殖疾病、感染疾病以及免疫疾病?？捎蒙鲜龅幕衔镏委煹募?xì)胞增殖疾病包括癌癥、心血管疾病例如心肌炎及血管形成術(shù)后的再狹窄，腎疾病例如狼瘡和多囊性腎病(polycystic kidney disease)，宿主移植物排斥、痛風(fēng)及其它增殖疾病?？捎蒙鲜龅幕衔镏委煹淖陨砻庖卟“愶L(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、狼瘡、Ⅰ型糖尿病、多發(fā)性硬化癥和相似的疾病。可用上述的化合物治療的感染疾病包括IBD、Crohn′s病、AIDS、ARDS以及相似疾病。上述化合物也可用于治療真菌感染、皮膚感染例如牛皮癬、異常的傷口愈合、瘢痕瘤，免疫疾病例如自體免疫、哮喘、過敏、急性和延遲性過敏、移植物宿主疾病、移植排斥以及神經(jīng)免疫疾病例如多發(fā)性硬化癥和急性播散性腦脊髓炎。
對這些疾病的治療包括將有效量的所選的化合物或其組合優(yōu)選分散于藥用載體中以經(jīng)胃腸外、經(jīng)口的方式進(jìn)行給藥?；钚猿煞值膭┝繂挝灰话氵x擇為0.01到100毫克/千克，但這種給藥的劑量可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)給藥途徑、患者年齡及狀況很容易地加以確定。對急性或慢性疾病每天給藥的劑量單位可以從1到10倍。當(dāng)根據(jù)本發(fā)明以本發(fā)明的藥物進(jìn)行給藥時沒發(fā)現(xiàn)不可接受的毒理效應(yīng)。
本發(fā)明的化合物的藥物組合物或其衍生物可以制成溶液或凍干粉末以用于胃腸外給藥。在使用前可加入適當(dāng)溶劑或其它可藥用的載體將粉末重新配制。液體配方一般是緩沖溶液、等滲溶液和水溶液。適當(dāng)溶劑的實例有等滲鹽水溶液、標(biāo)準(zhǔn)5％葡萄糖水溶液或乙酸鈉或乙酸銨緩沖溶液。這類配方尤其適于經(jīng)胃腸外給藥，但也可用于口服給藥。加入賦形劑例如聚乙烯吡咯烷酮、明膠、羥基纖維素、阿拉伯膠、聚乙二醇、甘露糖醇、氯化鈉或檸檬酸鈉。另外，這些化合物可以制成膠囊、藥片或制備于乳劑和糖漿中用于口服給藥?？梢约尤肟伤幱玫墓腆w或液體載體以增強(qiáng)或穩(wěn)定該組合物或者幫助制備該組合物。液體載體包括糖漿、花生油、橄欖油、甘油、鹽水、乙醇和水。固體載體包括淀粉、乳糖、硫酸鈣、脫水物、石膏粉、硬脂酸鎂或硬脂酸、滑石、果膠、阿拉伯膠、瓊脂或明膠。該載體可包括持續(xù)釋放的物質(zhì)例如單硬脂酸甘油酯或雙硬脂酸甘油酯，它們可單獨使用或與蠟一起使用。固體載體的用量不限但優(yōu)選每劑量單位在約20毫克到約1克的范圍內(nèi)。根據(jù)傳統(tǒng)的方法制備這些藥物制劑，對于片劑，當(dāng)有必要時這些方法包括研磨、混合、成粒以及壓縮；對于硬明膠膠囊劑，這些方法包括研磨、混合和充填。當(dāng)使用液體載體時，制劑的形式包括糖漿、酏劑、乳劑或水或非水懸浮液。這種液體制劑可直接經(jīng)口給藥或填入軟明膠膠囊中。實施例1本發(fā)明治療方法中所用的化合物是通過有機(jī)化學(xué)的常規(guī)方法制備的。偶聯(lián)試劑是本領(lǐng)域熟知的，例如DCC與其它碳化二亞胺、EDC、BOP和PPA，而且它們可以可選地與其它有助于反應(yīng)的試劑例如HOBT、NMM和DMAP一起使用。其D1、D2和E為氨基酸的化合物(Ⅰ)制備是本領(lǐng)域熟知的，該技術(shù)中使用的常規(guī)溶液和或固相技術(shù)的描述見Bodanszky，“肽合成的實踐”，Springer-Verlag，第一版，1984。氨基的適當(dāng)保護(hù)基公開于Greene等“有機(jī)合成中的保護(hù)基”，第二版，John Wiley & Sons,NewYork,1991。特別有用的氨基保護(hù)基團(tuán)有芐氧羰基，叔丁氧基羰基及芴基甲氧基羰基。
如下進(jìn)行固相肽合成。將Rink酰胺樹脂置于裝有注射器的多孔濾器上。用20％DMF吡啶溶液使樹脂去保護(hù)。20分鐘后，以DMF將樹脂洗滌五次，以甲醇洗滌五次，然后再以DMF洗滌五次。將氨基酸(E)、碳化二亞胺和HOBT的DMF溶液吸入注射器并將反應(yīng)混合物混合4到20小時。排出反應(yīng)溶液，用DMF將混合物洗滌五次，用甲醇洗滌五次，再以DMF洗滌五次。重復(fù)這種循環(huán)只到獲得所需序列為止。最終所進(jìn)行的是5-甲氧基-1-2,3-二氫-1-茚酮-3-乙酸，碳化二亞胺和HOBT之間的偶聯(lián)。將樹脂進(jìn)行最后的洗滌之后，用95％TFA5％水將肽片段從樹脂上切下。裂解混合物濃縮后成為白色固體。實施例2按照下述方法對根據(jù)實施例1的方法制備的本發(fā)明的化合物進(jìn)行測試。根據(jù)公開發(fā)表的方法(Wilk S.和Orlowski,M40842 J Neurochem(1983))將來自小牛腦的蛋白酶體(也稱復(fù)催化蛋白酶復(fù)合體)20S催化亞單化純化至均質(zhì)。通過底物肽琥珀酰-亮氨酸-亮氨酸-纈氨酸-酪氨酸-7-氨基-4-甲基香豆素裂解后熒光的增加來測定復(fù)合物糜蛋白酶活性。標(biāo)準(zhǔn)的體外試驗包括2微克20S蛋白酶體，0.1-100微克/毫升蛋白酶體抑制劑溶于200微升50毫摩爾/升HEPES，含0.1％十二烷基硫酸鈉，pH7.5。加入50微摩爾/升的熒光肽底物起始反應(yīng)，并在37℃進(jìn)行15分鐘。加入100微升100毫摩爾/升的乙酸鹽緩沖液pH4.0中止反應(yīng)。蛋白水解速率直接與氨基甲基香豆素的釋放量成比例，所釋放的氨基甲基香豆素以熒光色譜儀測定(EX370納米，EM430納米)。所檢測的化合物及檢測結(jié)果見下面的表2。
表2
<p>
實施例3在幾種不同的細(xì)胞系中測試了根據(jù)實施1的方法制備的化合物。將有測試化合物存在的情況下將單層細(xì)胞培養(yǎng)18小時以鑒定其抑制細(xì)胞增殖的能力。通過使用Celltiter 96 Aqueous非放射性細(xì)胞增殖試驗(Promega)以比色法確定細(xì)胞增殖，在測試中細(xì)胞增殖與490納米的吸收值直接成比例。結(jié)果表示為在不同類型細(xì)胞中微克/毫升的IC50的細(xì)胞增殖抑制。
實施例4測試根據(jù)實施例1的方法制備的化合物對LPS誘導(dǎo)的TNF合成的抑制。在用脂多糖給藥(100納克/毫升)之前先用不同濃度的化合物Ⅰ對RAW細(xì)胞處理1小時。1小時后收獲的細(xì)胞培養(yǎng)物上清并通過ELISA(Biosource)測定TNF濃度
中存在Iκ3和/或p105而抑制蛋白酶體活性的能力。為了使得對應(yīng)于刺激，例如脂多糖或活躍轉(zhuǎn)錄而使NF-KB轉(zhuǎn)位到核中，就有必要產(chǎn)生兩個蛋白水解過程，即抑制蛋白IκB的降解和p105加工成p50。這些蛋白水解事件將會揭示出NF-κB的核定位信號。
LPS誘導(dǎo)的IκB降解的抑制在以脂多糖給藥(100納米/毫升)之前先用不同濃度的待測化合物對RAW細(xì)胞處理1小時。1小時后收集所有細(xì)胞裂解物，以SDS-PAGE分離10微克蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素上并測定其對抗1κBa抗體的免疫活性。用Boehringer Mannheim Chemiluminescent檢測試劑盒觀察Westem印跡(見圖1)。印跡表明在用少至5微克/毫升的化合物173和187處理過的細(xì)胞中也存在IκB。
LPS誘導(dǎo)的p150加工成p50的抑制按照以上描述用表1和2中所述的化合物187來滲透RAW細(xì)胞。對按上述制備的全細(xì)胞裂解物都進(jìn)行了抗-p50抗體免疫活性分析。圖2中建立的結(jié)果表明在用少至5微克/毫升的化合物187處理過的細(xì)胞中都存在有p50和p150，而在未處理細(xì)胞中，絕大部分的p105都被加工成了p50。
LPS誘導(dǎo)的NF-κB轉(zhuǎn)位到細(xì)胞的核部分的抑制將RAW細(xì)胞用化合物187(20微克/毫升)處理1小時，然后與脂多糖(100納克/毫升)再溫育1小時。數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法制備核部分。凝膠遷移率變換試驗的結(jié)合反應(yīng)含有5微克核提取蛋白；而且有50000cpm32P標(biāo)記的NF-κB共有序列結(jié)合寡核苷酸存在和沒有50倍過量未標(biāo)記寡核苷酸的存在。圖3中建立的凝膠遷移率變換試驗表明化合物187在抑制細(xì)胞的核中可以有效地抑制NF-κB的積累。在本說明書中Nlc=正亮氨酸，Nva=正纈氨酸，CHA=環(huán)己胺，Aib=a-氨基異丁酸，Tic=四氫異喹啉-3-羧酸，Phg=苯基甘氨酸，Thi=b-[2-噻吩基]丙氨酸。
權(quán)利要求
1．一種治療哺乳動物的細(xì)胞增殖疾病、免疫系統(tǒng)疾病和感染疾病的方法，包括用治療有效量的具有下式的化合物對哺乳動物給藥；
R1-R4分別選自氫、鹵素、羥基、硫羥、低級烷基、取代的低級烷基、鏈烯基、炔基、烷基鏈烯基、烷基炔基、烷氧基、烷基硫代、酰基、芳氧基、氨基、酰氨基、羧基、芳基、取代的芳基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜環(huán)、雜烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)雜烷基、硝基或氰基。R5-R9分別選自氫、鹵素、羥基、硫羥、氧代、低級烷基、取代的低級烷基、鏈烯基、炔基、烷基鏈烯基、烷基炔基、烷氧基、烷基硫代、酰基、芳氧基、氨基、酰氨基、羧基、芳基、取代的芳基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜環(huán)、雜烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)雜烷基、硝基或氰基；X選自氫、-D1、-D2、E、-D1D2、-D1-E1、-D2E或具有通式
其中D1和D2分別選自
氫、鹵素、羥基、硫羥、低級烷基、取代的低級烷基、炔基、烷基鏈烯基、烷基炔基、烷氧基、烷基、烷基硫代、?；?、芳氧基、氨基、酰氨基、羧基、芳基、取代的芳基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜環(huán)、雜烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)雜烷基、或空缺；其中E選自
氫、鹵素、羥基、硫羥、低級烷基、取代的低級烷基、炔基、烷基鏈烯基、烷基炔基、烷氧基、烷基硫代、?；?、芳氧基、烷基硫代、酰基、芳氧基、氨基、酰氨基、羧基、芳基、取代的芳基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜環(huán)、雜烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烷基、或烷基環(huán)雜烷基；其中R10-R14分別選逢氫、鹵素、羥基、硫羥、氧代、低級烷基、取代的低級烷基、鏈烯基、炔基、烷基鏈烯基、烷基炔基、烷氧基、烷基硫代、?；⒎佳趸?、氨基、酰氨基、羧基、芳基、取代的芳基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜環(huán)、雜烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)雜烷基、硝基或氰基；J1和J2是N-R15,CR16R17,O,S-(O)0-2,P-(O)0-3；及R15-R16分別選自氫、鹵素、羥基、氧代、硫羥基、低級烷基、取代的低級烷基、炔基、烷基鏈烯基、烷基炔基、烷氧基、烷基硫代、酰基、芳氧基、氨基、酰氨基、羧基、芳基、取代的芳基、雜環(huán)、雜芳基、取代的雜環(huán)、雜烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)雜烷基、硝基或氰基。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中R1-R4分別選自氫、鹵素、低級烷基、取代的低級烷基、芳基、芳氧基、取代的芳基、氨基、酰氨基、烷氧基、硫代、烷基硫羥、羥基、氰基、硝基、酰基、羧基和炔基，R5-R9分別選自氫、低級烷基、取代的低級烷基、芳基、取代的芳基、氨基、酰氨基、烷氧基和炔基。
3．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中X選自-D1-E或-D2-E。
4．根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中D1和D2分別是
5．根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中J1是N-R15，并且R5-R11和R15分別選自氫、低級烷基、取代的低級烷基、芳基、取代的芳基，E選自低級烷基，取代的低級烷基、芳基、取代的芳基、烷氧基和氨基。
6．根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中R5-R11和R15分別選自氫、低級烷基、和取代的低級烷基，E選自低級烷基、取代的低級烷基、芳基、取代的芳基烷氧基和氨基。
7．根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中E選自烷氧基和氨基，R1-R4選自氫、鹵素、低級烷基、取代的低級烷基、烷氧基、氨基、硝基、羥基、氰基、炔基、硫代和烷基硫代。
8．根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中E是NR’R”，其中R’和R”分別選自氫、低級烷基、取代的低級烷基、芳基、取代的芳基和環(huán)烷基、而且R1-R4分別選自氫、鹵素、硝基、低級烷基、取代的低級烷基、氨基、烷基硫代、硫代、羥基和烷氧基。
9．根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中R1和R4分別選自氫，烷氧基，低級烷基，R5-R11和R15分別選自氫、低級烷基和取代的低級烷基，R’和R”分別選自氫、低級烷基、取代的低級烷基和環(huán)烷基。
10．根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中X為
11．根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中-D1和-D2分別為
12．根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中E選自氫、低級烷基、取代的低級烷基、芳基、取代的芳基、氨基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、烷氧基和烷基環(huán)烷基。
13．根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中E是
14．根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中J1和J2分別是NR15，其中R12-R13分別選自氫、低級烷基、取代的低級烷基、芳基、取代的芳基，R14選自低級烷基、取代的低級烷基、芳基、取代的芳基、氨基和烷氧基。
15．根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中R5-R13分別選自氫、低級烷基、取代的低級烷基、芳基和取代的芳基，R14選自烷氧基和氨基，R15選自氫、低級烷基、取代的低級烷基、芳基和取代的芳基。
16．根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中R1-R4分別選自氫、鹵素、低級烷基、取代的低級烷基、芳基、芳氧基、取代的芳基、氨基、烷基硫代、硝基、羥基、硫代和烷氧基。
17．根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中R5-R13和R15分別選自氫、低級烷基和取代的低級烷基。
18．根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中R14是NR’R”，其中R’和R”分別選自氫、低級烷基、取代的低級烷基、芳基、取代的芳基和環(huán)烷基。
19．根據(jù)權(quán)利要求18的方法，其中R1-R4分別選自氫、烷氧基和低級烷基、R5-R13和R15分別選自氫、低級烷基和取代的低級烷基，而且R’和R”分別選自氫、低級烷基、環(huán)烷基和取代的低級烷基。
20．權(quán)利要求12的方法，其中J1是-NR15而其中R15選自氫，低級烷基，取代的低級烷基，芳基和取代的芳基。
21．權(quán)利要求20的方法，其中R5-R11分別選自氫，低級烷基，取代的低級烷基，芳基和取代的芳基，E選自烷氧基和氨基，R1-R4分別選自氫，鹵素，低級烷基，取代的低級烷基，烷基硫代，硫代，烷氧基，氨基，硝基和羥基，并且R15選自氫，低級烷基和芳基。
22．權(quán)利要求21的方法，其中E是NR’R”，其中R’和R”分別選自氫，低級烷基，取代的低級烷基，芳基，取代的芳基和環(huán)烷基。
23．權(quán)利要求21的方法，其中R1-R4分別選自氫，烷氧基和低級烷基，R5-R11分別選自氫，低級烷基，取代的低級烷基，R’和R”分別選自氫，低級烷基，取代的低級烷基和環(huán)烷基，R15選自氫和低級烷基。
24．權(quán)利要求10的方法，其中R3是甲氧基，-D1是亮氨酸，-D2是亮氨酸，而且E是NR’R”。
25．權(quán)利要求24的方法，其中-D1是l-亮氨酸，-D2是d-亮氨酸。
26．權(quán)利要求25的方法，其中E選自芐胺，1-2,3-二氫化茚基胺，N,N’-二芐胺，2,6-二氟芐胺，4-甲氧基芐胺，胡椒基胺和NH2。
27．權(quán)利要求24的方法，其中E是甘氨酰胺。
28．權(quán)利要求1的方法，其中的哺乳動物是人。
29．權(quán)利要求1的方法，其中治療有效量的范圍是0.001到100毫克/千克哺乳動物體重。
30．權(quán)利要求1的方法，其中將組合物對患細(xì)胞增殖疾病的哺乳動物給藥，這些疾病選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，狼瘡，Ⅰ型糖尿病，多發(fā)性硬化癥，癌癥，再狹窄，宿主移植物疾病及痛風(fēng)。
31．權(quán)利要求30的方法，其中的細(xì)胞增殖疾病是再狹窄。
32．權(quán)利要求30的方法，其中的細(xì)胞增殖疾病是癌癥。
33．權(quán)利要求30的方法，其中治療劑可誘導(dǎo)細(xì)胞程序性死亡。
34．權(quán)利要求30的方法，其中的細(xì)胞增殖疾病是多囊性腎病。
35．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中將組合物對患傳染疾病的哺乳動物給藥。
36．根據(jù)權(quán)利要求33的方法，其中的傳染疾病選自IBD、CROHN’S病、AIDS、ARDS以及真菌疾病。
35．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中將該組合對患免疫性疾病例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自體免疫疾病、移植排斥和牛皮癬的哺乳動物給藥。
36．用于權(quán)利要求1中的治療有效量的組合物，其以溶液式給藥。
37．用于權(quán)利要求1中的治療有效量的組合物，其以片劑形式給藥的。
全文摘要
本發(fā)明是用2,3－二氫－1－茚酮類抑制細(xì)胞增殖的方法。
文檔編號A61P9/00GK1231612SQ97198205
公開日1999年10月13日 申請日期1997年9月23日 優(yōu)先權(quán)日1996年9月24日
發(fā)明者羅伯特·T·盧姆, 史蒂文·R·舍伍, 艾莉森·喬利, 休爾什·克沃, 馬雷克·G·納爾遜, 邁克爾·M·威克 申請人:Cv治療公司