本發(fā)明屬于植物活性成分提取技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種楊梅葉多酚的提取方法。
背景技術(shù):
植物多酚是目前功能食品與天然產(chǎn)物研究開發(fā)等領(lǐng)域研究的熱點,國內(nèi)外不斷有發(fā)現(xiàn)植物多酚新功能及從新植物資源中開發(fā)利用植物多酚的報道。按照自由基能力,目前所報道的植物多酚眾多的功能,如預(yù)防心腦血管疾病、調(diào)節(jié)免疫能力、抗腫瘤等, 都與植物多酚清除自由基的能力有關(guān)。在體內(nèi)危害人體健康的主要自由基是超氧陰離子自由基與羥基自由基。
植物多酚是廣泛存在于植物體內(nèi)的重要次生代謝產(chǎn)物,廣泛分布于植物體的根、葉、皮、果肉和殼中,具有抗氧化、抗腫瘤、保護肝臟等多種生理功能,是人體每天必須從食物中攝取的抗氧化物質(zhì),被稱為繼膳食纖維之后的第七營養(yǎng)素。
現(xiàn)有技術(shù)中,植物多酚的提取方法主要有溶液浸提法、超聲提取法、微波法等,但是單一的提取方法產(chǎn)率低。本發(fā)明引入生物酶解技術(shù),同時采用改進的超聲提取工藝,破壞楊梅葉細(xì)胞,促使其中的多酚物質(zhì)溶出并向外擴散,可以減少溶劑的用量,提高提取率,提高純度。
楊梅(Myrica rubra Sieb. et Zucc.)屬楊梅科楊梅屬植物,是我國的特色果樹之一,在我國東南部地區(qū)已經(jīng)有2000 多年的種植歷史。楊梅的果實、樹葉和樹皮均可入藥,具有較高的經(jīng)濟價值。古代醫(yī)書記載楊梅葉味苦、微辛、性溫,可用于治療腹瀉、黃膽肝炎、淋巴結(jié)核、慢性咽喉炎等疾病。重慶是楊梅種植大市, 為調(diào)節(jié)生長與結(jié)實的關(guān)系,促進楊梅的持續(xù)、優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn),每年都需對楊梅樹進行整形修剪, 因而產(chǎn)生大量廢棄楊梅枝葉。開發(fā)利用楊梅葉資源, 不僅解決了廢物處理所帶來的環(huán)境污染問題,而且增加了楊梅的產(chǎn)業(yè)價值。
技術(shù)實現(xiàn)要素:
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種楊梅葉多酚的提取方法,該方法制得的楊梅葉多酚純度高,收率高。
本發(fā)明提供的技術(shù)方案是提供一種楊梅葉多酚的提取方法,包括以下步驟:
1)打漿、酶解:采用料液比1: 3-5,用打漿機將洗凈瀝干的楊梅葉打漿3-5min,然后加入蛋白酶充分?jǐn)嚢韬箪o置1-2 h 進行酶解后,用 800-1000 目濾網(wǎng)過濾取上清酶解液備用;
2) 粗提:用乙醇對楊梅葉酶解液進行超聲浸提,離心,收集上清液,減壓回收乙醇,得到楊梅葉粗提液;
3)過膜:將上清液過膜過濾裝置進行過濾,得到澄清液;
4)純化:將澄清液上大孔樹脂柱,上樣流速為0.4~0.6BV/h,上大孔樹脂柱,水洗柱,然后用乙醇洗脫,收集乙醇洗脫液,減壓濃縮,干燥,即得楊梅葉多酚。
上述步驟1) 中,所述的酶解是每100克楊梅葉加入0.2-0.4g 蛋白酶,45-55℃酶解1-2h。
步驟2) 中,楊梅葉中含有蛋白質(zhì)和碳水化合物,采用乙醇為溶媒,不利于蛋白質(zhì)和碳水化合物的溶解,可減少雜質(zhì)成分的溶出,對后續(xù)純化有益。乙醇體積濃度為40~50%及酶解液與乙醇的料液比為1ml:1~ 3ml為佳,乙醇濃度過高會對蛋白質(zhì)產(chǎn)生凝聚作用,使得蛋白質(zhì)滯留在顆粒的內(nèi)部孔道中,反而增加楊梅葉多酚的擴散阻力,降低終產(chǎn)品的收率。乙醇濃度過低則雜質(zhì)含量較大,影響終產(chǎn)品的純度。
步驟3) 中,所述膜過濾裝置為50000 道爾頓微濾膜。
步驟4) 中, 水洗流速為2.5~3BV/h,水的洗脫量為5~6BV ;乙醇的洗脫流速為2~2.5BV/h,乙醇的洗脫量為4~5BV;乙醇的體積濃度為65~85%。
與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明制得的楊梅葉多酚純度在97%以上,楊梅葉多酚的得率為6.4 mg/g以上,是現(xiàn)有技術(shù)的2-5倍。
具體實施方式
以下具體實施例對本發(fā)明作進一步闡述,但不作為對本發(fā)明的限定。
實施例1
1) 打漿、酶解:取洗凈瀝干楊梅葉1000g,采用料液比1:3加入純凈水,用打漿機將洗凈瀝干的楊梅葉打漿3min,然后加入2g蛋白酶充分?jǐn)嚢韬笤?5℃酶解1h,然后用 800目濾網(wǎng)過濾取上清酶解液備用;
2) 粗提:按酶解液與乙醇的料液比為1ml:1ml加入40%乙醇對楊梅葉酶解液進行超聲浸提,離心,收集上清液,減壓回收乙醇,得到楊梅葉粗提液;
3) 過膜:將上清液50000 道爾頓微濾膜裝置進行過濾,得到澄清液;
4)純化:將澄清液上DA201大孔樹脂柱,上樣流速為0.4BV/h,先水洗柱,水洗流速為2.5 BV/h,水的洗脫量為5BV;然后用65%乙醇洗脫,乙醇的洗脫流速為2BV/h,乙醇的洗脫量為4BV,收集乙醇洗脫液,減壓濃縮,干燥,即得9.4g楊梅葉多酚。經(jīng)HPLC 檢測,成品中楊梅葉多酚的純度為98.4%,楊梅葉多酚的得率為6.4 mg/g以上。
實施例2
1) 打漿、酶解:取洗凈瀝干楊梅葉1000g,采用料液比1:5加入純凈水,用打漿機將洗凈瀝干的楊梅葉打漿5min,然后加入4g蛋白酶充分?jǐn)嚢韬笤?5℃酶解2h,然后用1000目濾網(wǎng)過濾取上清酶解液備用;
2) 粗提:按酶解液與乙醇的料液比為1ml:3ml加入50%乙醇對楊梅葉酶解液進行超聲浸提,離心,收集上清液,減壓回收乙醇,得到楊梅葉粗提液;
3) 過膜:將上清液50000 道爾頓微濾膜裝置進行過濾,得到澄清液;
4)純化:將澄清液上DA201大孔樹脂柱,上樣流速為0.6BV/h,先水洗柱,水洗流速為3BV/h,水的洗脫量為6BV;然后用85%乙醇洗脫,乙醇的洗脫流速為2.5BV/h,乙醇的洗脫量為5BV,收集乙醇洗脫液,減壓濃縮,干燥,即得9.7g楊梅葉多酚。經(jīng)HPLC 檢測,成品中楊梅葉多酚的純度為97.8%,楊梅葉多酚的得率為6.4 mg/g以上。
實施例3
1) 打漿、酶解:取洗凈瀝干楊梅葉1000g,采用料液比1:4加入純凈水,用打漿機將洗凈瀝干的楊梅葉打漿4min,然后加入3g蛋白酶充分?jǐn)嚢韬笤?0℃靜置酶解1.5h,然后用900目濾網(wǎng)過濾取上清酶解液備用;
2) 粗提:按酶解液與乙醇的料液比為1ml:2ml加入45%乙醇對楊梅葉酶解液進行超聲浸提,離心,收集上清液,減壓回收乙醇,得到楊梅葉粗提液;
3) 過膜:將上清液50000 道爾頓微濾膜裝置進行過濾,得到澄清液;
4)純化:將澄清液上DA201大孔樹脂柱,上樣流速為0.5BV/h,先水洗柱,水洗流速為2.8BV/h,水的洗脫量為5.5BV;然后用75%乙醇洗脫,乙醇的洗脫流速為2.3BV/h,乙醇的洗脫量為4.5BV,收集乙醇洗脫液,減壓濃縮,干燥,即得9.6g楊梅葉多酚。經(jīng)HPLC 檢測,成品中楊梅葉多酚的純度為98.4%,楊梅葉多酚的得率為6.4 mg/g以上。
實施例4
將上述實施例1-3得到的楊梅葉多酚對超氧陰離子O2-·清除效果的測定:
在試驗濃度范圍內(nèi), 楊梅葉多酚對O2-·的清除能力較強,0.5mg/mL~2.5mg/mL 濃度范圍內(nèi)清除率隨濃度上升而提高的趨勢明顯。當(dāng)楊梅葉多酚濃度達到 2.5mg/mL 時, 對O2-·的清除率已超過90%。
實施例5
將上述實施例1-3得到的楊梅葉多酚對羥基自由基·OH 清除效果的測定:
楊梅葉多酚濃度在0.5mg/mL~2.0mg/mL 范圍內(nèi)對·OH 清除率隨濃度上升而顯著提高。當(dāng)楊梅葉多酚濃度達到 2.0mg/mL 時, 清除率已超過90%。