本發(fā)明涉及多酚的制備技術領域，具體是一種抗疲勞活性的石榴皮多酚的制備工藝。
背景技術：
石榴皮是石榴干燥后的果皮，性酸、味道發(fā)澀，具有止血、澀腸、殺蟲的效用，是臨床常用中藥。石榴皮多酚是一類具有多酚羥基化合物的總稱，包括沒食子單寧、鞣花單寧、鞣花酸、綠原酸、沒食子酸、兒茶素、表兒茶素、花色素等多種化合物，主要存在于石榴皮中，含量約為其干重的10~20%。近年來，大量研究表明，石榴皮多酚具有抗自由基、抗誘變、抗老化、抑菌、預防心血管疾病、改善婦女更年期綜合癥等多種功能，在醫(yī)藥、日用品以及食品等領域都有廣泛的作用，因此，發(fā)明一種提取效率高的提取石榴皮多酚的方法具有重要的意義。
傳統(tǒng)的提取多酚的方法有熱水提取法、熱乙醇提取法等，但這些方法都具有耗時長，溶劑用量大，提取效率低等缺點。CO2 超臨界萃取技術是近二十年來國際上發(fā)展迅速的化工分離新技術，其能在接近室溫 ( 35～40 ℃) 及 CO2氣體籠罩下進行萃取，可有效防止熱敏性物質的氧化和逸散。因此，在萃取物中保持著藥用植物的全部成分，而且能把高沸點，低揮發(fā)度、易熱解的物質在其沸點溫度以下萃取出來。同時不使用有機溶劑，無殘留，100%純天然，可以防止對人體的毒害和環(huán)境的污染?，F(xiàn)有技術如授權公告號為CN103705647B的中國發(fā)明專利，公開了一種CO2超臨界法萃取金花茶葉總黃酮的工藝方法，其包括以下步驟：1 )金花茶粉碎至20～100目，置于萃取罐中；2 )以55～85%的乙醇為攜帶劑，超臨界CO2為溶劑；3）萃取罐溫度35～55℃，壓力25～35MPa，CO2流量10～20L/h；一級分離罐溫度25℃，壓力6～8MPa；二級分離罐溫度25℃，壓力6MPa；萃取時間2～4h；可得金花茶葉總黃酮的乙醇溶液；4 )減壓蒸餾回收乙醇，冷凍干燥即得深褐色的金花茶葉總黃酮浸膏。利用該方法提取的總黃酮，無有機溶劑殘留，簡便易行，且收率高，收率可達3 .81%，可廣泛應用于食品、藥品等領域，可顯著提升金花茶的經(jīng)濟效益和社會效益。這種方法在超臨界萃取前未進行處理，總黃酮的提取率有待提高?，F(xiàn)有技術如授權公告號為CN102973617B的中國發(fā)明，公開了一種石榴皮多酚的提取方法，其步驟如下：將石榴皮沖洗、干燥、粉碎成粉末后過40 目篩；將所述的石榴皮粉末加入到乙醇水溶液中，經(jīng)微波處理；再經(jīng)水浴回流浸提，抽濾后離心20min，離心功率為4000r/min，過濾，然后真空旋轉蒸發(fā)回收乙醇，得多酚粗提液；將所述多酚粗提液配制為4mg/mL 的溶液，流過大孔樹脂進行吸附，水浴振蕩24h，水浴溫度為25℃，振蕩功率為120r/min ；將吸附后的樹脂過濾，蒸餾水洗兩次后濾干，用乙醇進行動態(tài)洗脫，乙醇濃度為40%，洗脫液濃縮后冷凍干燥，得到多酚提取物。該方法的提取時間過長，提取率和提取純度都有待提高。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種提取率高，提取的多酚活性高，純度高，操作簡單的抗疲勞活性石榴皮多酚的制備工藝。
本發(fā)明針對背景技術中提到的問題采取的技術方案為：
一種抗疲勞活性石榴皮多酚的制備工藝，具體操作步驟：
1）預處理：將石榴皮洗凈，粉碎，過30~100目篩；
2）酶解：加水，再加入復合酶解劑，加入的復合酶制劑的量為石榴皮粉末質量的0.2~0.8%，合酶制劑成分及其重量份為：15~20份纖維素酶，4~8份果膠酶，3~6份NaCl，0.3~0.9份半胱氨酸，1~5份木瓜蛋白酶，0.3~0.6份氧硅磷灰石和0.0002~0.0004份谷氨酰胺。水浴加熱，酶解溫度為30~60℃，pH為3.0~7.0，酶解時間為0.7~1.9h。攪拌，沸水浴滅酶5~15min，干燥，研磨。采用復合酶水解石榴皮，條件溫和，不會產生廢酸廢堿，綠色環(huán)保；特殊制備的復合酶制劑針對石榴皮成分結構配置，水解速度快，酶解徹底，并且不會破壞石榴皮多酚的活性；
3）超臨界萃?。簩⒉襟E2得到的粉末置于超臨界萃取儀的萃取罐中萃取，以超臨界CO2為溶劑，濃度為30~50%的乙醇為攜帶劑。萃取罐溫度為35~60℃，壓力為20~30Mpa，CO2流量為15~25L/h；一級分離溫度為20~30℃，壓力為5~9 Mpa；二級分離溫度為15~25℃，壓力為3~5Mpa。減壓蒸餾回收乙醇，真空度為0.004~0.008 Mpa，溫度為40~60℃，時間為0.4~1.2h，得到抗疲勞活性石榴皮多酚浸膏。多酚在超臨界CO2中的溶解度高，在得到多酚超臨界CO2物質之后，只需改變壓力和溫度就能去除溶劑，無有機溶劑殘留，綠色安全，操作簡單，成本低廉；最重要的是采用超臨界CO2提取的多酚具有很高的活性，抗疲勞效果很好；
4）純化：采用大孔吸附樹脂為：HP-20 或X-5 型大孔吸附樹脂，依次用水和35~55％v/v乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，真空冷凍干燥，研磨，得到抗疲勞活性石榴皮多酚粉末。利用不同大孔吸附樹脂的吸附特性，去除了抗疲勞活性石榴皮多酚浸膏中易溶于超臨界CO2的雜質，使多酚的純度大大提高。采用上述方法提取石榴皮多酚操作簡單，成本低廉，不會有有機溶劑殘留，綠色安全；最后得到的抗疲勞活性石榴皮多酚粉末純度高，多酚的活性強，抗疲勞效果明顯。
與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：先采用復合酶水解石榴皮，破壞石榴皮細胞，使其中的有效成分多酚流出；酶解條件溫和，不會產生廢酸廢堿，綠色環(huán)保；特殊制備的復合酶制劑針對石榴皮成分結構配置，水解速度快，酶解徹底，并且不會破壞石榴皮多酚的活性；接著采用超臨界CO2提取多酚，多酚在超臨界CO2中的溶解度高，在得到多酚超臨界CO2物質之后，只需改變壓力和溫度就能去除溶劑，無有機溶劑殘留，綠色安全，操作簡單，成本低廉；最重要的是采用超臨界CO2提取的多酚具有很高的活性，抗疲勞效果很好；最后再利用不同大孔吸附樹脂的吸附特性，去除了抗疲勞活性石榴皮多酚浸膏中易溶于超臨界CO2的雜質，使多酚的純度大大提高。采用上述方法提取石榴皮多酚操作簡單，成本低廉，不會有有機溶劑殘留，綠色安全；最后得到的抗疲勞活性石榴皮多酚粉末純度高，多酚的活性強，抗疲勞效果明顯。
具體實施例
下面通過實施例對本發(fā)明方案作進一步說明：
實施例1：
一種抗疲勞活性石榴皮多酚的制備工藝，具體操作步驟：
1）預處理：將石榴皮洗凈，粉碎，過30~100目篩；
2）酶解：加水，再加入復合酶解劑，加入的復合酶制劑的量為石榴皮粉末質量的0.2~0.8%，合酶制劑成分及其重量份為：15~20份纖維素酶，4~8份果膠酶，3~6份NaCl，0.3~0.9份半胱氨酸，1~5份木瓜蛋白酶，0.3~0.6份氧硅磷灰石和0.0002~0.0004份谷氨酰胺。水浴加熱，酶解溫度為30~60℃，pH為3.0~7.0，酶解時間為0.7~1.9h。攪拌，沸水浴滅酶5~15min，干燥，研磨。采用復合酶水解石榴皮，條件溫和，不會產生廢酸廢堿，綠色環(huán)保；特殊制備的復合酶制劑針對石榴皮成分結構配置，水解速度快，酶解徹底，并且不會破壞石榴皮多酚的活性；
3）超臨界萃取：將步驟2得到的粉末置于超臨界萃取儀的萃取罐中萃取，以超臨界CO2為溶劑，濃度為30~50%的乙醇為攜帶劑。萃取罐溫度為35~60℃，壓力為20~30Mpa，CO2流量為15~25L/h；一級分離溫度為20~30℃，壓力為5~9 Mpa；二級分離溫度為15~25℃，壓力為3~5Mpa。減壓蒸餾回收乙醇，真空度為0.004~0.008 Mpa，溫度為40~60℃，時間為0.4~1.2h，得到抗疲勞活性石榴皮多酚浸膏。多酚在超臨界CO2中的溶解度高，在得到多酚超臨界CO2物質之后，只需改變壓力和溫度就能去除溶劑，無有機溶劑殘留，綠色安全，操作簡單，成本低廉；最重要的是采用超臨界CO2提取的多酚具有很高的活性，抗疲勞效果很好；
4）純化：采用大孔吸附樹脂為：HP-20 或X-5 型大孔吸附樹脂，依次用水和35~55％v/v乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，真空冷凍干燥，研磨，得到抗疲勞活性石榴皮多酚粉末。利用不同大孔吸附樹脂的吸附特性，去除了抗疲勞活性石榴皮多酚浸膏中易溶于超臨界CO2的雜質，使多酚的純度大大提高。采用上述方法提取石榴皮多酚操作簡單，成本低廉，不會有有機溶劑殘留，綠色安全；最后得到的抗疲勞活性石榴皮多酚粉末純度高，多酚的活性強，抗疲勞效果明顯。
實施例2：
一種抗疲勞活性石榴皮多酚的制備工藝，最優(yōu)選操作步驟：
1）預處理：將石榴皮洗凈，粉碎，過50目篩；
2）酶解：加水，再加入復合酶解劑，加入的復合酶制劑的量為石榴皮粉末質量的0.6%，復合酶制劑成分及其最優(yōu)選重量份為：18份纖維素酶，7份果膠酶，5份NaCl，0.7份半胱氨酸，3份木瓜蛋白酶，0.5份氧硅磷灰石和0.0004份谷氨酰胺。水浴加熱，酶解溫度為40℃，pH為5.5，酶解時間為1.0h。攪拌，沸水浴滅酶12min，干燥，研磨。采用復合酶水解石榴皮，條件溫和，不會產生廢酸廢堿，綠色環(huán)保；特殊制備的復合酶制劑針對石榴皮成分結構配置，水解速度快，酶解徹底，并且不會破壞石榴皮多酚的活性；
3）超臨界萃?。簩⒉襟E2得到的粉末置于超臨界萃取儀的萃取罐中萃取，以超臨界CO2為溶劑，濃度為75%的乙醇為攜帶劑。萃取罐溫度為40℃，壓力為25Mpa，CO2流量為20L/h；一級分離溫度為26℃，壓力為8 Mpa；二級分離溫度為24℃，壓力為4Mpa。減壓蒸餾回收乙醇，真空度為0.006Mpa，溫度為45℃，時間為0.9h，得到抗疲勞活性石榴皮多酚浸膏。多酚在超臨界CO2中的溶解度高，在得到多酚超臨界CO2物質之后，只需改變壓力和溫度就能去除溶劑，無有機溶劑殘留，綠色安全，操作簡單，成本低廉；最重要的是采用超臨界CO2提取的多酚具有很高的活性，抗疲勞效果很好；
4）純化：將得到的浸膏配置成4mg/mL 的溶液，以3BV/h 的流速流過HP-20 型大孔樹脂，吸附2h，水浴振蕩24h，振蕩功率為120r/min。將吸附后的樹脂過濾，蒸餾水洗兩次后濾干，用40%的乙醇進行動態(tài)洗脫，洗脫速率為2BV/h，合并洗脫液，減壓濃縮，回收乙醇和水后，真空冷凍干燥濃縮液，研磨，得到抗疲勞活性石榴皮多酚粉末。利用不同大孔吸附樹脂的吸附特性，去除了抗疲勞活性石榴皮多酚浸膏中易溶于超臨界CO2的雜質，使多酚的純度大大提高。采用上述方法提取石榴皮多酚操作簡單，成本低廉，不會有有機溶劑殘留，綠色安全；最后得到的抗疲勞活性石榴皮多酚粉末純度高，多酚的活性強，抗疲勞效果明顯。
本發(fā)明的操作步驟中的常規(guī)操作為本領域技術人員所熟知，在此不進行贅述。
復合酶制劑的量不僅限于為石榴皮粉末質量的0.2~0.8%，還包括0.202%或0.204%或0.206%，……，或0.796%或0.798%或0.8%。
以上所述的實施例對本發(fā)明的技術方案進行了詳細說明，應理解的是以上所述僅為本發(fā)明的具體實施例，并不用于限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的原則范圍內所做的任何修改、補充或類似方式替代等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內。