本發(fā)明涉及藥物
技術(shù)領(lǐng)域：
，且特別涉及一種竹節(jié)參提取物在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用及組合物。
背景技術(shù)：
：抑郁癥(Depression，DEP)是一種嚴(yán)重影響身心健康的情感障礙性精神疾病，患者表現(xiàn)為持續(xù)的情緒低落和認(rèn)知障礙。隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快和社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)的日益激烈，抑郁癥已成為現(xiàn)代社會(huì)的常見(jiàn)病、高發(fā)病，其發(fā)病率正在迅速攀升，研究抑郁癥的發(fā)病機(jī)理、預(yù)防途徑和治療方法具有重大的醫(yī)學(xué)意義和現(xiàn)實(shí)需求。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為，抑郁癥發(fā)病機(jī)理與腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)異常有關(guān)，其中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)包括5-羥色胺、乙酞膽堿和兒茶酚胺類(包括多巴胺，去甲腎上腺素和腎上腺素)物質(zhì)。臨床上常用抗抑郁癥藥物主要包括單胺重?cái)z取抑制劑型；單胺氧化酶抑制劑；受體拈抗劑及植物藥?，F(xiàn)代病理學(xué)研究表明：抑郁癥發(fā)病機(jī)制甚為復(fù)雜，誘發(fā)原因較多，合成抗抑郁藥大多存在抗抑郁譜窄、副作用大、藥價(jià)高和易復(fù)發(fā)等缺陷。因此，國(guó)內(nèi)外在抗抑郁藥的研制與開發(fā)方面越來(lái)越注重傳統(tǒng)植物用藥。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外對(duì)單一藥用植物的提取物的抗抑郁活性研究報(bào)道較多，已發(fā)現(xiàn)的抗抑郁活性植物成分主要有苯并二蒽酮類、黃酮及低聚糖類、生物堿類、間苯三酚類、倍半萜類、二萜類、三萜類、皂苷、有機(jī)酸等類型化合物。竹節(jié)參為五加科植物竹節(jié)參(PanaxjaponicusC.A.Mey.)的干燥根莖，其具有滋補(bǔ)強(qiáng)身、活血化瘀、散瘀止痛、止血祛痰的功效，在土家族苗族聚居區(qū)被譽(yù)為“草藥之王”，屬珍稀瀕危的名貴“七類”中草藥。研究表明，竹節(jié)參提取物具有抗炎、抗腫瘤、降血脂的功效，對(duì)多種疾病具有有效的治療效果，如竹節(jié)參提取物能夠用于預(yù)防和治療慢性阻塞性肺疾病、護(hù)肝、降血脂、治療腸粘膜損傷、制備抗血栓藥物、制備抗尿酸性關(guān)節(jié)炎藥物、制備抗骨質(zhì)疏松藥物等等，但是目前尚無(wú)竹節(jié)參提取物在制備治療抑郁癥的藥物方面的應(yīng)用。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種竹節(jié)參提取物在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的另一目的在于提供一種包括上述竹節(jié)參提取物的組合物，該組合物對(duì)于抑制和治療抑郁癥具有較好的效果。本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題是采用以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的。一種竹節(jié)參提取物在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用，竹節(jié)參提取物包含竹節(jié)參多糖提取物或竹節(jié)參總皂苷提取物中的至少一種。進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實(shí)施例中，竹節(jié)參提取物包括質(zhì)量比為1：2.5～4的竹節(jié)參多糖提取物和竹節(jié)參總皂苷提取物。進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實(shí)施例中，竹節(jié)參提取物包括質(zhì)量比為1：3～3.5的竹節(jié)參多糖提取物和竹節(jié)參總皂苷提取物。進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實(shí)施例中，竹節(jié)參提取物為竹節(jié)參多糖提取物，其單位體重用量為每天15～250mg/kg。進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實(shí)施例中，竹節(jié)參提取物為竹節(jié)參總皂苷提取物，其單位體重用量為每天20～350mg/kg。進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實(shí)施例中，竹節(jié)參總皂苷提取物中竹節(jié)參皂苷V的含量為50％以上。進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實(shí)施例中，竹節(jié)參多糖提取物是按照以下制備方法制得：向竹節(jié)參粉末中加入其質(zhì)量6～8倍的水，浸泡1～3小時(shí)后煎煮1～2.5小時(shí)，過(guò)濾；對(duì)過(guò)濾后的濾渣進(jìn)行2～3次二次提取，并過(guò)濾，合并所有過(guò)濾后的濾液，減壓濃縮得到濃縮液；對(duì)濃縮液進(jìn)行2～3次醇提，合并所有醇提得到的沉淀物，冷凍干燥。進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實(shí)施例中，竹節(jié)參總皂苷提取物是按照以下制備方法制得：向竹節(jié)參粉末中加入其質(zhì)量12～15倍的乙醇，浸泡2～4小時(shí)后水浴并回流提取2～4小時(shí)，過(guò)濾；對(duì)過(guò)濾后的殘?jiān)M(jìn)行2～4次再提取，并過(guò)濾，合并所有過(guò)濾后的提取液，減圧回收乙醇后配制成固體：液體為1g：2～3mL的溶液，使用HP-400大孔樹脂柱依次用水、質(zhì)量濃度60％的乙醇洗脫溶液得到乙醇洗脫液，將乙醇洗脫液冷凍干燥。進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實(shí)施例中，回流提取過(guò)程中進(jìn)行超聲波處理，超聲波處理的頻率為23～25KHz，功率為600～900KW，每間隔45～75秒后超聲波處理15～30秒。本發(fā)明還提供了一種組合物，其包括上述的竹節(jié)參提取物及醫(yī)用輔料。本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供了竹節(jié)參提取物在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用，表明竹節(jié)參提取物中的竹節(jié)參多糖、竹節(jié)參總皂苷和竹節(jié)參皂苷V對(duì)于抑郁癥具有顯著的療效，其具有開發(fā)和制備抗抑郁藥物的前景，竹節(jié)參提取物還具有對(duì)人體副作用小，使用安全的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明還提供了一種包含上述竹節(jié)參提取物的組合物，該組合物能夠用于抑制和治療抑郁癥。具體實(shí)施方式為使本發(fā)明實(shí)施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過(guò)市售購(gòu)買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。下面對(duì)本發(fā)明實(shí)施例提供的竹節(jié)參提取物在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用及組合物進(jìn)行具體說(shuō)明。本發(fā)明實(shí)施例提供了一種竹節(jié)參提取物在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用，即竹節(jié)參提取物在制備治療內(nèi)源性抑郁癥、反應(yīng)性抑郁癥、隱匿性抑郁癥、繼發(fā)性抑郁癥、產(chǎn)后抑郁癥等抑郁癥藥物中的應(yīng)用。該竹節(jié)參提取物中含有竹節(jié)參多糖提取物、竹節(jié)參總皂苷提取物或竹節(jié)參皂苷V中的至少一種；且當(dāng)竹節(jié)參提取物為竹節(jié)參多糖提取物時(shí)，其單位體重用量為每天15～250mg/kg；當(dāng)竹節(jié)參提取物為竹節(jié)參總皂苷提取物時(shí)，其單位體重用量為每天25～350mg/kg；當(dāng)竹節(jié)參提取物為竹節(jié)參多糖提取物和竹節(jié)參總皂苷提取物的混合物時(shí)，竹節(jié)參多糖提取物和竹節(jié)參總皂苷提取物的質(zhì)量比為1：2.5～4；且當(dāng)竹節(jié)參多糖提取物和竹節(jié)參總皂苷提取物的質(zhì)量比為1：3～3.5時(shí)，竹節(jié)參提取物對(duì)于抑郁癥具有最佳的治療效果；竹節(jié)參多糖提取物的優(yōu)選單位體重用量為每天15～75mg/kg，竹節(jié)參總皂苷提取物的優(yōu)選單位體重用量為每天25～135mg/kg；此外，竹節(jié)參總皂苷提取物中竹節(jié)參皂苷V的含量?jī)?yōu)選為50％以上；竹節(jié)參皂苷V的純度為90％以上。其中，竹節(jié)參多糖提取物是按照以下制備方法制得：向竹節(jié)參粉末中加入其質(zhì)量6～8倍的水，浸泡1～3小時(shí)后煎煮1～2.5小時(shí)，過(guò)濾；對(duì)過(guò)濾后的濾渣進(jìn)行2～3次二次提取并過(guò)濾；二次提取的方法是：向?yàn)V渣中加入其質(zhì)量4～6倍的水并煎煮1.5～2小時(shí)后過(guò)濾；合并所有過(guò)濾后的濾液，減壓濃縮得到濃縮液，對(duì)濃縮液進(jìn)行2～3次醇提；醇提是向濃縮液中加入乙醇至乙醇質(zhì)量濃度為60～65％，并放置12小時(shí)以上后過(guò)濾獲取沉淀物；合并所有醇提得到的沉淀物，冷凍干燥得到竹節(jié)參多糖提取物。竹節(jié)參總皂苷提取物是按照以下制備方法制得：向竹節(jié)參粉末中加入其質(zhì)量12～15倍的乙醇，浸泡2～4小時(shí)后水浴并回流提取2～4小時(shí)，過(guò)濾；對(duì)過(guò)濾后的殘?jiān)M(jìn)行2～4次再提取并過(guò)濾，再提取是向殘?jiān)屑尤肫滟|(zhì)量6～8倍的乙醇并回流提取2～3次，每次提取1～1.5小時(shí)得到提取液：在回流提取的過(guò)程中，使用超聲波處理殘?jiān)?，超聲波處理的頻率為23～25KHz，功率為600～900KW，每間隔45～75秒后超聲波處理15～30秒；合并所有過(guò)濾后的提取液，減圧回收乙醇后配制成固體：液體為1g：2～3mL的溶液，使用HP-400大孔樹脂柱依次用水、質(zhì)量濃度60％的乙醇洗脫溶液得到乙醇洗脫液，將乙醇洗脫液冷凍干燥得到竹節(jié)參總皂苷提取物。本發(fā)明還提供了一種組合物，其包括上述竹節(jié)參提取物及醫(yī)用輔料，該組合物可以制備成為片劑、顆粒劑、膠囊劑、膏劑等常用藥品使用。以下結(jié)合實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。1.實(shí)驗(yàn)材料。1.1竹節(jié)參多糖提取物的提取、純化和制備。將竹節(jié)參磨成100μm以下的粉末，向竹節(jié)參粉末中加入其質(zhì)量8倍的水，浸泡3小時(shí)后煎煮2.5小時(shí)，過(guò)濾得到濾液和濾渣，對(duì)濾渣進(jìn)行3次二次提取得到濾液，二次提取的方法是：向?yàn)V渣中加入其質(zhì)量6倍的水并煎煮2小時(shí)后過(guò)濾；合并濾液后減壓濃縮得到濃縮液，對(duì)濃縮液進(jìn)行3次醇提得到沉淀物，醇提是向濃縮液中加入乙醇至乙醇濃度為65％，并放置18小時(shí)后過(guò)濾獲取沉淀物，合并沉淀物后冷凍干燥得到竹節(jié)參多糖。1.2竹節(jié)參總皂苷提取物的提取、純化和制備。將竹節(jié)參磨成200μm以下的粉末，向竹節(jié)參粉末中加入其質(zhì)量15倍的乙醇，浸泡3小時(shí)后水浴回流提取3小時(shí)，過(guò)濾得到提取液和殘?jiān)瑢?duì)殘?jiān)M(jìn)行4次再提取得到提取液，再提取是向殘?jiān)屑尤肫滟|(zhì)量6倍的乙醇回流提取2次得到提取液，每次提取1.5小時(shí)，在回流提取的過(guò)程中，使用超聲波處理殘?jiān)暡ㄌ幚淼念l率為24KHz，功率為800KW，每間隔50秒后超聲波處理25秒；合并提取液，減圧回收乙醇后配制成固體：液體為1g：3mL的溶液，使用HP-400大孔樹脂柱依次用水、60％的乙醇洗脫溶液得到乙醇洗脫液，將乙醇洗脫液干燥得到竹節(jié)參總皂苷。1.3竹節(jié)參皂苷V的提取、純化和制備。取上述竹節(jié)參總皂苷使HP-20樹脂柱純化，收集55～85％的乙醇洗脫液，減壓回收乙醇冷凍干燥，得到竹節(jié)參皂苷V，其純度為97％。2.竹節(jié)參多糖、竹節(jié)參總皂苷與竹節(jié)參皂苷V抑制與治療抑郁癥的實(shí)驗(yàn)研究。2.1實(shí)驗(yàn)方法及實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。2.1.1實(shí)驗(yàn)試劑：竹節(jié)參多糖(DT)、竹節(jié)參總皂苷(ZG)、竹節(jié)參皂苷V(ZV)為自制，氟西汀為上海西部藥業(yè)有限公司產(chǎn)品。2.1.2實(shí)驗(yàn)儀器：TE-CAr全波長(zhǎng)多功能酶標(biāo)儀(型號(hào)SAFIRE2)；LXJ-II離心機(jī)(上海醫(yī)用分析儀器廠)；Satrious電子天平(德國(guó))；恒溫水浴鍋(上海亞榮生化儀器廠)；低溫高速離心機(jī)(天美Z323K)；RSFJ800心肺功能測(cè)定儀(成都日升科技有限公司)；移液槍(大龍)。2.1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF級(jí)雄性昆明小鼠72只，體重20±2g，由華中科技大學(xué)提供。2.2實(shí)驗(yàn)樣品溶液的配制。2.2.1CMC-Na溶液的配制：精密稱取4gCMC-Na溶解于1000mL蒸餾水，配制成濃度為0.4％的CMC-Na溶液。2.2.2陽(yáng)性對(duì)照液制備：稱取氟西汀適量，置于研缽中碾成細(xì)粉，溶解于適量CMC-Na溶液中，配制成2.0mg/mL的氟西汀懸液，為陽(yáng)性對(duì)照藥液。2.2.3DT藥液的配制：精密稱取DT適量，溶解于適量CMC-Na溶液中，配制成2.0mg/mL的DT混懸液。2.2.4ZG藥液的配制：精密稱取ZG適量，溶解于適量CMC-Na溶液中，配制成2.0mg/mL的ZG混懸液。2.2.5ZV藥液的配制：精密稱取ZV適量，溶解于適量CMC-Na溶液中，配制成1.0mg/mL的ZV混懸液。2.2.6DT+ZG(1)藥液的配制：精密稱取ZG與DT適量，溶解于適量CMC-Na溶液中，配制成含DT為1.0mg/mL與含ZG為1.0mg/mL的混懸液(即DT：ZG＝1：1)。2.2.7DT+ZG(2)藥液的配制：精密稱取ZG與DT適量，溶解于適量CMC-Na溶液中，配制成含DT為0.5mg/mL與含ZG為1.5mg/mL的混懸液(即DT：ZG＝1：3)。2.2.8DT+ZG(3)藥液的配制：精密稱取ZG與DT適量，溶解于適量CMC-Na溶液中，配制成含DT為0.4mg/mL與含ZG為1.6mg/mL的混懸液(即DT：ZG＝1：4)。2.3動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。2.3.1動(dòng)物自主興奮性實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物分組：將動(dòng)物稱重，編號(hào)，選擇健康小鼠72只，按體重大小排序，用隨機(jī)分組法分成9組，正常組、模型組、陽(yáng)性組、DT組、ZG組、ZV組、DT+ZG(1)組、DT+ZG(2)組與DT+ZG(3)組，各組動(dòng)物均自由飲食，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后用于實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)方法：采用底面為正方形的敞箱，長(zhǎng)100cm，寬100cm，高50cm，底面用黑線分為100個(gè)面積相近的扇形。實(shí)驗(yàn)時(shí)將大鼠放在敞箱正中心，以大鼠5min內(nèi)水平運(yùn)動(dòng)越格數(shù)(至少3爪跨過(guò)邊界)評(píng)價(jià)其運(yùn)動(dòng)性；以垂直運(yùn)動(dòng)直立次數(shù)(兩前爪離開地面)評(píng)價(jià)其探究性，通過(guò)比較各給藥組給藥前后自主運(yùn)動(dòng)變化情況來(lái)考察各給藥組是否有自主興奮作用，同時(shí)以給予生理鹽水的空白組和給予陽(yáng)性對(duì)照藥鹽酸氟西汀的陽(yáng)性對(duì)照組來(lái)進(jìn)行隨行對(duì)照。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中給藥前通過(guò)觀察大鼠在敞箱內(nèi)的活動(dòng)，記錄5min內(nèi)水平運(yùn)動(dòng)越格數(shù)以及垂直運(yùn)動(dòng)直立的次數(shù)；在給藥7天后，觀察大鼠在敞箱內(nèi)的活動(dòng)，記錄5min內(nèi)水平運(yùn)動(dòng)越格數(shù)以及垂直運(yùn)動(dòng)直立的次數(shù)。數(shù)據(jù)處理：各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±SD)表示，并用spss13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，顯著性檢驗(yàn)采用方差分析。水平運(yùn)動(dòng)變化率＝(給藥7天后水平運(yùn)動(dòng)越格數(shù)-給藥前水平運(yùn)動(dòng)越格數(shù))/給藥前水平運(yùn)動(dòng)越格數(shù)×100％。垂直運(yùn)動(dòng)變化率＝(給藥7天后垂直運(yùn)動(dòng)越格數(shù)-給藥前垂直運(yùn)動(dòng)越格數(shù))/給藥前垂直運(yùn)動(dòng)越格數(shù)×100％。表1給藥前與給藥7天后各給藥組大鼠開場(chǎng)實(shí)驗(yàn)自主運(yùn)動(dòng)變化情況結(jié)果：運(yùn)用SPSS軟件，進(jìn)行t檢驗(yàn)，分別比較以上各組給藥前后自主運(yùn)動(dòng)情況，與空白組和陽(yáng)性對(duì)照藥氟西汀組一樣，其他給藥組大鼠水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)在給藥前后均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，表明在給上述藥物后對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)無(wú)自主興奮作用。2.3.2強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)。篩選出不動(dòng)時(shí)間在60～160s之間的小鼠64只，分為8個(gè)組，即模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照(氟西汀20mg/kg)組、竹節(jié)參不同成分給藥劑量組，每組各為8只.每天上午8時(shí)灌胃給藥，連續(xù)給藥7d，第7d給藥后60min進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn).小鼠游泳2min后立即開始觀察，觀察時(shí)間持續(xù)4min，記錄此4min內(nèi)小鼠在水中停止掙扎或者呈漂浮狀態(tài)，僅微小肢體運(yùn)動(dòng)以保持頭部浮在水面的持續(xù)時(shí)間(即不動(dòng)時(shí)間)。2.3.3懸尾實(shí)驗(yàn)。篩選出不動(dòng)時(shí)間在20～120s之間的小鼠64只，分組及給藥方法同上.第7d給藥后60min進(jìn)行懸尾實(shí)驗(yàn).將小鼠尾部在距尾尖2cm處黏在一根水平木棍上，使小鼠成倒掛狀態(tài)，頭部距離桌面5cm，懸掛處兩側(cè)及后部用擋板隔開小鼠視線，觀察6min，記錄后5min內(nèi)小鼠的累積不動(dòng)時(shí)間。表2竹節(jié)參對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間的影響(x±s)組別例數(shù)/只劑量g/kg不動(dòng)時(shí)間/s模型組8---143±19陽(yáng)性組80.02126±13**DT組80.02120±11**ZG組80.02119±12*ZV組80.01125±17*DT+ZG組(1)80.02125±13**DT+ZG組(2)80.02122±14*DT+ZG組(3)80.02121±11*結(jié)果：上述竹節(jié)參不同給藥組對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間的影響與模型對(duì)照組比較，竹節(jié)參給藥組及陽(yáng)性對(duì)照組不動(dòng)時(shí)間明顯縮短(P<0.05，P<0.01)。表3竹節(jié)參對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間的影響(x±s)組別例數(shù)/只劑量/mg/kg不動(dòng)時(shí)間/s模型組8---116±26陽(yáng)性組80.0291±26**DT組80.0290±15**ZG組80.0294±10**ZV組80.0189±11*DT+ZG組(1)80.0287±16**DT+ZG組(2)80.0286±16**DT+ZG組(3)80.0284±15*注：與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。結(jié)果：上述竹節(jié)參不同給藥組對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間的影響與模型對(duì)照組相比較，竹節(jié)參各給藥組及陽(yáng)性對(duì)照組不動(dòng)時(shí)間明顯縮短(P<0.05，P<0.01)。綜上所述，竹節(jié)參總多糖、竹節(jié)參總皂苷、竹節(jié)參皂苷V以及竹節(jié)參多糖和竹節(jié)參總皂苷的混合物均對(duì)行為絕望模型有抗抑郁作用，表明竹節(jié)參提取物具有抗抑郁的作用，能夠用于制備抗抑郁的藥物。本發(fā)明提供的以上所描述的實(shí)施例是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。本發(fā)明的實(shí)施例的詳細(xì)描述并非旨在限制要求保護(hù)的本發(fā)明的范圍，而是僅僅表示本發(fā)明的選定實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3