本發(fā)明涉及一種外用中藥用途領(lǐng)域，特別涉及一種抗炎、止癢特效的中藥提取物及其外用制劑，屬于藥品、化工以及個人護理品行業(yè)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
近年來，炎癥性瘙癢的發(fā)病趨勢不斷上升，具體表現(xiàn)為慢性濕疹、過敏性皮膚病、嬰兒尿布疹、蚊蟲叮咬等，非常影響人的生活質(zhì)量和工作狀態(tài)。
目前，主要抗炎、止癢的方法是采用西藥治療，主要包括采用爐甘石洗劑、糖皮質(zhì)激素乳膏劑、軟膏或硬膏、氧化鋅軟膏劑、皮炎平、抗真菌類藥物等。但是，這一類方法都是治標(biāo)不治本，且易復(fù)發(fā)，容易產(chǎn)生耐藥性。另也有采用純中藥療法進行治療的，但現(xiàn)有的治療效果緩慢，療效不明顯，患者忍受病痛折磨時間較長。
女貞子又名冬青子（為冬青樹之果實）是木犀科女貞屬植物女貞的成熟果，為傳統(tǒng)護肝中藥。女貞子的采集容易，價廉易得。女貞子的有效成分主要有齊墩果酸、女貞子多糖、氨基酸、磷脂及揮發(fā)油等。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
鑒于以上所述現(xiàn)狀，本發(fā)明的目的在于提供一種抗炎、止癢特效藥物，用于快速止癢、抑制炎癥，安全無刺激。
本發(fā)明首要目的在于提出一種用于抗炎、止癢的特效中藥提取物。
本發(fā)明再一目的在于提供上述中藥提取物的制備方法。
本發(fā)明的第三目的提出一種抗炎止癢中藥提取物外用制劑的制備方法。
本發(fā)明的第四目的在于證明上述中藥提取物外用制劑安全無刺激、可用于治療接觸性皮炎和瘙癢。
本發(fā)明的思路為：
對天然草本植物女貞子進行提取分離。進一步，將其作為主要成分制備成外用制劑，然后測試外用制劑的穩(wěn)定性、安全性，及對接觸性皮炎和瘙癢的治療效果。
為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下具體技術(shù)方案：
一種具有抗炎、止癢特效的外用中藥提取物是由女貞子中提取純化得到，具體方法步驟如下：
(1).收集女貞子果實、去殼、清洗、烘干；
(2).將女貞子粉碎為粉末，加入8倍量的80%乙醇，60℃回流提取三次，每次1.5小時；
(3).合并步驟（2）中三次提取液，減壓蒸餾至粘稠狀；
(4).步驟（3）中粘稠膏狀物按體積比1:1稀釋，加入濃鹽酸調(diào)節(jié)ph至1；
(5).步驟（4）溶液抽濾得到濾渣，濾渣加入于8倍體積水溶解，加入naoh調(diào)節(jié)至ph為12，煮沸20分鐘，加入10倍體積氯化鈉固體，冷卻至室溫進行鹽析，出現(xiàn)晶體后過濾，收集濾渣；
(6).將步驟（5）中收集的濾渣溶于水，加入鹽酸調(diào)節(jié)ph至約為1-2，冷卻過夜；
(7).（6）過夜后抽濾收集濾渣，用蒸餾水洗濾渣至無氯離子，加入8倍體積的無水乙醇，此時溶液為黃褐色；
(8).（7）溶液加入1/10的活性炭，煮沸20分鐘，過濾，濾液溶液顏色變淺；冷卻過夜，抽濾，得微黃色濾渣；
(9).將（8）濾渣轉(zhuǎn)移到索氏提取器套筒中，用正己烷對濾渣進行脫脂；脫脂后得沉淀成白色；將沉淀溶解于95%乙醇重結(jié)晶，得白色針狀結(jié)晶；
(10).（9）得到晶體進行鑒定，計算含量約為98.4%。
所述步驟（10）鑒定包含性狀、鑒別、干燥失重、熾灼殘渣、含量計算、目數(shù)、重金屬（鉛、砷、鎘）微生物（霉菌、酵母菌數(shù)、大腸桿菌、沙門氏菌）、溶劑殘留，鑒定結(jié)果如表1
一種具有抗炎、止癢特效的外用制劑，所述制劑由下述重量百分比的原料組成
如表2
一種上述外用制劑的制備方法，包括如下步驟：
(1).a相（除生育酚乙酸酯，薄荷油，羥苯甲酯外）與d相司盤80混合，加熱至80℃；
(2).b相（蒸餾水，甘油，聚乙二醇）與d相油酸三乙醇胺皂混合，加熱至82℃；
(3).b相中卡波姆過100目篩，均勻撒在蒸餾水水面，靜至過夜使充分溶脹。緩慢攪拌除去氣泡，使卡波姆分布均勻；
(4).將b相置于剪切乳化機中，啟動乳化機，轉(zhuǎn)速5000r/min，乳化五分鐘后靜置1分鐘，緩慢加入b相，80℃條件下使兩相混合乳化；
(5).（3）步驟完全乳化后冷卻至室溫，加入0.5%的（1）步驟中融化的卡波姆溶液，加入油酸調(diào)節(jié)ph至6.5；
(6).加入c相，薄荷油及生育酚，混勻即得。
上述方法制備得到的是膏霜劑型，膏霜中除中藥提取物外的其他組分并非為常規(guī)輔料，而是經(jīng)過發(fā)明人長期研究得到的與中藥提取物相配起到最佳協(xié)同功效的成分。
一種上述外用制劑，其性質(zhì)穩(wěn)定、無刺激，所述性質(zhì)經(jīng)穩(wěn)定性實驗和安全性實驗驗證。
一種上述外用制劑，其對接觸性皮炎具有治療效果，所述效果經(jīng)接觸性皮炎的小鼠模型驗證。
一種上述外用制劑，其對瘙癢具有治療效果，所述效果經(jīng)瘙癢的小鼠模型驗證。
具體實施方式
本發(fā)明為用于抗炎、止癢治療的中藥提取物外用制劑，治療效果顯著，實施例1、實施例2示出了本發(fā)明中關(guān)鍵單因素對中藥提取物提取效率的影響。
實施例1
在本實施例中，分析乙醇體積分數(shù)對中藥提取物提取效率的影響：
(1).收集女貞子果實、去殼、清洗、烘干；
(2).將女貞子粉碎為粉末，稱重，加入如表3中不同乙醇體積分數(shù)，60℃回流提取三次，每次1.5小時；
(3).合并步驟（2）中三次提取液，減壓蒸餾至粘稠狀；
(4).步驟（3）中粘稠膏狀物按體積比1:1稀釋，加入濃鹽酸調(diào)節(jié)ph至1；
(5).步驟（4）溶液抽濾得到濾渣，濾渣加入于8倍體積水溶解，加入naoh調(diào)節(jié)至ph為12，煮沸20分鐘，加入10倍體積氯化鈉固體，冷卻至室溫進行鹽析，出現(xiàn)晶體后過濾，收集濾渣；
(6).將步驟（5）中收集的濾渣溶于水，加入鹽酸調(diào)節(jié)ph至約為1-2，冷卻過夜；
(7).（6）過夜后抽濾收集濾渣，用蒸餾水洗濾渣至無氯離子，加入8倍體積的無水乙醇，此時溶液為黃褐色；
(8).（7）溶液加入1/10的活性炭，煮沸20分鐘，過濾，濾液溶液顏色變淺；冷卻過夜，抽濾，得微黃色濾渣；
(9).將（8）濾渣轉(zhuǎn)移到索氏提取器套筒中，用正己烷對濾渣進行脫脂；脫脂后得沉淀成白色；將沉淀溶解于95%乙醇重結(jié)晶，得白色針狀結(jié)晶，稱重；提取率=(女貞子粉末重量/白色晶體重量)*100
表3乙醇體積分數(shù)對提取率的影響
由表3的數(shù)據(jù)可知，中藥提取物提取效率隨乙醇體積分數(shù)的增加而提高。
當(dāng)乙醇體積分數(shù)超過80%后，中藥提取物提取效率增加緩慢，但是此時需消耗較多的乙醇。
綜合分析上述情況，實驗中選擇乙醇體積分數(shù)為80%為宜。
實施例2
在本實施例中，分析冷凝回流提取溫度對提取率的影響:
(1).收集女貞子果實、去殼、清洗、烘干；
(2).將女貞子粉碎為粉末，稱重，加入80%乙醇體積分數(shù)，如表4中溫度梯度回流提取三次，每次1.5小時；
(3).合并步驟（2）中三次提取液，減壓蒸餾至粘稠狀；
(4).步驟（3）中粘稠膏狀物按體積比1:1稀釋，加入濃鹽酸調(diào)節(jié)ph至1；
(5).步驟（4）溶液抽濾得到濾渣，濾渣加入于8倍體積水溶解，加入naoh調(diào)節(jié)至ph為12，煮沸20分鐘，加入10倍體積氯化鈉固體，冷卻至室溫進行鹽析，出現(xiàn)晶體后過濾，收集濾渣；
(6).將步驟（5）中收集的濾渣溶于水，加入鹽酸調(diào)節(jié)ph至約為1-2，冷卻過夜；
(7).（6）過夜后抽濾收集濾渣，用蒸餾水洗濾渣至無氯離子，加入8倍體積的無水乙醇，此時溶液為黃褐色；
(8).（7）溶液加入1/10的活性炭，煮沸20分鐘，過濾，濾液溶液顏色變淺；冷卻過夜，抽濾，得微黃色濾渣；
(9).將（8）濾渣轉(zhuǎn)移到索氏提取器套筒中，用正己烷對濾渣進行脫脂；脫脂后得沉淀成白色；將沉淀溶解于95%乙醇重結(jié)晶，得白色針狀結(jié)晶，稱重；計算提取率。
表4回流溫度對提取率的影響
從表4看出，隨著溫度的升高，提取率逐漸升高，當(dāng)溫度高于60℃，提取率開始下降，故綜合分析其最佳溫度60℃為宜。
綜上分析，提取最優(yōu)條件是體積分數(shù)80%乙醇在60℃條件反應(yīng)。
實施例3-7按照表5的原料配比制備以優(yōu)選條件提取的女貞子提取物為主要成分的外用制劑。
本發(fā)明提供的外用制劑通過以下步驟制備：
(1).a相（除生育酚乙酸酯，薄荷油，羥苯甲酯外）與d相司盤80混合，加熱至80℃；
(2).b相（蒸餾水，甘油，聚乙二醇）與d相油酸三乙醇胺皂混合，加熱至82℃；
(3).b相中卡波姆過100目篩，均勻撒在蒸餾水水面，靜至過夜使充分溶脹。緩慢攪拌除去氣泡，使卡波姆分布均勻；
(4).將b相置于剪切乳化機中，啟動乳化機，轉(zhuǎn)速5000r/min，乳化五分鐘后靜置1分鐘，緩慢加入b相，80℃條件下使兩相混合乳化；
(5).（3）步驟完全乳化后冷卻至室溫，加入0.5%的（1）步驟中融化的卡波姆溶液，加入油酸調(diào)節(jié)ph至6.5；
(6).加入c相，薄荷油及生育酚，混勻即得。
表5外用制劑原料配比表
穩(wěn)定性測試
測試外用制劑穩(wěn)定性主要方法如下：
取實施例3-7的外用制劑進行高低溫加速試驗，依次在-4℃、15℃、20℃、40℃和60℃下，分別測試30天、60天、90天、180天。
穩(wěn)定性測試結(jié)果如表6所示
表6中穩(wěn)定性測試結(jié)果顯示：本發(fā)明的外用制劑可以具有良好的低溫、常溫、高溫穩(wěn)定性。
安全性測試
測試外用制劑安全性方法如下：
對實施例3-7的外用制劑進行皮膚急性刺激試驗，測試方案如下：
每個實施例選擇4只白色家兔進行實驗，試驗室溫度：20-25℃，相對濕度：60-70%。試驗前約24h，將實驗動物背部脊柱兩側(cè)毛剪掉，不可損傷表皮，去毛范圍左、右各約3cm×3cm。取受試物約0.5ml直接涂在皮膚上，然后用二層紗布（2.5cm×2.5cm）和一層玻璃紙或類似物覆蓋，再用無刺激性膠布和繃帶加以固定。另一側(cè)皮膚作為對照。采用封閉試驗，敷用時間為4h，每天涂抹1次，連續(xù)涂抹14天。第二天開始，每次涂抹前應(yīng)剪毛，用水或無刺激性溶劑清除殘留受試物，清除受試物后的1、24、48和72h觀察涂抹部位皮膚反應(yīng)按表7進行皮膚反應(yīng)評分，以受試動物積分的平均值進行綜合評價，根據(jù)24、48和72h分別觀察時點最高積分均值，按表8判定皮膚刺激強度。
結(jié)果評價：按下列公式計算每天每只動物平均積分，以表8判定皮膚刺激強度。
每天每只動物平均積分=[∑(紅斑積分+水腫積分)]/(受試動物數(shù)量*14)
表7皮膚反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)
表8皮膚刺激強度分級
根據(jù)表7、表8的標(biāo)準(zhǔn)得出皮膚急性刺激試驗測試結(jié)果如表9所示：
表9刺激反應(yīng)積分表
皮膚急性刺激試驗測試結(jié)果表明：本發(fā)明的外用制劑性質(zhì)溫和，皮膚急性刺激試驗測試結(jié)果為無急性皮膚刺激性。
功效測試
本發(fā)明提出的外用制劑抗炎、止癢功效通過小鼠接觸性皮炎模型和瘙癢模型進行驗證。
藥效驗證方法如下。
接觸性皮炎小鼠模型
取icr小鼠40只，于實驗前1d剃凈每只小鼠腹部毛發(fā)，面積約3cm×3cm，實驗當(dāng)日用質(zhì)量/體積分數(shù)5%2，4-二硝基氯苯dnfb-丙酮溶液100μl涂抹于腹部剃毛處，使其致敏。第2天再涂抹100μl強化致敏。5d后在小鼠右耳殼正反兩側(cè)均勻涂抹1%dncb-丙酮溶液各20μl以激發(fā)，同時左耳涂等劑量丙酮溶液，每隔3d激發(fā)1次，共激發(fā)4次(第6，9，12，15天予以激發(fā))，即得接觸性皮炎小鼠模型。
瘙癢模型
取icr小鼠40只，雌雄各半，提前1d脫去小鼠頭頸部耳后皮膚的毛備用，各實驗組連續(xù)給藥3d，末次用藥1h后脫毛部位用右旋糖酐0.2ml/次，即得小鼠瘙癢模型。
分組與給藥方案
將接觸性皮炎模型小鼠隨機分為模型組、陽性藥哈西奈德乳膏組(0.01g·kg－1)，外用制劑高和低劑量組，每組10只，另取10只未致敏的小鼠作為正常組。各組分別于致敏后1h時將相應(yīng)劑量受試物均勻涂于各小鼠右耳的正反兩面，如遇激發(fā)日期，則在每次激發(fā)后2h時再將受試物均勻外涂，正常組和模型組分別給予生理鹽水，連用15d。末次激發(fā)后24h時處死小鼠，并檢測相關(guān)指標(biāo)。將瘙癢模型小鼠隨機分為模型組、陽性藥止癢醑組(1g·kg－1)，本發(fā)明中外用制劑高、低劑量組，每組10只，各組分別將相應(yīng)劑量受試藥物均勻涂抹于脫毛部位，模型組涂抹生理鹽水，連續(xù)用藥3d。以小鼠前爪搔頭部、后爪搔軀干、嘴咬全身各部位作為瘙癢指征，記錄第1次撓癢后15min內(nèi)小鼠瘙癢次數(shù)。
觀察指標(biāo)
耳破損情況
于每次激發(fā)后24h時觀察各組小鼠右耳破損情況，并統(tǒng)計得分。
明顯紅腫增厚及滲出或明顯角化結(jié)痂者記3分；
輕度紅腫，滲出不明顯，或中度角化者記2分；
紅腫和滲出均不明顯，或輕度角化者記1分；
正常皮膚為0分。
瘙癢次數(shù)
自瘙癢模型小鼠第1次發(fā)生撓癢動作起，記錄15min內(nèi)的撓癢總次數(shù)。
實驗結(jié)果
本發(fā)明外用制劑對接觸性皮炎小鼠耳破損結(jié)痂數(shù)的影響如下表10：
表10接觸性皮炎小鼠耳破損結(jié)痂數(shù)表
表10顯示了本發(fā)明高低劑量組對接觸性皮炎小鼠耳破損結(jié)痂數(shù)的影響，結(jié)果表明：
經(jīng)過dncb的致敏和激發(fā)后，小鼠的耳廓有了明顯的腫脹，且隨著激發(fā)的次數(shù)增加，其腫脹度就明顯地增加，皮損也逐漸嚴(yán)重，并且形成了明顯的結(jié)痂現(xiàn)象；與模型組比較，本發(fā)明的外用制劑能有效緩解dncb致敏引起的耳破損結(jié)痂現(xiàn)象。
綜述發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的外用制劑高、低劑量組均能一定程度地抑制接觸性皮炎模型小鼠右耳部結(jié)痂的形成。
對瘙癢小鼠的影響如表11：
表11瘙癢小鼠模型療效表
表11顯示本發(fā)明外用制劑對瘙癢模型小鼠具有一定止癢作用，使各項指標(biāo)水平均優(yōu)于模型組，并且表現(xiàn)出了量-效依賴關(guān)系。
綜上所述，本發(fā)明的外用制劑具有以下有益效果：
(1).本發(fā)明外用制劑具有治療接觸性皮炎的效果；
(2).本發(fā)明外用制劑具有治療瘙癢的效果。
上述實施例僅例示性說明本發(fā)明的原理及其功效，而非用于限制本發(fā)明。任何熟悉此技術(shù)的人士皆可在不違背本發(fā)明的精神及范疇下，對上述實施例進行修飾或改變。因此，凡所屬技術(shù)領(lǐng)域中具有通常知識者在未脫離本發(fā)明所揭示的精神與技術(shù)思想下所完成的一切等效修飾或改變，仍應(yīng)由本發(fā)明的權(quán)利要求所涵蓋。