本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2012年2月15日、申請(qǐng)?zhí)枮?01280014480.6、名稱為“細(xì)胞毒性苯并二氮雜衍生物”的專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。參考相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)要求提交于2011年2月15日的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)no.61/443,062、提交于2011年5月6日的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)no.61/483,499和提交于2011年2月15日的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)no.61/443,092在35u.s.c.§119(e)下的提交日期的權(quán)益，其全部?jī)?nèi)容(包括所有附圖、化學(xué)式、說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求)通過(guò)引用并入本文。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及新型細(xì)胞毒性化合物和包含這些細(xì)胞毒性化合物和細(xì)胞結(jié)合劑的細(xì)胞毒性綴合物。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及新型苯并二氮雜化合物、其衍生物、其中間體、其綴合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，它們可用作藥物，尤其是用作抗增殖劑。發(fā)明背景苯并二氮雜衍生物是用于治療多種病癥的有用的化合物，且包括諸如以下的藥物：抗癲癇劑(咪唑并[2,1-b][1,3,5]苯并硫二氮雜美國(guó)專利no.4,444,688；美國(guó)專利no.4,062,852)、抗菌劑(嘧啶并[1,2-c][1,3,5]苯并硫二氮雜gb1476684)、利尿劑和降血壓劑(吡咯并(1,2-b)[1,2,5]-苯并硫二氮雜5,5二氧化物，美國(guó)專利no.3,506,646)、降血脂劑(wo03091232)、抗抑郁劑(美國(guó)專利no.3,453,266)；骨質(zhì)疏松癥(jp2138272)。最近，在動(dòng)物腫瘤模型中已示出，諸如吡咯并苯并二氮雜(pbd)的苯并二氮雜衍生物用作抗腫瘤劑(n-2-咪唑基烷基取代的1,2,5-苯并硫二氮雜-1,1-二氧化物，美國(guó)專利no.6,156,746)、苯并-吡啶并或二吡啶并硫二氮雜(wo2004/069843)、吡咯并[1,2-b][1,2,5]苯并硫二氮雜和吡咯并[1,2-b][1,2,5]苯并二氮雜衍生物(wo2007/015280)、托馬霉素(tomaymycin)衍生物(如，吡咯并[1,4]苯并二氮雜)，諸如描述于wo00/12508、wo2005/085260、wo2007/085930和ep2019104中的那些。也已知苯并二氮雜影響細(xì)胞生長(zhǎng)和分化(kamala.，等人，bioorgmedchem.2008年8月15日；16(16):7804-10(和其中引用的文獻(xiàn))；kumarr,minirevmedchem.2003年6月；3(4):323-39(和其中引用的文獻(xiàn))；bednarskijj，等人，2004；suttera.p，等人，2002；blattnb，等人，2002),kamala.等人,currentmed.chem.,2002；2；215-254,wangj-j.,j.med.chem.,2206；49:1442-1449,alleym.c.等人,cancerres.2004；64:6700-6706,pepperc.j.,cancerres2004；74:6750-6755,thurstond.e.和bosed.s.，chemrev1994；94:433-465；和tozuka,z.，等人，journalofantibiotics,(1983)36；1699-1708。pbd的一般結(jié)構(gòu)描述于美國(guó)公開(kāi)no.20070072846。pbd在取代基的數(shù)量、類型和位置，在其芳族a環(huán)和吡咯并c環(huán)，以及在c環(huán)的飽和度上存在不同。它們?cè)谛虾徒宦?lián)dna中形成加合物的能力使它們干擾dna處理，因此它們可能用作抗增殖劑。進(jìn)入臨床的第一種吡咯并苯并二氮雜sjg-136(nsc694501)是一種有效的引起dna鏈間交聯(lián)的細(xì)胞毒性劑(s.ggregson等人，2001，j.med.chem.,44:737-748；m.c.alley等人,2004,cancerres.,64:6700-6706；j.a.hartley等人,2004,cancerres.,64:6693-6699；c.martin等人,2005,biochemistry.,44:4135-4147；s.arnould等人,2006,mol.cancerther.,5:1602-1509)。sjg-136的i期臨床評(píng)價(jià)結(jié)果顯示：該藥物在極低劑量時(shí)是有毒的(最大耐受劑量是45μg/m2，且觀察到幾種副作用，包括血管滲漏綜合征、外周性水腫、肝臟毒性和疲勞。在所有劑量下在淋巴細(xì)胞循環(huán)中均觀察到dna損傷(d.hochhauser等人,2009,clin.cancerres.,15:2140-2147)。因此，需要改進(jìn)的較低毒性且仍有治療活性的苯并二氮雜衍生物，用于治療各種增殖性疾病狀況，諸如癌癥。發(fā)明概要現(xiàn)有技術(shù)中公開(kāi)的細(xì)胞毒性苯并二氮雜二聚體具有兩個(gè)亞胺官能團(tuán)(functionalities)，所述亞胺官能團(tuán)以它們的游離形式或可逆保護(hù)形式存在，諸如水合物、烷氧基化物或磺酸鹽。這兩個(gè)亞胺官能團(tuán)的存在導(dǎo)致dna的交聯(lián)(s.g.gregson等人,2001,j.med.chem.,44:737-748)。本發(fā)明部分基于以下意外發(fā)現(xiàn)：新細(xì)胞毒性苯并二氮雜衍生物(諸如沒(méi)有兩個(gè)亞胺官能團(tuán)(如，一個(gè)亞胺官能團(tuán)和一個(gè)胺官能團(tuán))，并因此不能交聯(lián)dna的二氫吲哚并苯并二氮雜二聚體)的細(xì)胞結(jié)合劑綴合物；與先前技術(shù)公開(kāi)的能交聯(lián)dna的苯并二氮雜衍生物相比，該細(xì)胞結(jié)合劑綴合物顯示高得多的體內(nèi)治療指數(shù)(最大耐受劑量與最低有效劑量的比率)。本發(fā)明的一個(gè)目標(biāo)是提供包含具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的能夠?qū)⒃摷?xì)胞毒性化合物共價(jià)連接于細(xì)胞結(jié)合劑(cba，參見(jiàn)下文)的連接基團(tuán)的細(xì)胞毒性化合物，其中該細(xì)胞毒性化合物由下式中的任一者：或其藥學(xué)上可接受的鹽表示，其中：n和c之間的雙線表示單鍵或雙鍵，條件是當(dāng)其是雙鍵時(shí)，x不存在且y是-h，或具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基，而當(dāng)其是單鍵時(shí)，x是-h，具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)或氨基保護(hù)部分；y是-h或離去基團(tuán)，其選自-or、-ocor’、-ocoor’、-oconr’r”、-nr’r”、-nr’cor”、-nr’nr’r”，任選取代的5或6元含氮雜環(huán)(如，哌啶、四氫吡咯、吡唑、嗎啉等)、由-nr’(c＝nh)nr’r”表示的胍基、氨基酸或由-nrcop’表示的肽，其中p’是氨基酸或含有2至20個(gè)氨基酸單元的多肽、-sr、-sor’、-so2m、-so3m、-oso3m、鹵素、氰基和疊氮基；或y為亞硫酸鹽(hso3、hso2或與陽(yáng)離子形成的hso3-、so32-或hso2-的鹽)，偏亞硫酸氫鹽(h2s2o5或與陽(yáng)離子形成的s2o52-的鹽)，單、二、三和四硫代磷酸鹽(po3sh3、po2s2h2、pos3h2、ps4h2或與陽(yáng)離子形成的po3s3-、po2s23-、pos33-或ps43-的鹽)，硫代磷酸酯(rio)2ps(ori)、ris-、riso、riso2、riso3，硫代硫酸鹽(hs2o3或與陽(yáng)離子形成的s2o32-的鹽)，連二亞硫酸鹽(hs2o4或與陽(yáng)離子形成的s2o42-的鹽),二硫代磷酸鹽(p(＝s)(ork’)(s)(oh)或其與陽(yáng)離子形成的鹽)，異羥肟酸(rk’c(＝o)noh或與陽(yáng)離子形成的鹽)，甲醛次硫酸氫鹽(hoch2so2-或與陽(yáng)離子形成的hoch2so2-的鹽，諸如hoch2so2-na+)或其混合物，其中ri是具有1至10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基且被選自-n(rj)2、-co2h、-so3h和-po3h中的至少一個(gè)取代基取代；ri可進(jìn)一步任選地被本文所述的烷基取代基取代；rj是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；rk’是具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，芳基，雜環(huán)基或雜芳基；優(yōu)選地，y是亞硫酸氫鹽、次硫酸鹽、或偏亞硫酸氫鹽或其鹽(諸如鈉鹽)的加合物；m是-h或陽(yáng)離子；每次出現(xiàn)時(shí)，r獨(dú)立地選自-h，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(ch2ch2o)n-rc，任選取代的具有6至18個(gè)碳原子的芳基，任選取代的含有一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自氮、氧和硫的雜原子的5至18元雜芳基環(huán)，或任選取代的含有1至6個(gè)獨(dú)立地選自o、s、n和p的雜原子的3至18元雜環(huán)；r’和r”各自獨(dú)立地選自-h，-oh，-or，-nhr，-nr2，-cor，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(ch2ch2o)n-rc，和任選取代的具有1至6個(gè)獨(dú)立地選自o、s、n和p的雜原子的3至18元雜環(huán)；rc是-h或具有1至4個(gè)碳原子的取代或未取代的直鏈或支鏈的烷基，或具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)；n是1至24的整數(shù)；w選自c＝o、c＝s、ch2、bh、so和so2；x’選自-h，氨基保護(hù)基，具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(ch2ch2o)n-rc，任選取代的具有6至18個(gè)碳原子的芳基，任選取代的含有一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自氮、氧和硫的雜原子的5至18元雜芳基環(huán)，和任選取代的含有1至6個(gè)獨(dú)立地選自o、s、n和p的雜原子的3至18元雜環(huán)；y'選自-h、氧代基團(tuán)、具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)、任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，任選取代的6至18元芳基，任選取代的含有一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自氮、氧和硫的雜原子的5至18元雜芳基環(huán)，任選取代的具有1至6個(gè)雜原子的3至18元雜環(huán)；r1、r2、r3、r4、r1’、r2’、r3’和r4’各自獨(dú)立地選自-h，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(och2ch2)n-rc，鹵素，胍基[-nh(c＝nh)nh2]，-or，-nr’r”，-no2，-nco，-nr’cor”，-sr，由-sor’所表示的亞砜，由-so2r’所表示的砜，磺酸鹽-so3-m+，硫酸鹽-oso3-m+，由-so2nr’r”所表示的磺酰胺，氰基，疊氮基，-cor’，-ocor’，-oconr’r”和具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)；r6是-h、-r、-or、-sr、-nr’r”、-no2、鹵素或具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)；z和z’獨(dú)立地選自-(ch2)n’-、-(ch2)n’-cr7r8-(ch2)na’-、-(ch2)n’-nr9-(ch2)na’-、-(ch2)n’-o-(ch2)na’-和-(ch2)n’–s-(ch2)na’-；n’和na’相同或不同，且選自0、1、2和3；r7和r8相同或不同，且各自獨(dú)立地選自-h，-oh，-sh，-cooh，-nhr’，聚乙二醇單元-(och2ch2)n-，氨基酸，具有2至6個(gè)氨基酸的肽單元，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基；r9獨(dú)立地選自-h，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基，聚乙二醇單元-(och2ch2)n-；a和a’相同或不同，且獨(dú)立地選自-o-、氧代(-c(＝o)-)、-crr’o-、-crr’-、-s-、-crr’s-、-nr5-和-crr’n(r5)-；每次出現(xiàn)時(shí)，r5獨(dú)立地為-h或任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；d和d’相同或不同，且獨(dú)立地不存在或選自任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，氨基酸，具有2至6個(gè)氨基酸的肽，和聚乙二醇單元(-och2ch2)n-；l不存在，為具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)，聚乙二醇單元(-och2ch2)n-，具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基或烯基，苯基，具有1至6個(gè)獨(dú)立選自o、s、n和p的雜原子的3至18元雜環(huán)或5至18元雜芳基環(huán)，其中所述烷基、烯基任選地被具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)取代；苯基或雜環(huán)或雜芳基環(huán)可任選被取代，其中所述取代基可以是具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)。在某些實(shí)施方案中，x不是具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)。在某些實(shí)施方案中，n和c之間的雙線表示單鍵，y不是-h。在某些實(shí)施方案中，化合物不是下述化合物中的任一者：在某些實(shí)施方案中，y是離去基團(tuán)，其選自-or、-ocor’、-ocoor’、-oconr’r”、-nr’r”、-nr’cor”、-nr’nr’r”，任選取代的5或6元含氮雜環(huán)(如，哌啶、四氫吡咯、吡唑、嗎啉等)，由-nr’(c＝nh)nr’r”表示的胍基，氨基酸，或由-nrcop’表示的肽，其中p’是氨基酸或含有2至20個(gè)氨基酸單元的多肽、-sr、-sor’、-so2m、-so3m、-oso3m、鹵素、氰基和疊氮基。本發(fā)明的第二目標(biāo)是提供細(xì)胞結(jié)合劑與本發(fā)明的新型苯并二氮雜化合物或其衍生物的綴合物。這些綴合物可用作治療劑，它們被特異性地遞送至靶細(xì)胞且有細(xì)胞毒性。具體地說(shuō)，本發(fā)明的綴合物可包含：細(xì)胞毒性化合物和細(xì)胞結(jié)合劑(cba)，其中所述細(xì)胞毒性化合物包含將細(xì)胞毒性化合物共價(jià)連接于所述cba的連接基團(tuán)，且其中所述細(xì)胞毒性化合物由下式中的任一者：或其藥學(xué)上可接受的鹽表示，其中：n和c之間的雙線表示單鍵或雙鍵，條件是當(dāng)其是雙鍵時(shí)，x不存在且y是-h，或具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基，而當(dāng)其是單鍵時(shí)，x是-h、連接基團(tuán)或氨基保護(hù)部分；y是-h或離去基團(tuán)，其選自-or、-ocor’、-ocoor’、-oconr’r”、-nr’r”、-nr’cor”、-nr’nr’r”，任選取代的5或6元含氮雜環(huán)(如，哌啶、四氫吡咯、吡唑、嗎啉)、由-nr’(c＝nh)nr’r”表示的胍基、氨基酸或由-nrcop’表示的肽，其中p’是氨基酸或含有2至20個(gè)氨基酸單元的多肽、-sr、-sor’、-so2m、-so3m、-oso3m、鹵素、氰基和疊氮基；或y為亞硫酸鹽(hso3、hso2或與陽(yáng)離子形成的hso3-、so32-或hso2-的鹽)，偏亞硫酸氫鹽(h2s2o5或與陽(yáng)離子形成的s2o52-的鹽)，單、二、三和四硫代磷酸鹽(po3sh3、po2s2h2、pos3h2、ps4h2或與陽(yáng)離子形成的po3s3-、po2s23-、pos33-或ps43-的鹽)，硫代磷酸酯(rio)2ps(ori)、ris-、riso、riso2、riso3，硫代硫酸鹽(hs2o3或與陽(yáng)離子形成的s2o32-的鹽)，連二亞硫酸鹽(hs2o4或與陽(yáng)離子形成的s2o42-的鹽),二硫代磷酸鹽(p(＝s)(ork’)(s)(oh)或其與陽(yáng)離子形成的鹽)，異羥肟酸(rk’c(＝o)noh或與陽(yáng)離子形成的鹽)，甲醛次硫酸氫鹽(hoch2so2-或與陽(yáng)離子形成的hoch2so2-的鹽，諸如hoch2so2-na+)或其混合物，其中ri是具有1至10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基且被選自-n(rj)2、-co2h、-so3h和-po3h中的至少一個(gè)取代基取代；ri可進(jìn)一步任選地被本文所述的烷基取代基取代；rj是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；rk’是具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，芳基，雜環(huán)基或雜芳基；優(yōu)選地，y是亞硫酸氫鹽、次硫酸鹽、或偏亞硫酸氫鹽或其鹽(諸如鈉鹽)的加合物；m是-h或陽(yáng)離子；每次出現(xiàn)時(shí)，r獨(dú)立地選自-h，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(ch2ch2o)n-rc，任選取代的具有6至18個(gè)碳原子的芳基，任選取代的含有一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自氮、氧和硫的雜原子的5至18元雜芳基環(huán)，或任選取代的含有1至6個(gè)獨(dú)立地選自o、s、n和p的雜原子的3至18元雜環(huán)；r’和r”各自獨(dú)立地選自-h，-oh，-or，-nhr，-nr2，-cor，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(ch2ch2o)n-rc，和任選取代的具有1至6個(gè)獨(dú)立地選自o、s、n和p的雜原子的3至18元雜環(huán)；rc是-h或具有1至4個(gè)碳原子的取代或未取代的直鏈或支鏈的烷基或連接基團(tuán)；n是1至24的整數(shù)；w選自c＝o、c＝s、ch2、bh、so和so2；x’選自-h，氨基保護(hù)基，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(ch2ch2o)n-rc，任選取代的具有6至18個(gè)碳原子的芳基，任選取代的含有一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自氮、氧和硫的雜原子的5至18元雜芳基環(huán)，和任選取代的含有1至6個(gè)獨(dú)立地選自o、s、n和p的雜原子的3至18元雜環(huán)；y’選自-h，氧代基團(tuán)，連接基團(tuán)，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，任選取代的6至18元芳基，任選取代的含有一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自氮、氧和硫的雜原子的5至18元雜芳基環(huán)，任選取代的具有1至6個(gè)雜原子的3至18元雜環(huán)；r1、r2、r3、r4、r1’、r2’、r3’和r4’各自獨(dú)立地選自-h，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(och2ch2)n-rc，鹵素，胍基[-nh(c＝nh)nh2]，-or，-nr’r”，-no2，-nco，-nr’cor”，-sr，由-sor’所表示的亞砜，由-so2r’所表示的砜，磺酸鹽-so3-m+，硫酸鹽-oso3-m+，由-so2nr’r”所表示的磺酰胺，氰基，疊氮基，-cor’，-ocor’，-oconr’r”和連接基團(tuán)；r6是-h、-r、-or、-sr、-nr’r”、-no2、鹵素或連接基團(tuán)；z和z’獨(dú)立地選自-(ch2)n’-、-(ch2)n’-cr7r8-(ch2)na’-、-(ch2)n’-nr9-(ch2)na’-、-(ch2)n’-o-(ch2)na’-和-(ch2)n’–s-(ch2)na’-；n’和na’相同或不同，且選自0、1、2和3；r7和r8相同或不同，且各自獨(dú)立地選自-h，-oh，-sh，-cooh，-nhr’，聚乙二醇單元-(och2ch2)n-，氨基酸，具有2至6個(gè)氨基酸的肽單元，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基；r9獨(dú)立地選自-h，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基，聚乙二醇單元-(och2ch2)n-；a和a’相同或不同，且獨(dú)立地選自-o-、氧代(-c(＝o)-)、-crr’o-、-crr’-、-s-、-crr’s-、-nr5和-crr’n(r5)-；每次出現(xiàn)時(shí)，r5獨(dú)立地為-h或任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；d和d’相同或不同，且獨(dú)立地不存在或選自任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，氨基酸，具有2至6個(gè)氨基酸的肽，和聚乙二醇單元(-och2ch2)n-；l不存在，為連接基團(tuán)，聚乙二醇單元(-och2ch2)n-，具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基或烯基，苯基，具有1至6個(gè)獨(dú)立選自o、s、n和p的雜原子的3-18元雜環(huán)或5至18元雜芳基環(huán)，其中所述烷基或烯基任選被所述連接基團(tuán)取代；苯基或雜環(huán)或雜芳基環(huán)可任選被取代，其中所述取代基可以是連接基團(tuán)；在某些實(shí)施方案中，x不是連接基團(tuán)。在某些實(shí)施方案中，n和c之間的雙線表示單鍵，y不是-h。在某些實(shí)施方案中，y是-h或離去基團(tuán)，其選自-or、-ocor’、-ocoor’、-oconr’r”、-nr’r”、-nr’cor”、-nr’nr’r”，任選取代的5或6元含氮雜環(huán)(如，哌啶、四氫吡咯、吡唑、嗎啉等)，由-nr’(c＝nh)nr’r”表示的胍基，氨基酸，或由-nrcop’表示的肽，其中p’是氨基酸或含有2至20個(gè)氨基酸單元的多肽、-sr、-sor’、-so2m、-so3m、-oso3m、鹵素、氰基和疊氮基。在某些實(shí)施方案中，y不是-h。在某些實(shí)施方案中，綴合物的化合物不是以下化合物中的任一者(波浪鍵表示化合物通過(guò)該鍵連接于cba)：本發(fā)明還包括包含新型苯并二氮雜化合物、其衍生物或其綴合物(和/或其溶劑化物、水合物和/或鹽)和載體(藥學(xué)上可接受的載體)的組合物(如，藥物組合物)。本發(fā)明另外包括包含新型苯并二氮雜化合物、其衍生物或其綴合物(和/或其溶劑化物、水合物和/或鹽)和載體(藥學(xué)上可接受的載體)，進(jìn)一步包含第二治療劑的組合物(如，藥物組合物)。本發(fā)明組合物可用于在哺乳動(dòng)物(如人類)中抑制異常細(xì)胞生長(zhǎng)或治療增殖性病癥。本發(fā)明組合物可用于治療哺乳動(dòng)物(如，人類)中的疾病諸如癌癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、移植物抗宿主疾病(gvhd)、移植排斥、狼瘡、肌炎、感染、諸如aids的免疫缺陷以及炎癥性疾病。本發(fā)明包括在哺乳動(dòng)物(如人類)中抑制異常細(xì)胞生長(zhǎng)或治療增殖性病癥的方法，所述方法包括向所述哺乳動(dòng)物單獨(dú)或與第二治療劑組合施用治療有效量的新型苯并二氮雜化合物、其衍生物，或其綴合物，(和/或其溶劑化物及鹽)或其組合。本發(fā)明包括合成和使用新型苯并二氮雜化合物、其衍生物及其綴合物，用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞、生物體或相關(guān)病理病患的體外、原位和體內(nèi)診斷或治療的方法。本發(fā)明的化合物、其衍生物或其綴合物，以及包含它們的組合物可用于治療或減輕病癥的嚴(yán)重性，諸如，特征是細(xì)胞的異常生長(zhǎng)(如，癌癥)。本發(fā)明化合物和綴合物的其它應(yīng)用包括，但不限于治療哺乳動(dòng)物(如，人類)中的疾患，諸如癌癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、移植物抗宿主疾病(gvhd)、移植排斥、狼瘡、肌炎、感染、諸如aids的免疫缺陷以及炎癥性疾病。如本文所用，當(dāng)提到基團(tuán)(如，rc、l、x’等)時(shí)，“是/為”(或“不是”)連接基團(tuán)或具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)，意指該基團(tuán)“包含”(或“不包含”)連接基團(tuán)或具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)。附圖簡(jiǎn)述圖1-6示出適用于本發(fā)明的綴合的苯并二氮雜化合物和相應(yīng)的可連接化合物的合成方案。圖7示出用本發(fā)明的peg修飾的連接子合成代表性化合物的方案。圖8示出用本發(fā)明的甲硫基連接子合成代表性化合物的方案。圖9-10示出合成含有本發(fā)明叔胺的代表性化合物的方案。圖11示出用本發(fā)明的肽連接子合成代表性化合物的方案。圖12-19示出適用于本發(fā)明的一步綴合方法的代表性化合物的合成方案。圖20示出兩步單亞胺二聚體的合成方案。圖21示出兩步兩次還原的二聚體的合成方案。圖22示出代表性抗體-藥物綴合物的一步合成方案。圖23示出代表性抗體-藥物綴合物的兩步合成方案。圖24示出甲基二硫代二聚體1d對(duì)namalwa、kb和hl60/qc細(xì)胞系的體外細(xì)胞毒性。圖25示出humy9-6-spdb-1f綴合物對(duì)各種細(xì)胞系的體外細(xì)胞毒性和特異性。注意，向綴合反應(yīng)中加入亞硫酸氫鈉用于制備綴合物。圖26示出hufolr1-spdb-1f綴合物的體外細(xì)胞毒性和特異性。圖27示出二聚體的綴合不會(huì)降低抗體的結(jié)合親和力。注意，向綴合反應(yīng)中加入亞硫酸氫鈉用于制備綴合物。圖28示出humy9-6綴合物的體內(nèi)抗腫瘤活性。注意，向綴合反應(yīng)中加入亞硫酸氫鈉用于制備綴合物。圖29示出humy9-6-spdb-1f綴合物對(duì)抗原陽(yáng)性細(xì)胞的體外細(xì)胞毒性。注意，向綴合反應(yīng)中加入亞硫酸氫鈉用于制備綴合物。圖30示出用于制備含硫醚連接子二硫化物27e-h的合成方案。圖31示出用于制備28c-f二聚體的合成方案。圖32示出用于制備苯基連接的二聚體29b-c的合成方案。圖33示出單亞胺二聚體的替代兩步合成方案。圖34示出humy9-6-spdb-1f(a)、humy9-6-磺基spdb-1f(b)和humy9-6-bmps-1f(c)對(duì)阻斷和未阻斷抗原結(jié)合位點(diǎn)的hl60/qc(ag+)細(xì)胞的體外細(xì)胞毒性。注意，在所有三個(gè)試驗(yàn)(34a、34b和34c)中，向綴合反應(yīng)中加入亞硫酸氫鈉用于制備綴合物。圖35示出chb38.1-spdb-1f(a)和chb38.1-磺基spdb-1f(b)對(duì)colo205(ag+)細(xì)胞的體外細(xì)胞毒性。注意，在兩個(gè)試驗(yàn)中，向綴合反應(yīng)中加入亞硫酸氫鈉用于制備綴合物。圖36示出humy9-6-spdb-1f在具有hl60/qc小鼠的體內(nèi)效力。注意，向綴合反應(yīng)中加入亞硫酸氫鈉。圖37示出hufolr1-spdb-1f在具有kb腫瘤的小鼠體內(nèi)效力。圖38示出化合物1的合成方案。圖39示出有5-乙基-2-甲基吡啶硼烷(pemb)的化合物1d的合成方案。圖40示出有三乙酰氧基硼氫化鈉(stab)的化合物1d的合成方案。圖41示出化合物31a-c的合成方案。圖42示出化合物32c,d的合成方案。圖43示出化合物1i和12a的合成方案。圖44示出通過(guò)比較(a)humy9-6-spdb-1f、(b)humy9-6-磺基spdb-1f和(c)humy9-6-bmps-1f對(duì)阻斷或未阻斷抗原結(jié)合位點(diǎn)的oci-aml3(ag+)細(xì)胞的抗增殖活性。注意，在所有三個(gè)試驗(yàn)中，向綴合反應(yīng)中加入亞硫酸氫鈉用于制備綴合物。圖45示出用于合成4-(芐氧基)-5-甲氧基-2-硝基苯甲酸(用于制備ibd單體)的一種替換方案。圖46是(5-((2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基)(2-甲基-2-(甲基二硫烷基)丙基)氨基)-1,3-亞苯基)二甲醇(1b)的替換合成方案。圖47是5-((2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基)(2-甲基-2-(甲基二硫烷基)丙基)氨基)-1,3-亞苯基)二甲醇(1b)的替換合成方案。圖48是用于兩步單亞胺二聚物合成的替換合成方案。圖49示出各種綴合物對(duì)各種細(xì)胞系的效力。ic50值以nm為單位列于表中。圖50示出humy9-6-磺基-spdb-1f在具有molm-13腫瘤的小鼠中的體內(nèi)效力。圖51示出humy9-6-磺基-spdb-1f在具有nb4腫瘤的小鼠中的體內(nèi)效力。圖52示出humy9-6-bmps-1f在具有hl60/qc腫瘤的小鼠中的體內(nèi)效力。圖53示出humy9-6-bmps-1f在具有molm-13腫瘤的小鼠中的體內(nèi)效力。注意，向綴合反應(yīng)中加入亞硫酸氫鈉用于制備綴合物。圖54示出磺化葉酸/細(xì)胞毒性化合物綴合物的代表性合成方案。圖55示出具有不同連接子的幾種代表性的磺化藥物-抗體綴合物。圖56示出humy9-6-藥物2在具有hl60/qc腫瘤的小鼠中的體內(nèi)效力。注意，向綴合反應(yīng)中加入亞硫酸氫鈉用于制備綴合物。圖57示出humy9-6-藥物2在具有molm-13腫瘤的小鼠中的體內(nèi)效力。注意，向綴合反應(yīng)中加入亞硫酸氫鈉用于制備綴合物。圖58示出在不含和含有亞硫酸氫鈉下制備的humy9-6-藥物2綴合物對(duì)表達(dá)cd33-抗原的hl60細(xì)胞的類似的體外細(xì)胞毒性。圖59示出在不含和含有亞硫酸氫鈉下制備的抗-cd22ab-藥物2綴合物對(duì)表達(dá)cd22-抗原的bjab細(xì)胞的類似的體外細(xì)胞毒性。圖60示出使用高反應(yīng)性的4-硝基py-磺基-spdb連接子制備humy9-6-磺基-spdb-1d。發(fā)明詳述現(xiàn)在將詳細(xì)參考本發(fā)明的某些實(shí)施方案，在附隨的結(jié)構(gòu)和式中闡明本發(fā)明的實(shí)例。盡管將結(jié)合所列舉的實(shí)施方案來(lái)描述本發(fā)明，但應(yīng)理解，它們并非旨在將本發(fā)明限制于那些實(shí)施方案中。相反，本發(fā)明旨在涵蓋所有的備選方案、修改和等效物，它們可如由權(quán)利要求所定義的那樣包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到許多方法和材料與本文描述的那些類似或等效，可將這些方法和材料用于本發(fā)明的實(shí)踐。應(yīng)當(dāng)理解，包括在本發(fā)明的不同方面(如，化合物、化合物-連接分子、綴合物、組合物、制備和使用方法)和說(shuō)明書(shū)的不同部分(包括僅在實(shí)施例中描述的實(shí)施方案)所描述的那些在內(nèi)的本文所述的任何實(shí)施方案，可與本發(fā)明的一種或多種其它實(shí)施方案組合，除非明確地排除或不適當(dāng)。實(shí)施方案的組合不限于經(jīng)由多個(gè)從屬權(quán)利要求所要求的那些特定的組合。定義本文使用的“直鏈或支鏈的烷基”是指1至20個(gè)碳原子的飽和直鏈或支鏈單價(jià)烴基。烷基的實(shí)例包括但不限于甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-甲基-1-丙基、-ch2ch(ch3)2)、2-丁基、2-甲基-2-丙基、1-戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基)、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基、3,3-二甲基-2-丁基、1-庚基、1-辛基等。優(yōu)選地，烷基具有1至10個(gè)碳原子。更優(yōu)選地，烷基具有1至4個(gè)碳原子?！爸辨溁蛑ф溝┗笔侵妇哂兄辽僖粋€(gè)不飽和位點(diǎn)(即，碳-碳雙鍵)的2至20個(gè)碳原子的直鏈或支鏈單價(jià)烴基，其中該烯基包括具有“順式”和“反式”取向，或者可選地，具有“e”和“z”取向的基團(tuán)。實(shí)例包括但不限于亞乙烷基(ethylenyl)或乙烯基(-ch＝ch2)、烯丙基(-ch2ch＝ch2)等。優(yōu)選地，烯基具有2至10個(gè)碳原子。更優(yōu)選地，烷基具有2至4個(gè)碳原子。“直鏈或支鏈炔基”是指具有至少一個(gè)不飽和位點(diǎn)(即，碳-碳三鍵)的2至20個(gè)碳原子的直鏈或支鏈單價(jià)烴基。實(shí)例包括但不限于乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、己炔基等。優(yōu)選地，炔基具有2至10個(gè)碳原子。更優(yōu)選地，炔基具有2至4個(gè)碳原子。術(shù)語(yǔ)“碳環(huán)(carbocycle)”、“碳環(huán)基”和“碳環(huán)(carbocyclicring)”是指具有3至12個(gè)碳原子作為單環(huán)或7至12個(gè)碳原子作為雙環(huán)的單價(jià)非芳族、飽和或部分不飽和的環(huán)。具有7至12個(gè)原子的雙環(huán)碳環(huán)可排列為，例如，雙環(huán)[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統(tǒng)，而具有9或10個(gè)環(huán)原子的雙環(huán)碳環(huán)可排列為雙環(huán)[5,6]或[6,6]系統(tǒng)或排列為橋環(huán)系統(tǒng)諸如雙環(huán)[2.2.1]庚烷、雙環(huán)[2.2.2]辛烷和雙環(huán)[3.2.2]壬烷。單環(huán)碳環(huán)的實(shí)例包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、1-環(huán)戊-1-烯基、1-環(huán)戊-2-烯基、1-環(huán)戊-3-烯基、環(huán)己基、1-環(huán)己-1-烯基、1-環(huán)己-2-烯基、1-環(huán)己-3-烯基、環(huán)己二烯基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、環(huán)壬基、環(huán)癸基、環(huán)十一烷基、環(huán)十二烷基等。術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基(cyclicalkyl)”和“環(huán)烷基(cycloalkyl)”可互換使用。它們是指單價(jià)飽和碳環(huán)基團(tuán)。優(yōu)選地，環(huán)烷基是3至7元單環(huán)基團(tuán)。更優(yōu)選地，環(huán)烷基是環(huán)己基。術(shù)語(yǔ)“環(huán)烯基”是指在環(huán)結(jié)構(gòu)中具有至少一個(gè)雙鍵的碳環(huán)基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“環(huán)炔基”是指在環(huán)結(jié)構(gòu)中具有至少一個(gè)三鍵的碳環(huán)基團(tuán)?！胺蓟币庵笍哪阁w芳族環(huán)系的單個(gè)碳原子上去除一個(gè)氫原子而得到的6-18個(gè)碳原子的單價(jià)芳族烴基。一些芳基在示例性結(jié)構(gòu)中表示為“ar”。芳基包括含有稠合于飽和、部分不飽和環(huán)或芳族碳環(huán)或雜環(huán)的雙環(huán)基團(tuán)。典型的芳基包括但不限于來(lái)自于苯(苯基)、取代的苯、萘、蒽、茚基、二氫茚基、1,2-二氫萘、1,2,3,4-四氫萘基等的基團(tuán)。優(yōu)選地，芳基是苯基。術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)(heterocycle)”、“雜環(huán)基”和“雜環(huán)(heterocyclicring)”在本文中可互換使用且是指飽和或部分不飽和的(即，環(huán)內(nèi)具有一個(gè)或多個(gè)雙鍵和/或三鍵)3至18個(gè)環(huán)原子的碳環(huán)基團(tuán)，其中至少一個(gè)環(huán)原子選自氮、氧、磷和硫的雜原子，其余的環(huán)原子是c，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)原子任選被下文所述的一個(gè)或多個(gè)取代基獨(dú)立地取代。雜環(huán)可以是具有3至7個(gè)環(huán)成員的單環(huán)(2至6個(gè)碳原子和1至4個(gè)選自n、o、p和s的雜原子)或具有7至10個(gè)環(huán)成員的雙環(huán)(4至9個(gè)碳原子和1至6個(gè)選自n、o、p和s的雜原子)，例如：雙環(huán)[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統(tǒng)。雜環(huán)描述于paquette,leoa.；“principlesofmodernheterocyclicchemistry”(w.a.benjamin,newyork,1968)，特別是第1、3、4、6、7和9章；thechemistryofheterocycliccompounds,aseriesofmonographs”(johnwiley&sons,newyork,1950年至今)，特別是第13、14、16、19和28卷；和j.am.chem.soc.(1960)82:5566?！半s環(huán)基”還包括其中雜環(huán)基與飽和、部分不飽和環(huán)或芳族碳環(huán)或雜環(huán)稠合的基團(tuán)。雜環(huán)的實(shí)例包括但不限于吡咯烷基、四氫呋喃基、二氫呋喃基、四氫噻吩基、四氫吡喃基、二氫吡喃基、四氫噻喃基、哌啶子基、嗎啉代、硫代嗎啉代、噻噁烷基、哌嗪基、高哌嗪基、氮雜環(huán)丁基、氧雜環(huán)丁基、硫雜環(huán)丁基、高哌啶基、氧雜環(huán)庚基、硫雜環(huán)庚基、氧氮雜基、二氮雜基、硫氮雜基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吲哚啉基、2h-吡喃基、4h-吡喃基、二噁烷基、1,3-二氧戊環(huán)基、吡唑啉基、二噻烷基、二硫戊環(huán)基、二氫吡喃基、二氫噻吩基、二氫呋喃基、吡唑烷基咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基、3-氮雜二環(huán)[4.1.0]庚基和氮雜二環(huán)[2.2.2]己基。螺環(huán)部分也包括在此定義的范圍內(nèi)。其中環(huán)原子被氧代(＝o)部分取代的雜環(huán)基團(tuán)的實(shí)例是嘧啶酮基和1,1-二氧代-硫代嗎啉基。術(shù)語(yǔ)“雜芳基”是指5或6元環(huán)的單價(jià)芳族基團(tuán)，且包含含有一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自氮、氧和硫的雜原子的5-18個(gè)原子的稠環(huán)系統(tǒng)(其中至少一者是芳族)。雜芳基的實(shí)例是吡啶基(包括，例如2-羥基吡啶基)、咪唑基、咪唑并吡啶基、嘧啶基(包括，例如4-羥基嘧啶基)、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、異噁唑基、噻唑基、噁唑基、異噻唑基、吡咯基、喹啉基、異喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲哚啉基、酞嗪基、噠嗪基、三嗪基、異吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并苯硫基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基和呋喃吡啶基。該雜環(huán)或雜芳基可連接有碳(碳連接的)或氮(氮連接的)(在此類連接可能的情況下)。通過(guò)實(shí)例而非限制的方式，碳鍵合的雜環(huán)或雜芳基鍵合于吡啶的2、3、4、5或6位，噠嗪3、4、5或6位，嘧啶的2、4、5或6位，吡嗪的2、3、5或6位，呋喃、四氫呋喃、噻吩(thiofuran)、噻吩(thiophene)、吡咯、四氫吡咯的2、3、4或5位，噁唑、咪唑或噻唑的2、4或5位，異噁唑、吡唑或異噻唑的3，4或5位，氮丙啶的2或3位，氮雜環(huán)丁烷的2、3或4位，喹啉的2、3、4、5、6、7或8位，或異喹啉的1、3、4、5、6、7或8位。通過(guò)實(shí)例而非限制的方式，氮鍵合的雜環(huán)或雜芳基連接于氮丙啶、氮雜環(huán)丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、吲哚啉、1h-吲唑的1位，異吲哚或異吲哚啉的2位，嗎啉的4位和咔唑或o-咔啉的9位。存在于雜芳基或雜環(huán)基中的雜原子包括諸如no、so和so2的氧化形式。術(shù)語(yǔ)“鹵代”或“鹵素”是指f、cl、br或i。上述的烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、碳環(huán)基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基環(huán)可任選被一個(gè)以上(如，2、3、4、5、6或更多個(gè))取代基取代。如果取代基被描述為被“取代的”，那么非氫取代基代替取代基的碳、氧、硫或氮上的氫取代基。因此，例如，取代的烷基取代基是其中至少一個(gè)非氫取代基代替烷基取代基上的氫取代基的烷基取代基。舉例而言，單氟烷基是被一個(gè)氟代取代基取代的烷基，而二氟烷基是被兩個(gè)氟代取代基取代的烷基。應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，如果在取代基上存在多于一個(gè)的取代基，那么每個(gè)非氫取代基可相同或不同(除非另有說(shuō)明)。如果取代基被描述為“任選取代的”，那么該取代基可以是(1)未被取代的，或(2)被取代的。如果取代基的碳被描述為任選被一系列取代基的一個(gè)或多個(gè)取代時(shí)，那么碳上的一個(gè)或多個(gè)氫原子(在存在任何氫原子的程度上)可單獨(dú)地和/或一起被獨(dú)立選擇的任選取代基替換。如果取代基的氮被描述為任選被一系列取代基的一個(gè)或多個(gè)取代時(shí)，那么氮上的一個(gè)或多個(gè)氫原子(在存在任何氫原子的程度上)可被獨(dú)立選擇的任選取代基替換。一個(gè)示例性取代基可表示為-nr’r”，其中r’和r”與它們連接的氮原子一起可形成雜環(huán)。由r’和r”與它們連接的氮原子一起形成的雜環(huán)可部分或完全飽和。在一個(gè)實(shí)施方案中，雜環(huán)由3至7個(gè)原子組成。在另一實(shí)施方案中，該雜環(huán)選自吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、異噁唑基、吡啶基和噻唑基。本說(shuō)明書(shū)中的術(shù)語(yǔ)“取代基”、“基團(tuán)(radical)”和“基團(tuán)(group)”可互換使用。如果一組取代基統(tǒng)稱為任選地被一系列取代基的一個(gè)或多個(gè)取代時(shí)，所述基團(tuán)可包括：(1)未被取代的取代基，(2)未被任選的取代基取代的可取代的取代基，和/或(3)被一個(gè)或多個(gè)任選的取代基取代的可取代的取代基。如果取代基被描述為任選地被多達(dá)特定數(shù)目的非氫取代基取代，那么該取代基可以是(1)未被取代的；或(2)被多達(dá)該特定數(shù)目的非氫取代基取代或者被多達(dá)取代基的可取代位置上的最大數(shù)目的取代基取代(以較小者為準(zhǔn))。因此，例如，如果取代基被描述為任選被多達(dá)3個(gè)非氫取代基取代的雜芳基，那么具有小于3個(gè)可取代位置的任何雜芳基將任選地被多達(dá)僅與雜芳基所具有的可取代位置一樣多的非氫取代基取代。在非限制性實(shí)施例中，此類取代基可選自具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，芳基，雜芳基，雜環(huán)基，鹵素、胍基[-nh(c＝nh)nh2]，-or100，nr101r102，-no2，-nr101cor102，-sr100，由-sor101表示的亞砜，由-so2r101表示的砜，磺酸鹽-so3m，硫酸鹽-oso3m，由-so2nr101r102表示磺酰胺，氰基，疊氮基，-cor101,-ocor101,-oconr101r102和聚乙二醇單元(-och2ch2)nr101，其中m是h或藥學(xué)上可接受的陽(yáng)離子(諸如na+或k+)；r101、r102和r103各自獨(dú)立地選自h，具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元(-och2ch2)n-r104，其中n為1至24的整數(shù)，具有6至10個(gè)碳原子的芳基，具有3至10個(gè)碳原子的雜環(huán)和具有5至10個(gè)碳原子的雜芳基；且r104是h或具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基，其中由r100、r101、r102、r103和r104表示的基團(tuán)中的烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基和雜環(huán)基任選被一個(gè)或多個(gè)(如，2、3、4、5、6或更多個(gè))獨(dú)立地選自鹵素、-oh、-cn、-no2的取代基和具有1至4個(gè)碳原子的未取代的直鏈或支鏈的烷基取代。優(yōu)選地，上文描述的任選取代的烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、碳環(huán)基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基的取代基包括鹵素、-cn、-nr102r103、-cf3、-or101、芳基、雜芳基、雜環(huán)基、-sr101、-sor101、-so2r101和-so3m。術(shù)語(yǔ)“化合物”或“細(xì)胞毒性化合物、“細(xì)胞毒性二聚體”以及“細(xì)胞毒性二聚體化合物”可互換使用。它們旨在包括這樣的化合物，對(duì)于該化合物而言，其結(jié)構(gòu)式或化學(xué)式或任何衍生物已公開(kāi)于通過(guò)引用方式并入本發(fā)明或其結(jié)構(gòu)式或化學(xué)式或任何衍生物。該術(shù)語(yǔ)還包括本發(fā)明公開(kāi)的所有式的化合物的立體異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑化物、代謝物、鹽(如，藥學(xué)上可接受的鹽)和前藥及前藥鹽。該術(shù)語(yǔ)還包括任何溶劑化物、水合物和前述的任何多晶型物。在本申請(qǐng)中描述的本發(fā)明某些方面中，“立體異構(gòu)體”、“幾何異構(gòu)體”、“互變異構(gòu)體”、“溶劑化物”、“代謝物”、“鹽”、“前藥”、“前藥鹽”“綴合物”、“綴合物鹽”、“溶劑化物”、“水合物”或“多晶型物”的特定引用在使用術(shù)語(yǔ)“化合物”而未引用這些其它形式的情況下不應(yīng)理解為在本發(fā)明其它方面的這些形式的有意省略。本文使用的術(shù)語(yǔ)“綴合物”是指本文所述的化合物或其連接于細(xì)胞結(jié)合劑的衍生物。本文使用的術(shù)語(yǔ)“可連接于細(xì)胞結(jié)合劑”是指本文所述的化合物或其衍生物，其包含適于將這些化合物或其衍生物鍵合于細(xì)胞結(jié)合劑的至少一個(gè)連接基團(tuán)或前體。給定基團(tuán)的術(shù)語(yǔ)“前體”是指可通過(guò)任何脫保護(hù)、化學(xué)修飾或綴合反應(yīng)而產(chǎn)生該基團(tuán)的任何基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“連接于細(xì)胞結(jié)合劑”是指包含至少一種本文所述化合物(如，本文所述的式(i)-(iv)和(viii)-(xi)的化合物和藥物-連接子化合物)，或其經(jīng)由合適的連接基團(tuán)結(jié)合于細(xì)胞結(jié)合劑的衍生物或其前體的綴合物分子。術(shù)語(yǔ)“手性”是指具有鏡像配偶體(mirrorimagepartner)的不重疊性性質(zhì)的分子，而術(shù)語(yǔ)“非手性”是指其鏡像配偶體可重疊的分子。術(shù)語(yǔ)“立體異構(gòu)體”是指具有相同的化學(xué)組成和連接性，但是其原子在空間具有不同取向的化合物，該取向不能通過(guò)單鍵旋轉(zhuǎn)互換?！胺菍?duì)映異構(gòu)體”是指具有兩個(gè)或多個(gè)手性中心且其分子并非彼此鏡像的立體異構(gòu)體。非對(duì)映異構(gòu)體具有不同的物理性質(zhì)，如熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、光譜特性和反應(yīng)性。非對(duì)映異構(gòu)體混合物可在高分辨率分析程序(諸如結(jié)晶、電泳和色譜法)下進(jìn)行分離?！皩?duì)映體”是指彼此為非重疊鏡像化合物的兩種立體異構(gòu)體。本文使用的立體化學(xué)的定義和慣例通常遵循s.p.parker，編輯，mcgraw-hilldictionaryofchemicalterms(1984)mcgraw-hillbookcompany,newyork；及eliel,e.和wilen,s.,“stereochemistryoforganiccompounds,”johnwiley&sons,inc.,newyork,1994。本發(fā)明的化合物可含有不對(duì)稱或手性中心，并因此存在不同的立體異構(gòu)形式。預(yù)期包括但不限于非對(duì)映體、對(duì)映體和阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體以及其混合物例如外消旋混合物的本發(fā)明化合物的所有立體異構(gòu)形式，形成本發(fā)明的一部分。許多有機(jī)化合物以光學(xué)活性形式存在，即，它們具有旋轉(zhuǎn)平面偏振光的平面的能力。在描述光學(xué)活性化合物時(shí)，前綴d和l，或r和s用于表示分子在其手性中心處的絕對(duì)構(gòu)型。前綴d和i或(+)和(-)用于表示化合物的平面偏振光旋轉(zhuǎn)的標(biāo)記，其中(-)或1意指該化合物是左旋的。前綴為(+)或d的化合物是右旋的。對(duì)于給定的化學(xué)結(jié)構(gòu)，除了彼此互為鏡像以外，這些立體異構(gòu)體是相同的。特定的立體異構(gòu)體也可稱為對(duì)映體，且此類異構(gòu)體的混合物經(jīng)常被稱為對(duì)映體混合物。50:50的對(duì)映體混合物被稱為外消旋混合物或外消旋物，它們可在化學(xué)反應(yīng)或過(guò)程中沒(méi)有立體選擇性或立體特異性的情況下產(chǎn)生。術(shù)語(yǔ)“外消旋混合物”和“外消旋物”是指無(wú)光學(xué)活性的兩種對(duì)映體種類的等摩爾混合物。術(shù)語(yǔ)“互變異構(gòu)體”或“互變異構(gòu)形式”是指經(jīng)由低能量屏障可相互轉(zhuǎn)化的不同能量的結(jié)構(gòu)異構(gòu)體。例如，質(zhì)子互變異構(gòu)體(也稱為質(zhì)子異變互變異構(gòu)體)包括經(jīng)由質(zhì)子遷移的互變，如酮-烯醇和亞胺-烯胺異構(gòu)化。價(jià)互變異構(gòu)體包括通過(guò)一些成鍵電子的重組而相互轉(zhuǎn)化。在本申請(qǐng)中所用的術(shù)語(yǔ)“前藥”是指本發(fā)明化合物的前體或衍生形式，其能夠被酶或水解激活或轉(zhuǎn)化為更具活性的母體形式。參見(jiàn)，如,wilman，“prodrugsincancerchemotherapy”biochemicalsocietytransactions，14，第375-382頁(yè)，615thmeetingbelfast(1986)和stella等人，“prodrugs：achemicalapproachtotargeteddrugdelivery”，directeddrugdelivery，borchardt等人，(編輯)，第247-267頁(yè)，humanapress(1985)。本發(fā)明的前藥包括但不限于，含酯的前藥、含磷酸酯的前藥、含有硫代磷酸酯的前藥、含硫酸酯的前藥、含肽的前藥、d-氨基酸修飾的前藥、糖基化的前藥、含β-內(nèi)酰胺類的前藥、任選取代的含苯氧基乙酰胺的前藥、任選取代的含苯乙酰胺的前藥、5-氟胞嘧啶和可轉(zhuǎn)化為更具活性的無(wú)細(xì)胞毒素藥物的其它5-氟尿苷前藥?？杀谎苌捎糜诒景l(fā)明前藥形式的細(xì)胞毒性藥物的實(shí)例包括但不限于本發(fā)明的化合物和諸如上述的化療劑。術(shù)語(yǔ)“前藥”也意在包括在生物學(xué)條件下(體外或體內(nèi))可水解、氧化或發(fā)生其它反應(yīng)的化合物的衍生物以提供本發(fā)明的化合物。前藥可僅在生物學(xué)條件下在此類反應(yīng)中活化，或者它們可以其未反應(yīng)的形式具有活性。本發(fā)明涵蓋的前藥的實(shí)例包括但不限于本文公開(kāi)的包含可生物水解部分的任一式的化合物的類似物或衍生物，諸如可生物水解的酰胺、可生物水解的酯、可生物水解的氨基甲酸酯、可生物水解的碳酸酯、可生物水解的酰脲和可生物水解的磷酸酯類似物。前藥的其它實(shí)例包括本文公開(kāi)的任一式的化合物的衍生物，其包括-no、-no2、-ono或-ono2部分。前藥通?？墒褂帽娝苤姆椒ㄖ苽洌鏱urger’smedicinalchemistryanddrugdiscovery(1995)172-178,949-982(manfrede.wolff編輯，第5版)；還可參見(jiàn)goodmanandgilman’s，thepharmacologicalbasisoftherapeutics，第8版，mcgraw-hill，int.編輯于1992年，“biotransformationofdrugs”。本發(fā)明前藥的一種優(yōu)選形式包括本發(fā)明的化合物(含有或不含任何連接子基團(tuán))和綴合物，其包括在化合物/綴合物的亞胺鍵和亞胺反應(yīng)劑之間形成的加合物。另一優(yōu)選形式的本發(fā)明的前藥包括諸如式(i)-(iv)的那些化合物，其中當(dāng)n和c之間的雙線表示單鍵時(shí)，x是h或氨基保護(hù)基，該化合物變?yōu)榍八?。本發(fā)明的前藥可包含本文所述的一種或兩種形式的前藥(如，含有化合物/綴合物的亞胺鍵和亞胺反應(yīng)劑之間形成的加合物，和/或當(dāng)x是-h時(shí)含有y離去基團(tuán))。術(shù)語(yǔ)“亞胺反應(yīng)劑”是指能夠與亞胺基團(tuán)反應(yīng)的試劑。亞胺反應(yīng)劑的實(shí)例包括但不限于，亞硫酸鹽(h2so3，h2so2，與陽(yáng)離子形成的hso3-、so32-或hso2-的鹽)、偏亞硫酸氫鹽(h2s2o5或與陽(yáng)離子形成的s2o52-的鹽)，單、二、三和四硫代磷酸鹽(po3sh3、po2s2h3、pos3h3、ps4h3或與陽(yáng)離子形成的po3s3-、po2s23-、pos33-或ps43-的鹽)，硫代磷酸酯((rio)2ps(ori)、rish、risoh、riso2h、riso3h)，各種胺(羥胺(如，nh2oh)，肼(如，nh2nh2)、nh2o-ri、ri’nh-ri、nh2-ri),nh2-co-nh2,nh2-c(＝s)-nh2，硫代硫酸鹽(h2s2o3或與陽(yáng)離子形成的s2o32-的鹽)、連二亞硫酸鹽(h2s2o4或與陽(yáng)離子形成的s2o42-的鹽)、二硫代磷酸鹽(p(＝s)(ork)(sh)(oh)或其與陽(yáng)離子形成的鹽)，異羥肟酸(rkc(＝o)nhoh或與陽(yáng)離子形成的鹽)，酰肼(rkconhnh2)，甲醛次硫酸氫鹽氫鈉(hoch2so2h或與陽(yáng)離子形成的hoch2so2-的鹽，諸如，hoch2so2-na+)，糖化的核苷酸(諸如gdp-甘露糖)，氟達(dá)拉濱或其混合物，其中ri和ri’各自獨(dú)立地為具有1至10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基且被至少一個(gè)選自-n(rj)2、-co2h、-so3h和-po3h的取代基取代；ri和ri’可進(jìn)一步任選地被本文所述的烷基取代基取代；rj是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；rk是具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，芳基，雜環(huán)基或雜芳基(優(yōu)選地，rk是具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；更優(yōu)選地，rk是甲基、乙基或丙基)。優(yōu)選地，陽(yáng)離子是單價(jià)陽(yáng)離子，諸如na+或k+。優(yōu)選地，亞胺反應(yīng)劑選自亞硫酸鹽、羥胺、脲和肼。更優(yōu)選地，亞胺反應(yīng)劑是nahso3或khso3。除非另外指明，否則本文使用的術(shù)語(yǔ)“可生物水解的酰胺”、“可生物水解的酯、“可生物水解的氨基甲酸酯”、“可生物水解的碳酸酯”、“可生物水解的酰脲””和“可生物水解的磷酸鹽酯類似物”分別意指酰胺、酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、酰脲或磷酸鹽酯類似物，它們或者：1)不破壞化合物的生物活性并賦予該化合物在體內(nèi)有利的特性，諸如吸收、作用持續(xù)時(shí)間或作用開(kāi)始；或者2)其本身無(wú)生物活性但在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為生物活性化合物?？缮锼獾孽０返膶?shí)例包括但不限于低級(jí)烷基酰胺、α-氨基酸酰胺、烷氧基酰基酰胺和烷基氨基烷基羰基酰胺?？缮锼獾孽サ膶?shí)例包括但不限于低級(jí)烷基酯、烷氧基酰氧基酯、烷基酰氨基烷基酯和膽堿酯?？缮锼獾陌被姿狨サ膶?shí)例包括但不限于低級(jí)烷基胺、取代的乙二胺、氨基酸、羥基烷基胺、雜環(huán)胺和雜芳香胺及聚醚胺。特別優(yōu)選的前藥和前藥鹽是將此類化合物施用于哺乳動(dòng)物時(shí)提高本發(fā)明化合物生物利用度的那些。本文使用的短語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”是指本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的有機(jī)鹽或無(wú)機(jī)鹽。示例性的鹽包括但不限于硫酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異煙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、單寧酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來(lái)酸鹽、龍膽酸鹽(gentisinate)、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、蔗糖鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、谷氨酸鹽、甲烷磺酸鹽“甲磺酸鹽”、乙烷磺酸鹽、苯磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、撲酸鹽(即，1,1’-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘甲酸))鹽、堿金屬(如，鈉和鉀)鹽、堿土金屬(如，鎂)鹽和銨鹽。藥學(xué)上可接受的鹽可涉及引入另一種分子如乙酸根離子、琥珀酸根離子或其他平衡離子。平衡離子可以是使母體化合物上的電荷穩(wěn)定的任何有機(jī)或無(wú)機(jī)部分。此外，藥學(xué)上可接受的鹽在其結(jié)構(gòu)中可具有一個(gè)以上的帶電原子。多個(gè)帶電原子為藥學(xué)上可接受鹽的一部分的情況可具有多個(gè)平衡離子。因此，藥學(xué)上可接受的鹽可具有一個(gè)或多個(gè)帶電原子和/或一個(gè)或多個(gè)平衡離子。如果本發(fā)明的化合物是堿，那么所需的藥學(xué)上可接受的鹽可通過(guò)本領(lǐng)域可獲得的任何合適的方法制備，例如，用以下酸來(lái)處理游離堿：用無(wú)機(jī)酸，如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、磷酸等；或用有機(jī)酸，如乙酸、馬來(lái)酸、琥珀酸、扁桃酸、富馬酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水楊酸、吡喃酮側(cè)基酸(如葡糖醛酸或半乳糖醛酸)、α-羥基酸(如檸檬酸或酒石酸)、氨基酸(如天冬氨酸或谷氨酸)、芳族酸(如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(如對(duì)甲苯磺酸或乙磺酸)等。如果本發(fā)明的化合物是酸，那么所需的藥學(xué)上可接受的鹽可通過(guò)任何合適的方法制備，例如，用無(wú)機(jī)或有機(jī)堿，如胺(伯胺、仲胺或叔胺)、堿金屬氫氧化物或堿土金屬氫氧化物等處理游離酸。合適鹽的示例性實(shí)例包括但不限于衍生自氨基酸(如甘氨酸和精氨酸)的有機(jī)鹽，氨，伯胺、仲胺、叔胺及環(huán)胺，如哌啶、嗎啉和哌嗪以及衍生自鈉、鈣、鉀、鎂、錳、鐵、銅、鋅、鋁和鋰的無(wú)機(jī)鹽。本文使用的術(shù)語(yǔ)“溶劑化物”意指進(jìn)一步包括化學(xué)計(jì)算量或非化學(xué)計(jì)量的溶劑，如水、異丙醇、丙酮、乙醇、甲醇、dmso、乙酸乙酯、乙酸及乙醇胺二氯甲烷、2-丙醇等的化合物，其通過(guò)非共價(jià)分子間力結(jié)合?；衔锏娜軇┗锘蛩衔镆子谕ㄟ^(guò)向化合物中加入至少一摩爾當(dāng)量的羥基溶劑(如甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇或水)而導(dǎo)致亞胺部分的溶劑化或水合來(lái)制備。術(shù)語(yǔ)“異常細(xì)胞生長(zhǎng)”和“增殖性病癥”在本申請(qǐng)中可互換使用。除非另有說(shuō)明，本文所用的“異常細(xì)胞生長(zhǎng)”是指獨(dú)立于正常調(diào)節(jié)機(jī)制的細(xì)胞生長(zhǎng)(如，接觸抑制的喪失)。這包括，例如，以下的異常生長(zhǎng)：(1)通過(guò)表達(dá)突變的酪氨酸激酶或過(guò)度表達(dá)受體酪氨酸激酶而增殖的腫瘤細(xì)胞(腫瘤)；(2)其中發(fā)生異常酪氨酸激酶活化的其它增殖性疾病的良性和惡性細(xì)胞；(3)通過(guò)受體酪氨酸激酶增殖的任何腫瘤；(4)通過(guò)異常絲氨酸/蘇氨酸激酶活化而增殖的任何腫瘤；和(5)其中發(fā)生異常絲氨酸/蘇氨酸激酶活化的其它增殖性疾病的良性和惡性細(xì)胞。術(shù)語(yǔ)“癌癥”和“癌性的”是指或描述哺乳動(dòng)物中通常以失調(diào)的細(xì)胞生長(zhǎng)為特征的生理狀態(tài)?！澳[瘤”包括一種或多種癌細(xì)胞和/或良性或癌前細(xì)胞。癌癥的實(shí)例包括但不限于，癌、淋巴瘤、胚細(xì)胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴惡性腫瘤。此類癌癥的更具體的實(shí)例包括鱗狀細(xì)胞癌(如，上皮鱗狀細(xì)胞癌)；肺癌，包括小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌(“nsclc”)、肺腺癌和肺鱗狀癌；腹膜癌、肝細(xì)胞癌、胃癌(gastriccancer)或胃癌(stomachcancer)，包括胃腸道癌；胰腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細(xì)胞瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、結(jié)直腸癌、子宮內(nèi)膜或子宮癌、唾液腺癌、腎癌(kidneycancer)或腎癌(renalcancer)、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、肛門癌、陰莖癌、急性白血病、頭/腦和頸癌(head/brainandneckcancer)、淋巴器官的癌癥和骨髓惡性腫瘤，包括白血病(急性淋巴細(xì)胞性白血病(all)、急性髓性白血病(aml)、慢性淋巴細(xì)胞白血病(cll)、慢性髓性白血病(cml)、急性單核細(xì)胞白血病(amol)、多毛細(xì)胞白血病(hcl)、t-細(xì)胞幼淋巴細(xì)胞白血病(t-pll)、巨粒淋巴細(xì)胞白血病、成人t細(xì)胞白血病)、淋巴瘤(小淋巴細(xì)胞淋巴瘤(sll)、霍奇金淋巴瘤(hodgkin'slymphomas)(結(jié)節(jié)硬化型、混合細(xì)胞型、富于淋巴細(xì)胞型、淋巴細(xì)胞削減型或未削減型和結(jié)節(jié)性淋巴細(xì)胞主導(dǎo)的霍奇金淋巴瘤)、非霍奇金淋巴瘤(所有亞型)、慢性淋巴細(xì)胞白血病/小淋巴細(xì)胞淋巴瘤、b-細(xì)胞幼淋巴細(xì)胞白血病、淋巴漿細(xì)胞性淋巴瘤(諸如瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥)、脾邊緣帶淋巴瘤、漿細(xì)胞腫瘤(漿細(xì)胞性骨髓瘤、漿細(xì)胞瘤、單克隆免疫球蛋白沉積物疾病、重鏈病)、結(jié)節(jié)外邊緣區(qū)b細(xì)胞淋巴瘤(malt淋巴瘤)、結(jié)節(jié)邊緣區(qū)b細(xì)胞淋巴瘤(nmzl)、濾泡淋巴瘤、外套細(xì)胞淋巴瘤、彌漫性大b細(xì)胞淋巴瘤、縱隔(胸腺)大b細(xì)胞淋巴瘤、血管內(nèi)大b細(xì)胞淋巴瘤、原發(fā)性滲出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤/白血病、t細(xì)胞幼淋巴細(xì)胞白血病、t細(xì)胞巨粒淋巴細(xì)胞白血病、攻擊性nk細(xì)胞白血病、成人t細(xì)胞白血病/淋巴瘤、結(jié)節(jié)外nk/t細(xì)胞淋巴瘤(鼻型)、腸病型t細(xì)胞淋巴瘤、肝脾t細(xì)胞淋巴瘤、亞頂級(jí)nk細(xì)胞淋巴瘤、蕈樣真菌病/塞扎里綜合征、原發(fā)性皮膚間cd30-陽(yáng)性t細(xì)胞淋巴增生性病癥、原發(fā)性皮膚間變性大細(xì)胞淋巴瘤、淋巴瘤樣丘疹病、血管免疫母細(xì)胞性t細(xì)胞淋巴瘤、外周t細(xì)胞淋巴瘤(非特異性)、間變性大細(xì)胞淋巴瘤)、多發(fā)性骨髓瘤(漿細(xì)胞性骨髓瘤或卡勒病(kahler'sdisease))?！爸委焺卑ㄖT如抗體、肽、蛋白質(zhì)、酶的生物制劑或化療劑兩者。“化療劑”是用于治療癌癥的化學(xué)物質(zhì)?；熤委焺┑膶?shí)例包括厄洛替尼(genentech/osipharm.)，硼替佐米(millenniumpharm.)，氟維司群(astrazeneca)，舒尼替尼(su11248,pfizer)，來(lái)曲唑(novartis)，甲磺酸伊馬替尼(novartis)，ptk787/zk222584(novartis)，奧沙利鉑(sanofi)，5-fu(5-氟尿嘧啶)，甲酰四氫葉酸，雷帕霉素(sirolimus,wyeth)，拉帕替尼(gsk572016,glaxosmithkline)，洛那法尼(lonafarnib)(sch66336)，索拉非尼(bay43-9006，bayerlabs)和吉非替尼(astrazeneca)，ag1478、ag1571(su5271；sugen)，烷化劑，諸如塞替派和環(huán)磷酰胺；烷基磺酸鹽類諸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶類諸如苯并多巴、卡波醌、美妥多巴和尿多巴；氮丙啶和甲基三聚氰胺包括六甲蜜胺、三乙烯三聚氰胺、三亞乙基磷酰胺、三亞乙基硫代磷酰胺和三羥甲基三聚氰胺；己酸配質(zhì)(特別是泡番荔枝辛和泡番荔枝辛酮)；喜樹(shù)堿(包括合成類似物托泊替康)；苔蘚抑素；callystatin；cc-1065(包括它的阿多來(lái)新、卡折來(lái)新和比折來(lái)新合成類似物)；念珠藻素(特別是念珠藻素1和念珠藻素8)；多拉司他汀；多卡米星(包括合成類似物，kw-2189和cb1-tm1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；水鬼蕉堿；匍枝珊瑚醇；海綿抑制素；氮芥諸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯代磷酰胺、雌氮芥、異環(huán)磷酰胺、氮芥、氧化氮芥氫氯化物、美法侖、新氮芥、膽甾醇對(duì)苯乙酸氮芥、潑尼莫司汀、曲磷胺、烏拉莫司??；亞硝基脲類諸如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷尼司汀(ranimnustine)；抗生素諸如烯二炔抗生素(如，卡其霉素，特別是卡其霉素γll和卡其霉素ωll(angewchem.intl.ed.engl.(1994)33:183-186)；達(dá)內(nèi)霉素，包括達(dá)內(nèi)霉素a；雙磷酸鹽類諸如氯膦酸；埃斯波霉素；以及新制癌菌素生色團(tuán)和相關(guān)的色蛋白烯二炔抗生素生色團(tuán))，阿克拉霉素、放線菌素、安曲霉素、偶氮絲氨酸、博來(lái)霉素、放線菌素c(cactinomycin)、卡柔比星(carabicin)，洋紅霉素(caminomycin)，嗜癌素、色霉素(chromomycinis)、更生霉素、柔紅霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-l-正亮氨酸、(多柔比星)、嗎啉代-多柔比星，氰基嗎啉代-多柔比星，2-吡咯啉基-多柔比星和脫氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊達(dá)比星、麻西羅霉素、絲裂霉素諸如絲裂霉素c、霉酚酸、諾拉霉素、橄欖霉素類(olivomycins)、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三鐵阿霉素、羅多比星、鏈黑霉素、鏈佐星、殺結(jié)核菌素、烏苯美司、凈司他丁、佐柔比星；抗代謝藥諸如甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶(5-fu)；葉酸類似物諸如二甲葉酸、甲氨蝶呤、蝶羅呤、三甲曲沙；嘌呤類似物諸如氟達(dá)拉濱、6-巰基嘌呤、thiamniprine、硫鳥(niǎo)嘌呤；嘧啶類似物諸如安西他濱、阿扎胞苷、6-阿扎尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、雙脫氧尿苷、去氧氟尿苷、依諾他濱、氟尿苷；雄激素諸如卡普睪酮、屈他雄酮、環(huán)硫雄醇、美雄烷、睪內(nèi)酪；抗腎上腺諸如氨魯米特、米托坦、曲洛司坦；葉酸補(bǔ)充劑諸如亞葉酸(frolinicacid)；醋葡醛內(nèi)酯；醛磷酰胺糖苷；氨基酮戊酸；恩尿嘧啶；安吖啶；比生群；依達(dá)曲沙(edatraxate)；地磷酰胺；秋水仙胺；地吖醌；elformithine；依利醋銨；埃博霉素；依托格魯；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖；氯尼達(dá)明(lonidainine)；美登木素生物堿諸如美坦辛和美登木素(ansamitocins)；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌達(dá)醇(mopidanmol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；噴司他??；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；-多糖復(fù)合物(jhsnaturalproducts，eugene，oreg.)；雷佐生；根霉素；施佐非蘭(sizofuran)；鍺螺胺；替奴佐酸、三亞胺醌、2,2’,2”-三氯三乙胺；單端孢霉烯類(尤其是t-2毒素、疣孢菌素(verracurin)a、桿孢菌素a和anguidine)；烏拉坦；長(zhǎng)春地辛；達(dá)卡巴嗪；甘露莫司??；二溴甘露醇；二溴衛(wèi)矛醇；哌泊溴烷；加胞嘧啶(gacytosine)；阿糖胞苷(“ara-c”)；環(huán)磷酰胺；塞替派；紫杉烷，如，(紫杉醇，bristol-myerssquibboncology，princeton，n.j.),(無(wú)克列莫佛)，紫杉醇白蛋白工程納米粒子制劑(americanpharmaceuticalpartners,schaumberg,ill.)和(多西紫杉醇(doxetaxel)；rhone-poulencrorer,antony,france)；苯丁酸氮芥(chloranmbucil)；(吉西他濱)；6-硫鳥(niǎo)嘌呤；巰嘌呤；氨甲蝶呤；鉑類似物諸如順鉑和卡鉑；長(zhǎng)春堿；依托泊苷(vp-16)；異環(huán)磷酰胺；米托蒽醌；長(zhǎng)春新堿；(長(zhǎng)春瑞濱)；米托蒽醌；替尼泊苷；依達(dá)曲沙；柔紅霉素；氨基蝶呤；卡培他濱伊班膦酸鹽；cpt-11；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑rfs2000；二氟甲基鳥(niǎo)氨酸(dmfo)；類維生素a諸如視黃酸；以及上文中任一種藥學(xué)上可接受的鹽、酸和衍生物。也包括在“化療劑”定義中的是：(i)起到調(diào)節(jié)或抑制激素對(duì)腫瘤作用的抗激素劑諸如抗雌激素類和選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(serm)，包括，例如，他莫昔芬(包括枸櫞酸他莫昔芬)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羥泰米芬、曲沃昔芬、雷洛西芬、ly117018、奧那司酮和枸櫞酸托瑞米芬(toremifinecitrate)(ii)抑制芳香酶的芳香酶抑制劑，其調(diào)節(jié)腎上腺中的雌激素產(chǎn)生，諸如，例如4(5)-咪唑、氨魯米特、(醋酸甲地孕酮)、(依西美坦；pfizer)、formestanie、法倔唑、(伏氯唑)、(來(lái)曲唑；novartis)和(阿那曲唑；astrazeneca)；(iii)抗雄激素類諸如氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及曲沙他濱(1,3-二氧戊環(huán)核苷胞嘧啶類似物)；(iv)蛋白激酶抑制劑；(v)脂質(zhì)激酶抑制劑；(vi)反義寡核苷酸，特別地是抑制基因在異常細(xì)胞增殖中牽涉的信號(hào)傳導(dǎo)途徑中表達(dá)的那些，諸如，例如，pkc-α、ralf和h-ras；(vii)核酶，諸如vegf表達(dá)抑制劑(如，)和her2表達(dá)抑制劑；(viii)疫苗諸如基因治療疫苗，例如，和ril-2；拓?fù)洚悩?gòu)酶1抑制劑諸如rmrh；(ix)抗血管生成劑諸如貝伐單抗(genentech)；和(x)上文任一藥劑的藥學(xué)上可接受的鹽、酸和衍生物。其它抗血管生成劑包括mmp-2(基質(zhì)-金屬蛋白酶2)抑制劑、mmp-9(基質(zhì)-金屬蛋白酶9)抑制劑、cox-ii(環(huán)氧合酶ii)抑制劑和vegf受體酪氨酸激酶抑制劑?？膳c本發(fā)明化合物/組合物組合使用的此類有用的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的實(shí)例描述于以下專利中：wo96/33172、wo96/27583、ep818442、ep1004578、wo98/07697、wo98/03516、wo98/34918、wo98/34915、wo98/33768、wo98/30566、ep606,046、ep931,788、wo90/05719、wo99/52910、wo99/52889、wo99/29667、wo99/07675、ep945864、美國(guó)專利no.5,863,949；美國(guó)專利no.5,861,510,和ep780,386，所有這些專利均通過(guò)引用整體并入本文。vegf受體酪氨酸激酶抑制劑的實(shí)例包括4-(4-溴代-2-氟代苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(zd6474；wo01/32651中的實(shí)施例2)、4-(4-氟代-2-甲基吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)-喹唑啉(azd2171；wo00/47212中的實(shí)施例240)、瓦他拉尼堿(ptk787；wo98/35985)和su11248(舒尼替尼；wo01/60814)，以及諸如公開(kāi)于pct公開(kāi)no.wo97/22596、wo97/30035、wo97/32856和wo98/13354的那些化合物)?？膳c本化合物組合使用的化療劑的其它實(shí)例包括pi3k抑制劑(磷酸肌醇-3激酶)，諸如以下文獻(xiàn)中報(bào)告的那些：yaguchi等人(2006)jour.ofthenat.cancerinst.98(8):545-556；美國(guó)專利no.7,173,029；美國(guó)專利no.7,037,915；美國(guó)專利no.6,608,056；美國(guó)專利no.6,608,053；美國(guó)專利no.6,838,457；美國(guó)專利no.6,770,641；美國(guó)專利no.6,653,320；美國(guó)專利no.6,403,588；wo2006/046031；wo2006/046035；wo2006/046040；wo2007/042806；wo2007/042810；wo2004/017950；us2004/092561；wo2004/007491；wo2004/006916；wo2003/037886；us2003/149074；wo2003/035618；wo2003/034997；us2003/158212；ep1417976；us2004/053946；jp2001247477；jp08175990；jp08176070；美國(guó)專利no.6,703,414和wo97/15658，所有這些文獻(xiàn)均通過(guò)引入并入本文。此類pi3k抑制劑的具體實(shí)例包括sf-1126(pi3k抑制劑，semaforepharmaceuticals)、bez-235(pi3k抑制劑，novartis)、xl-147(pi3k抑制劑，exelixis，inc.)?；焺┻€可包括本文引用的品牌藥物的非專利藥或生物仿制藥或它們的改良藥中的任一者，包括改良的制劑、前藥、遞送裝置(緩釋、生物粘附涂層、定向遞送等)和劑型。“代謝物”是特定的化合物、其衍生物或其綴合物或其鹽通過(guò)體內(nèi)代謝而產(chǎn)生的產(chǎn)物?；衔铩⑵溲苌?、或其綴合物的代謝物可使用本領(lǐng)域已知的常規(guī)技術(shù)進(jìn)行鑒定并使用如本文所述的那些試驗(yàn)來(lái)測(cè)定其活性。此類產(chǎn)物可通過(guò)施用化合物的例如氧化、羥基化、還原、水解、酰胺化、脫酰胺、酯化、脫酯、酶裂解等而產(chǎn)生。因此，本發(fā)明包括本發(fā)明的化合物、其衍生物、或其綴合物的代謝物，其包括通過(guò)包括使本發(fā)明的化合物、其衍生物或其綴合物與哺乳動(dòng)物接觸足夠的時(shí)間以產(chǎn)生其代謝產(chǎn)物的方法而產(chǎn)生的化合物、其衍生物或其綴合物。短語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的”表示物質(zhì)或組合物在化學(xué)上和/或毒理學(xué)上與構(gòu)成制劑的其它成分和/或用其治療的哺乳動(dòng)物是可相容的。術(shù)語(yǔ)“保護(hù)基”或“保護(hù)部分”是指通常用于阻斷或保護(hù)特定的官能團(tuán)而使化合物、其衍生物或其綴合物上的其它官能團(tuán)發(fā)生反應(yīng)的取代基。例如，“氨基保護(hù)基”或“氨基保護(hù)部分”是連接于阻斷或保護(hù)化合物中氨基官能團(tuán)的氨基基團(tuán)的取代基。此類基團(tuán)是本領(lǐng)域熟知的(參見(jiàn)例如p.wuts和t.greene，2007，protectivegroupsinorganicsynthesis，第7章，j.wiley&sons,nj)并通過(guò)氨基甲酸酯，如甲基和氨基甲酸乙酯、fmoc、取代的氨基甲酸乙酯、通過(guò)1,6-β-消除(也稱為“自我切除”)斷裂的氨基甲酸酯、脲、酰胺、肽、烷基和芳基衍生物例示。合適的氨基保護(hù)基包括乙?；?、三氟乙?；⑹宥⊙趸驶?boc)、芐氧基羰基(cbz)和9-芴基亞甲氧基羰基(fmoc)。對(duì)于保護(hù)基及其用途的一般描述，參見(jiàn)p.g.m.wuts和t.w.greene，protectivegroupsinorganicsynthesis，johnwiley&sons，newyork，2007.術(shù)語(yǔ)“離去基團(tuán)”是指在置換或取代期間脫離的帶電基團(tuán)或不帶電的部分。此類離去基團(tuán)是本領(lǐng)域熟知的，包括但不限于鹵素、酯類、烷氧基、羥基、甲苯磺酸酯、三氟甲磺酸酯、甲磺酸酯、腈、疊氮化物、氨基甲酸酯、二硫化物、硫酯、硫醚和重氮化合物。術(shù)語(yǔ)“雙官能交聯(lián)劑”，“雙官能連接子”或“交聯(lián)劑”是指具有兩個(gè)反應(yīng)性基團(tuán)的修飾劑，其中一者能與細(xì)胞結(jié)合劑反應(yīng)，而另一者與細(xì)胞毒性化合物反應(yīng)以將兩部分連接在一起。此類雙官能交聯(lián)劑是本領(lǐng)域熟知的(參見(jiàn)，例如，isalmanddentinbioconjugation第5章，第218-363頁(yè)，grovesdictionariesinc.newyork,1999)。例如，能夠通過(guò)硫醚鍵連接的雙官能交聯(lián)劑包括n-琥珀酰亞胺基-4-(n-馬來(lái)酰亞胺甲基)環(huán)己烷-1-羧酸酯(smcc)引入馬來(lái)酰亞胺基，或用n-琥珀酰亞胺基-4-(碘代乙?；?-氨基苯甲酸酯(siab)引入碘乙?；ⅠR來(lái)酰亞胺基或鹵代乙?；胗诩?xì)胞結(jié)合劑的其它雙官能交聯(lián)劑是本領(lǐng)域熟知的(參見(jiàn)美國(guó)專利申請(qǐng)2008/0050310,20050169933，獲自piercebiotechnologyinc.,p.o.box117,rockland,il61105,usa)且包括但不限于雙-馬來(lái)酰亞胺聚乙二醇(bmpeo)、bm(peo)2、bm(peo)3、n-(β-馬來(lái)酰亞胺丙基氧基)琥珀酰亞胺酯(bmps)、γ-馬來(lái)酰亞胺丁酸n-琥珀酰亞胺酯(gmbs)、ε-馬來(lái)酰亞胺己酸n-羥基琥珀酰亞胺酯(emcs)、5-馬來(lái)酰亞胺戊酸nhs、hbvs、n-琥珀酰亞胺基-4-(n-馬來(lái)酰亞胺甲基)-環(huán)己烷-1-羧基-(6-酰氨基己酸酯)(其是smcc的“長(zhǎng)鏈”類似物(lc-smcc))、間馬來(lái)酰亞胺苯甲酰-n-羥基琥珀酰亞胺酯(mbs)、4-(4-n-馬來(lái)酰亞胺苯基)-丁酸酰肼或hcl鹽(mpbh)、3-(溴代乙酰胺基)丙酸-n-琥珀酰亞胺酯(sbap)、碘乙酸n-琥珀酰亞胺酯(sia)、κ-馬來(lái)酰胺基十一烷酸n-琥珀酰亞胺酯(kmua)、4-(對(duì)馬來(lái)酰亞胺基苯基)丁酸n-琥珀酰亞胺酯(smpb)、琥珀酰亞胺基-6-(β-馬來(lái)酰亞胺基丙酰胺基)己酸酯(smph)、琥珀酰亞胺基-(4-乙烯基磺酰基)苯甲酸酯(svsb)、二硫代雙-馬來(lái)酰亞胺乙烷(dtme)、1,4-雙-馬來(lái)酰亞胺丁烷(bmb)、1,4雙馬來(lái)酰亞胺基-2,3-二羥基丁烷(bmdb)、雙-馬來(lái)酰亞胺基己烷(bmh)、雙-馬來(lái)酰亞胺乙烷(bmoe)、4-(n-馬來(lái)酰亞胺甲基)環(huán)己烷-1-羧酸磺基琥珀酰亞胺酯(磺基-smcc)、(4-碘乙?；?氨基苯甲酸磺基琥珀酰亞胺酯(磺基-siab)、間-馬來(lái)酰亞胺苯甲酰-n-羥基磺基琥珀酰亞胺酯(磺基-mbs)、n-(γ-馬來(lái)酰亞胺丁基氧基)磺基琥珀酰亞胺酯(磺基-gmbs)、n-(ε-馬來(lái)酰亞胺乙酰氧基)磺基琥珀酰亞胺酯(磺基-emcs)、n-(κ-馬來(lái)酰亞胺十一酰氧基)磺基琥珀酰亞胺酯(磺基-kmus)和4-(對(duì)馬來(lái)酰亞胺基苯基)丁酸磺基琥珀酰亞胺酯(磺基-smpb)。異雙官能交聯(lián)劑是具有兩個(gè)不同反應(yīng)性基團(tuán)的雙官能交聯(lián)劑。含有胺反應(yīng)性n-羥基琥珀酰亞胺基團(tuán)(nhs基團(tuán))和羰基反應(yīng)性酰肼基團(tuán)的異雙官能交聯(lián)劑也可用于將本文描述的細(xì)胞毒性化合物與細(xì)胞結(jié)合劑(如，抗體)反應(yīng)。此類商業(yè)上可獲得的雜雙官能交聯(lián)劑的實(shí)例包括6-丙酮腙基煙酸琥珀酰亞胺酯(sanh)、4-酰肼對(duì)苯二酸琥珀酰亞胺酯鹽酸鹽(shth)和肼基煙酸琥珀酰亞胺酯鹽酸鹽(shnh)。具有對(duì)酸敏感連接的綴合物還可通過(guò)使用本發(fā)明的含肼的苯二氮類衍生物來(lái)制備。可使用的雙官能交聯(lián)劑的實(shí)例包括琥珀酰亞胺基-對(duì)甲?；郊姿狨?sfb)和琥珀酰亞胺基-對(duì)甲酰苯氧乙酸酯(sfpa)。能夠使細(xì)胞結(jié)合劑與細(xì)胞毒性化合物通過(guò)二硫鍵連接的雙官能交聯(lián)劑在本領(lǐng)域是已知的且包括n-琥珀酰亞胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(spdp)、n-琥珀酰亞胺基-4-(2-吡啶基二硫代)戊酸酯(spp)、n-琥珀酰亞胺基-4-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯(spdb)、n-琥珀酰亞胺基-4-(2-吡啶基二硫代)2-硫代丁酸酯(磺基-spdb)以引入二硫代吡啶基。其它可用于引入二硫基的雙官能交聯(lián)劑是本領(lǐng)域已知的且公開(kāi)于美國(guó)專利6,913,748、6,716,821和美國(guó)專利公布20090274713和20100129314中，其全部通過(guò)引用并入本文?？蛇x地，也可使用引入硫醇基的交聯(lián)劑，諸如2-亞氨基硫雜環(huán)戊烷、高半胱氨酸硫內(nèi)酯或s-乙酰琥珀酸酸酐。本文所定義的“連接子”、“連接子部分”或“連接基團(tuán)”是指將諸如細(xì)胞結(jié)合劑和細(xì)胞毒性化合物的兩部分連接在一起的部分。通常，連接子在連接兩個(gè)連接基團(tuán)的條件下基本上是惰性的。雙官能交聯(lián)劑可包含兩個(gè)反應(yīng)性基團(tuán)，在連接子部分的每個(gè)末端各一個(gè)，使得一個(gè)反應(yīng)性基團(tuán)可首先與細(xì)胞毒素化合物反應(yīng)以提供具有連接部分和第二反應(yīng)性基團(tuán)的化合物，該化合物隨后可與細(xì)胞結(jié)合劑反應(yīng)?？蛇x地，雙官能交聯(lián)劑的一端可首先與細(xì)胞結(jié)合劑反應(yīng)以提供具有連接子部分和第二反應(yīng)性基團(tuán)的細(xì)胞結(jié)合劑，其隨后可與細(xì)胞毒性化合物反應(yīng)。該連接部分可含有使細(xì)胞毒性部分在特定位點(diǎn)釋放的化學(xué)鍵。適合的化學(xué)鍵在本領(lǐng)域是眾所周知的且包括二硫鍵、硫醚鍵、對(duì)酸不穩(wěn)定的鍵、對(duì)光不穩(wěn)定的鍵、對(duì)肽酶不穩(wěn)定的鍵、以及對(duì)酯酶不穩(wěn)定的鍵(參見(jiàn)例如美國(guó)專利5,208,020、5,475,092、6,441,163、6,716,821、6,913,748、7,276,497、7,276,499、7,368,565、7,388,026和7,414,073)。優(yōu)選二硫鍵、硫醚、對(duì)肽酶不穩(wěn)定的鍵?？捎糜诒景l(fā)明的其它連接子包括非裂解性連接子，例如美國(guó)公開(kāi)第20050169933號(hào)中詳細(xì)描述中描述的那些，或帶電荷的連接子或親水性連接子并且描述于us2009/0274713、us2010/01293140和wo2009/134976，其各自通過(guò)引用明確地并入本文，其各自通過(guò)引用明確地并入本文。在一個(gè)實(shí)施方案中，在一端連接有反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)(諸如反應(yīng)性酯)選自下述：-o(cr20r21)m(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”、-o(cr20r21)m(cr26＝cr27)m’(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”、-o(cr20r21)m(炔基)n’(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”、-o(cr20r21)m(哌嗪子基)t’(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”、-o(cr20r21)m(吡咯并)t’(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”、-o(cr20r21)ma”m”(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”、-s(cr20r21)m(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”、-s(cr20r21)m(cr26＝cr27)m’(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”、-s(cr20r21)m(炔基)n’(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”、-s(cr20r21)m(哌嗪子基)t’(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”、-s(cr20r21)m(吡咯并)t’(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”、-s(cr20r21)ma”m”(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”、-nr33(c＝o)p”(cr20r21)m(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”-nr33(c＝o)p”(cr20r21)m(cr26＝cr27)m’(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”，-nr33(c＝o)p”(cr20r21)m(炔基)n’(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q-(co)tx”、-nr33(c＝o)p”(cr20r21)m(哌嗪子基)t’(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”，-nr33(c＝o)p”(cr20r21)m(吡咯并)t’(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q-(co)tx”、-nr33(c＝o)p”(cr20r21)ma”m”(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”，-(cr20r21)m(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”、-(cr20r21)m(cr26＝cr27)m’(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”、-(cr20r21)m(炔基)n’(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”、-(cr20r21)m(哌嗪子基)t’(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”、-(cr20r21)ma”m”(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx’’。-(cr20r21)m(cr29＝n-nr30)n”(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”、-(cr20r21)m(cr29＝n-nr30)n”(cr26＝cr27)m’(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”、-(cr20r21)m(cr29＝n-nr30)n”(炔基)n’(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q-(co)tx”、-(cr20r21)m(cr29＝n-nr30)n”a”m”(cr22r23)n(och2ch2)p(cr40r41)p”y”(cr24r25)q(co)tx”，其中：m、n、p、q、m’、n’、t’是1至10的整數(shù)，或任選地是0；t、m”、n”和p”是0或1；x”選自or36、sr37、nr38r39，其中r36、r37、r38、r39是h，或具有1至20個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基和，或聚乙二醇單元–(och2ch2)n，r37任選地是硫醇基保護(hù)基。當(dāng)t＝1時(shí)，cox”形成選自以下的反應(yīng)性酯：n-羥基琥珀酰亞胺酯、n-羥基鄰苯二甲酰亞胺酯、n-羥基磺基琥珀酰亞胺酯、對(duì)硝基苯基酯、二硝基苯基酯、五氟苯基酯及其衍生物，其中所述衍生物促進(jìn)酰胺鍵的形成；y”不存在或選自o、s、s-s或nr32，其中r32具有上述r給出的相同的定義，或當(dāng)y”不是s-s”且t＝0時(shí)，x”選自馬來(lái)酰亞胺基或鹵代乙酰基或sr37，其中r37具有上述相同的定義；a”是選自甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、纈氨酸、賴氨酸、瓜氨酸和谷氨酸的氨基酸或含有2至20個(gè)氨基酸單元的多肽。r20、r21、r22、r23、r24、r25、r26和r27相同或不同且是-h或具有1至5個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基。r29和r30相同或不同且是-h或1至5個(gè)碳原子的烷基。r33是-h或具有1至12個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元r–(och2ch2)n-，或r33是-cor34、-csr34、-sor34，或-so2r34，其中r34是h或具有1至20個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基、或聚乙二醇單元-(och2ch2)n；且r40和r41中的一者任選地是帶負(fù)或正電荷的官能團(tuán)而另一者是h或具有1至4個(gè)碳原子的烷基、烯基、炔基。上述連接基團(tuán)中的任一者可存在于本發(fā)明化合物、藥物-連接子化合物或綴合物中的任一者，包括取代本文所述式中任一者的連接基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“氨基酸”是指天然存在的氨基酸或由nh2-c(raa’raa)-c(＝o)oh表示的非天然存在的氨基酸，其中raa和raa’各自獨(dú)立為h，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，芳基，雜芳基或雜環(huán)基。術(shù)語(yǔ)“氨基酸”還指當(dāng)從胺和/或氨基酸的羧基末端去除一個(gè)氫原子時(shí)相應(yīng)的殘基，諸如-nh-c(raa’raa)-c(＝o)o-。術(shù)語(yǔ)“陽(yáng)離子”是指帶正電荷的離子。陽(yáng)離子可以是單價(jià)的(如，na+、k+、等)，二價(jià)的(如，ca2+、mg2+、等)或多價(jià)的(如，al3+等)。優(yōu)選地，陽(yáng)離子是單價(jià)的。術(shù)語(yǔ)“治療上的有效量”意指引發(fā)受試者中所需的生物反應(yīng)的活性化合物或綴合物的量。與沒(méi)有治療或預(yù)防、抑制或延緩疾病病癥或疾病本身的進(jìn)展相比，此類反應(yīng)包括緩解正在治療的疾病或病癥的癥狀，預(yù)防、抑制或延緩疾病的病癥的復(fù)發(fā)或疾病本身，增加受試者的壽命。特別地根據(jù)本文提供的詳細(xì)公開(kāi)內(nèi)容，有效量的確定完全在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)?；衔飅的毒性和治療效應(yīng)可通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)物和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中的標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)方法來(lái)確定。本發(fā)明的化合物或綴合物或待施用于受試者的其它治療劑的有效量將取決于受試者多發(fā)性骨髓瘤的階段、種類和狀態(tài)及受試者的特征，諸如一般健康、年齡、性別、體重和藥物耐受性。本發(fā)明的化合物或綴合物或待施用的其它治療劑的有效量也將取決于施用途徑和劑型?？蓡为?dú)調(diào)整劑量和間隔以提供足以維持所需的治療效應(yīng)的血漿水平的活性化合物。細(xì)胞毒性化合物本發(fā)明涉及本文描述的細(xì)胞毒性化合物(如，式(i)、(ii)、(iii)和(iv)的化合物)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的細(xì)胞毒性化合物不包括描述于美國(guó)2010/0203007中的任何化合物(其全部教導(dǎo)通過(guò)引用并入本文)，諸如在下文附帶條件中明確放棄的那些。在第一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的能夠?qū)⑺黾?xì)胞毒性化合物共價(jià)連接于細(xì)胞結(jié)合劑(cba)的連接基團(tuán)的細(xì)胞毒性化合物，其中所述細(xì)胞毒性化合物由下式(i)、(ii)、(iii)或(iv)中的任一者：或其藥學(xué)上可接受的鹽表示，其中：n和c之間的雙線表示單鍵或雙鍵，條件當(dāng)它是雙鍵時(shí)，x不存在且y是-h、或具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基，而當(dāng)其是單鍵時(shí)，x是-h，具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)或氨基保護(hù)部分；優(yōu)選地，n和c之間的雙線表示雙鍵；y是-h或離去基團(tuán)，其選自-or、-ocor’、-ocoor’、-oconr’r”、-nr’r”、-nr’cor”、-nr’nr’r”，任選取代的5或6元含氮雜環(huán)(如，哌啶、四氫吡咯、吡唑、嗎啉等)，由-nr’(c＝nh)nr’r”表示的胍基，氨基酸，或由-nrcop’表示的肽，其中p’是氨基酸或含有2至20個(gè)氨基酸單元的多肽、-sr、-sor’、-so2m、-so3m、-oso3m、鹵素、氰基和疊氮基，其中m是-h或陽(yáng)離子；諸如na+或k+。優(yōu)選地，m是-h或na+。優(yōu)選地，y選自-so3m、-oh、-ome、-oet或-nhoh。更優(yōu)選地，y是-so3m或-oh；或，y為亞硫酸鹽(hso3、hso2或與陽(yáng)離子形成的hso3-、so32-或hso2-的鹽)，偏亞硫酸氫鹽(h2s2o5或與陽(yáng)離子形成的s2o52-的鹽)，單、二、三和四硫代磷酸鹽(po3sh3、po2s2h2、pos3h2、ps4h2或與陽(yáng)離子形成的po3s3-、po2s23-、pos33-或ps43-的鹽)，硫代磷酸酯(rio)2ps(ori)、ris-、riso、riso2、riso3，硫代硫酸鹽(hs2o3或與陽(yáng)離子形成的s2o32-的鹽)，連二亞硫酸鹽(hs2o4或與陽(yáng)離子形成的s2o42-的鹽),二硫代磷酸鹽(p(＝s)(ork’)(s)(oh)或其與陽(yáng)離子形成的鹽)，異羥肟酸(rk’c(＝o)noh或與陽(yáng)離子形成的鹽)，甲醛次硫酸氫鹽(hoch2so2-或與陽(yáng)離子形成的hoch2so2-的鹽，諸如hoch2so2-na+)或其混合物，其中ri是具有1至10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基且被選自-n(rj)2、-co2h、-so3h和-po3h中的至少一個(gè)取代基取代；ri可進(jìn)一步任選地被本文所述的烷基取代基取代；rj是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；rk’是具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，芳基，雜環(huán)基或雜芳基；優(yōu)選地，y是亞硫酸氫鹽、次硫酸鹽、或偏亞硫酸氫鹽或其鹽(諸如鈉鹽)的加合物；每次出現(xiàn)時(shí)，r獨(dú)立地選自-h，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(ch2ch2o)n-rc，任選取代的具有6至18個(gè)碳原子的芳基，任選取代的含有一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自氮、氧和硫的雜原子的5至18元雜芳基環(huán)，或任選取代的含有1至6個(gè)獨(dú)立地選自o、s、n和p的雜原子的3至18元雜環(huán)；r’和r”相同或不同，且獨(dú)立地選自-h，-oh，-or，-nhr，-nr2，-cor，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(ch2ch2o)n-rc，和任選取代的具有1至6個(gè)獨(dú)立地選自o、s、n和p的雜原子的3至18元雜環(huán)；rc是-h或具有1至4個(gè)碳原子的取代或未取代的直鏈或支鏈的烷基，或具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)；n是1至24的整數(shù)；w選自c＝o、c＝s、ch2、bh、so和so2；x’選自-h，-oh，氨基保護(hù)基，具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(ch2ch2o)n-rc，任選取代的具有6至18個(gè)碳原子(如，苯基)的芳基，任選取代的含有一個(gè)或多個(gè)雜原子獨(dú)立地選自氮、氧和硫雜原子的5至18元雜芳環(huán)和任選取代的含有1至6個(gè)獨(dú)立地選自o、s、n和p的雜原子的3至18元雜環(huán)。優(yōu)選地，x’是-h、-oh、-me或具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)。更優(yōu)選地，x’是-h；y’選自-h、氧代基團(tuán)、具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)、任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，任選取代的6至18元芳基，任選取代的含有一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自氮、氧和硫的雜原子的5至18元雜芳基環(huán)，任選取代的具有1至6個(gè)雜原子的3至18元雜環(huán)；優(yōu)選地，y’選自-h或氧代。更優(yōu)選地，y’是-h；r1、r2、r3、r4、r1’、r2’、r3’和r4’各自獨(dú)立地選自-h，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(och2ch2)n-rc，鹵素，胍基[-nh(c＝nh)nh2]，-or，-nr’r”，-no2，-nco，-nr’cor”，-sr，由-sor’所表示的亞砜，由-so2r’所表示的砜，磺酸鹽-so3-m+，硫酸鹽-oso3-m+，由-so2nr’r”所表示的磺酰胺，氰基，疊氮基，-cor’，-ocor’，-oconr’r”和具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)。優(yōu)選地，r2、r3、r2’和r3’中的一者是具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)且其余的是-h；r6是-h、-r、-or、-sr、-nr’r”、-no2、鹵素、具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)、-orc或-src，其中rc是-h、具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基。優(yōu)選地，r6是-ome或-sme。甚至更優(yōu)選地，r6是-ome；z和z’獨(dú)立地選自-(ch2)n’-、-(ch2)n’-cr7r8-(ch2)na’-、-(ch2)n’-nr9-(ch2)na’-、-(ch2)n’-o-(ch2)na’-和-(ch2)n’–s-(ch2)na’-；n’和na’相同或不同，且選自0、1、2和3；r7和r8相同或不同，且各自獨(dú)立地選自-h，-oh，-sh，-cooh，-nhr’，聚乙二醇單元-(och2ch2)n-，氨基酸，具有2至6個(gè)氨基酸的肽單元，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基；r9獨(dú)立地選自-h，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基，聚乙二醇單元-(och2ch2)n-；a和a’相同或不同，且獨(dú)立地選自-o-、氧代(-c(＝o)-)、-crr’o-、-crr’-、-s-、-crr’s-、-n(r5)-和-crr’n(r5)-。優(yōu)選地，a和a’相同或不同，且選自-o-和-s-。更優(yōu)選地，a和a’是-o-；每次出現(xiàn)時(shí)，r5獨(dú)立地為-h或任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；d和d’相同或不同，且獨(dú)立地不存在或選自氨基酸、具有2至6個(gè)氨基酸的肽，和聚乙二醇單元(-och2ch2)n-，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，其中烷基、烯基和炔基被一個(gè)或更多(如，2、3、4、5、6或更多個(gè))獨(dú)立地選自鹵素、-or、-nr’cor”、-sr和-cor’的取代基取代；優(yōu)選地，d和d’相同或不同，且獨(dú)立地選自具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基。更優(yōu)選地，d和d’是具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基。更優(yōu)選地，d和d’相同或不同，且選自具有1至4個(gè)碳原子的直鏈烷基。l不存在，為具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)，聚乙二醇單元(-och2ch2)n-，具有1至10個(gè)碳原子(如，1-6個(gè)碳原子)的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基或烯基，苯基，具有1至6個(gè)獨(dú)立選自o、s、n和p的雜原子的3至18元雜環(huán)或5至18元雜芳基環(huán)，其中所述烷基、烯基任選被具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)取代；苯基或雜環(huán)或雜芳基環(huán)可任選被取代，其中所述取代基可以是具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)。在某些實(shí)施方案中，x不是具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)。在某些實(shí)施方案中，n和c之間的雙線表示單鍵，y不是-h。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的細(xì)胞毒性化合物不是下列化合物中的任一者：在某些實(shí)施方案中，y是-h或離去基團(tuán)，其選自-or、-ocor’、-ocoor’、-oconr’r”、-nr’r”、-nr’cor”、-nr’nr’r”，任選取代的5或6元含氮雜環(huán)(如，哌啶、四氫吡咯、吡唑、嗎啉等)，由-nr’(c＝nh)nr’r”表示的胍基，氨基酸，或由-nrcop’表示的肽，其中p’是氨基酸或含有2至20個(gè)氨基酸單元的多肽、-sr、-sor’、-so2m、-so3m、-oso3m、鹵素、氰基和疊氮基。優(yōu)選地，y是亞硫酸氫鈉加合物、連二亞硫酸鈉加合物，或焦亞硫酸鈉加合物。在某些實(shí)施方案中，y不是-h。在某些實(shí)施方案中，l不存在或選自任選取代的苯基和任選取代的吡啶基，其中苯基和吡啶基任選具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)，或l是具有連接基團(tuán)的氨基(即，-n(連接基)-)，所述連接基團(tuán)具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)，或l是具有1至6個(gè)碳原子且具有連接基團(tuán)的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基或烯基，所述連接基團(tuán)具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)。在第二具體實(shí)施方案中，對(duì)于細(xì)胞毒性二聚體(i)、(ii)、(iii)和(iv)，變量如下所述：n和c之間的雙線表示雙鍵；y是-h；w是c＝o；r1、r2、r1’、r2’、r4和r4’是-h；r3或r3’中的一者任選為連接基團(tuán)，而另一者是-h；r6是-ome；z和z’是-ch2-；x’是-h；y’是-h；a和a’是-o-；且剩余的變量如第一具體實(shí)施方案所述。在第三具體實(shí)施方案中，式(i)、(ii)、(iii)和(iv)的細(xì)胞毒性二聚體由下式表示：其中：n和c之間的雙線表示單鍵或雙鍵，條件是當(dāng)其是雙鍵時(shí)，x不存在且y是-h，而當(dāng)其是單鍵時(shí)，x選自-h或具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)或氨基保護(hù)基(優(yōu)選地x是-h)；y選自-h、-or、-ocor’、-sr、-nr’r”、-so3m、-so2m或-oso3m，其中m是-h或陽(yáng)離子，諸如na+、k+。優(yōu)選地，y選自-oh、-ome、-oet、-nhoh或-so3m。甚至更優(yōu)選地，y是-oh或-so3m，優(yōu)選地m是-h或na+；r是-h、任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，或peg基團(tuán)-(ch2ch2o)n-rc，其中n是1至24的整數(shù)，且rc是具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；r’和r”相同或不同，且選自-h，-oh，-or，-nrrg’，-cor，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，具有6至18個(gè)碳原子的任選取代的芳基，選自o、s、n和p具有1至6個(gè)雜原子的3至18元任選取代的雜環(huán)，peg基團(tuán)-(ch2ch2o)n-rc，其中n是1至24的整數(shù)，優(yōu)選地n是2、4或8；且rg’是-h，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基或peg基團(tuán)-(ch2ch2o)n-rc；x’選自-h，-oh，具有1至10個(gè)碳原子的取代或未取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，苯基，以及氨基保護(hù)基。優(yōu)選地，x’是-h、-oh或-me。更優(yōu)選地，x’是-h；y’選自-h，氧代基團(tuán)，具有1至10個(gè)碳原子的取代或未取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基。優(yōu)選地，y’選自-h或-me。更優(yōu)選地，y’是-h；r6是-orc或-src，其中rc是具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基。優(yōu)選地，r6是-ome或-sme。甚至更優(yōu)選地，r6是-ome；a和a’選自-o-和-s-。優(yōu)選地，a和a’是-o-；l’、l”和l”’相同或不同，且獨(dú)立地選自-h、具有1至10個(gè)碳原子的任選取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(och2ch2)n-rc，鹵素，胍基[-nh(c＝nh)nh2]，-or，-nr’r”，-no2，-nr’cor”，-sr，由-sor’表示的亞砜，由-so2r’表示的砜，磺酸鹽-so3-m+，硫酸鹽-oso3+m-，由so2nr’r”表示的磺酰胺，氰基，疊氮基，-cor’，-ocor’，-oconr’r”和具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)，條件是l’、l”和l”’中僅一者是具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)；優(yōu)選地，l’是具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)?？蛇x地，l’、l”或l”’中的一者為具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)，而其它為-h的連接基團(tuán)。更優(yōu)選地，l’是具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)，而l”和l”’均是-h；g選自-ch-或-n-；而其余的變量如第一具體實(shí)施方案所述。在某些實(shí)施方案中，x不是具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)。在某些實(shí)施方案中，n和c之間的雙線表示單鍵，y不是-h。在某些實(shí)施方案中，a和a’均是-o-；r6是-ome，且g是-ch-。在第四具體實(shí)施方案中，對(duì)于式(ia)、(iia)、(iiia)或(iva)的細(xì)胞毒性二聚體，l’由下式表示：-w’-rx-v-ry-j，其中：w’和v相同或不同，且各自獨(dú)立地不存在或選自-crere’-、-o-、-o-c(＝o)-、-c(＝o)-o-、-s-、-so-、-so2-、-ch2-s-、-ch2o-、-ch2nre-、-o-(c＝o)o-、-o-(c＝o)n(re)-、-n(re)-、-n(re)-c(＝o)-、-c(＝o)-n(re)-、-n(re)-c(＝o)o-、-n(c(＝o)re)c(＝o)-、-n(c(＝o)re)-、-(o-ch2-ch2)n-、-ss-或-c(＝o)-或氨基酸，或具有2至8個(gè)氨基酸的肽；rx和ry相同或不同，且各自獨(dú)立地不存在或者是具有1至10個(gè)碳原子的任選取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，具有6至10個(gè)碳原子的芳基或具有1至3個(gè)選自o、n或s的雜原子的3至8元雜環(huán)；re和re’相同或不同，且選自-h，具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基或-(ch2-ch2-o)n-rk，其中rk是-h，具有1至6個(gè)碳原子的直鏈、支鏈的環(huán)狀的烷基，任選地具有仲氨基(如，-nhr101)或叔氨基(-nr101r102)基團(tuán)或5或6元含氮雜環(huán)，如哌啶或嗎啉，其中r101和r102各自獨(dú)立地為具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基。優(yōu)選地，r101和r102各自獨(dú)立地為具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；n是1至24的整數(shù)；且j包含鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)，且選自馬來(lái)酰亞胺、鹵代乙酰氨基、-sh、-ssrd、-ch2sh、-ch(me)sh、-c(me)2sh、-nhrc1、-ch2nhrc1、-nrc1nh2、-cooh和-coe，其中-coe表示反應(yīng)性酯，其選自但不限于n-羥基琥珀酰亞胺酯、n-羥基磺基琥珀酰亞胺酯、硝基苯基(如，2或4-硝基苯基)酯、二硝基苯基(如，2,4-二硝基苯基)酯、磺基-四氟苯基(如，4-磺基-2,3,5,6-四氟苯基)酯和五氟苯基酯，且其中rc1是-h或具有1至4個(gè)碳原子的取代或未取代的直鏈或支鏈的烷基，且，rd選自苯基、硝基苯基(如，2或4-硝基苯基)、二硝基苯基(如，2或4-硝基苯基)、羧基硝基苯基(如，3-羧基-4-硝基苯基)、吡啶基或硝基吡啶基(如，4-硝基吡啶基)。在某些實(shí)施方案中，j是-sh、-ssrd、馬來(lái)酰亞胺或n-羥基琥珀酰亞胺酯。在某些實(shí)施方案中，re’是-h或-me；re是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基或-(ch2-ch2-o)n-rk；n是2至8的整數(shù)，且rk是-h、-me或-ch2ch2-nme2，而其余的變量如在上文第四具體實(shí)施方案中所述。在某些實(shí)施方案中，v是氨基酸或具有2至8個(gè)氨基酸的肽。在某些實(shí)施方案中，v是纈氨酸-瓜氨酸、gly-gly-gly或ala-leu-ala-leu。在某些實(shí)施方案中，w’是-o-、-n(re)-或-n(re)-c(＝o)-；re是h、具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基或-(ch2-ch2-o)n-rk；rx是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；v不存在、-(o-ch2-ch2)n-、-c(＝o)-nh-、-s-、-nh-c(＝o)-；ry不存在或者是具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；且j是-sh、-ssrd或-coe(優(yōu)選地，n-羥基琥珀酰亞胺酯)。剩余的變量如第四具體實(shí)施方案所述。在某些實(shí)施方案中，w’是-o-、-n(re)-或-n(re)-c(＝o)-；re是h、me或-(ch2-ch2-o)n-me；n是2至6的整數(shù)；rx是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；v和ry不存在；且j為-coe，優(yōu)選n-羥基琥珀酰亞胺酯。剩余的變量如第四具體實(shí)施方案所述。在第五具體實(shí)施方案中，l’由下式表示：-w’-[cr1”r2”]a-v-[cy]0-1-[cr3”r4”]b-coe，其中：r1”、r2”和r3”各自獨(dú)立地為-h或具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基，優(yōu)選為-me；r4”是-h、具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基(優(yōu)選-me)、-so3h或-so3-m+，其中m+是藥學(xué)上可接受的陽(yáng)離子；a是0-5(如，從0至2、3、4或5)的整數(shù)，且b是0-6(如，從0至3、4、5或6)的整數(shù)；且cy是具有n雜原子的任選取代的5元雜環(huán)，優(yōu)選地cy是在某些實(shí)施方案中，w’是-n(re)-。在某些實(shí)施方案中，諸如在第四或第五具體實(shí)施方案中，re是-(ch2-ch2-o)2-6-rk，其中rk是-h，具有1至6個(gè)碳原子的直鏈、支鏈環(huán)狀的烷基。在某些實(shí)施方案中，諸如在第四和/或第五具體實(shí)施方案中，v是-s-或-ss-。在第六具體實(shí)施方案中，諸如在第四和第五具體實(shí)施方案中，l’由下式表示：-nre-[cr1”r2”]a-s-[cr3”r4”]b-coe。在某些實(shí)施方案中，化合物是下式的任一個(gè)：其中y是-h或-so3m；且m是-h或藥學(xué)上可接受的陽(yáng)離子。在某些實(shí)施方案中，y’是-so3m。在第七具體實(shí)施方案中，諸如在第四和/或第五具體實(shí)施方案中，l’由下式表示：-nre-[cr1”r2”]a-s-cy-[cr3”r4”]b-coe。在某些實(shí)施方案中，化合物是下式中的任一者：其中y是-h或-so3m；且m是-h或藥學(xué)上可接受的陽(yáng)離子。在某些實(shí)施方案中，y’是-so3m。在第八具體實(shí)施方案中，式(i)、(ii)、(iii)和(iv)的細(xì)胞毒性二聚體由下式表示：其中：w’不存在或選自-o-、-n(re)-、-n(re)-c(＝o)-、-n(c(＝o)re)-、-s-或-ch2-s-、-ch2nre-；rx不存在或選自具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基；re是-h，具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基或-(ch2-ch2-o)n-rk，其中rk是-h，具有1至6個(gè)碳原子的直鏈、支鏈環(huán)狀的烷基，任選地具有仲氨基(如，-nhr101)或叔氨基(-nr101r102)基團(tuán)或5或6元含氮雜環(huán)，如哌啶或嗎啉，其中r101和r102各自獨(dú)立地為具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基。優(yōu)選地，r101和r102各自獨(dú)立地為具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；zs是-h、-srm；rm是rd或具有1至4個(gè)碳原子的取代或未取代的具有反應(yīng)性酯的直鏈或支鏈的烷基，所述反應(yīng)性酯選自n-羥基琥珀酰亞胺酯、n-羥基鄰苯二甲酰亞胺酯、n-羥基磺基琥珀酰亞胺酯、對(duì)硝基苯基酯、二硝基苯基酯、五氟苯酯；rd選自苯基、硝基苯基、二硝基苯基、羧基硝基苯基、吡啶基或硝基吡啶基；且n是1至24的整數(shù)，且剩余的變量如上文第三具體實(shí)施方案所述。優(yōu)選地，rk是-h或-me且n是2至8的整數(shù)。優(yōu)選地，rx是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；且剩余的變量如上文第三、第四和/或第五具體實(shí)施方案所述。在第九具體實(shí)施方案中，式(i)、(ii)、(iii)和(iv)的細(xì)胞毒性二聚體由下式表示：其中：n和c之間的雙線表示單鍵或雙鍵，條件是當(dāng)其是雙鍵時(shí)，x不存在且y是-h，而當(dāng)其是單鍵時(shí)，x選自-h或具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)或氨基保護(hù)基(優(yōu)選地x是-h或氨基保護(hù)基；更優(yōu)選地，x是-h)；y選自-h、-or、-ocor’、-sr、-nr’r,”、-so3m、-so2m或-oso3m(如，y是-or、-ocor’、-sr、-nr’r”、-so3m、-so2m或-oso3m)，其中m是-h或陽(yáng)離子，諸如na+或k+；r是-h、任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，或peg基團(tuán)-(ch2ch2o)n-rc，其中n是1至24的整數(shù)，且rc是具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；r’和r”相同或不同，且選自-h，-oh，-or，-nrrg’，-cor，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，具有6至18個(gè)碳原子的任選取代的芳基，選自o、s、n和p具有1至6個(gè)雜原子的3至18元任選取代的雜環(huán)，peg基團(tuán)-(ch2ch2o)n-rc，其中n是1至24的整數(shù)，優(yōu)選地n是2、4或8；且rg’是-h，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基或peg基團(tuán)-(ch2ch2o)n-rc；x’選自-h，-oh，具有1至10個(gè)碳原子的取代或未取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，苯基，以及氨基保護(hù)基；y’選自-h，氧代基團(tuán)，具有1至10個(gè)碳原子的取代或未取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基；a和a’選自-o-和-s-；w’不存在或選自-o-、-n(re)-、-n(re)-c(＝o)-、-n(c(＝o)re)-、-s-或-ch2-s-、-ch2nre-；rx不存在或選自具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基；re是-h，具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基或-(ch2-ch2-o)n-rk，其中rk是-h，具有1至6個(gè)碳原子的直鏈、支鏈環(huán)狀的烷基，任選地具有仲氨基(如，-nhr101)或叔氨基(-nr101r102)基團(tuán)或5或6元含氮雜環(huán)，如哌啶或嗎啉，其中r101和r102各自獨(dú)立地為具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基；g選自-ch-或-n-；zs是-h，或選自下式中的任一者：其中：q是1至5的整數(shù)；n是2至6的整數(shù)；d是-h或-so3m；m是-h或陽(yáng)離子，諸如na+或k+。在某些實(shí)施方案中，zs由下式中的任一者表示：在某些實(shí)施方案中，w’是-n(re)-。在某些實(shí)施方案中，re是-(ch2-ch2-o)n-rk，其中rk是-h、具有1至6個(gè)碳原子的直鏈、支鏈環(huán)狀的烷基。在某些實(shí)施方案中，rk是-h或-me，n是4，且q是2。在某些實(shí)施方案中，rx是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基。在某些實(shí)施方案中，rx是-(ch2)p-(crfrg)-，其中rf和rg各自獨(dú)立地選自h或具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；且p是0、1、2或3。在某些實(shí)施方案中，rf和rg相同或不同，且選自-h和-me；且p是1。在第十具體實(shí)施方案中，在第九具體實(shí)施方案中所述的式(viii)、(ix)、(x)和(xi)的化合物，變量如下所述：n和c之間的雙線表示單鍵或雙鍵，條件是當(dāng)其是雙鍵時(shí)，x不存在且y是-h，當(dāng)其是單鍵時(shí)，x是-h；y是-h、-oh或-so3m；m是-h或藥學(xué)上可接受的陽(yáng)離子(如，na+)；x’和y’均是-h；a和a’均是-o-；r6是-ome；且rx是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基。在相關(guān)實(shí)施方案中，y是-oh或-so3m。在另一實(shí)施方案中，在第九具體實(shí)施方案中所述的式(viii)、(ix)、(x)和(xi)的化合物，變量如下所述：w’是-o-，-n(re)-、-n(re)-c(＝o)-、-n(core)-、-s-或-ch2-s-；rx不存在或選自具有1至6個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基；re是-h，具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基或-(ch2-ch2-o)n-rk，其中rk是-h，具有1至6個(gè)碳原子直鏈、支鏈環(huán)狀的烷基，任選地具有伯、仲或叔氨基或5或6元含氮雜環(huán)，諸如哌啶或嗎啉；n是1至24的整數(shù)，且剩余的變量如上文第九具體實(shí)施方案所述。優(yōu)選地，rk是-h或-me且n是2至8的整數(shù)。優(yōu)選地，rx是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基。優(yōu)選地，rx是-(ch2)p-(crfrg)-，其中rf和rg各自獨(dú)立地選自h或具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；p是0、1、2或3。更優(yōu)選地，rf和rg相同或不同，且選自-h和-me；且p是1。在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，連接子由選自上文所示的式(a1)、(a4)、(a5)、(a10)和(a11)的任一者表示；且剩余的變量如上文第十具體實(shí)施方案所述。在第十一具體實(shí)施方案中，在第八具體實(shí)施方案中所述的式(ib)、(iib)、(iiib)和(ivb)的化合物，變量如下所述：n和c之間的雙線表示單鍵或雙鍵，條件是當(dāng)其是雙鍵時(shí)，x不存在且y是-h，而當(dāng)其是單鍵時(shí)，x是-h；y是-h、-oh或-so3m(如，y是-oh或-so3m)；m是-h或na+；x’和y’均是-h；a和a’均是-o-；r6是-ome；rx是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；且剩余的變量如上文第三、第四、或第五具體實(shí)施方案所述。優(yōu)選地，rx是-(ch2)p-(crfrg)-，其中rf和rg各自獨(dú)立地選自h或具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；p是0、1、2或3。更優(yōu)選地，rf和rg相同或不同，且選自-h和-me；且p是1。在上文任一具體實(shí)施方案中(如，第1至第11具體實(shí)施方案中)，n和c之間的雙線可表示雙鍵。在上文任一具體實(shí)施方案中(如，第1至第11具體實(shí)施方案中)，n和c之間的雙線可表示單鍵，x是-h，具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)，或氨基保護(hù)基(如，x是-h或氨基保護(hù)基)；且y選自-h、-or、-ocor’、-sr、-nr’r”、任選取代的5或6元含氮雜環(huán)、-so3m、-so2m和-oso3m硫酸鹽(如，y是-or、-ocor’、-sr、-nr’r”、任選取代的5或6元含氮雜環(huán)、-so3m、-so2m和硫酸鹽-oso3m)。在某些實(shí)施方案中，y選自-h、-so3m、-oh、-ome、-oet或-nhoh(如，y是-so3m、-oh、-ome、-oet或-nhoh)。在某些實(shí)施方案中，y是-h、-so3m或-oh(如，y是-so3m或-oh)。在某些實(shí)施方案中，m是-h、na+或k+。在上文任一具體實(shí)施方案中(如，第1至第11具體實(shí)施方案中)，w當(dāng)存在時(shí)是c＝o。在上文任一具體實(shí)施方案中(如，第1至到第11具體實(shí)施方案中)，z和z′當(dāng)存在時(shí)是-ch2。在上文任一具體實(shí)施方案中(如，第1至到第11具體實(shí)施方案中)，x’選自-h，-oh，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，苯基，具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)和氨基保護(hù)基。在某些實(shí)施方案中，x’是-h、-oh、-me或具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)。在某些實(shí)施方案中，x’是-h。在上文任一具體實(shí)施方案中(如，第1至第11具體實(shí)施方案中)，y’選自-h，氧代基團(tuán)，具有1至10個(gè)碳原子的取代或未取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基。在某些實(shí)施方案中，y’是-h或氧代。在某些實(shí)施方案中，y’是-h。在上文任一具體實(shí)施方案中(如，第1至第11具體實(shí)施方案中)，a和a’相同或不同，且選自o、s、nr5和氧代(c＝o)。a和a’相同或不同，且選自-o-和-s-。優(yōu)選地，a和a’兩者是-o-。在上文任一具體實(shí)施方案中(如，第1至第11具體實(shí)施方案中)，d和d’當(dāng)存在時(shí)相同或不同，且獨(dú)立地選自聚乙二醇單元(-och2ch2)n，其中n是1至24的整數(shù)，氨基酸，具有2至6個(gè)氨基酸的肽，具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，其中所述烷基、烯基和炔基任選被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、-or、-nr’cor”、-sr和-cor’的取代基取代。優(yōu)選地，d和d’是具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基。在第十二實(shí)施方案中，本發(fā)明的第一、第三和第九實(shí)施方案中所述的細(xì)胞毒化合物由下式表示：n和c之間的雙線表示雙鍵；y是-h；w是c＝o；r1、r2、r1’、r2’、r4和r4’是-h；r3或r3’中的一者任選為具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)且另一者是-h；r6是-ome；z和z’是-ch2；x’是-h；y’是-h；且a和a’是-o-。在第十三實(shí)施方案中，本發(fā)明的細(xì)胞毒化合物是：或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物29b可用于本文所述的本發(fā)明的方法。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，化合物29b可用于治療增殖性病癥，諸如癌癥。在另一實(shí)施方案中，化合物29b可用于篩選細(xì)胞系以鑒定對(duì)苯并二氮雜化合物，諸如本文所述的苯并二氮雜衍生物，敏感的細(xì)胞系。藥物化合物&藥物-連接子化合物。上文所述的細(xì)胞毒化合物包含具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接基團(tuán)，該化合物可引起雙官能交聯(lián)劑與“無(wú)連接子”的化合物反應(yīng)以形成所謂的藥物-連接子化合物。或者，在其它方面與藥物-連接子化合物相同，但沒(méi)有連接子部分的藥物化合物也包含在本發(fā)明內(nèi)。因此，在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供沒(méi)有連接基團(tuán)但能夠與雙官能交聯(lián)劑反應(yīng)的細(xì)胞毒性化合物以形成本發(fā)明的化合物(諸如上述第1至第12具體實(shí)施方案中的任一者)；或以形成本發(fā)明的細(xì)胞結(jié)合劑綴合物(諸如下文所述的那些)。本發(fā)明示例性的無(wú)連接子細(xì)胞毒性化合物包括上文第13具體實(shí)施方案的化合物29b。本發(fā)明的無(wú)連接子細(xì)胞毒性化合物由下式(i’)、(ii’)、(iii’)或(iv’)中的任一者：或其藥學(xué)上可接受的鹽表示，其中：n和c之間的雙線表示單鍵或雙鍵，條件是當(dāng)其是雙鍵時(shí)，x不存在且y是-h、或具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基，而當(dāng)其是單鍵，x是-h，或氨基保護(hù)部分；優(yōu)選地，n和c之間的雙線表示雙鍵；y是-h或離去基團(tuán)，其選自-or、-ocor’、-ocoor’、-oconr’r”、-nr’r”、-nr’cor”、-nr’nr’r”，任選取代的5或6元含氮雜環(huán)(如，哌啶、四氫吡咯、吡唑、嗎啉等)，由-nr’(c＝nh)nr’r”表示的胍基，氨基酸，或由-nrcop’表示的肽，其中p’是氨基酸或含有2至20個(gè)氨基酸單元的多肽、-sr、-sor’、-so2m、-so3m、-oso3m、鹵素、氰基和疊氮基，其中m是-h或陽(yáng)離子；諸如na+或k+。優(yōu)選地，m是-h或na+。優(yōu)選地，y選自-so3m、-oh、-ome、-oet或-nhoh。更優(yōu)選地，y是-so3m或-oh；或，y為亞硫酸鹽(hso3、hso2或與陽(yáng)離子形成的hso3-、so32-或hso2-的鹽)，偏亞硫酸氫鹽(h2s2o5或與陽(yáng)離子形成的s2o52-的鹽)，單、二、三和四硫代磷酸鹽(po3sh3、po2s2h2、pos3h2、ps4h2或與陽(yáng)離子形成的po3s3-、po2s23-、pos33-或ps43-的鹽)，硫代磷酸酯(rio)2ps(ori)、ris-、riso、riso2、riso3，硫代硫酸鹽(hs2o3或與陽(yáng)離子形成的s2o32-的鹽)，連二亞硫酸鹽(hs2o4或與陽(yáng)離子形成的s2o42-的鹽),二硫代磷酸鹽(p(＝s)(ork’)(s)(oh)或其與陽(yáng)離子形成的鹽)，異羥肟酸(rk’c(＝o)noh或與陽(yáng)離子形成的鹽)，甲醛次硫酸氫鹽(hoch2so2-或與陽(yáng)離子形成的hoch2so2-的鹽，諸如hoch2so2-na+)或其混合物，其中ri是具有1至10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基且被選自-n(rj)2、-co2h、-so3h和-po3h中的至少一個(gè)取代基取代；ri可進(jìn)一步任選地被本文所述的烷基取代基取代；rj是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；rk’是具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，芳基，雜環(huán)基或雜芳基；優(yōu)選地，y是亞硫酸氫鹽、次硫酸鹽、或偏亞硫酸氫鹽或其鹽(諸如鈉鹽)的加合物；每次出現(xiàn)時(shí)，r獨(dú)立地選自-h，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(ch2ch2o)n-rc，任選取代的具有6至18個(gè)碳原子的芳基，任選取代的含有一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自氮、氧和硫的雜原子的5至18元雜芳基環(huán)，或任選取代的含有1至6個(gè)獨(dú)立地選自o、s、n和p的雜原子的3至18元雜環(huán)；r’和r”相同或不同，且獨(dú)立地選自-h，-oh，-or，-nhr，-nr2，-cor，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(ch2ch2o)n-rc，和任選取代的具有1至6個(gè)獨(dú)立地選自o、s、n和p的雜原子的3至18元雜環(huán)；rc是-h或具有1至4個(gè)碳原子的取代或未取代的直鏈或支鏈的烷基；n是1至24的整數(shù)；w選自c＝o、c＝s、ch2、bh、so和so2；x’選自-h，-oh，氨基保護(hù)基，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(ch2ch2o)n-rc，任選取代的具有6至18個(gè)碳原子(如，苯基)的芳基，任選取代的含有一個(gè)或多個(gè)雜原子獨(dú)立地選自氮、氧和硫雜原子的5至18元雜芳環(huán)和任選取代的含有1至6個(gè)獨(dú)立地選自o、s、n和p的雜原子的3至18元雜環(huán)。優(yōu)選地，x’是-h、-oh或-me。更優(yōu)選地，x’是-h；y'選自-h，氧代基團(tuán)，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，任選取代的6至18元芳基，任選取代的含有一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自氮、氧和硫的雜原子的5至18元雜芳基環(huán)，任選取代的具有1至6個(gè)雜原子的3至18元雜環(huán)。優(yōu)選地，y’選自-h或氧代。更優(yōu)選地，y’是-h；r1、r2、r3、r4、r1’、r2’、r3’和r4’各自獨(dú)立地選自-h，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(och2ch2)n-rc，鹵素，胍基[-nh(c＝nh)nh2]，-or，-nr’r”，-no2，-nco，-nr’cor”，-sr，由-sor’所表示的亞砜，由-so2r’所表示的砜，磺酸鹽-so3-m+，硫酸鹽-oso3-m+，由-so2nr’r”所表示的磺酰胺，氰基，疊氮基，-cor’，-ocor’和-oconr’r”。優(yōu)選地，1、2、3，或所有的r2、r3、r2’和r3’是-h；r6是-h、-r、-or、-sr、-nr’r”、-no2、鹵素、-orc或-src，其中rc是-h、具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基。優(yōu)選地，r6是-ome或-sme。甚至更優(yōu)選地，r6是-ome；z和z’獨(dú)立地選自-(ch2)n’-、-(ch2)n’-cr7r8-(ch2)na’-,-(ch2)n’-nr9-(ch2)na’-、-(ch2)n’-o-(ch2)na’-和-(ch2)n’–s-(ch2)na’-；n’和na’相同或不同，且選自0、1、2和3；r7和r8相同或不同，且各自獨(dú)立地選自-h，-oh，-sh，-cooh，-nhr’，聚乙二醇單元-(och2ch2)n-，氨基酸，具有2至6個(gè)氨基酸的肽單元，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基；r9獨(dú)立地選自-h，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基，聚乙二醇單元-(och2ch2)n-；a和a’相同或不同，且獨(dú)立地選自-o-、氧代(-c(＝o)-)、-crr’o-、-crr’-、-s-、-crr’s-、-n(r5)-和-crr’n(r5)-。優(yōu)選地，a和a’相同或不同，且選自-o-和-s-。更優(yōu)選地，a和a’是-o-；每次出現(xiàn)時(shí)，r5獨(dú)立地為-h或任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；l’、l”和l”’相同或不同，且獨(dú)立選自-h、鹵素、任選取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、-no2或-cn；g選自-ch-或-n-。在某些實(shí)施方案中，n和c之間的雙線表示單鍵，y不是-h。在某些實(shí)施方案中，n和c之間的雙線表示單鍵或雙鍵，條件是當(dāng)其是雙鍵時(shí)，x不存在且y是-h，且當(dāng)其為單鍵時(shí)，x選自-h、或氨基保護(hù)基(優(yōu)選x是-h)；w是c＝o；r1、r2、r3、r4、r1’、r2’、r3’和r4’是-h；z和z’是-ch2-；a和a’均是-o-；w是-(c＝o)-；g是-ch-；r6是-h或任選取代的c1-c10直鏈、c1-c10支鏈或c3-c7環(huán)烷基、-o-烷基或-o-鹵代-烷基，諸如-ome；x’選自-h，-oh，具有1至10個(gè)碳原子的取代或未取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，苯基，和氨基保護(hù)基；y’選自-h，氧代基團(tuán)，具有1至10個(gè)碳原子的取代或未取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基。優(yōu)選地，當(dāng)y不是-h時(shí)，y選自-or、-ocor’、-sr、-nr’r”、-so3m、-so2m或-oso3m，其中m是-h或陽(yáng)離子，諸如na+、k+。優(yōu)選地，y選自-h、-oh、-ome、-oet、-nhoh或-so3m(如，y是-oh、-ome、-oet、-nhoh或-so3m)。甚至更優(yōu)選地，y是-h、-oh或-so3m(如，y是-oh或-so3m)，優(yōu)選地m是-h或na+。在某些實(shí)施方案中，n和c之間的雙線表示單鍵或雙鍵，條件當(dāng)它是雙鍵時(shí)，x不存在且y是-h，而當(dāng)其是單鍵時(shí)，x選自-h、或氨基保護(hù)基(優(yōu)選x是-h)；w是c＝o；r1、r2、r3、r4、r1’、r2’、r3’、r4’、x’和y′是-h；z和z’是-ch2-；a和a’均是-o-；w是-(c＝o)-；g是-ch-；r6是-h或任選取代的c1-c10直鏈、c1-c10支鏈、或c3-c7環(huán)烷基、-o-烷基、或-o-鹵代-烷基，諸如-ome。該雙官能交聯(lián)劑可以是本領(lǐng)域已知的任何雙官能連接子。例如，可用于制備藥物-連接子化合物的雙官能連接子是與細(xì)胞毒性化合物形成二硫鍵、硫醚鍵、對(duì)酸不穩(wěn)定的鍵、對(duì)光不穩(wěn)定的鍵、對(duì)肽酶不穩(wěn)定的鍵、以及對(duì)酯酶不穩(wěn)定的鍵的那些(參見(jiàn)例如美國(guó)專利5,208,020；5,475,092；6,441,163；6,716,821；6,913,748；7,276,497；7,276,499；7,368,565；7,388,026和7,414,073，所有這些文獻(xiàn)均通過(guò)引用并入本文)。優(yōu)選地，雙官能交聯(lián)劑是與細(xì)胞毒性化合物形成二硫鍵，硫醚和對(duì)肽酶不穩(wěn)定的鍵的那些?？捎糜诒景l(fā)明的其它雙官能交聯(lián)劑包括不可裂解的連接子，諸如描述于美國(guó)公開(kāi)no.us2005/0169933的那些，或帶電荷的連接子或親水性連接子以及描述于us2009/0274713、us2010/01293140和wo2009/134976，其各自通過(guò)引用明確地并入本文?？捎糜谥苽浔景l(fā)明的藥物-連接子化合物的雙官能交聯(lián)劑還包括描述于thermoscientificpiercecrosslinkingtechnicalhandbook的那些，其全部教導(dǎo)通過(guò)引用并入本文。細(xì)胞毒性化合物的合成制備本發(fā)明的細(xì)胞毒性二聚體化合物的代表性方法示于圖1-11。該二聚體通過(guò)使單體與具有兩個(gè)離去基團(tuán)的連接子化合物反應(yīng)來(lái)制備，所述離去基團(tuán)諸如鹵素、三氟甲磺酸酯、甲磺酸酯或甲苯磺酸酯(諸如描述用于圖1中1c的合成的甲苯磺酸酯)。具有硫醇或二硫化物部分以使得能經(jīng)還原或非還原鍵連接于細(xì)胞結(jié)合劑的代表性二聚體的合成示于圖1-5、7、8和10。在圖1中通過(guò)1a的還原胺化來(lái)制備包含短的聚乙二醇部分和烷基二硫化物的連接子。將1b轉(zhuǎn)化為其相應(yīng)的甲磺酸酯并與ibd(二氫吲哚并苯并二氮雜)單體單元偶聯(lián)得到二聚體1c，將該二聚體還原成單亞胺、轉(zhuǎn)化為游離硫醇，并與2偶聯(lián)以得到本發(fā)明的化合物1g。在圖3中，制備ibd單體的修飾形式并偶聯(lián)以得到本發(fā)明的二聚體，其中將還原的亞胺轉(zhuǎn)化為連接子。圖4描述具有短的聚乙二醇部分和酰胺二硫化物的二聚體，將該二聚體還原成硫醇4c并轉(zhuǎn)化為反應(yīng)性酯。圖5描述含有吡啶基二硫化物的連接子5e的合成，將該二硫化物轉(zhuǎn)化為本發(fā)明的單亞胺硫醇5i然后轉(zhuǎn)化為反應(yīng)性酯。圖6、9和11示出代表性二聚體的合成，所述代表性二聚體具有可與細(xì)胞結(jié)合劑(將甲酯轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的離去基團(tuán)的反應(yīng)性酯而制備)反應(yīng)的連接子，諸如但不限于n-羥基琥珀酰亞胺酯、n-羥基鄰苯二甲酰亞胺酯，n-羥基磺基琥珀酰亞胺酯、對(duì)硝基苯基酯、五氟苯基酯。用于制備本發(fā)明的適于與細(xì)胞結(jié)合劑一步綴合的細(xì)胞毒性二聚體化合物的代表性方法示于圖1和12-19。在所有這些實(shí)施例中，含有硫醇部分的二聚體與雙官能交聯(lián)劑反應(yīng)，所述雙官能交聯(lián)劑在一側(cè)具有反應(yīng)性基團(tuán)，諸如但不限于硫代吡啶基、馬來(lái)酰亞胺、碘化物、溴化物或甲苯磺酸酯；以及適于與細(xì)胞結(jié)合劑反應(yīng)的反應(yīng)性取代基，諸如但不限于n-羥基琥珀酰亞胺酯、n-羥基苯鄰二甲酰亞胺基酯，n-羥基磺基琥珀酰亞胺酯類、對(duì)硝基苯基酯、五氟苯基酯。用于制備本發(fā)明的代表性細(xì)胞毒性二聚體化合物的替代合成方法示于圖20-21。在圖20中，單還原的二聚體(即，具有一個(gè)亞胺基團(tuán))的合成通過(guò)兩步偶聯(lián)方法實(shí)現(xiàn)，其中單體的還原形式最初偶聯(lián)于連接子然后與ibd單體偶聯(lián)，或者使用還原單體和ibd單體兩者的混合物與反應(yīng)性連接子偶聯(lián)來(lái)制備二聚體。二次還原二聚體可能是先前所述的第二種合成途徑的副產(chǎn)物，而一種更直接的途徑示于圖21，其中還原的單體直接與連接子偶聯(lián)。細(xì)胞結(jié)合劑本發(fā)明的綴合物作為治療劑的有效性取決于對(duì)合適細(xì)胞結(jié)合劑的謹(jǐn)慎選擇。細(xì)胞結(jié)合劑可以是目前已知的或眾所周知的任一種，且包括肽和非肽。通常，這些細(xì)胞結(jié)合劑可以是抗體(特別是單克隆抗體)、淋巴因子、激素、生長(zhǎng)因子、維生素(諸如葉酸等，它們可結(jié)合于其細(xì)胞表面受體，如，葉酸受體)、營(yíng)養(yǎng)運(yùn)輸分子(諸如轉(zhuǎn)鐵蛋白)或任何其它細(xì)胞結(jié)合分子或物質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞結(jié)合劑是蛋白或多肽，或包含蛋白或多肽的化合物。優(yōu)選地，蛋白或多肽包含一個(gè)或多個(gè)具有側(cè)鏈-nh2基團(tuán)的lys殘基?？蛇x地或另外，所述蛋白或多肽包含一個(gè)或多個(gè)cys殘基。cys殘基的側(cè)鏈-sh基團(tuán)可以是完整的，或可以是在可被還原的二硫鍵中。優(yōu)選地，二硫鍵的還原對(duì)蛋白或多肽的細(xì)胞結(jié)合功能的不利影響不顯著(如，就抗體或其抗原結(jié)合片段而言，二硫鍵的還原基本上不會(huì)增加輕鏈/重鏈的解離)。lys側(cè)鏈-nh2基和/或cys側(cè)鏈-sh基可共價(jià)連接于連接子，該連接子進(jìn)而連接于本發(fā)明的二聚體化合物，從而將細(xì)胞結(jié)合劑綴合于本發(fā)明的二聚體化合物。每種基于蛋白的細(xì)胞結(jié)合劑可包含用于通過(guò)雙官能交聯(lián)劑連接本發(fā)明化合物的多個(gè)lys側(cè)鏈nh2基和/或cys側(cè)鏈-sh基。可使用的細(xì)胞結(jié)合劑的更具體的實(shí)施例包括：多克隆抗體；單克隆抗體；抗體片段諸如fab、fab’和f(ab’)2、fv、微型抗體、二聚體、三聚體、四聚體(parham，j.immunol.131:2895-2902(1983)；spring等人.j.immunol.113:470-478(1974)；nisonoff等人.arch.biochem.biophys.89:230-244(1960),kim等人,mol,cancerther.,7:2486-2497(2008)，carter，naturerevs.，6：343-357(2006))；干擾素(如α、β、γ)；淋巴因子諸如il-2、il-3、il-4、il-6；激素諸如胰島素、trh(促甲狀腺素釋放激素)、msh(促黑素細(xì)胞激素)、類固醇激素，諸如雄激素和雌激素；生長(zhǎng)因子和集落刺激因子，諸如egf、tgf-α、fgf、vegf、g-csf，m-csf和gm-csf(burgess，immunologytoday5:155-158(1984))；轉(zhuǎn)鐵蛋白(o’keefe等人.j.biol.chem.260:932-937(1985))；維生素，諸如葉酸；基于纖連蛋白iii型(fn3)重復(fù)序列的共有序列的蛋白支架(也稱為centyrins；參見(jiàn)美國(guó)專利公布2010/0255056，其通過(guò)引用并入本文)；設(shè)計(jì)者錨蛋白重復(fù)蛋白(darpins；美國(guó)專利申請(qǐng)no.20040132028；20090082274；20110118146；20110224100，其通過(guò)引用并入本文),c.zahnd等人.2010，cancerres.，70：1595-1605，其通過(guò)引用并入本文)；和，纖連蛋白結(jié)構(gòu)域支架蛋白(adnectins：美國(guó)專利申請(qǐng)no.20070082365；20080139791，其通過(guò)引用并入本文)。單克隆抗體技術(shù)允許以特異性的單克隆抗體形式制備非常特異的細(xì)胞結(jié)合劑。本領(lǐng)域特別熟知的是用于制備單克隆抗體的技術(shù)，所述單克隆抗體通過(guò)免疫小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠或任何其它具有關(guān)注抗原(諸如完整的靶細(xì)胞、從靶細(xì)胞分離的抗原、全病毒、減毒的全病毒和病毒蛋白如病毒外殼蛋白)的哺乳動(dòng)物而產(chǎn)生。也可使用致敏的人體細(xì)胞。制備單克隆抗體的另一種方法是使用scfv(單鏈可變區(qū))的噬菌體文庫(kù)，尤其是人類scfv(參見(jiàn)如griffiths等人，美國(guó)專利no.5,885,793和5,969,108；mccafferty等，wo92/01047；liming等人，wo99/06587)。此外，也可使用公開(kāi)于美國(guó)專利no.5,639,641的表面重構(gòu)抗體，如嵌合抗體和人源化抗體。選擇合適的細(xì)胞結(jié)合劑是選擇的問(wèn)題，這取決于待靶向的特定細(xì)胞群，但是如果可得到合適的細(xì)胞群，一般而言人類單克隆抗體是優(yōu)選的。例如，單克隆抗體my9是鼠igg1抗體，其特異結(jié)合于cd33抗原{j.d.griffin等人8leukemiares.，521(1984)}，如果在急性骨髓性白血病(aml)疾病中，靶細(xì)胞表達(dá)cd33，那么可使用該抗體。細(xì)胞結(jié)合劑可以是以特異性或非特異性方式結(jié)合細(xì)胞的任何化合物。通常，這些可以是抗體(特別是單克隆抗體和抗體片段)、干擾素、淋巴因子、激素、生長(zhǎng)因子、維生素、營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)分子(諸如轉(zhuǎn)鐵蛋白)或任何其它細(xì)胞結(jié)合分子或物質(zhì)。在細(xì)胞結(jié)合劑是抗體的情況下，該抗體結(jié)合于抗原，該抗原是多肽并且可以是跨膜分子(如受體)或配體諸如生長(zhǎng)因子。示例性的抗原包括以下分子，諸如腎素；生長(zhǎng)激素，包括人體生長(zhǎng)激素和牛生長(zhǎng)激素；生長(zhǎng)激素釋放因子；甲狀旁腺素；促甲狀腺激素；脂蛋白；α-1-抗胰蛋白酶；胰島素a鏈；胰島素b鏈；胰島素原；促卵泡激素；降鈣素；促黃體激素；胰高血糖素；凝血因子諸如因子vmc、因子ix、組織因子(tf)，和血管性血友病(vonwillebrands)因子；抗凝血因子，諸如蛋白c；心房利鈉因子；肺表面活性物質(zhì)；纖溶酶原激活物，諸如尿激酶或人尿液或組織型纖溶酶原激活物(t-pa)；鈴蟾肽；凝血酶；造血生長(zhǎng)因子；腫瘤壞死因子-α和-β；腦啡肽酶；rantes(調(diào)節(jié)激活正常t-細(xì)胞表達(dá)和分泌)；人體巨噬細(xì)胞炎性蛋白(mip-1-α)；血清白蛋白，諸如人血清白蛋白；抑制穆氏管(muellerian)物質(zhì)；松弛素a鏈；松弛素b鏈；松弛素原；小鼠促性腺素相關(guān)肽；微生物蛋白，諸如β-內(nèi)酰胺酶；dna酶；ige；細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原(ctla)，諸如ctla-4；抑制素；激活素；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vegf)；激素或生長(zhǎng)因子的受體；蛋白a或d；類風(fēng)濕因子；神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，諸如骨源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(bdnf)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3、-4、-5、或-6(nt-3、nt4、nt-5或nt-6)，或神經(jīng)生長(zhǎng)因子，諸如ngf-β；血小板衍生生長(zhǎng)因子(pdgf)；成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子諸如afgf和bfgf；成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2(fgfr2)，表皮生長(zhǎng)因子(egf)；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(tgf)諸如tgf-α和tgf-β，包括tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、tgf-β4或tgf-β5；胰島素樣生長(zhǎng)因子-i和-ii(igf-ⅰ和igf-ⅱ)，des(1-3)-igf-i(腦igf-i)、胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白、黑素轉(zhuǎn)鐵蛋白、epcam、gd3、flt3、psma、psca、muc1、muc16、steap、cea、tenb2、epha受體、ephb受體、葉酸受體、folr1、間皮素、cripto、αvβ6、結(jié)合素類、vegf、vegfr、egfr、轉(zhuǎn)鐵蛋白(tarnsferrin)受體、irta1、irta2、irta3、irta4、irta5；cd蛋白諸如cd2、cd3、cd4、cd5、cd6、cd8、cd11、cd14、cd19、cd20、cd21、cd22、cd25、cd26、cd28、cd30、cd33、cd36、cd37、cd38、cd40、cd44、cd52、cd55、cd56、cd59、cd70、cd79、cd80、cd81、cd103、cd105、cd134、cd137、cd138、cd152或公開(kāi)在美國(guó)公開(kāi)no.20080171040或美國(guó)公布no.20080305044中結(jié)合于一個(gè)或多個(gè)腫瘤相關(guān)抗原或細(xì)胞表面受體的抗體，且該公開(kāi)通過(guò)引用整體并入；促紅細(xì)胞生成素；骨誘導(dǎo)因子；免疫毒素類；骨形態(tài)生成蛋白(bmp)；干擾素，如干擾素-α、-β和-γ；集落刺激因子(csf)，如，m-csf、gm-csf和g-csf；白細(xì)胞介素類(il)，如，il-1至il-10；超氧化物歧化酶；t細(xì)胞受體；表面膜蛋白；衰變加速因子；病毒抗原諸如，例如hiv包膜部分；運(yùn)輸?shù)鞍?；歸巢受體；地址素；調(diào)節(jié)蛋白；結(jié)合素類，諸如cd11a、cd11b、cd11c、cd18、icam、vla-4和vcam；腫瘤相關(guān)抗原，諸如her2、her3或her4受體；內(nèi)皮因子、c-met、c-kit、1gf1r、psgr、ngep、psma、psca、lgr5、b7h4和上面列出的多肽的任一片段。另外，結(jié)合于骨髓細(xì)胞的gm-csf可用作急性髓性白血病患病細(xì)胞的細(xì)胞結(jié)合劑。結(jié)合于活化t細(xì)胞的il-2可用于預(yù)防移植排斥、用于治療和預(yù)防移植物抗宿主病和用于治療急性t細(xì)胞白血病。結(jié)合于黑素細(xì)胞的msh可用于治療黑素瘤，可以是針對(duì)黑素瘤的抗體。葉酸可用于靶向在卵巢和其它腫瘤中表達(dá)的葉酸受體。表皮生長(zhǎng)因子可用于靶向鱗癌，諸如肺癌和頭頸癌。生長(zhǎng)抑素可用于靶向神經(jīng)母細(xì)胞瘤和其它腫瘤類型?？煞謩e成功地用雌激素(或雌激素類似物)或雄激素(或雄激素類似物)作為細(xì)胞結(jié)合劑來(lái)靶向乳腺癌和睪丸癌。在一個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)胞結(jié)合劑是人源化單克隆抗體。在另一實(shí)施方案中，細(xì)胞結(jié)合劑是humy9-6或其它相關(guān)的抗體，該抗體描述于美國(guó)專利no.7,342,110和7,557,189(通過(guò)引用并入本文)中。在另一實(shí)施方案中，細(xì)胞結(jié)合劑是抗葉酸受體抗體，該抗體描述于美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)no.61/307,797、61/346,595,61/413,172和美國(guó)申請(qǐng)no.13/033,723(公開(kāi)為us2012-0009181a1中)。所有這些申請(qǐng)的教義均通過(guò)引用全文并入本文。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞結(jié)合劑可以是單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，它們共享對(duì)于抗原與本文公開(kāi)的抗體結(jié)合來(lái)說(shuō)關(guān)鍵的序列，諸如humy9-6或其相關(guān)抗體，其描述于美國(guó)專利no.7,342,110和7,557,189(通過(guò)引用并入本文)中。這些衍生的抗體與本文所述的抗體相比可基本上具有相同或同一的(1)輕鏈和/或重鏈cdr3區(qū)域；(2)輕鏈和/或重鏈cdr1、cdr2和cdr3區(qū)域；或(3)輕鏈和/或重鏈區(qū)域。這些區(qū)域中的序列可含有保守氨基酸置換，包括cdr區(qū)域內(nèi)的置換。優(yōu)選地，存在不超過(guò)1、2、3、4或5個(gè)保守性置換。在某些實(shí)施方案中，衍生抗體具有至少約90％、95％、99％或100％同一于本文所述抗體的輕鏈區(qū)域和/或重鏈區(qū)域。與本文所述的抗體相比，這些衍生抗體與靶抗原可具有基本相同的結(jié)合特異性和/或親和力。優(yōu)選地，衍生抗體的kd和/或koff值是本文所述抗體的10倍(更高或更低)、5倍(更高或更低)、3倍(更高或更低)或2倍(更高或更低)。這些衍生抗體可以是完全人體抗體或人源化抗體或嵌合抗體。衍生抗體可根據(jù)任何本領(lǐng)域公認(rèn)的方法制備。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗葉酸受體抗體是人源化抗體或其特異結(jié)合于人葉酸受體1的抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含：(a)包含gyfmn(seqidno:1)的重鏈cdr1；包含rihpydgdtfynqxaa1fxaa2xaa3(seqidno:2)的重鏈cdr2；；和包含ydgsramdy(seqidno:3)的重鏈cdr3；；和(b)包含kasqsvsfagtslmh(seqidno:4)的輕鏈cdr1；包含rasnlea(seqidno:5)的輕鏈cdr2；和包含qqsreypyt(seqidno:6)的輕鏈cdr3；其中xaa1選自k、q、h和r；xaa2選自q、h、n和r；且xaa3選自g、e、t、s、a和v。優(yōu)選地，重鏈cdr2序列包含rihpydgdtfynqkfqg(seqidno:7)。在另一實(shí)施方案中，抗葉酸受體抗體是人源化抗體或其特異結(jié)合于人葉酸受體1的抗原結(jié)合片段，該抗體包含具有下述氨基酸序列的重鏈qvqlvqsgaevvkpgasvkisckasgytftgyfmnwvkqspgqslewigrihpydgdtfynqkfqgkatltvdkssntahmellsltsedfavyyctrydgsramdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk(seqidno:8)。在另一實(shí)施方案中，抗葉酸抗體是人源化抗體或由質(zhì)粒dna編碼的其抗原結(jié)合片段，該dna于2010年4月7日保藏于atcc(美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，美國(guó)維吉尼亞州)及具有的atcc保藏號(hào)是pta-10772(重組質(zhì)粒dna，phmov19hcv1.0ctk)和pta-10773(重組質(zhì)粒dna，phmov19lcv1.0)或pta-10774(重組質(zhì)粒dna，phmov19lcv1.6)。在另一實(shí)施方案中，抗葉酸受體抗體是人源化抗體或其特異結(jié)合于人葉酸受體1的抗原結(jié)合片段，該抗體包含具有下述氨基酸序列的輕鏈divltqsplslavslgqpaiisckasqsvsfagtslmhwyhqkpgqqprlliyrasnleagvpdrfsgsgsktdftlnispveaedaatyycqqsreypytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seqidno:9)；或divltqsplslavslgqpaiisckasqsvsfagtslmhwyhqkpgqqprlliyrasnleagvpdrfsgsgsktdftltispveaedaatyycqqsreypytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seqidno:10)。在另一實(shí)施方案中，抗葉酸受體抗體是人源化抗體或其特異結(jié)合于人葉酸受體1的抗原結(jié)合片段，該抗體包含具有seqidno:8氨基酸序列的重鏈和具有seqidno:9或seqidno:10.優(yōu)選地，抗體包含具有seqidno:8氨基酸序列的重鏈和具有seqidno:10(hufolr1)氨基酸序列的輕鏈。在另一實(shí)施方案中，抗葉酸受體抗體是人源化抗體或由質(zhì)粒dna編碼的其抗原結(jié)合片段，該質(zhì)粒dna于2010年4月7日保藏于atcc及具有的atcc保藏號(hào)是pta-10772和pta-10773或pta-10774。在另一實(shí)施方案中，抗葉酸受體抗體是人源化抗體或其抗原結(jié)合片段，該抗體包含與qvqlvqsgaevvkpgasvkisckasgytftgyfmnwvkqspgqslewigrihpydgdtfynqkfqgkatltvdkssntahmellsltsedfavyyctrydgsramdywgqgttvtvss(seqidno:11)至少約90％、95％、99％或100％相同的重鏈可變區(qū)和與divltqsplslavslgqpaiisckasqsvsfagtslmhwyhqkpgqqprlliyrasnleagvpdrfsgsgsktdftlnispveaedaatyycqqsreypytfgggtkleikr(seqidno:12)；或divltqsplslavslgqpaiisckasqsvsfagtslmhwyhqkpgqqprlliyrasnleagvpdrfsgsgsktdftltispveaedaatyycqqsreypytfgggtkleikr(seqidno:13).細(xì)胞結(jié)合劑-藥物綴合物本發(fā)明還提供細(xì)胞結(jié)合劑-藥物綴合物，其包括通過(guò)各種連接子連接于一種或多種本發(fā)明的細(xì)胞毒性化合物的細(xì)胞結(jié)合劑，該連接子包括但不限于二硫化物連接子、硫醚連接子、酰胺鍵合的連接子、肽酶不穩(wěn)定性連接子、酸不穩(wěn)定性連接子、酯酶不穩(wěn)定性連接子。本發(fā)明的代表性綴合物是抗體/細(xì)胞毒性化合物、抗體片段/細(xì)胞毒性化合物/、表皮生長(zhǎng)因子(egf)/細(xì)胞毒性化合物、促黑素細(xì)胞激素(msh)/細(xì)胞毒性化合物、促甲狀腺激素(tsh)/細(xì)胞毒性化合物、生長(zhǎng)抑素/細(xì)胞毒性化合物、葉酸/細(xì)胞毒性化合物、雌激素/細(xì)胞毒性化合物、雌性激素類似物/細(xì)胞毒性化合物、雄激素/細(xì)胞毒性化合物和雄激素類似物/細(xì)胞毒性化合物。代表性的葉酸/細(xì)胞毒性化合物的綴合物如下所述，在兩種藥物單體中的一者的亞胺鍵上具有任選的-so3-na+加合物。該綴合物的代表性合成方案示于圖54。葉酸/細(xì)胞毒性化合物綴合物在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含二氫吲哚并苯并二氮雜二聚體化合物(如，式(i)-(iv)、(ia)-(iva)和(ib)-(ivb)的化合物)和通過(guò)共價(jià)鍵連接的細(xì)胞結(jié)合劑的綴合物。該連接子可在腫瘤/不希望的增殖細(xì)胞位點(diǎn)裂解以許多方式將細(xì)胞毒性劑傳送至其靶標(biāo)。該連接子可，例如，通過(guò)低ph(腙)、還原環(huán)境(二硫化物)、蛋白裂解(酰胺/肽鍵)或通過(guò)酶促反應(yīng)(酯酶/糖苷酶)裂解。在優(yōu)選的方面，本發(fā)明的代表性細(xì)胞毒性綴合物是抗體/二氫吲哚并苯并二氮雜二聚體化合物、抗體片段/二氫吲哚并苯并二氮雜二聚體化合物、表皮生長(zhǎng)因子(egf)/二氫吲哚并苯并二氮雜二聚體化合物、促黑素細(xì)胞激素(msh)/二氫吲哚并苯并二氮雜二聚體化合物、促甲狀腺激素(tsh)/二氫吲哚并苯并二氮雜二聚體化合物、生長(zhǎng)抑素/二氫吲哚并苯并二氮雜二聚體化合物、葉酸/二氫吲哚并苯并二氮雜二聚體化合物、雌激素/二氫吲哚并苯并二氮雜二聚體化合物、雌激素類似物/二氫吲哚并苯并二氮雜二聚體化合物、前列腺特異性膜抗原(psma)抑制劑/二氫吲哚并苯并二氮雜二聚體化合物、蛋白裂解酶抑制劑/二氫吲哚并苯并二氮雜二聚體化合物、設(shè)計(jì)的錨蛋白重復(fù)蛋白(darpin)/二氫吲哚并苯并二氮雜二聚體化合物、雄激素/二氫吲哚并苯并二氮雜二聚體化合物及雄激素類似物/二氫吲哚并苯并二氮雜二聚體化合物。因此在第十四具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供綴合物，其包含：細(xì)胞毒性化合物和細(xì)胞結(jié)合劑(cba)，其中所述細(xì)胞毒性化合物包含將細(xì)胞毒性化合物共價(jià)連接于所述cba的連接基團(tuán)，且其中所述細(xì)胞毒性化合物由下式中的任一者：或其藥學(xué)上可接受的鹽表示，其中：n和c之間的雙線表示單鍵或雙鍵，條件是當(dāng)其是雙鍵時(shí)，x不存在且y是-h，或具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基，而當(dāng)其是單鍵時(shí)，x是-h、連接基團(tuán)或氨基保護(hù)部分；y是-h或離去基團(tuán)，其選自-or、-ocor’、-ocoor’、-oconr’r”、-nr’r”、-nr’cor”、-nr’nr’r”，任選取代的5或6元含氮雜環(huán)(如，哌啶、四氫吡咯、吡唑、嗎啉)、由-nr(c＝nh)nr’r”表示的胍基、氨基酸或由-nrcop’表示的肽，其中p’是氨基酸或含有2至20個(gè)氨基酸單元的多肽、-sr、-sor’、-so2m、-so3m、-oso3m、鹵素、氰基和疊氮基；或y為亞硫酸鹽(hso3、hso2或與陽(yáng)離子形成的hso3-、so32-或hso2-的鹽)，偏亞硫酸氫鹽(h2s2o5或與陽(yáng)離子形成的s2o52-的鹽)，單、二、三和四硫代磷酸鹽(po3sh3、po2s2h2、pos3h2、ps4h2或與陽(yáng)離子形成的po3s3-、po2s23-、pos33-或ps43-的鹽)，硫代磷酸酯(rio)2ps(ori)、ris-、riso、riso2、riso3，硫代硫酸鹽(hs2o3或與陽(yáng)離子形成的s2o32-的鹽)，連二亞硫酸鹽(hs2o4或與陽(yáng)離子形成的s2o42-的鹽),二硫代磷酸鹽(p(＝s)(ork’)(s)(oh)或其與陽(yáng)離子形成的鹽)，異羥肟酸(rk’c(＝o)noh或與陽(yáng)離子形成的鹽)，甲醛次硫酸氫鹽(hoch2so2-或與陽(yáng)離子形成的hoch2so2-的鹽，諸如hoch2so2-na+)或其混合物，其中ri是具有1至10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基且被選自-n(rj)2、-co2h、-so3h和-po3h中的至少一個(gè)取代基取代；ri可進(jìn)一步任選地被本文所述的烷基取代基取代；rj是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；rk’是具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，芳基，雜環(huán)基或雜芳基；優(yōu)選地，y是亞硫酸氫鹽、次硫酸鹽、或偏亞硫酸氫鹽或其鹽(諸如鈉鹽)的加合物；m是-h或陽(yáng)離子；每次出現(xiàn)時(shí)，r獨(dú)立地選自-h，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(ch2ch2o)n-rc，任選取代的具有6至18個(gè)碳原子的芳基，任選取代的含有一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自氮、氧和硫的雜原子的5至18元雜芳基環(huán)，或任選取代的含有1至6個(gè)獨(dú)立地選自o、s、n和p的雜原子的3至18元雜環(huán)；r’和r”各自獨(dú)立地選自-h，-oh，-or，-nhr，-nr2，-cor，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(ch2ch2o)n-rc，和任選取代的具有1至6個(gè)獨(dú)立地選自o、s、n和p的雜原子的3至18元雜環(huán)；rc是-h或具有1至4個(gè)碳原子的取代或未取代的直鏈或支鏈的烷基或連接基團(tuán)；n是1至24的整數(shù)；w選自c＝o、c＝s、ch2、bh、so和so2；x’選自-h，氨基保護(hù)基，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(ch2ch2o)n-rc，任選取代的具有6至18個(gè)碳原子的芳基，任選取代的含有一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自氮、氧和硫的雜原子的5至18元雜芳基環(huán)，和任選取代的含有1至6個(gè)獨(dú)立地選自o、s、n和p的雜原子的3至18元雜環(huán)；y’選自-h，氧代基團(tuán)，連接基團(tuán)，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，任選取代的6至18元芳基，任選取代的含有一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自氮、氧和硫的雜原子的5至18元雜芳基環(huán)，任選取代的具有1至6個(gè)雜原子的3至18元雜環(huán)；r1、r2、r3、r4、r1’、r2’、r3’和r4’各自獨(dú)立地選自-h，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(och2ch2)n-rc，鹵素，胍基[-nh(c＝nh)nh2]，-or，-nr’r”，-no2，-nco，-nr’cor”，-sr，由-sor’所表示的亞砜，由-so2r’所表示的砜，磺酸鹽-so3-m+，硫酸鹽-oso3-m+，由-so2nr’r”所表示的磺酰胺，氰基，疊氮基，-cor’，-ocor’，-oconr’r”和連接基團(tuán)；r6是-h、-r、-or、-sr、-nr’r”、-no2、鹵素或連接基團(tuán)；z和z’獨(dú)立地選自-(ch2)n’-、-(ch2)n’-cr7r8-(ch2)na’-、-(ch2)n’-nr9-(ch2)na’-、-(ch2)n’-o-(ch2)na’-和-(ch2)n’–s-(ch2)na’-；n’和na’相同或不同，且選自0、1、2和3；r7和r8相同或不同，且各自獨(dú)立地選自-h，-oh，-sh，-cooh，-nhr’，聚乙二醇單元-(och2ch2)n-，氨基酸，具有2至6個(gè)氨基酸的肽單元，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基；r9獨(dú)立地選自-h，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基，聚乙二醇單元-(och2ch2)n-；a和a’相同或不同，且獨(dú)立地選自-o-、氧代(-c(＝o)-)、-crr’o-、-crr’-、-s-、-crr’s-、-nr5和-crr’n(r5)-；每次出現(xiàn)時(shí)，r5獨(dú)立地為-h或任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；d和d’相同或不同，且獨(dú)立地不存在或選自任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，氨基酸，具有2至6個(gè)氨基酸的肽，和聚乙二醇單元(-och2ch2)n-；l不存在，為連接基團(tuán)，聚乙二醇單元(-och2ch2)n-，具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基或烯基，苯基，具有1至6個(gè)獨(dú)立選自o、s、n和p的雜原子的3-18元雜環(huán)或5至18元雜芳基環(huán)，其中所述烷基或烯基任選被所述連接基團(tuán)取代；苯基或雜環(huán)或雜芳基環(huán)可任選被取代，其中所述取代基可以是連接基團(tuán)；在某些實(shí)施方案中，x不是連接基團(tuán)。在某些實(shí)施方案中，n和c之間的雙線表示單鍵，y不是-h。在某些實(shí)施方案中，y是離去基團(tuán)，其選自-or、-ocor’、-ocoor’、-oconr’r”、-nr’r”、-nr’cor”、-nr’nr’r”、任選取代的5或6元含氮雜環(huán)(如，哌啶、四氫吡咯、吡唑、嗎啉等)，由-nr’(c＝nh)nr’r”表示的胍基，氨基酸，或由-nrcop’表示的肽，其中p’是氨基酸或含有2至20個(gè)氨基酸單元的多肽、-sr、-sor’、-so2m、-so3m、-oso3m、鹵素、氰基和疊氮基。在某些實(shí)施方案中，化合物不是下述化合物中的任一者：在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的綴合物包括下述：其中：cba是細(xì)胞結(jié)合劑，r是1至10的整數(shù)，y是-h，亞硫酸氫鹽、次硫酸鹽或偏亞硫酸氫鹽的加合物，或其鹽，或-so3m，且m是-h或藥學(xué)上可接受的陽(yáng)離子。在某些實(shí)施方案中，l不存在，或?yàn)檫x自任選取代的苯基和任選取代的吡啶基，其中苯基和吡啶基具有連接基團(tuán)，或l是具有連接基團(tuán)的胺基(即，-n(連接基團(tuán))-)，或l是具有1至6個(gè)碳原子且具有連接基團(tuán)的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基或烯基。在第十五具體實(shí)施方案中，化合物由下式中的任一者表示：其中：l’、l”和l”’相同或不同，且獨(dú)立地選自-h，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，聚乙二醇單元-(och2ch2)n-rc，鹵素，胍基[-nh(c＝nh)nh2]，-or，-nr’r”，-no2，-nr’cor”，-sr，由-sor’表示的亞砜，由-so2r’表示的砜，磺酸鹽-so3m，硫酸鹽-oso3m，由-so2nr’r”表示的磺酰胺，氰基，疊氮基，-cor’，-ocor’，-oconr’r”和連接基團(tuán)，條件是l’、l”和l”’中僅一者是連接基團(tuán)；且g選自-ch-或-n-。其余的基團(tuán)如上文第十四具體實(shí)施方案中所述。在某些實(shí)施方案中，l’、l”或l”’中的一者是連接基團(tuán)，而其它的是-h。優(yōu)選地，l’是連接基團(tuán)，而l”和l”’是-h。在某些實(shí)施方案中，a和a’均是-o-；r6是-ome，且g是-ch-。在第十六具體實(shí)施方案中，l’由下式表示：-w’-rx-v-ry-j，其中：w’和v相同或不同，且各自獨(dú)立地不存在或選自-crere’-、-o-、-o-c(＝o)-、-c(＝o)-o-、-s-、-so-、-so2-、-ch2-s-、-ch2o-、-ch2nre-、-o-(c＝o)o-、-o-(c＝o)n(re)-、-n(re)-、-n(re)-c(＝o)-、-c(＝o)-n(re)-、-n(re)-c(＝o)o-、-n(c(＝o)re)c(＝o)-、-n(c(＝o)re)-、-(o-ch2-ch2)n-、-ss-或-c(＝o)-或氨基酸，或具有2至8個(gè)氨基酸的肽；rx和ry相同或不同，且各自獨(dú)立地不存在或?yàn)槿芜x取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，具有6至10個(gè)碳原子的芳基或具有1至3個(gè)選自o、n或s的雜原子的3至8元雜環(huán)；re和re’相同或不同，且選自-h，具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基或-(ch2-ch2-o)n-rk，其中rk是-h，具有1至6個(gè)碳原子的直鏈、支鏈的環(huán)狀的烷基，任選地具有仲氨基(如，-nhr101)或叔氨基(-nr101r102)或5或6元含氮雜環(huán)，諸如哌啶或嗎啉，其中r101和r102是各自獨(dú)立地具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基；優(yōu)選地，r101和r102是各自獨(dú)立地具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；n是1至24的整數(shù)；且j共價(jià)連接于cba，且選自琥珀酰亞胺、乙酰氨基、-s-、-ss-、-ch2s-、-ch(me)s-、-c(me)2s-、-nrc1-、-ch2nrc1-、-nrc1n-和-c(＝o)-，其中rc1是-h或具有1至4個(gè)碳原子的取代或未取代的直鏈或支鏈的烷基。在某些實(shí)施方案中，j是-s-、-ss-，琥珀酰亞胺，或-c(＝o)-。在某些實(shí)施方案中，re’是-h或-me；re是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基或-(ch2-ch2-o)n-rk；n是2至8的整數(shù)，且rk是-h、-me或-ch2ch2-nme2，而其余的變量如在上文第十五具體實(shí)施方案中所述。在某些實(shí)施方案中，v是氨基酸或具有2至8個(gè)氨基酸的肽。在某些實(shí)施方案中，v是纈氨酸-瓜氨酸、gly-gly-gly或ala-leu-ala-leu。在某些實(shí)施方案中，w’是-o-、-n(re)-或-n(re)-c(＝o)-；re是h、具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基或-(ch2-ch2-o)n-rk；rx是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；v不存在、為-(o-ch2-ch2)n-、-c(＝o)-nh-、-s-、-nh-c(＝o)-；ry不存在或者是具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；且j是-s-、-ss-或-c(＝o)-，而其余的基團(tuán)如第十六具體實(shí)施方案所定義。在某些實(shí)施方案中，w’是-o-、-n(re)-或-n(re)-c(＝o)-；re是-h、-me或-(ch2-ch2-o)n-me；n是2至6的整數(shù)；rx是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；v和ry不存在；且j是-c(＝o)-。其余的基團(tuán)如第十六具體實(shí)施方案所定義。在第十七具體實(shí)施方案中，第十六具體實(shí)施方案中的l’由下式表示：-w’-[cr1”r2”]a-v-[cy]0-1-[cr3”r4”]b-c(＝o)-，其中：r1”、r2”和r3”各自獨(dú)立地為-h或具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基，優(yōu)選為-me；r4”是-h、具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基(優(yōu)選-me)、-so3h或-so3-m+，其中m+是藥學(xué)上可接受的陽(yáng)離子；a是0-5(如，從0至2、3、4或5)的整數(shù)，且b是0-6(如，從0至3、4、5或6)的整數(shù)；且cy是具有n雜原子的任選取代的5元雜環(huán)，優(yōu)選地cy是在某些實(shí)施方案中，諸如在第十六或第十七具體實(shí)施方案中，w’是-n(re)-。在某些實(shí)施方案中，諸如在第十六或第十七具體實(shí)施方案中，re是-(ch2-ch2-o)2-6-rk，其中rk是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基。在某些實(shí)施方案中，諸如在第十六或第十七具體實(shí)施方案中，v是-s-或-ss-。在第十八具體實(shí)施方案中，在第十六或第十七具體實(shí)施方案中的l’由下式表示：-nre-[cr1”r2”]a-s-[cr3”r4”]b-c(＝o)-。在某些實(shí)施方案中，諸如在第十六至第十八具體實(shí)施方案中，綴合物是其中r是1至10的整數(shù)，y是-h或-so3m(如，y是-so3m)，且m是-h或藥學(xué)上可接受的陽(yáng)離子。在某些實(shí)施方案中，諸如在第十六至第十八具體實(shí)施方案中，抗體是humy9-6。在第十九具體實(shí)施方案中，在第十六或第十七具體實(shí)施方案中的l’由下式表示：-nre-[cr1”r2”]a-s-cy-[cr3”r4”]b-c(＝o)-。在某些實(shí)施方案中，諸如在第十六、第十七和第十九具體實(shí)施方案中，綴合物是：其中r是1至10的整數(shù)，y是-h或-so3m(如，y是-so3m)，且m是-h或藥學(xué)上可接受的陽(yáng)離子。在某些實(shí)施方案中，諸如在第十六、第十七和第十九具體實(shí)施方案中，抗體是humy9-6。在第二十具體實(shí)施方案中，化合物由下式表示：其中：w’不存在或選自-o-、-n(re)-、-n(re)-c(＝o)-、-n(c(＝o)re)-、-s-、-ch2-s-或-ch2nre-；rx不存在或選自具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基；re是-h，具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基或-(ch2-ch2-o)n-rk，其中rk是-h，具有1至6個(gè)碳原子的直鏈、支鏈環(huán)狀的烷基，任選地具有仲氨基(如，-nhr101)或叔氨基(-nr101r102)基團(tuán)或5或6元含氮雜環(huán)，如哌啶或嗎啉，其中r101和r102各自獨(dú)立地為具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基；zs連接于cba，且為鍵或-srm-；rm是rd或是具有1至4個(gè)碳原子的取代的具有反應(yīng)性酯的直鏈或支鏈的烷基，其選自n-羥基琥珀酰亞胺酯、n-羥基鄰苯二甲酰亞胺酯，n-羥基磺基琥珀酰亞胺酯、對(duì)硝基苯基酯、二硝基苯基酯和五氟苯酯；rd選自苯基、硝基苯基、二硝基苯基、羧基硝基苯基、吡啶基或硝基吡啶基；且n是1至24的整數(shù)，且剩余的變量如上文第八或第十五具體實(shí)施方案所述。在第二十一具體實(shí)施方案中，化合物由下式表示：其中：w’不存在或選自-o-、-n(re)-、-n(re)-c(＝o)-、-n(c(＝o)re)-、-s-、-ch2-s-或-ch2nre-；rx不存在或選自具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基；re是-h，具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基或-(ch2-ch2-o)n-rk，其中rk是-h，具有1至6個(gè)碳原子的直鏈、支鏈環(huán)狀的烷基，任選地具有仲氨基(如，-nhr101)或叔氨基(-nr101r102)基團(tuán)或5或6元含氮雜環(huán)，如哌啶或嗎啉，其中r101和r102各自獨(dú)立地為具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基；n是2至6的整數(shù)；zs連接至所述cba，且選自：鍵；其中：q是1至5的整數(shù)；且m是-h或陽(yáng)離子，諸如na+或k+。在某些實(shí)施方案中，zs由下式中的任一者表示：在某些實(shí)施方案中，w’是-n(re)-。在某些實(shí)施方案中，re是-(ch2-ch2-o)n-rk，其中rk是-h、具有1至6個(gè)碳原子的直鏈、支鏈環(huán)狀的烷基。在某些實(shí)施方案中，rk是-h或-me，n是4，且q是2。在某些實(shí)施方案中，rx是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基。在某些實(shí)施方案中，rx是-(ch2)p-(crfrg)-，其中rf和rg各自獨(dú)立地選自h或具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；且p是0、1、2或3。在某些實(shí)施方案中，rf和rg相同或不同，且選自-h和-me；且p是1。在第二十二具體實(shí)施方案中，在第二十一具體實(shí)施方案中所述的式(viii)、(ix)、(x)和(xi)的綴合物，變量如下所述：n和c之間的雙線表示單鍵或雙鍵，條件是當(dāng)其是雙鍵時(shí)，x不存在且y是-h，而當(dāng)其是單鍵時(shí)，x是-h；y是-h、-oh或-so3m(如，y是-oh或-so3m)；m是-h或藥學(xué)上可接受的陽(yáng)離子(如，na+)；x’和y’均是-h；a和a’均是-o-；r6是-ome；且rx是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基。在第二十三具體實(shí)施方案中，對(duì)于第二十具體實(shí)施方案中所述的式(ib)、(iib)、(iiib)和(ivb)的化合物，變量如下所述：n和c之間的雙線表示單鍵或雙鍵，條件是當(dāng)其是雙鍵時(shí)，x不存在且y是-h，而當(dāng)其是單鍵時(shí)，x是-h；y是-h、-oh或-so3m(如，y是-oh或-so3m)；m是-h或na+；x’和y’均是-h；a和a’均是-o-；r6是-ome；rx是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基。優(yōu)選地，rx是-(ch2)p-(crfrg)-，其中rf和rg各自獨(dú)立地選自-h或具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基；p是0、1、2或3。更優(yōu)選地，rf和rg相同或不同，且選自-h和-me；且p是1。在本發(fā)明上文所述綴合物的任一具體實(shí)施方案，諸如第十四到第二十三具體實(shí)施方案中，n和c之間的雙線可表示雙鍵。在本發(fā)明上文所述綴合物的任一具體實(shí)施方案，諸如第十四到第二十三具體實(shí)施方案中，n和c之間的雙線可表示單鍵，x是-h，連接基團(tuán)，或氨基保護(hù)基(如，x是-h)；且y是-h或選自-or、-ocor’、-sr、-nr’r”、任選取代的5或6元含氮雜環(huán)、-so3m、-so2m和硫酸鹽-oso3m。在某些實(shí)施方案中，y不是-h。在某些實(shí)施方案中，y選自-h、-so3m、-oh、-ome、-oet或-nhoh(如，y是-so3m、-oh、-ome、-oet或-nhoh)。在某些實(shí)施方案中，y是-h、-so3m或-oh(如，y是-so3m或-oh)。在某些實(shí)施方案中，m是-h、na+或k+。在本發(fā)明上文所述綴合物的任一具體實(shí)施方案，諸如第14至第23具體實(shí)施方案中，w當(dāng)存在時(shí)是c＝o。在本發(fā)明上文所述綴合物的任一具體實(shí)施方案，諸如第14至第23具體實(shí)施方案中，z和z’當(dāng)存在時(shí)是-ch2-。在本發(fā)明上文所述綴合物的任一具體實(shí)施方案，諸如第14至第23具體實(shí)施方案中，x’選自-h，-oh，任選取代的具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，苯基，連接基團(tuán)和氨基保護(hù)基。在某些實(shí)施方案中，x’是-h、-oh、-me或連接基團(tuán)。在某些實(shí)施方案中，x’是-h。在本發(fā)明上文所述綴合物的任一具體實(shí)施方案，諸如第14至第23具體實(shí)施方案中，y’選自-h，氧代基團(tuán)，具有1至10個(gè)碳原子的取代或未取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基。在某些實(shí)施方案中，y’是-h或氧代。在某些實(shí)施方案中，y’是-h。在本發(fā)明上文所述綴合物的任一具體實(shí)施方案，諸如第14至第23具體實(shí)施方案中，a和a’相同或不同，且選自-o-、-s-、-n(r5)-和氧代(c＝o)。在某些實(shí)施方案中，a和a’相同或不同，且選自-o-和-s-。在某些實(shí)施方案中，a和a’是-o-。在本發(fā)明上文的綴合物的任一具體實(shí)施方案，諸如第14至第23具體實(shí)施方案中，d和d’當(dāng)存在時(shí)相同或不同，且獨(dú)立地選自聚乙二醇單元(-och2ch2)n，其中n是1至24的整數(shù)，氨基酸，具有2至6個(gè)氨基酸的肽，具有1至10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基、烯基或炔基，其中所述烷基、烯基和炔基任選被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、-or、-nr’cor”、-sr和-cor’的取代基取代。在某些實(shí)施方案中，d和d’是具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基。在第二十四具體實(shí)施方案中，如第十四、第十五、或第二十一具體實(shí)施方案中所述的本發(fā)明的綴合物由下述表示：n和c之間的雙線表示雙鍵；y是-h；w是c＝o；r1、r2、r1’、r2’、r4和r4’是-h；r3或r3’中的一者任選為連接基團(tuán)，而另一者是-h；r6是-ome；z和z’是-ch2；x’是-h；y’是-h；且a和a’是-o-。在某些實(shí)施方案中，諸如第14至24具體實(shí)施方案的任一所述實(shí)施方案的綴合物均可包含1-10種細(xì)胞毒性化合物、2-9種細(xì)胞毒性化合物、3-8種細(xì)胞毒性化合物、4-7種細(xì)胞毒性化合物或5-6種細(xì)胞毒性化合物，包含將細(xì)胞毒性化合物連接于cba的連接基團(tuán)的每種細(xì)胞毒性化合物和綴合物上的各種細(xì)胞毒性化合物是相同的。在任一綴合物實(shí)施方案，諸如第14至第24具體實(shí)施方案中，細(xì)胞結(jié)合劑可結(jié)合至選自腫瘤細(xì)胞、病毒感染細(xì)胞、微生物感染細(xì)胞、寄生蟲(chóng)感染細(xì)胞、自身免疫細(xì)胞、活化細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、活化的t細(xì)胞、b細(xì)胞或黑素細(xì)胞的靶細(xì)胞；結(jié)合至表達(dá)的cd4、cd6、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd37、cd38、cd40、cd44、cd56、epcam、canag、calla、或her-2抗原；her-3抗原的細(xì)胞；或表達(dá)胰島素生長(zhǎng)因子受體、表皮生長(zhǎng)因子受體和葉酸受體的細(xì)胞。在任一綴合物實(shí)施方案，諸如第14至第24具體實(shí)施方案中，細(xì)胞結(jié)合劑可以是抗體、單鏈抗體、特異性結(jié)合于靶細(xì)胞的抗體片段、單克隆抗體、單鏈單克隆抗體或特異性結(jié)合于靶細(xì)胞的單克隆抗體片段、嵌合抗體、特異性結(jié)合于靶細(xì)胞的嵌合抗體片段、結(jié)構(gòu)域抗體、特異性結(jié)合于靶細(xì)胞結(jié)構(gòu)域抗體片段、淋巴因子、激素、維生素、生長(zhǎng)因子、集落刺激因子或營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)分子?？贵w可以是表面重構(gòu)抗體、表面重構(gòu)單鏈抗體或表面重構(gòu)抗體片段。該抗體可以是單克隆抗體、單鏈單克隆抗體或其單克隆抗體片段?？贵w可以是人源化抗體、人源化單鏈抗體或人源化抗體片段。本發(fā)明還提供包含本文所述的任一綴合物的藥物組合物和藥學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明還提供包含共價(jià)連接于雙官能連接子的任一主題化合物的藥物-連接子化合物。本發(fā)明另外提供包含連接于細(xì)胞結(jié)合劑的任一種主題化合物或主題藥物-連接子化合物的綴合物。本發(fā)明還提供抑制哺乳動(dòng)物中異常細(xì)胞生長(zhǎng)或治療增殖性病癥、自身免疫性病癥、破壞性骨病癥、傳染性疾病、病毒性疾病、纖維化疾病、神經(jīng)變性病癥，胰腺炎或腎臟疾病的方法，其包括向所述哺乳動(dòng)物施用治療有效量的本發(fā)明的任一種化合物(含有或不含任何連接子基團(tuán))或綴合物，及任選地，第二化療劑。在某些實(shí)施方案中，化合物或綴合物是：其中r是1至10的整數(shù)，y是-h或-so3m(如，y是-so3m)，且m是-h或藥學(xué)上可接受的陽(yáng)離子。在某些實(shí)施方案中，將第二化療劑相繼或連續(xù)地施用于所述哺乳動(dòng)物。在某些實(shí)施方案中，所述方法用于治療選自以下的病癥：癌癥、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、移植物抗宿主病(gvhd)、移植排斥、狼瘡、肌炎、感染和免疫缺陷。在某些實(shí)施方案中，該方法或綴合物用于治療癌癥。在某些實(shí)施方案中，癌癥選自乳腺癌、結(jié)腸癌、腦癌、前列腺癌、腎癌、胰腺癌、卵巢癌、頭頸癌、黑素瘤、結(jié)直腸癌、胃癌、鱗癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、睪丸癌、梅克爾細(xì)胞癌(merkelcellcarcinoma)、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)細(xì)胞瘤、淋巴器官癌和骨髓惡性腫瘤癌包括白血病(急性淋巴細(xì)胞性白血病(all)、急性髓性白血病(aml)、慢性淋巴細(xì)胞白血病(cll)、慢性髓性白血病(cml)、急性單核細(xì)胞白血病(amol)、多毛細(xì)胞白血病(hcl)、t-細(xì)胞幼淋巴細(xì)胞白血病(t-pll)、巨粒淋巴細(xì)胞白血病、成人t細(xì)胞白血病)、淋巴瘤(小淋巴細(xì)胞淋巴瘤(sll)、霍奇金淋巴瘤(hodgkin'slymphomas)(結(jié)節(jié)硬化型、混合細(xì)胞型、富于淋巴細(xì)胞型、淋巴細(xì)胞削減型或未削減型和結(jié)節(jié)性淋巴細(xì)胞主導(dǎo)的霍奇金淋巴瘤)、非霍奇金淋巴瘤(所有亞型)、慢性淋巴細(xì)胞白血病/小淋巴細(xì)胞淋巴瘤、b-細(xì)胞前淋巴細(xì)胞白血病、淋巴質(zhì)漿細(xì)胞白血病(諸如瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥)、脾邊緣帶淋巴瘤、漿細(xì)胞腫瘤(漿細(xì)胞性骨髓瘤、漿細(xì)胞瘤、單克隆免疫球蛋白沉積物疾病、重鏈病)、結(jié)節(jié)外邊緣區(qū)b細(xì)胞淋巴瘤(malt淋巴瘤)、結(jié)節(jié)邊緣區(qū)b細(xì)胞淋巴瘤(nmzl)、濾泡淋巴瘤、外套細(xì)胞淋巴瘤、彌漫性大b細(xì)胞淋巴瘤、縱隔(胸腺)大b細(xì)胞淋巴瘤、血管內(nèi)大b細(xì)胞淋巴瘤、原發(fā)性滲出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤/白血病、t細(xì)胞幼淋巴細(xì)胞白血病、t細(xì)胞巨粒淋巴細(xì)胞白血病、攻擊性nk細(xì)胞白血病、成人t細(xì)胞白血病/淋巴瘤、結(jié)節(jié)外nk/t細(xì)胞淋巴瘤(鼻型)、腸病型t細(xì)胞淋巴瘤、肝脾t細(xì)胞淋巴瘤、亞頂級(jí)nk細(xì)胞淋巴瘤、蕈樣真菌病/塞扎里綜合征、原發(fā)性皮膚間cd30-陽(yáng)性t細(xì)胞淋巴增生性病癥、原發(fā)性皮膚間變性大細(xì)胞淋巴瘤、淋巴瘤樣丘疹病、血管免疫母細(xì)胞性t細(xì)胞淋巴瘤、外周t細(xì)胞淋巴瘤(非特異性)、間變性大細(xì)胞淋巴瘤)、多發(fā)性骨髓瘤(漿細(xì)胞性骨髓瘤或卡勒病(kahler'sdisease))。細(xì)胞結(jié)合劑-藥物綴合物的制備為了將本發(fā)明的細(xì)胞毒性化合物或其衍生物連接于細(xì)胞結(jié)合劑，細(xì)胞毒性化合物可包含具有鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)的連接部分。在一個(gè)實(shí)施方案中，雙官能交聯(lián)劑可首先與細(xì)胞毒性化合物反應(yīng)以提供具有連接部分的化合物(即藥物-連接子化合物)，所述連接部分具有一個(gè)鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)，其然后能與細(xì)胞結(jié)合劑反應(yīng)?？蛇x地，雙官能交聯(lián)劑的一端可首先與細(xì)胞結(jié)合劑反應(yīng)以提供具有連接部分的細(xì)胞結(jié)合劑，所述連接部分具有一個(gè)鍵合至其的反應(yīng)性基團(tuán)，其然后可與細(xì)胞毒性化合物反應(yīng)。該連接部分可含有使細(xì)胞毒性部分在特定位點(diǎn)釋放的化學(xué)鍵。適合的化學(xué)鍵在本領(lǐng)域是眾所周知的且包括二硫鍵、硫醚鍵、對(duì)酸不穩(wěn)定的鍵、對(duì)光不穩(wěn)定的鍵、對(duì)肽酶不穩(wěn)定的鍵、以及對(duì)酯酶不穩(wěn)定的鍵(參見(jiàn)例如美國(guó)專利5,208,020、5,475,092、6,441,163、6,716,821、6,913,748、7,276,497、7,276,499、7,368,565、7,388,026和7,414,073)。優(yōu)選二硫鍵、硫醚、對(duì)肽酶不穩(wěn)定的鍵?？捎糜诒景l(fā)明的其它連接子包括非裂解性連接子，例如美國(guó)公開(kāi)第2005/0169933號(hào)中詳細(xì)描述中描述的那些，或帶電荷的連接子或親水性連接子并且描述于us2009/0274713、us2010/01293140和wo2009/134976，其各自通過(guò)引用明確地并入本文，其各自通過(guò)引用明確地并入本文。式(i)-(iv)、(ia)-(iva)和(ib)-(ivb)的化合物可通過(guò)r1、r2、r3、r4、r1’、r2’、r3’、r4’、l’、l”、l”’或x(當(dāng)存在時(shí))連接。其中，優(yōu)選的可交聯(lián)基團(tuán)是r2’、r3’、r4’、l’、l”、l”’，且最優(yōu)選的可交聯(lián)基團(tuán)是r2’、r3’和l’。式(i)-(iv)、(ia)-(iva)和(ib)-(ivb)化合物的連接基團(tuán)的實(shí)例如上所述。在一個(gè)實(shí)施方案中，將含水緩沖液中的抗體溶液與摩爾過(guò)量的抗體修飾劑諸如n-琥珀酰亞胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(spdp)或與n-琥珀酰亞胺基-4-(2-吡啶基二硫代)丁酸甲酯(spdb)一起孵育以引入二硫代吡啶基。然后使修飾的抗體與含硫醇基的細(xì)胞毒性化合物(諸如化合物2a)反應(yīng)，以產(chǎn)生二硫鍵連接的抗體-二氫吲哚并苯并二氮雜二聚體綴合物。然后可使用本領(lǐng)域已知的任何純化方法對(duì)細(xì)胞結(jié)合劑-藥物綴合物進(jìn)行純化，所述純化方法諸如描述于美國(guó)專利號(hào)7,811,572和美國(guó)公開(kāi)no.2006/0182750的那些，二者均通過(guò)引用并入本文。例如，可使用正切流動(dòng)過(guò)濾、吸附色譜法、吸附過(guò)濾、選擇性沉淀、非吸附性過(guò)濾或其組合對(duì)細(xì)胞結(jié)合劑-藥物綴合物進(jìn)行純化。優(yōu)選地，將正切流動(dòng)過(guò)濾(tff，也稱為交叉流動(dòng)過(guò)濾、超濾和滲濾)和/或吸附色譜樹(shù)脂用于純化綴合物?；蛘撸蓪⒖贵w與摩爾過(guò)量的抗體修飾劑諸如2-亞氨基四氫噻吩、l-高半胱氨酸硫代內(nèi)酯(或衍生物)，或n-琥珀酰亞胺基-s-乙酰硫代乙酸酯(sata)一起孵育以引入硫醇基。然后將修飾的抗體與合適的含二硫鍵的細(xì)胞毒性劑反應(yīng)以制備二硫鍵連接的抗體-細(xì)胞毒性劑綴合物。然后抗體-細(xì)胞毒性劑綴合物可通過(guò)上述方法進(jìn)行純化。也可對(duì)細(xì)胞結(jié)合進(jìn)行設(shè)計(jì)以引入硫醇部分，諸如公開(kāi)于美國(guó)專利號(hào)7,772485和7.855,275的半胱氨酸-設(shè)計(jì)的抗體。在另一實(shí)施方案中，可將抗體在含水緩沖液中的溶液與摩爾過(guò)量的抗體修飾劑諸如n-琥珀酰亞胺基-4-(n-馬來(lái)酰亞胺甲基)環(huán)己烷-1-羧酸酯一起孵育以引入馬來(lái)酰亞胺基，或用n-琥珀酰亞氨基4-(碘代乙酰基)-氨基苯甲酸酯(siab)以引入碘乙?；Ｈ缓髮⑿揎椀目贵w與含硫醇的細(xì)胞毒性劑反應(yīng),以制備硫醚連接的抗體-細(xì)胞毒性綴合物。然后可通過(guò)上述方法來(lái)純化抗體-細(xì)胞毒性綴合物?？赏ㄟ^(guò)測(cè)量在280nm和330nm下的吸光度比率用分光光度法來(lái)測(cè)定每個(gè)抗體分子結(jié)合的細(xì)胞毒性分子的數(shù)目。平均1-10個(gè)細(xì)胞毒性化合物/抗體分子可通過(guò)本文所述的方法連接。連接的細(xì)胞毒性化合物/抗體分子優(yōu)選的平均數(shù)目是2-5，且最優(yōu)選2.5-4.0。含有末端是n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)酯的連接子的細(xì)胞毒性劑，諸如化合物1g和10，可與抗體反應(yīng)以制備直接酰胺連接的綴合物，諸如humy9-6-spdb-1f或humy9-6-bmps-1f。然后抗體-細(xì)胞毒性劑綴合物可通過(guò)上述任何方法經(jīng)凝膠過(guò)濾進(jìn)行純化。用于制備本發(fā)明細(xì)胞結(jié)合劑-藥物綴合物的代表性方法示于圖22和23。本發(fā)明的細(xì)胞毒性二聚體化合物可通過(guò)一步或兩步綴合方法與細(xì)胞結(jié)合劑綴合。在圖22a和22b中，對(duì)代表性的實(shí)施例進(jìn)行了描述，其中具有連接子的二聚體化合物(諸如n-羥基琥珀酰亞胺酯)直接與細(xì)胞結(jié)合劑(諸如抗體)反應(yīng)，產(chǎn)生所需的綴合物。在圖22c中，將可連接的二聚體1g首先用亞硫酸氫鈉處理以提供修飾的二聚體化合物26，然后添加抗體以形成本發(fā)明的綴合物humy9-6-sbdp-1f。兩步綴合法的代表性實(shí)例描述于圖23中，其中首先用雙官能交聯(lián)劑修飾抗體，產(chǎn)生具有所需數(shù)目連接子的抗體，該抗體適于與具有游離硫醇部分的二聚體化合物反應(yīng)。在該實(shí)例中，首先用spdb修飾抗體humy9-6以得到具有含有二硫代吡啶基部分的連接子的抗體。然后將修飾的抗體暴露于游離的硫醇，諸如2a，產(chǎn)生所需的綴合物humy9-6-spdb-2a。用于合成本發(fā)明的藥物-連接子化合物和綴合物的方法也描述于提交于2011年2月15日的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)no.61/443,092，以及要求其申請(qǐng)日期的權(quán)益及與本申請(qǐng)同一天提交的題為“methodsofpreparationofconjugates”的美國(guó)實(shí)用新型申請(qǐng)中，所述申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容(包括所有附圖、化學(xué)式、合成方案、說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求)以引入方式并入本文。本發(fā)明的代表性化合物和綴合物的結(jié)構(gòu)示于表1-8。這些化合物和綴合物可根據(jù)本文所述的方法制備。表1.本發(fā)明中代表性化合物的結(jié)構(gòu)。表2.本發(fā)明代表性化合物的結(jié)構(gòu)(續(xù))。表3.本發(fā)明代表性化合物的結(jié)構(gòu)(續(xù))。表4.本發(fā)明代表性化合物的結(jié)構(gòu)(續(xù))。表5.本發(fā)明中代表性化合物的結(jié)構(gòu)。表6.本發(fā)明代表性化合物的結(jié)構(gòu)(續(xù))。表7.本發(fā)明代表性化合物的結(jié)構(gòu)(續(xù))。表8.本發(fā)明代表性綴合物的結(jié)構(gòu)?；衔锖途Y合物的體外細(xì)胞毒性可對(duì)本發(fā)明的細(xì)胞毒性化合物和細(xì)胞結(jié)合劑-藥物綴合物抑制各種癌細(xì)胞系體外增殖的能力進(jìn)行評(píng)價(jià)。例如，可將細(xì)胞系諸如人結(jié)腸癌細(xì)胞系colo205、橫紋肌肉瘤細(xì)胞系rh-30和多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系molp-8用于評(píng)價(jià)這些化合物和綴合物的細(xì)胞毒性。待評(píng)價(jià)的細(xì)胞可被暴露于化合物或綴合物1-5天且細(xì)胞的存活部分通過(guò)已知的方法以直接測(cè)定進(jìn)行測(cè)量。然后可由測(cè)定的結(jié)果來(lái)計(jì)算ic50值。可選地或另外，體外細(xì)胞系敏感度篩選，諸如由美國(guó)國(guó)家癌癥研究所(參見(jiàn)voskoglou-nomikos等人，2003,clinicalcancerres.9:42227-4239，通過(guò)引用并入本文)描述的一類可用作指南之一，以確定可對(duì)由本發(fā)明的化合物或綴合物敏感的癌癥的類型。本發(fā)明的抗體-細(xì)胞毒性劑綴合物的體外效能和靶特異性的實(shí)例示于圖25-26中。所有綴合物對(duì)在低皮摩爾范圍內(nèi)的ic50抗原陽(yáng)性癌細(xì)胞有極強(qiáng)的細(xì)胞毒性。當(dāng)暴露于相同的綴合物時(shí)，抗原陰性細(xì)胞系保持活力。當(dāng)用未綴合的抗體humy9-6(抗-cd33)阻斷時(shí)，該吲哚啉苯并二氮雜二聚體示出小于160倍效能的靶特異性效能及當(dāng)用未綴合的抗體folr1(抗葉酸受體抗體)阻斷時(shí)，該吲哚啉苯并二氮雜二聚體示出小于40倍效能的靶特異性效能。例如，用humy9-6-spdb-1f綴合物殺死ic50值為10.5pm的抗原陽(yáng)性hl60/qc細(xì)胞，而加入過(guò)量未綴合的humy9-6抗體減少該細(xì)胞毒性效應(yīng)(ic50＝1.69nm)，這證明了抗原特異性(圖25a)。此外，humy9-6-spdb-1f綴合物對(duì)ic50值為21pm的hl60/atcc細(xì)胞系和ic50為190pm的nb-4細(xì)胞系(圖25b和25c)也是高度有效的。類似地，hufolr1-spdb-1f綴合物對(duì)ic50值為55pm的抗原陽(yáng)性kb細(xì)胞是高度有效的(圖26)。加入過(guò)量的未綴合的hufolr1抗體使該細(xì)胞毒性效果減少>40倍，這證明了抗原特異性。通過(guò)比較未綴合的humy9-6抗體和humy9-6-spdb-1f綴合物兩者對(duì)hl60/qc細(xì)胞系的結(jié)合來(lái)測(cè)量綴合物對(duì)抗體結(jié)合的效應(yīng)(圖27)。facs分析表明綴合物與裸露抗體的結(jié)合能力沒(méi)有變化，這表明沒(méi)有因?yàn)榧?xì)胞毒性劑綴合于抗體而削弱結(jié)合。在一個(gè)實(shí)例中，測(cè)量了細(xì)胞結(jié)合劑/細(xì)胞毒性劑綴合物的體內(nèi)功效。用humy9-6-spdb-1f綴合物來(lái)處理具有人類hl60/qc腫瘤的裸鼠，在多劑量下觀察到顯著的腫瘤消退，而未處理的小鼠腫瘤生長(zhǎng)迅速(圖28)。在低至20μg/kg的劑量時(shí)，觀察到比最大耐受劑量低至少35倍的反應(yīng)性。亞胺飽和對(duì)耐受性的影響示于表9。在多劑量下對(duì)二亞胺hufolr1-藥物1進(jìn)行測(cè)試，發(fā)現(xiàn)所有這些是高度有毒的僅留下在50μg/kg下測(cè)試的最低測(cè)試組的幸存者。相比之下，發(fā)現(xiàn)部分還原的單亞胺hufolr1-藥物2和hufolr1-spdb-ign(hufolr1-spdb-1f)綴合物具有顯著改善的耐受性，而hufolr1-spdb-ign(hufolr1-spdb-1f)綴合物在最高測(cè)試劑量560μg/kg時(shí)，這表明100％的動(dòng)物存活。組合物及使用方法本發(fā)明包括包含本文所述的新型苯并二氮雜化合物(如，二氫吲哚并苯并二氮雜或噁唑烷并苯并二氮雜)，其衍生物或其綴合物(和/或其溶劑化物、水合物和/或鹽)和載體(藥學(xué)上可接受的載體)的組合物(如，藥物組合物)。本發(fā)明還包括包含本文所述的新型苯并二氮雜化合物、其衍生物或其綴合物(和/或其溶劑化物、水合物和/或鹽)和載體(藥學(xué)上可接受的載體)，進(jìn)一步包含第二治療劑的組合物(如，藥物組合物)。本發(fā)明組合物可用于在哺乳動(dòng)物(如人類)中抑制異常細(xì)胞生長(zhǎng)或治療增殖性病癥。本發(fā)明組合物還可用于治療哺乳動(dòng)物(如人類)的抑郁、焦慮、緊張、恐懼、恐慌、煩躁、精神疾患、疼痛和炎性病癥。本發(fā)明包括在哺乳動(dòng)物(如人類)中抑制異常細(xì)胞生長(zhǎng)或治療增殖性病癥的方法，包括向所述哺乳動(dòng)物單獨(dú)或與第二治療劑組合施用治療有效量的本文所述的新型苯并二氮雜化合物(如，二氫吲哚并苯并二氮雜或噁唑烷并苯并二氮雜)，其衍生物或其綴合物，(和/或其溶劑化物和鹽)或其組合。本發(fā)明還提供治療方法，包括向需要治療的受試者施用有效量的上文所述的任一種綴合物。類似地，本發(fā)明提供用于誘導(dǎo)所選擇的細(xì)胞群體中細(xì)胞死亡的方法，包括使靶細(xì)胞或含有靶細(xì)胞的組織與有效量的包含本發(fā)明的細(xì)胞毒性化合物-細(xì)胞結(jié)合劑中的任一者細(xì)胞毒性劑(如，連接于細(xì)胞結(jié)合劑的二氫吲哚并苯并二氮雜或噁唑烷并苯并二氮雜二聚體)，其鹽或溶劑化物接觸。靶細(xì)胞是細(xì)胞結(jié)合劑可結(jié)合于其的細(xì)胞。如果需要，其它活性劑，諸如其它抗腫瘤劑，可與綴合物一起施用。合適的藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑和賦形劑是熟知的且可在臨床情況許可時(shí)由本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員確定。合適的載體、稀釋劑和/或賦形劑的實(shí)例包括：(1)杜氏磷酸鹽緩沖鹽水(dulbecco’sphosphatebufferedsaline)，ph約7.4，含有或不含約1mg/ml至25mg/ml人血清白蛋白，(2)0.9％鹽水(0.9％w/vnacl)，和(3)5％(w/v)葡萄糖；及也可含有抗氧化劑諸如色胺和穩(wěn)定劑諸如tween20。用于誘導(dǎo)所選擇的細(xì)胞群體中細(xì)胞死亡的方法可在體外、體內(nèi)、或離體下進(jìn)行。體外應(yīng)用的實(shí)例包括在將自體骨髓移植至同一患者之前處理自體骨髓以殺死患病的或惡性細(xì)胞：骨髓移植之前的處理以殺死感受性t細(xì)胞和預(yù)防移植物抗宿主病(gvhd)；對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)物的處理以殺死除了不表達(dá)靶抗原的所需變體以外的所有細(xì)胞；或殺死表達(dá)不期望的抗原的變體。非臨床的體外應(yīng)用條件易于由本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)確定。臨床離體應(yīng)用的實(shí)例是在癌癥治療或自身免疫疾病治療中在自體移植前從骨髓中去除腫瘤細(xì)胞或淋巴細(xì)胞，或在移植前從自體或同種異體骨髓或組織中去除t細(xì)胞和其它淋巴細(xì)胞以防止gvhd。處理可如下進(jìn)行。從患者或其它個(gè)體采集骨髓，然后在添加有本發(fā)明細(xì)胞毒性劑的含有血清(濃度范圍約10μm至1pm)的培養(yǎng)基中在約37℃下孵育約30分鐘至約48小時(shí)。濃度和孵育時(shí)間的精確條件，即，劑量，易于由本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)確定。孵育后，將骨髓細(xì)胞用含有血清的培養(yǎng)基洗滌并根據(jù)已知方法通過(guò)靜脈返回至患者。在患者接受其它治療的情況下，諸如在采集骨髓和再輸注細(xì)胞的時(shí)間內(nèi)燒蝕化療或全身輻射的過(guò)程，使用標(biāo)準(zhǔn)的醫(yī)療設(shè)備在液氮中冷凍儲(chǔ)存經(jīng)處理骨髓細(xì)胞。對(duì)于臨床體內(nèi)應(yīng)用，本發(fā)明的細(xì)胞毒性劑將以溶液或凍干粉劑的形式提供，測(cè)試該溶液或凍干粉劑的無(wú)菌性和內(nèi)毒素水平。綴合物施用的合適方案的實(shí)例如下。綴合物以每周靜脈推注給予，每周一次持續(xù)4周。單次劑量(bolusdoses)以50至1000ml的生理鹽水給予，可向其中加入5至10ml人血清白蛋白。劑量將是10μg至2000mg/靜脈內(nèi)施用(每天100ng至20mg/kg的范圍)。在治療四周之后，患者可每周一次繼續(xù)接受治療。關(guān)于施用途徑、賦形劑、稀釋劑、劑量、時(shí)間等的具體臨床方案，可在臨床情況許可時(shí)由本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員確定。可根據(jù)在所選擇的細(xì)胞群體中誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的體內(nèi)或體外方法治療的醫(yī)學(xué)疾患的實(shí)例包括任何類型的惡性腫瘤，包括，例如肺癌(小細(xì)胞和非小細(xì)胞)、乳腺癌、結(jié)腸癌、腦癌、前列腺癌、腎癌、胰腺癌、卵巢癌、頭頸癌、皮膚癌(黑色素瘤)、梅克爾細(xì)胞癌(merkelcellcarcinoma)、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)細(xì)胞瘤和淋巴器官的癌癥；自身免疫性疾病諸如全身性紅斑狼瘡、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和多發(fā)性硬化；移植排斥，例如腎移植排斥、肝移植排斥、肺移植排斥、心臟移植排斥和骨髓移植排斥；移植物抗宿主??；病毒感染，諸如cmv感染、hiv感染、aids等；和寄生蟲(chóng)感染，諸如賈第鞭毛蟲(chóng)病、阿米巴病、血吸蟲(chóng)病，和本領(lǐng)域的技術(shù)人員確定的其它病癥。癌癥治療及其劑量、施用途徑和推薦用途是本領(lǐng)域已知的且已描述于諸如physician'sdeskreference(pdr)的文獻(xiàn)中。pdr公開(kāi)已用于治療各種癌癥的試劑的劑量。治療上有效的這些上述化學(xué)治療藥物的給藥方案和劑量將取決于正治療的具體癌癥、疾病程度和本領(lǐng)域的技術(shù)醫(yī)師所熟悉的其它因素并且可由醫(yī)師確定。pdr的內(nèi)容通過(guò)引用明確地整體并入本文。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可查閱pdr，使用下述參數(shù)中的一者或多者來(lái)確定可根據(jù)本發(fā)明的教導(dǎo)使用的化療劑和綴合物的給藥方案和劑量。這些參數(shù)包括：綜合索引按制造商產(chǎn)品(按公司或商標(biāo)藥物名稱)類別索引通用/化學(xué)索引(無(wú)商標(biāo)常見(jiàn)藥物名稱)藥物的彩色圖像產(chǎn)品信息，與fda標(biāo)簽一致化學(xué)信息功能/作用適應(yīng)癥和禁忌癥試驗(yàn)研究、副作用、注意事項(xiàng)類似物和衍生物細(xì)胞毒性劑領(lǐng)域的技術(shù)人員將容易理解，可以這樣的方式對(duì)本文所述的每種細(xì)胞毒性劑進(jìn)行修飾，該方式使得所產(chǎn)生的化合物仍保持起始化合物的特異性和/或活性。本領(lǐng)域技術(shù)人員也將理解許多這些化合物可用于代替本文所述的細(xì)胞毒性劑。因此，本發(fā)明的細(xì)胞毒性劑包括本文所述化合物的類似物和衍生物。本文所引用的和下述實(shí)施例中的所有參考均通過(guò)引用明確地整體并入。實(shí)施例現(xiàn)將通過(guò)參考非限制性實(shí)施例來(lái)闡明本發(fā)明。除非另有說(shuō)明，否則所有百分比、比例、份等均按重量計(jì)。所有試劑均購(gòu)自aldrichchemicalco.，newjersey，或其它商業(yè)來(lái)源。在bruker400mhz儀器上獲得核磁共振(1hnmr)光譜，并在brukerdaltonicsesquire3000儀器上獲得質(zhì)譜(使用電噴霧電離)。實(shí)施例1化合物1b：向攪拌的苯胺1a(1.55g，5.18mmol)和2-(甲基二硫代)-異丁醛(0.7ml，5.18mmol)在無(wú)水1,2-二氯甲烷(20ml)的溶液中加入三乙酰氧基硼氫化鈉(1.1g，5.18mmol)和氯化鋅粉末(353mg，2.59mmol)，然后加入無(wú)水硫酸鎂(800mg)。將混合物在室溫(rt)下攪拌6小時(shí)，然后加入第二份2-(甲基二硫代)-異丁醛(0.7ml，5.18mmol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(1.1g，5.18mmol)。將其在rt下攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土過(guò)濾，并用二氯甲烷洗滌。濃縮濾液，并將殘余物經(jīng)凝膠色譜法(combiflash，40g柱，二氯甲烷/meoh)純化，得到無(wú)色油狀的化合物1b(487mgy＝22％)。未反應(yīng)的起始材料苯胺1a(1.02g)也以65％的產(chǎn)率回收。1hnmr(400hz,cdcl3):δ6.76(s,2h),6.63(s,1h),4.55(s,4h),3.65-3.51(m,14h),3.35(s,3h),2.44(s,3h),1.33(s,6h)；13cnmr(400hz,cdcl3):δ149.0,142.35,114.0,111.1,71.98,70.7,70.6,70.5,67.6,65.5,59.75,59.1,53.9,51.9,26.6,25.7,20.75；ms(m/z):實(shí)測(cè)值456.2(m+na)+。參見(jiàn)圖1?；衔?c:向攪拌的1b(243mg,0.56mmol)在無(wú)水二氯甲烷(3.5ml)的溶液中加入三乙胺(234μl，1.68mmol)。將混合物冷卻至-10℃，并通過(guò)注射器經(jīng)15分鐘緩慢加入甲磺酰氯(113μl，1.46mmol)。將該溶液在-10～-7℃下繼續(xù)攪拌60分鐘，并通過(guò)加入冰/水來(lái)淬滅。用乙酸乙酯稀釋，并用冷水洗滌。將有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾、濃縮并抽高真空，得到淺黃色油狀的甲磺酸酯(340mg)。將甲磺酸酯轉(zhuǎn)移至裝有乙酸乙酯/二氯甲烷的10ml圓底燒瓶中，濃縮并抽高真空。加入ibd單體(412mg，1.4mmol)，然后加入無(wú)水二甲基甲酰胺(3ml)和無(wú)水碳酸鉀(232mg，1.68mmol)。將所得淺黃色混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。用二氯甲烷稀釋，并用鹽水洗滌。將有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾并濃縮。將殘余物溶于二氯甲烷，加載于硅膠柱上，并用二氯甲烷/甲醇(15:1然后10:1)洗脫。合并含有化合物1c的級(jí)分并濃縮，得到705mg粗品，其進(jìn)一步經(jīng)制備反相hplc純化(c18柱，用乙腈/水洗脫)，得到淺黃色蓬松固體狀的化合物1c(181mg，y＝33％)。1hnmr(400hz,cdcl3):δ8.28(d,j＝8.0hz,2h),7.86(d,j＝3.6hz,2h),7.59(s,2h),7.31-7.26(m,4h),7.12(t,j＝7.6hz,2h),6.87-6.80(m,5h),5.18(dd,j1＝20.8hz,j2＝12.4hz,4h),4.50-4.47(m,2h),3.99(s,6h),3.75-3.48(m,18h),3.37(s,3h),2.44(s,3h),1.32(s,6h)；ms(m/z):實(shí)測(cè)值1025.9(m+h2o+na)+,1043.9(m+2h2o+na)+,983.8(m–h)-,1055.8(m+4h2o–h)-。參見(jiàn)圖1?；衔?d：在0℃下，向攪拌的化合物1c(112mg，0.114mmol)在無(wú)水二氯甲烷(0.3ml)和無(wú)水乙醇(0.6ml)的溶液中加入硼氫化鈉(0.9mg，0.023mmol)。5分鐘后，除去冰浴，并將混合物在室溫下攪拌3小時(shí)，然后冷卻至0℃，用飽和氯化銨淬滅、用二氯甲烷稀釋，分離并將有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水na2so4干燥，通過(guò)硅藻土過(guò)濾，并濃縮。將殘余物通過(guò)反相hplc純化(c18柱，乙腈/水)。相應(yīng)的級(jí)分用二氯甲烷萃取并濃縮以得到產(chǎn)物1d、1e和未反應(yīng)的起始材料1c?；衔?d：37.1mg(y＝33％),ms(m/z):實(shí)測(cè)值1010.4(m+na)+,1028.4(m+h2o+na)+,1040.3(m+3h2o–h)-；化合物1e：6.4mg(y＝5.7％),ms(m/z):實(shí)測(cè)值1012.4(m+na)+；化合物1c:44.1mg(y＝39％)。參見(jiàn)圖1?；衔?g：向攪拌的1d(23.6mg,0.024mmol)在乙腈(3ml)和甲醇(3ml)的溶液中在室溫下加入新制備的tcep溶液(將17mg的tcep的鹽酸鹽用飽和碳酸氫鈉溶液中和至ph6-6.5，然后用0.5mlph6.5的磷酸鹽緩沖液稀釋)。將混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后用二氯甲烷和去離子水稀釋，分離并將有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。將濾液高真空濃縮得到淺黃色泡沫狀22mg1f。由19mg1d按照相同的方法制備另一18mg1f。將合并的40mg(0.042mmol)1f溶于無(wú)水二氯甲烷(0.5ml)并攪拌。向該攪拌的溶液中加入spdbnhs酯2(34.6mg，80％純度，0.085mmol)和二異丙基乙胺(15μl，0.085mmol)。繼續(xù)在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，用飽和氯化銨淬滅及用二氯甲烷稀釋，分離并用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。將殘余物通過(guò)制備反相hplc純化(c18柱，乙腈/水)。將含有產(chǎn)物的級(jí)分合并，用二氯甲烷萃取并濃縮得到白色固體化合物1g(29.7mg，y＝60％)。1hnmr(400hz,cd3cn):δ8.28-8.25(m,1h),8.20-8.17(m,1h),7.87-7.84(m,1h),7.49(d,j＝4.4hz,1h),7.39(d,j＝4.4hz,1h),7.31-7.19(m,4h),7.13-7.01(m,2h),6.92-6.87(m,3h),6.77(bs,1h),6.31-6.29(m,1h),5.16-5.09(m,2h),5.00(d,j＝4.4hz,2h),4.94(bs,-nh),4.48-4.43(m,1h),4.40-4.34(m,1h),3.90(d,j＝4.4hz,3h),3.77(d,j＝4.4hz,3h),3.64-3.39(m,18h),3.26(d,j＝4.4hz,3h),2.82-2.70(m,8h),2.17(d,j＝4.4hz,1h),2.08-2.01(m,3h),1.30(d,j＝4.4hz,6h)；ms(m/z):實(shí)測(cè)值1025.9(m+h2o+na)+,1043.9(m+2h2o+na)+,983.8(m–h)-,1055.8(m+4h2o–h)-；ms(m/z)，實(shí)測(cè)值1179.5(m+na)+。參見(jiàn)圖1。實(shí)施例2化合物1e：向攪拌的1c(8mg,0.0081mmol)在無(wú)水1,2-二氯甲烷(0.2ml)的溶液中加入三乙酰氧基硼氫化鈉(3.8mg,0.018mmol)。將混合物在室溫下攪拌1.5小時(shí)，然后將混合物用二氯甲烷稀釋并用飽和碳酸氫鈉淬滅，分離并將有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并過(guò)濾。將濾液濃縮并將殘余物經(jīng)反相hplc純化(c18柱，乙腈/水)得到白色固體狀化合物1e(4.7mg，y＝58％)。ms(m/z)，實(shí)測(cè)值1012.4(m+na)+,1024.2(m+2h2o-h)-。參見(jiàn)圖2?；衔?a：向攪拌的1e(12mg,0.012mmol)在乙腈(1ml)和甲醇(3ml)的溶液中在室溫下加入新制備的tcep溶液(將11mg的tcep的鹽酸鹽用飽和碳酸氫鈉溶液中和至ph～6.5，然后用0.4mlph6.5的磷酸鹽緩沖液稀釋)。將混合物在室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，然后用二氯甲烷和去離子水稀釋，分離并將有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。將濾液濃縮并將殘余物經(jīng)反相hplc純化(c18柱，乙腈/水)得到白色固體狀化合物2a(4.9mg，y＝43％)。ms(m/z)，實(shí)測(cè)值966.4(m+na)+,978.2(m+2h2o-h)-。參見(jiàn)圖2。實(shí)施例3化合物3b：向化合物3a(830mg,1.9mmol)在甲醇(15ml)的溶液中加入pd/c(10％,204mg，0.19mmol)。將燒瓶中的空氣通過(guò)真空除去，然后用氣囊中的氫氣置換。將混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。將混合物通過(guò)硅藻土過(guò)濾，及用二氯甲烷和甲醇洗滌硅藻土/pd/c。濃縮濾液，殘余物用二氯甲烷稀釋并蒸發(fā)幾次，然后通過(guò)硅膠色譜法純化(二氯甲烷/甲醇)得到淺黃色固體狀化合物3b(558mg，y＝98％)。1hnmr(400hz,cdcl3):δ8.34(d,j＝8.0hz,1h),7.40(s,1h),7.22(dd,j1＝8.0hz,j2＝7.6hz,1h),7.17(d,j＝7.2hz,1h),7.02(dd,j1＝7.2hz,j2＝7.6hz,1h),6.16(s,1h),4.37(tt,j1＝10.4hz,j2＝7.2hz,1h),3.76(s,3h),3.49-3.36(m,3h),2.73(dd,j1＝16.8hz,j2＝3.6hz,1h)；13cnmr(400hz,cdcl3)：δ167.0,150.4,142.6,141.2,140.8,129.9,127.7,124.8,123.96,117.4,113.7,112.5,104.7,57.3,56.3,54.7,33.0；ms(m/z)，實(shí)測(cè)值295.1(m-h)-。參見(jiàn)圖3。化合物3c：向2-(甲基二硫代)-異丁醛(113mg，0.75mmol)和化合物3b(148mg，0.5mmol)在無(wú)水1,2-二氯乙烷(2ml)溶液中加入三乙酰氧基硼氫化鈉(212mg，1.0mmol)。將混合物在室溫下攪拌2天。在該時(shí)間內(nèi)，加入另兩份(0.05ml,0.5mmol/份)2-(甲基二硫代)-異丁醛以及一份三乙酰氧基硼氫化鈉(106mg，0.5mmol)。將反應(yīng)用飽和碳酸氫鈉淬滅，用二氯甲烷和水稀釋。將有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并過(guò)濾。將濾液減壓濃縮，殘余物經(jīng)硅膠色譜法(combiflash，24g柱，己烷/乙酸乙酯)純化得到白色蓬松固體狀化合物3c(92.5mg，y＝43％)。也回收未反應(yīng)的起始材料3b(49.3mg，y＝33％)。1hnmr(400hz,cdcl3):δ8.30(d,j＝8.0hz,1h),7.28(dd,j1＝6.8hz,j2＝7.6hz,1h),7.25-7.20(m,2h),7.07(t,j＝7.6hz,1h),6.80(s,1h),6.17(s,1h),4.36-4.28(m,1h),3.89(s,3h),3.78(d,j＝14.4hz,1h),3.46-3.34(m,3h),2.90(d,j＝14.4hz,1h),2.73(dd,j1＝16.4hz,j2＝2.8hz,1h),2.34(s,3h),1.17(s,3h),1.05(s,3h)；13cnmr(400hz,cdcl3)：δ167.2,149.0,142.5,142.2,141.9,129.9,128.0,125.3,124.5,124.1,117.1,112.0,108.5,64.8,61.4,58.1,56.3,53.4,32.0,26.3,25.7,25.4；ms(m/z)，實(shí)測(cè)值453.3(m+na)+，429.2(m-h)-。參見(jiàn)圖3?；衔?d：向攪拌的ibd單體(125mg，0.425mmol)和1,5-二碘戊烷(0.63ml，4.25mmol)在無(wú)水二甲基甲酰胺(3ml)的溶液中加入碳酸鉀(59mg,0.425mmol)并將混合物室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將反應(yīng)溶液用二氯甲烷稀釋，用鹽水洗滌并經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥。將其過(guò)濾并濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜純化(己烷/乙酸乙酯)得到淺黃色泡沫狀化合物3d(94mg，y＝45％)。1hnmr(400hz,cdcl3):δ8.27(d,j＝8.0hz,1h),7.86(d,j＝4.8hz,1h),7.56(s,1h),7.27(dd,j1＝8.4hz,j2＝7.6hz,2h),7.10(dd,j1＝7.6hz,j2＝7.2hz,1h),6.82(s,1h),4.48(dt,j1＝10.8hz,j2＝4.4hz,1h),4.15-4.07(m,2h),3.96(s,3h),3.70(dd,j1＝16.8hz,j2＝10.8hz,1h),3.49(dd,j1＝16.8hz,j2＝4.0hz,1h),3.22(t,j＝7.2hz,2h),1.96-1.87(m,4h),1.64-1.57(m,2h)；13cnmr(400hz,cdcl3)：δ164.0,163.2,151.4,148.3,142.2,140.3,129.6,128.3,124.9,120.5,117.0,112.0,110.6,68.8,56.4,55.1,33.3,32.7,28.0,27.2,6.6；ms(m/z)，實(shí)測(cè)值513.3(m+na)+,543.2(m+3h2o-h)-。參見(jiàn)圖3?；衔?e：向攪拌的起始材料3c(91mg，0.21mmol)和3d(94mg，0.19mmol)在無(wú)水二甲基甲酰胺(1ml)溶液中加入碳酸鉀(29mg,0.21mmol)，將混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將反應(yīng)溶液用二氯甲烷稀釋，用鹽水洗滌并經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥。過(guò)濾、濃縮并將殘余物通過(guò)硅膠色譜純化(己烷/乙酸乙酯)得到淺黃色泡沫狀化合物3e(89.1mg,y＝58％)。1hnmr(400hz,cdcl3):δ8.32-8.28(m,2h),7.91(bs,1h),7.57(s,1h),7.36-7.21(m,5h),7.15-7.05(m,2h),6.85(s,1h),6.74(s,1h),4.53-4.48(m,1h),4.37-4.31(m,1h),4.21-4.03(m,4h),3.98(s,3h),3.88(s,3h),3.86-3.70(m,2h),3.55-3.35(m,4h),2.93(d,j＝4.0hz,1h),2.73(dd,j1＝16.4hz,j2＝2.4hz,1h),2.36(s,3h),2.03-1.96(m,3h),1.77-1.67(m,3h),1.21(s,3h),1.06(s,3h)；ms(m/z)，實(shí)測(cè)值815.3(m+na)+。參見(jiàn)圖3?；衔?g：向攪拌的化合物3e(33.1mg,0.042mmol)在乙腈(2ml)和甲醇(4ml)的溶液中在室溫下加入新制備的tcep溶液(將36mg的tcep的鹽酸鹽用飽和碳酸氫鈉溶液中和至ph～6.5，然后用0.4mlph6.5的磷酸鹽緩沖液稀釋)。將混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后用二氯甲烷和去離子水稀釋，分離并將有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。將濾液高真空濃縮得到淺黃色固體狀31mg化合物3f。將其溶于無(wú)水二氯甲烷中(0.5ml)。將spdbnhs酯2(26mg，80％純度，0.063mmol)和二異丙基乙胺(11μl，0.063mmol)依次加入。將混合物繼續(xù)在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，用飽和氯化銨淬滅及用二氯甲烷稀釋，分離并用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。將殘余物通過(guò)制備反相hplc純化(c18柱，乙腈/水)。將含有產(chǎn)物的級(jí)分合并，用二氯甲烷萃取并濃縮得到黃色固體狀化合物3g(15.2mg，y＝38％)。ms(m/z)，實(shí)測(cè)值984.3(m+na)+,1014.2(m+3h2o-h)-。參見(jiàn)圖3。實(shí)施例4化合物4b：將攪拌的化合物4a(111mg，0.108mmol)在無(wú)水乙醇(720μl)和無(wú)水二氯甲烷(360μl)的溶液在冰浴中冷卻至0℃。在0℃下加入硼氫化鈉(0.817mg，0.022mmol)的50μl無(wú)水乙醇。將反應(yīng)物在環(huán)境溫度下攪拌兩小時(shí)。將混合物在冰浴中冷卻至0℃，用飽和氯化銨淬滅及用二氯甲烷萃取。將有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并通過(guò)硅藻土過(guò)濾。將濾液減壓濃縮，并將粗品經(jīng)由rp-hplc純化(c18去離子水/乙腈)得到化合物4b(43mg，38％)。1hnmr(400hz,cdcl3)：δ8.26(d,1h,j＝8.0hz),8.18(d,1h,j＝8.0hz),7.77(d,1h,j＝4.4hz),7.51(s,1h),7.41(s,2h),7.17(m,6h),7.03(t,1h,j＝7.2hz),6.96(t,1h,j＝7.2hz),6.76(s,1h),6.04(s,1h),5.13(m,4h),4.38(m,2h),3.90(s,3h),3.81(s,3h),3.79(m,2h),3.63(m,1h),3.51(m,8h),3.43(m,6h),3.25(s,3h),2.73(dd,1h,j＝3.6,16.4hz),2.22(s,3h),2.04(m,2h),1.81(m,2h),1.18(s,6h)；ms(m/z)實(shí)測(cè)值,1051.9(m+na),1069.9(m+na+h2o)。參見(jiàn)圖4?；衔?c：向攪拌的化合物4b(40mg，0.039mmol)在甲醇(4.45ml)和乙腈(2.225ml)的溶液中加入tcep.hcl(39.0mg，0.136mmol)的磷酸鈉緩沖液(0.89ml，ph6.5)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。將混合物用二氯甲烷稀釋及用水和鹽水洗滌。將有機(jī)萃取物經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾并濃縮。用rp-hplc(c18、去離子水/乙腈)純化并用二氯甲烷提取得到化合物4c(26.5mg，64％)；ms(m/z)實(shí)測(cè)值，1006.0(m+na)。參見(jiàn)圖4。化合物4d：向攪拌的化合物4c(24mg，0.024mmol)在無(wú)水二氯甲烷(800μl)的溶液中加入pba(11.18mg，0.049mmol)和二異丙基乙胺(20.18μl，0.116mmol)。在環(huán)境溫度下攪拌保持18小時(shí)之后，將反應(yīng)物用二氯甲烷稀釋及用飽和氯化銨淬滅。分層及有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。用ptlc(5％甲醇/二氯甲烷)純化得到化合物4d(17mg，63％)；ms(m/z)實(shí)測(cè)值，1123.9(m+na)1139.9(m+k)；1099.8(m-h)117.9(m-h+h2o)。參見(jiàn)圖4。化合物4e：向化合物4d(15mg，0.014mmol)和n-羥基琥珀酰亞胺(4.70mg，0.041mmol)在無(wú)水二氯甲烷(1.0ml)的混合物中加入edc.hcl(7.83mg，0.041mmol)。在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)之后，將反應(yīng)物用二氯甲烷稀釋及用飽和氯化銨淬滅。將混合物用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。將粗品通過(guò)rp-hplc(c18，去離子水/乙腈)純化。將含有產(chǎn)物的級(jí)分混合并用二氯甲烷萃取，經(jīng)無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾并濃縮得到化合物4e(13mg，80％)；ms(m/z)實(shí)測(cè)值，1220.8(m+na)1238.8(m+na+h2o)、1254.8(m+k+h2o)。參見(jiàn)圖4。實(shí)施例5化合物5a：將白屈氨酸酸水合物(3.0g，15.56mmol)和硫酸(0.6ml，11.26mmol)在無(wú)水乙醇(40ml)的混合物回流20小時(shí)。將反應(yīng)物冷卻至室溫，用含水碳酸鈉中和，然后用濃hcl酸化。加入水及用二氯甲烷萃取。將萃取物用無(wú)水硫酸鎂干燥、過(guò)濾并濃縮。將粗品通過(guò)硅膠色譜(5％甲醇/二氯甲烷)純化得到白色固體狀二乙基4-羥基吡啶-2,6-二羧酸酯(5a)(2.5g，68％)。參見(jiàn)圖5。化合物5c：將4-甲基-4-(甲基二硫烷基)戊-1-醇(5b)(2.0g,11.09mmol)在無(wú)水二氯甲烷(55.5ml)的溶液在冰浴中冷卻至0℃。在0℃下加入三乙胺(5.41ml，38.8mmol)和甲苯磺酰氯(3.17g，16.64mmol)。將反應(yīng)在環(huán)境溫度下攪拌三小時(shí)。將混合物用乙酸乙酯萃取及用鹽水洗滌。將有機(jī)萃取物用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾并濃縮。通過(guò)硅膠色譜純化(5％乙酸乙酯/己烷)得到4-甲基-4-(甲基二硫烷基)戊基4-苯磺酸甲酯(5c)(1.5g，40％)。5b:1hnmr(400hz,cdcl3):δ3.42(m,2h),2.19(s,3h),1.77(bs,1h),1.43(m,4h),1.09(s,6h).5c：1hnmr(400hz,cdcl3):δ7.66(d,2h,j＝7.6hz),7.22(d,2h,j＝8.0hz),3.90(t,2h,j＝6.4hz),2.32(s,3h),2.23(s,3h),1.60(m,2h),1.44(m,2h),1.11(s,6h).參見(jiàn)圖5?；衔?d：向攪拌的4-甲基-4-(甲基二硫烷基)戊基4-苯磺酸甲酯(5c)(0.48g，1.435mmol)和二乙基4-羥基吡啶-2,6-二羧酸酯(5a)(0.343g，1.435mmol)在無(wú)水二甲基甲酰胺(6.5ml)的溶液中加入碳酸鉀(0.297g，2.152mmol)。將反應(yīng)物在90℃下攪拌18小時(shí)。然后冷卻至環(huán)境溫度并用飽和氯化銨淬滅。將混合物用乙酸乙酯萃取三次。將萃取物用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾并減壓濃縮。通過(guò)硅膠色譜純化(30％己烷/乙酸乙酯)得到二乙基4-(4-甲基-4-(甲基二硫烷基)戊氧基)吡啶-2,6-二羧酸酯(5d)(300mg，52％)；1hnmr(400hz,cdcl3)：δ7.70(s,2h),4.40(q,4h,j＝7.2,14.4hz),4.07(t,2h,j＝6.hz),2.35(s,3h),1.86(m,2h),1.70(m,2h),1.38(t,6h,j＝7.2hz),1.27(s,6h)；ms(m/z)，實(shí)測(cè)值424.1(m+na)，440.1(m+k)。參見(jiàn)圖5?；衔?e：向攪拌的二乙基4-(4-甲基-4-(甲基二硫烷基)戊氧基)吡啶-2,6-二羧酸酯(5d)(270mg，0.672mmol)在無(wú)水乙醇(7.0ml)的溶液中加入氯化鈣(224mg，2.017mmol)和硼氫化鈉(76mg，2.017mmol)。將反應(yīng)物在環(huán)境溫度下攪拌90分鐘，之后用水淬滅及真空濃縮以除去乙醇。然后將混合物用二氯甲烷萃取兩次。將有機(jī)萃取物合并，用水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥并通過(guò)硅藻土過(guò)濾。將濾液減壓濃縮，及將粗品通過(guò)硅膠色譜(用10％甲醇/二氯甲烷洗脫)純化，獲得4-(4-甲基-4-(甲基二硫烷基)戊氧基)吡啶-2,6-二基)二甲醇(5e)(75mg，35％)；1hnmr(400hz,cdcl3)：δ6.63(s,2h),4.60(s,4h),3.95(t,2h,j＝6.2hz),3.54(bs,2h),2.35(s,3h),1.82(m,2h),1.66(m,2h),1.26(s,6h)；ms(m/z)，實(shí)測(cè)值340.1(m+na)。參見(jiàn)圖5?；衔?f：將攪拌的(4-(4-甲基-4-(甲基二硫烷基)戊氧基)吡啶-2,6-二基)二甲醇(5e)(51mg，0.161mmol)在無(wú)水二氯甲烷(1.6ml)的溶液在丙酮/冰浴中冷卻至-5℃。加入三乙胺(0.112ml，0.803mmol)和甲磺酰氯(0.031ml，0.402mmol)。將混合物在-5℃下攪拌60分鐘。將反應(yīng)用冰水淬滅并用冷乙酸乙酯萃取。將有機(jī)萃取物用冰水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并減壓濃縮，得到二甲磺酸酯。向攪拌的二甲磺酸酯中間體(179mg，0.378mmol)和ibd單體(256mg，0.869mmol)在無(wú)水二甲基甲酰胺(3.8ml)的溶液中加入碳酸鉀(261mg，1.890mmol)和碘化鉀(31.4mg，0.189mmol)。將反應(yīng)物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。將混合物用水淬滅并用二氯甲烷萃取三次。將有機(jī)萃取物用硫酸鈉干燥、過(guò)濾并濃縮。將粗品再溶于乙腈中，并通過(guò)rp-hplc(c18，去離子水/乙腈)純化。將含有含有產(chǎn)物的級(jí)分合并并用二氯甲烷萃取，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾并減壓濃縮，得到化合物5f(65mg，20％)；1hnmr(400hz,cdcl3)：δ8.20(d,2h,j＝8.0hz),7.78(m,2h),7.53(s,2h),7.20(m,4h),7.04(t,2h,j＝7.4hz),6.91(m,2h),6.80(s,2h),5.22(s,4h),4.40(m,2h),3.94(s,6h),3.93(m,2h),3.63(m,2h),3.42(dd,2h,j＝hz),2.32(s,3h),1.80(m,2h),1.64(m,2h),1.24(s,6h)；ms(m/z)，實(shí)測(cè)值892.3(m+na)910.3(m+na+h2o)928.3(m+na+2h2o)。參見(jiàn)圖5?；衔?g和5h：將化合物5f(74mg,0.085mmol)在無(wú)水乙醇(600μl)和無(wú)水二氯甲烷(300μl)的溶液在冰浴中冷卻至0℃。在0℃下加入硼氫化鈉(0.644mg,0.017mmol)的50μl無(wú)水乙醇。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌兩小時(shí)然后冷卻至0℃。用飽和氯化銨溶液淬滅反應(yīng)并用二氯甲烷萃取。將有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，通過(guò)硅藻土過(guò)濾并減壓濃縮。將粗品再溶于二甲基甲酰胺中，并通過(guò)rp-hplc(c18，去離子水/乙腈)純化。將含由化合物5g和5h的級(jí)分分別合并，并用二氯甲烷萃取，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾并濃縮，得到化合物5g(20mg，27％)和化合物5h。5g：1hnmr(400hz,cdcl3):δ8.25(m,1h)、8.18(m,1h)、7.77(m,1h)、7.51(ss,1h)、7.40(ss,1h)、7.18(m,4h)、7.08(m,1h)、7.03(m,1h)、6.92(m,2h)、6.86(ss,1h)5.98/6.06(ss,1h)、5.24(m,4h)、4.40(m,1h)、4.30(m,1h)、3.94(s,3h)、3.92(m,2h)、3.84(s,3h)、3.62(m,1h)、3.37(m,4h)、2.65(m或dd,1h)、2.32(ss,3h)、1.77(m,2h)、1.64(m,2h)、1.24(s,6h)。5h：1hnmr(400hz,cdcl3):δ8.24(d,2h,j＝8.0hz),7.39(s,2h),7.14(m,4h),6.97(m,2h),6.93(m,2h),6.15(ss,2h),5.25(s,4h),4.37(m或t,2h,j＝9.8hz),4.2(bs,2h),3.94(m,2h),3.83(s,6h),3.40(m,6h),2.72(dd,2h,j＝hz),2.32(s,3h),1.79(m,2h),1.64(m,2h),1.24(s,6h)。參見(jiàn)圖5?；衔?i：向攪拌的化合物5g(20mg,0.023mmol)在甲醇(5.25ml)和乙腈(1.750ml)的溶液中加入tcep.hcl(19.72mg,0.069mmol)的磷酸鈉緩沖液(0.7ml,ph6.5)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌3小時(shí)，然后用二氯甲烷和水稀釋。分層并將有機(jī)層用鹽水洗滌。將粗制品通過(guò)rp-hplc(c18，去離子水/乙腈)純化。將含有產(chǎn)物的級(jí)分合并，用二氯甲烷萃取及蒸發(fā)，得到化合物5i(7mg，37％)。ms(m/z)，實(shí)測(cè)值848.3(m+na)866.3(m+na+h2o)880.3(m+na+meoh)。參見(jiàn)圖5?；衔?j：向攪拌的化合物5i(7mg，8.47μmol)和2,5-二氧吡咯烷-1-基4-(吡啶-2-基二硫烷基)丁酸甲酯(8.64mg，0.021mmol)在無(wú)水二氯甲烷(113μl)的溶液中加入二異丙基乙胺(3.69μl，0.021mmol)。在環(huán)境溫度下攪拌保持18小時(shí)之后，將反應(yīng)物用飽和氯化銨溶液淬滅并用二氯甲烷萃取。將有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。將粗品通過(guò)制備rp-hplc(c18，去離子水/乙腈)純化。將含有產(chǎn)物的級(jí)分用二氯甲烷萃取、過(guò)濾及蒸發(fā)，得到化合物5j(3mg，34％)。ms(m/z)，實(shí)測(cè)值1063.3(m+na)1081.3(m+na+h2o)。參見(jiàn)圖5。實(shí)施例6抗體-spdb-藥物綴合物的制備：將化合物1g用3摩爾當(dāng)量的亞硫酸氫鈉(使用新鮮制備的nahso3水溶液)在96-98％dma水溶液中在25℃下保持4-5小時(shí)進(jìn)行預(yù)處理。對(duì)于綴合，將2mg/ml的人源化抗體與5-7摩爾當(dāng)量的化合1g(用nahso3預(yù)處理)在25℃下，在85-90％pbs，ph7.4，水性緩沖液(含有10-15％n,n-二甲基乙酰胺(dma))或50mmhepes，ph8.5，水性緩沖液中反應(yīng)6小時(shí)，然后在pbs中(ph7.4)經(jīng)g25凝膠過(guò)濾柱純化以除去未反應(yīng)或水解的藥物化合物。將人源化的抗體-spdb-藥物綴合物在10mm組氨酸、250mm甘氨酸、1％蔗糖，ph6.5緩沖液中透析。通過(guò)在280至320nm下的紫外吸光測(cè)量及藥物和使用抗體在280nm(215,000m-1cm-1)和320nm(9137m-1cm-1)下的消光系數(shù)測(cè)得綴合物的藥物抗體比率(dar)是2.2-2.9。綴合物中單體的百分比使用tsk-gelg300swxl柱(7.8mm×300mm，5μm粒度)通過(guò)sec(尺寸排阻色譜)測(cè)定為>90％?；趕ec中單體峰的紫外吸收也表明了單體綴合物峰具有連接的藥物分子。對(duì)于游離(未綴合)的藥物測(cè)定，以丙酮萃取綴合物以除去蛋白質(zhì)，干燥并重新溶解在流動(dòng)相中，并注射至vydac208tpc8反相hplc柱(4.6×250mm，7μm粒度)，并與標(biāo)準(zhǔn)相比較。綴合物中游離藥物化合物的百分比測(cè)定為<0.5％的綴合藥物化合物。參見(jiàn)圖22。制備人源化ab-spdb-2a綴合物：將8mg/ml人源化的ab與4-6摩爾當(dāng)量的spdb異雙官能連接子在25℃下在95％pbs，ph7.4，含有5％dma(v/v)，中衍化1.5h，然后經(jīng)g25脫鹽柱純化至檸檬酸鹽緩沖液(35mm檸檬酸鹽緩沖液，ph5.5，含2mmedta，150mmnacl)以除去未反應(yīng)的連接子。在沒(méi)有和有50mm二硫蘇糖醇(以測(cè)量總抗體和二硫蘇糖醇釋放的spy)下使用280和343nm下的紫外吸收測(cè)量lar(連接子抗體比率)且測(cè)定為2.7-4.1lar。將2mg/ml的spdb-修飾的抗體與2摩爾當(dāng)量的化合物2a(hcl鹽)/連接的spdb在環(huán)境溫度下在85％檸檬酸鹽緩沖液、15％dma(v/v)中反應(yīng)20h，然后經(jīng)g25脫鹽柱純化至pbs中，ph7.4，以除去未綴合的藥物化合物。最終人源化的ab-spdb-2a綴合物的dar通過(guò)紫外分光光度計(jì)在280至350nm下進(jìn)行測(cè)量及計(jì)算為～1.7-2.1dar。綴合物中單體和單體上連接藥物化合物的百分比通過(guò)hplc使用sec(尺寸排阻色譜)柱進(jìn)行測(cè)定。參見(jiàn)圖23。實(shí)施例7游離藥物和綴合物的體外效能：使用的通用方法：將未綴合的游離藥物化合物或藥物綴合物樣本加入至96-孔平底組織培養(yǎng)板中并使用連續(xù)稀釋滴定以覆蓋所需摩爾范圍。將抗原陽(yáng)性(ag+)或抗原陰性(ag-)細(xì)胞加入特定細(xì)胞密度的孔中從而對(duì)每個(gè)相應(yīng)的細(xì)胞系針對(duì)每種藥物濃度有三份樣品。然后將板在37℃下在5％co2的氛圍中孵育保持4-5天，這取決于細(xì)胞系。colo205(1,000個(gè)細(xì)胞/孔)、namalwa(3,000個(gè)細(xì)胞/孔)、hel92.1.7(3,000個(gè)細(xì)胞/孔)–4天；rh30(1,000個(gè)細(xì)胞/孔)、hl60/qc(5,000個(gè)細(xì)胞/孔)、ramos(10,000個(gè)細(xì)胞/孔)、kb(2,000個(gè)細(xì)胞/孔)、bjab(2,000個(gè)細(xì)胞/孔)、nb4(3,000個(gè)細(xì)胞/孔)–5天，rpmi8226(8,000個(gè)細(xì)胞/孔)–6天。然后在培養(yǎng)末期細(xì)胞毒性效能使用wst-8基于細(xì)胞活力的試驗(yàn)評(píng)估及存活細(xì)胞通過(guò)與wst-8顯影(2-7小時(shí))測(cè)量。測(cè)量每個(gè)孔中的吸光度及對(duì)在每個(gè)濃度下細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)作圖以顯示細(xì)胞毒性和/或抗原特異性(綴合物)。使用上述通用方法，測(cè)量未綴合的游離藥物化合物對(duì)七種細(xì)胞系的細(xì)胞毒性：kb，hela細(xì)胞污染物，hl60/qc，急性髓樣白血病細(xì)胞系，namalwa，伯基特淋巴瘤細(xì)胞系細(xì)胞系，nb4，急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系，hel92.1.7，紅白血病細(xì)胞系，rpmi8226，多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系和bjab，b-細(xì)胞白血病細(xì)胞系。示于圖24和表10的結(jié)果表明這些化合物對(duì)所有寬范圍的細(xì)胞類型具有高效能。針對(duì)表達(dá)抗原的細(xì)胞，在有和沒(méi)有加入過(guò)量未綴合的阻斷抗體以示出殺傷效果特異性下測(cè)量抗體-藥物綴合物的效能和特異性。my9-6-藥物綴合物對(duì)三種不同的表達(dá)抗原的細(xì)胞hl60/atcc、hl60/qc和nb-4非常有效，盡管nb4細(xì)胞中抗原表達(dá)是很低的。特定的效能可通過(guò)加入過(guò)量的未綴合抗體而阻斷，證明細(xì)胞殺傷作用是抗原特異性的。類似地，hufolr1-藥物綴合物可以特定的方式有效殺死表達(dá)抗原的kb細(xì)胞。圖25和26闡明了結(jié)果。表10.游離藥物對(duì)不同細(xì)胞系的效力。ic50值以nm為單位列于表中。namalwakbhl60/qcnb4hel92.1.7rpmi8226bjab1c0.0560.160.0231d0.0690.180.0321e2.4>3.00.6727d0.230.050.0390.140.070.0427e0.390.090.130.20.240.1227f4.41.71.11.8>3.0129a0.0020.0040.0010.00230.00310.0110.00129b0.0030.0070.0060.0070.0070.0050.00329c0.0130.0570.030.0230.0270.160.015使用不同細(xì)胞系和本發(fā)明的不同綴合物也獲得了類似的結(jié)果，所述細(xì)胞系和綴合物包括：humy9-6-spdb-1f對(duì)hl60/qc(ag+)細(xì)胞、hl60/atcc(ag+)細(xì)胞和nb-4(ag+)細(xì)胞(圖25)；hufolr1-spdb-1f對(duì)kb(ag+)細(xì)胞(圖26)；humy9-6-spdb-1f對(duì)抗原陽(yáng)性hl60/qc細(xì)胞、hl60/atcc細(xì)胞、nb-4細(xì)胞和hel92.1.7細(xì)胞(圖29)；humy9-6-spdb-1f、humy9-6-磺基spdb-1f和humy9-6-bmps-1f對(duì)hl60/qc(ag+)細(xì)胞(圖34)；chb38.1-spdb-1f和chb38.1-磺基spdb-1f對(duì)colo205(ag+)細(xì)胞(圖35)；humy9-6-spdb-1f、humy9-6-磺基spdb-1f和humy9-6-bmps-1f對(duì)oci-aml3(ag+)細(xì)胞(圖44)。對(duì)于各種綴合物對(duì)各種細(xì)胞系的效能(表示為ic50值(nm))也可參見(jiàn)圖49。注意，在圖25、29、34、35和44中，綴合物在存在亞硫酸氫鈉下制備。為了比較用和不用亞胺反應(yīng)劑(諸如亞硫酸氫鈉)制備的主題綴合物的體外效能測(cè)量結(jié)果，在有和沒(méi)有亞硫酸氫鈉下使用原位磺化法制備humy9-6-bmps-1f、humy9-6-磺基-spdb-1f和humy9-6-藥物2(其中相應(yīng)的本發(fā)明化合物首先與亞硫酸氫鈉和具有反應(yīng)性基團(tuán)的雙官能交聯(lián)劑混合，然后將反應(yīng)混合物(無(wú)需進(jìn)一步純化)與作為細(xì)胞結(jié)合劑的humy9-6單克隆抗體反應(yīng))。hl60-qc細(xì)胞上綴合物的ic50如下所示。數(shù)據(jù)表明綴合物制備步驟中包含亞胺反應(yīng)性基團(tuán)(諸如亞硫酸氫鈉)不會(huì)負(fù)面影響主題綴合物的體外效能。很明顯，在與humy9-6綴合之前將藥物化合物用亞硫酸氫鈉(5摩爾當(dāng)量，22h，4℃，90:10dma:ph5.5水)預(yù)處理沒(méi)有顯著影響綴合物體外效能的抗原依賴性或抗原非依賴性(用1μm未綴合humy9-6阻斷的抗原)。實(shí)施例8抗體-藥物綴合物的結(jié)合類似于未修飾抗體的結(jié)合：對(duì)于表達(dá)抗原的hl60/qc細(xì)胞，將humy9-6-藥物綴合物的結(jié)合與未修飾的humy9-6抗體的結(jié)合使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行比較。簡(jiǎn)單地說(shuō)，將抗原-陽(yáng)性細(xì)胞在4℃下與綴合物或未修飾的抗體孵育，然后在4℃下用二抗-fitc綴合物孵育，用甲醛固定(1％在pbs中)并用流式細(xì)胞儀分析。在綴合物的結(jié)合與未修飾抗體的結(jié)合之間沒(méi)有觀察到顯著差異。一個(gè)實(shí)施例示于圖27，其中humy9-6-藥物綴合物以類似于未修飾抗體的高親和力結(jié)合于抗原-陽(yáng)性細(xì)胞。實(shí)施例9humy9-6-spdb-1f綴合物在具有hl60/qc腫瘤裸鼠中的體內(nèi)效能：在本研究中，在具有hl60/qc腫瘤裸鼠(人急性髓性白血病模型)中研究humy9-6-spdb-1f的抗腫瘤活性。將hl60/qc腫瘤細(xì)胞(2×106細(xì)胞/小鼠)以0.1ml/小鼠的體積皮下接種至5周齡的雌性無(wú)胸腺裸鼠的右肩區(qū)中。腫瘤細(xì)胞接種后八天將小鼠通過(guò)腫瘤體積隨機(jī)分組(n＝6只/組)。隨機(jī)化那天開(kāi)始進(jìn)行處理，且組包括以pbs(200μl/注射)給藥的對(duì)照組，或?qū)umy9-6-spdb-1f(50μg/kg1f劑量相當(dāng)于2.5mg/kg抗體劑量)以不同劑量(5至100μg/kg)的單次處理。與pbs對(duì)照小鼠中觀察到的損失相比，所有的處理都良好耐受平均體重?fù)p失。平均腫瘤體積與時(shí)間的關(guān)系(圖28和36)以數(shù)據(jù)示出，表明humy9-6-spdb-1f綴合物的劑量依賴性抗腫瘤活性。最低有效劑量估計(jì)為20μg/kg，其比最大耐受劑量低約35倍。實(shí)施例10在雌性cd-1小鼠中研究hufolr-1綴合物的耐受性。在研究開(kāi)始前觀察動(dòng)物七天且發(fā)現(xiàn)沒(méi)有疾病或病癥。給小鼠施用單次靜脈內(nèi)注射該綴合物且每天監(jiān)測(cè)動(dòng)物的體重減輕、發(fā)病率或死亡率。表9示出對(duì)于hufolr1-藥物1，綴合物僅在50μg/kg的最低測(cè)試劑量具有耐受性。相比之下，發(fā)現(xiàn)單亞胺綴合物hufolr1-藥物2和hufolr1-spdb-1f兩者具有更好的耐受性，它們的最大耐受劑量分別是<198μg/kg和>560μg/kg。表9.(a)hufolr1-藥物1，(b)hufolr1-藥物2，和(c)hufolr1-spdb-1f綴合物的耐受性比較數(shù)據(jù)。實(shí)施例11化合物10：向攪拌的1f(18mg,0.019mmol)和n-(β-馬來(lái)酰亞胺丙基氧基)琥珀酰亞胺(bmps)酯(9.2mg，0.034mmol)在無(wú)水二氯甲烷(0.3ml)的溶液中加入無(wú)水二異丙基乙胺(5μl，0.029mmol)。將混合物在室溫下攪拌27小時(shí)，用飽和氯化銨淬滅及用二氯甲烷稀釋。將有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。殘余物通過(guò)制備反相hplc(c18柱，ch3cn/h2o)純化。將含有產(chǎn)物的級(jí)分合并，用二氯甲烷萃取并蒸發(fā)得到白色固體狀化合物10(7.6mg,y＝33％)。ms(m/z)：實(shí)測(cè)值1208.3(m+h)+。參見(jiàn)圖13。實(shí)施例12化合物12：向攪拌的1f(16.5mg,0.018mmol)和磺基-spdb(14.2mg,0.036mmol)在無(wú)水二氯甲烷(0.3ml)的溶液中加入無(wú)水二異丙基乙胺(9μl,0.054mmol)。將混合物在室溫過(guò)夜攪拌并減壓濃縮。殘余物通過(guò)制備反相hplc(c18柱，ch3cn/h2o)純化。將含有產(chǎn)物的級(jí)分合并，用二氯甲烷萃取并蒸發(fā)得到6.6mg淡黃色泡沫狀的化合物12。將水層凍干得到另外白色固體狀0.5mg的化合物12。ms(m/z)：實(shí)測(cè)值1235.0(m-h)-。參見(jiàn)圖15。實(shí)施例13人源化抗體-磺基spdb-1f綴合物的制備將含有2.5mg/ml的humy9-6抗體和10摩爾當(dāng)量的10(用5倍過(guò)量的亞硫酸氫鈉于90:10dma:水中預(yù)處理)在50mmhepes(4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸)ph8.5的緩沖液和15％v/vdma(n,n-二甲基乙酰胺)助溶劑的反應(yīng)中在25℃下綴合6小時(shí)。反應(yīng)后，將綴合物純化且用nap脫鹽柱(illustrasephadexg-25dnagrade,gehealthcare)將緩沖液更換為250mm甘氨酸、10mm組氨酸、1％蔗糖、0.01％tween、50μm亞硫酸氫鈉的制劑緩沖液中。在相同緩沖液中在室溫下利用slide-a-lyzer透析盒(thermoscientific20,000mwco)進(jìn)行4小時(shí)的透析。發(fā)現(xiàn)純化的綴合物具有的dar為2.4(通過(guò)紫外-可見(jiàn)，對(duì)1f使用摩爾消光系數(shù)ε330nm＝15,484cm-1m-1和ε280nm＝30,115cm-1m-1，及對(duì)my9-6抗體，ε280nm＝146,000cm-1m-1)、96.7％單體(通過(guò)尺寸排阻色譜法)，<1％未綴合的游離藥物化合物(用丙酮萃取/反相hplc)和最終1.4mg/ml的蛋白濃度。根據(jù)描述于實(shí)施例7的通用方法，測(cè)量抗體-磺基spdb-1f綴合物的體外效能且數(shù)據(jù)示于圖34和35。與抗體-spdb-1f綴合物相比，抗體-磺基spdb-1f具有相當(dāng)或更高的效能。使用的共價(jià)亞胺反應(yīng)物，諸如亞硫酸氫鈉，提高ab-化合物綴合規(guī)范規(guī)格(如，單體％和藥物負(fù)荷)。在一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，用5摩爾當(dāng)量的亞胺反應(yīng)物在25℃下經(jīng)nhs-bmps-1在90％dmso/10％pbsph7.4下反應(yīng)4小時(shí)以形成加合物。然后將反應(yīng)混合物加入至humy9-6抗體中(4摩爾當(dāng)量ign，2mg/ml，10％v/vdmso，50mmhepes緩沖液，ph8.5，5h，25℃)。使用連二亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉或焦亞硫酸鈉制備的綴合物具有類似的ign/ab比率和單體％，而不用添加劑處理制得的綴合物導(dǎo)致非常低的藥物結(jié)合。參見(jiàn)下述表。實(shí)施例14人源化抗體-bmps-1f綴合物的制備將含有2.0mg/ml的humy9-6抗體和5摩爾當(dāng)量的12(用5倍過(guò)量的亞硫酸氫鈉于90:10dma:水中預(yù)處理)在50mmhepes(4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸)ph8.5的緩沖液和15％v/vdma(n,n-二甲基乙酰胺)助溶劑的反應(yīng)中在25℃下反應(yīng)6小時(shí)。反應(yīng)后，將綴合物純化且用nap脫鹽柱(illustrasephadexg-25dnagrade,gehealthcare)將緩沖液更換為250mm甘氨酸、10mm組氨酸、1％蔗糖、0.01％tween、50μm亞硫酸氫鈉的制劑緩沖液中。在相同緩沖液中在室溫下利用slide-a-lyzer透析盒(thermoscientific20,000mwco)進(jìn)行4小時(shí)的透析。發(fā)現(xiàn)純化的綴合物具有的dar為2.8(通過(guò)紫外-可見(jiàn)，對(duì)1f使用摩爾消光系數(shù)ε330nm＝15,484cm-1m-1和ε280nm＝30,115cm-1m-1，對(duì)my9-6抗體，ε280nm＝146,000cm-1m-1)、91.7％單體(通過(guò)尺寸排阻色譜法)，<1％未綴合的游離藥物化合物(用丙酮萃取/反相hplc)和最終1.2mg/ml的蛋白濃度。根據(jù)描述于實(shí)施例7的通用方法，測(cè)量抗體-bmps-1f綴合物的體外效能且數(shù)據(jù)示于圖34和35?？贵w-bmps-1f綴合物具有與抗體-spdb-1f綴合物相當(dāng)?shù)男堋?shí)施例15hufolr1-spdb-1f綴合物在具有kb腫瘤裸鼠中的體內(nèi)效力：在本研究中，hufolr1-spdb-1f的抗腫瘤活性在具有kb腫瘤的雌性裸鼠(人類宮頸癌模型)中進(jìn)行了研究。將kb(1×107細(xì)胞/小鼠)以0.1ml/小鼠的體積皮下接種至6周齡的雌性無(wú)胸腺裸鼠的右肩區(qū)中。在腫瘤細(xì)胞接種六天后將小鼠通過(guò)腫瘤體積隨機(jī)分組(n＝6只/組)。隨機(jī)化那天開(kāi)始進(jìn)行處理，且組包括以pbs(200μl/注射)給藥的對(duì)照組，或?qū)ufolr1-spdb-1f(50μg/kg連接的劑量相當(dāng)于2.8mg/kg抗體劑量)以不同劑量(20至200μg/kg)的單次處理。所有的處理都是良好耐受的，在任一測(cè)試組中沒(méi)有體重減輕。平均腫瘤體積與時(shí)間的關(guān)系(圖37)以數(shù)據(jù)示出，表明hufolr1-spdb-1f綴合物的劑量依賴性抗腫瘤活性。最低有效劑量估計(jì)為<50μg/kg，其比最大耐受劑量低約14倍。類似的體內(nèi)結(jié)果也通過(guò)使用本發(fā)明的其它綴合物針對(duì)各種其它癌癥模型獲得，包括具有molm-13腫瘤小鼠中的humy9-6-磺基-spdb-1f(圖50)；具有nb4腫瘤小鼠中的humy9-6-磺基-spdb-1f(圖51)；具有hl60/qc腫瘤小鼠的humy9-6-bmps-1f(圖52)；具有molm-13腫瘤小鼠的humy9-6-bmps-1f(圖53)；具有hl60/qc腫瘤小鼠的humy9-6-藥物2(圖56)；和具有molm-13腫瘤小鼠的humy9-6-藥物2(圖57)。注意，在圖53、54、56和57中，綴合物在存在亞硫酸氫鈉下制備。為了比較有或沒(méi)有亞胺反應(yīng)性基團(tuán)制備的主題綴合物的體內(nèi)效力，有或沒(méi)有50μm亞硫酸氫鈉配制humy9-6-藥物2，且綴合物用于治療具有hl60-qc腫瘤異種移植物的小鼠。下列數(shù)據(jù)示出有或沒(méi)有50μm亞硫酸氫鈉配制的綴合物在～20μg/kg藥物劑量時(shí)示出可比的t/c％，表明在綴合物的制備步驟中包含亞硫酸氫鈉不會(huì)負(fù)面地影響主題綴合物的體內(nèi)效能。實(shí)施例16化合物27b：(5-((2-巰基-2-甲基丙基硫)甲基)-1,3-亞苯基)二甲醇：將(5-(巰基甲基)-1,3-亞苯基)二甲醇(0.163g，0.885mmol)溶于小瓶甲醇(3ml)中并加入攪拌棒。向該溶液加入三乙胺(0.016ml，0.118mmol)，然后加入2,2-二甲基環(huán)硫乙烷(0.058ml，0.590mmol)并將所得混合物密封，在室溫下攪拌過(guò)夜(16小時(shí))。然后將反應(yīng)物濃縮，重新溶于二氯甲烷，載入二氧化硅ptlc板(1000微米)并將板用10％甲醇的二氯甲烷溶液顯色。刮下相應(yīng)于產(chǎn)物的條帶，用純乙酸乙酯過(guò)濾并濃縮得到(5-((2-巰基-2-甲基丙基硫)甲基)-1,3-亞苯基)二甲醇(0.095g，0.349mmol，59.1％收率)。1hnmr(400hz,cdcl3)：δ7.26(s,3h)、4.69(s,4h)、3.82(s,2h)、2.74(s,2h)、2.17(s,1h)、2.12(brs,2h)、1.43(s,6h)；13cnmr(400hz,cdcl3)：δ141.6、138.9、126.7、124.3、65.0、49.0、45.4、38.4、31.5；ms(m/z)，預(yù)期值：272.4，實(shí)測(cè)值295.0(m+na)。參見(jiàn)圖30?；衔?7c：(5-((2-甲基-2-(甲基二硫烷基)丙基硫基)甲基)-1,3-亞苯基)二甲醇：將(5-((2-巰基-2-甲基丙基硫)甲基)-1,3-亞苯基)二甲醇(0.120g，0.440mmol)溶于乙醇(5ml)和1.0m磷酸鉀緩沖液(ph7)(5.00ml)中并在冰浴中冷卻(形成沉淀，但是它被忽略)。加入s-甲基甲烷磺硫酯(0.083ml，0.881mmol)及將混合物攪拌過(guò)夜，同時(shí)緩慢(經(jīng)30分鐘)升至室溫。將反應(yīng)物用二氯甲烷稀釋，及除去有機(jī)層，用水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并真空濃縮。將殘余物溶于二氯甲烷并載入至500微米ptlc及用66％乙酸乙酯的己烷中顯色。刮下相應(yīng)于產(chǎn)物的條帶，用乙酸乙酯過(guò)濾并濃縮得到(5-((2-巰基-2-甲基二硫烷基)丙基硫基)甲基)-1,3-亞苯基)二甲醇(0.091g，0.286mmol，64.9％收率)。1hnmr(400hz,cdcl3)：δ7.27(s,3h),4.71(s,4h),3.78(s,2h),2.77(s,2h),2.41(s,3h),1.94(brs,2h),1.38(s,6h)；13cnmr(400hz,cdcl3)：δ141.6,139.0,126.7,124.2,65.0,51.8,44.0,38.2,26.7,25.3；ms(m/z),預(yù)期值：341.5，實(shí)測(cè)值341.1(m+na)。參見(jiàn)圖30?；衔?7d：將(5-((2-甲基-2-(甲基二硫烷基)丙基硫基)甲基)-1,3-亞苯基)二甲醇(80mg，0.251mmol)的無(wú)水二氯甲烷(1.75ml)在鹽水/冰浴中冷卻至-5℃。在-5℃下加入三乙胺(105μl，0.753mmol)，隨后加入甲磺酰氯(50.7μl，0.653mmol)。將反應(yīng)物在-5℃下攪拌1小時(shí)，之后用冷乙酸乙酯將其稀釋并加入冰。將混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗中并用冷乙酸乙酯萃取。將有機(jī)萃取物用冰水洗滌，并用無(wú)水硫酸鎂和硫酸鈉干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。所得的(5-((2-甲基-2-(甲基二硫烷基)丙基硫基)甲基)-1,3-亞苯基)雙(亞甲基)二甲磺酸酯可直接使用而無(wú)需進(jìn)一步純化。將ibd單體(177mg，0.602mmol)的無(wú)水n，n-二甲基甲酰胺(1.75ml)在環(huán)境溫度下加入至(5-((2-甲基-2-(甲基二硫烷基)丙基硫基)甲基)-1,3-亞苯基)雙(亞甲基)二甲磺酸酯(119mg，0.251mmol)。加入碳酸鉀(173mg，1.253mmol)并將反應(yīng)物在環(huán)境溫度下攪拌20小時(shí)。將反應(yīng)混合物用水淬滅并用二氯甲烷萃取。將萃取液用鹽水洗滌然后用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在高真空下濃縮。將粗制品通過(guò)快速硅膠色譜(純dcm→2％meoh/dcm)純化。將含有產(chǎn)物的級(jí)分合并，濃縮并通過(guò)半制備rp-hplc(c18，a＝去離子水b＝acn，20ml/min)純化。將含有所需產(chǎn)物的級(jí)分合并，用二氯甲烷萃取，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾并減壓濃縮，得到所需產(chǎn)物(46mg,21％)。1hnmr(400hz，cdcl3)：δ8.19(d,j＝8.0hz,2h)、7.77(m,d,j＝4.4hz,2h)、7.50(s,2h)、7.34(s,1h)、7.31(s,2h)、7.19(m,4h)、7.03(t,j＝7.2,7.6hz,2h)、6.77(s,2h)、5.14(m,4h)、4.40(m,2h)、3.91(s,6h)、3.70(m,2h)、3.63(m,2h)、3.41(m,2h)、2.65(s,2h)、2.29(s,3h)、1.26(s,6h)。ms(m/z)，計(jì)算值893.2(m+na)+；實(shí)測(cè)值893.2(m+na)+、911.2(m+h2o+na)+、929.2(m+2h2o+na)+、945.1(m+2h2o+k)+。參見(jiàn)圖30。化合物27e和27f：向冷卻的(0℃)的27d(50mg，0.057mmol)無(wú)水二氯甲烷(225μl)和乙醇(450μl)溶液中加入硼氫化鈉(0.651mg，0.017mmol)。將反應(yīng)物在0℃下攪拌五分鐘然后在環(huán)境溫度下保持2.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃，用飽和氯化銨淬滅反應(yīng)并用二氯甲烷萃取。將有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，通過(guò)硅藻土過(guò)濾并濃縮。將粗品通過(guò)產(chǎn)物半制備rp-hplc(c18，a＝去離子水b＝acn，20ml/min)純化。將含有所需產(chǎn)物的級(jí)分合并，用二氯甲烷萃取，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾并濃縮，得到單還原胺27e(11mg,22％)ms(m/z),計(jì)算值895.3(m+na)+實(shí)測(cè)值895.2(m+na)+、913.2(m+h2o+na)+、929.2(m+h2o+k)+和二次還原的胺27f(5mg,10％)ms(m/z),計(jì)算值897.3(m+na)+，實(shí)測(cè)值897.3(m+na)+。參見(jiàn)圖30?；衔?7g：向攪拌的27e(10mg，0.011mmol)在甲醇(733μl)和乙腈(880μl)的溶液中加入三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽(9.85mg，0.034mmol)的緩沖液6.5(147μl)中。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)物用二氯甲烷稀釋。加入水并分層。用鹽水洗滌有機(jī)層，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并減壓濃縮，得到化合物27g(9mg，95％)。ms(m/z)，計(jì)算值849.3(m+na)+；實(shí)測(cè)值849.2(m+na)+、867.2(m+k)+。參見(jiàn)圖30?；衔?7h：向攪拌的27g(9mg，10.88μmol)和2,5-二氧吡咯烷-1-基4-(吡啶-2-基二硫烷基)丁酸甲酯(9.3mg，0.023mmol)在無(wú)水二氯甲烷(0.4ml)的溶液中加入無(wú)水二異丙基乙胺(9μl，0.054mmol)并將反應(yīng)在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。用飽和氯化銨溶液淬滅混合物并用二氯甲烷萃取。用鹽水洗滌萃取液，用無(wú)水硫酸鈉干燥并減壓濃縮。殘余物經(jīng)制備反相hplc純化(c18柱，ch3cn/h2o)。將含有產(chǎn)物的級(jí)分合并，用二氯甲烷萃取及蒸發(fā)得到化合物27h(5mg,44％)。ms(m/z)，計(jì)算值1064.3(m+na)+；實(shí)測(cè)值1064.1(m+na)+，1082.1(m+h2o+na)+，1098.1(m+h2o+k)+。參見(jiàn)圖30。實(shí)施例17化合物28b：將(5-(甲基(2-甲基-2-(甲基二硫烷基)丙基)氨基)-1,3-亞苯基)二甲醇(52mg，0.172mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷(1.7ml)中并在丙酮/冰浴中冷卻至-5。首先，加入三乙胺(0.120ml，0.862mmol)，隨后加入甲磺酰氯(0.040ml，0.517mmol)。將混合物在水浴中攪拌1小時(shí)。然后用冷乙酸乙酯稀釋反應(yīng)物并用冷水洗滌三次，然后經(jīng)無(wú)水硫酸鎂干燥。過(guò)濾二甲磺酸酯，真空濃縮并置于高真空下直至完全干燥。將產(chǎn)物直接用于下一步驟。將ibd單體(115mg,0.39mmol)的無(wú)水n，n-二甲基甲酰胺(1.5ml)在環(huán)境溫度下加入至(5-(甲基(2-(甲基-2-(甲基二硫烷基)丙基)氨基)-1,3-亞苯基)雙(亞甲基)二甲磺酸酯(72mg,0.156mmol)。加入碳酸鉀(108mg,0.780mmol)并將反應(yīng)物在環(huán)境溫度下攪拌20小時(shí)。在攪拌下將水(10ml)直接加入至混合物中，導(dǎo)致形成白色沉淀。過(guò)濾混合物并將固體用另外部分的水洗滌。然后將固體溶于二氯甲烷，用水萃取，然后將有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并真空濃縮得到化合物28b(104mg，78％)，其直接用于下一步驟無(wú)需進(jìn)一步處理。ms(m/z)，實(shí)測(cè)值912.1(m+2h2o+na)。參見(jiàn)圖31?；衔?8c和28d：將化合物28b(55mg，0.064mmol)溶解于二氯甲烷(0.4ml)和乙醇(0.8ml)的無(wú)水混合物中并在冰浴中冷卻至0℃。然后加入溶解于乙醇(100μl)的硼氫化鈉(0.731mg，0.019mmol)溶液，并將混合物攪拌5分鐘及除去冰浴。將反應(yīng)物攪拌2小時(shí)，在低溫下通過(guò)加入飽和氯化銨和二氯甲烷淬滅，分離并用鹽水洗滌有機(jī)層，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物通過(guò)半制備rp-hplc(c18，a＝去離子水b＝acn，20ml/min)純化。將含有所需產(chǎn)物的級(jí)分用二氯甲烷萃取并濃縮，得到單亞胺28c(19mg，32％)ms(m/z)，預(yù)期值：855.1，實(shí)測(cè)值：896.2(m+h2o+na)和二次還原胺28d(22mg,38％)ms(m/z)，預(yù)期值：857.1，實(shí)測(cè)值：880.2(m+na)+。參見(jiàn)圖31。實(shí)施例18化合物29b和29c：將化合物29a(60mg,0.043mmol)溶解于二氯甲烷(0.25ml)和乙醇(0.5ml)的無(wú)水混合物中并在冰浴中冷卻至0℃。然后加入溶解于乙醇(50μl)的硼氫化鈉(0.493mg,0.013mmol)溶液，并將混合物攪拌5分鐘及除去冰浴。將反應(yīng)物攪拌3小時(shí)，在低溫下通過(guò)加入飽和氯化銨和二氯甲烷淬滅，分離并用鹽水洗滌有機(jī)層，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物通過(guò)半制備rp-hplc(c18，a＝去離子水b＝acn，20ml/min)純化。將含有所需產(chǎn)物的級(jí)分用二氯甲烷萃取并濃縮得到單亞胺29b(20mg,33％)ms(m/z)，預(yù)期值：715.7，實(shí)測(cè)值：715.2(m+na)+，733.2(m+h2o+na)+，749.2(m+h2o+k)+和二次還原胺29c(12mg,20％)ms(m/z)，預(yù)期值：694.7，實(shí)測(cè)值：717.2(m+na)+。參見(jiàn)圖32。實(shí)施例19化合物30a：將(5-((2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基)(2-甲基-2-(甲基二硫烷基)丙基)氨基)-1,3-亞苯基)雙(亞甲基)二甲磺酸酯(0.566g，0.960mmol)溶于丙酮(30ml)并在劇烈攪拌下加入溶于丙酮(2毫升)的碘化鈉(0.544g，3.63mmol)。通過(guò)tlc(50％乙酸乙酯的己烷溶液)監(jiān)測(cè)反應(yīng)并在2小時(shí)后過(guò)濾反應(yīng)物，真空濃縮并向殘余物中加入二氯甲烷。將留下的固體鹽過(guò)濾，濃縮濾液，并將所得殘余物在硅膠上用3:5:2乙酸乙酯:己烷:二氯甲烷的混合物純化得到黃色油狀物3,5-二(碘甲基)-n-(2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基)-n-(2-甲基-2-(甲基二硫烷基)丙基)苯胺(0.505g，0.773mmol，74.5％收率)。1hnmr(400hz,cdcl3)：δ6.75(s,2h),6.73(s,1h),4.38(s,4h),3.63(m,14h),3.40(s,3h),2.50(s,3h),1.38(s,6h)；13cnmr(400hz,cdcl3)：δ148.7,140.3,117.3,113.4,71.9,70.7,70.6,67.2,59.8,59.1,53.5,53.4,51.8,26.5,25.6,6.11；ms(m/z),計(jì)算值676.0(m+na)+；實(shí)測(cè)值675.8(m+na)+。參見(jiàn)圖33?；衔?0b：將ibd單體(0.060g，0.204mmol)溶于小瓶的丙酮(4ml)中，加入攪拌棒，然后加入3,5-二(碘甲基)-n-(2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基)-n-(2-甲基-2-(甲基二硫烷基)丙基)苯胺(0.167g，0.255mmol)和碳酸鉀(0.070g，0.510mmol)。將小瓶密封并在室溫下攪拌過(guò)夜。濾出固體并濃縮濾液。將殘余物溶于二氯甲烷，用水萃取，及將有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并真空濃縮得到108mg粗品。將粗品在硅膠上純化，使用30％乙酸乙酯以除去二碘代原料隨后10％甲醇的二氯甲烷洗脫，得到所需產(chǎn)物30b(21mg，0.026mmol，13％)。ms(m/z)，預(yù)期值：819.1，實(shí)測(cè)值：858.0(m+k)+，890.0(m+ch3oh+k)+。參見(jiàn)圖33?；衔?d：將還原的單體3b(4.16mg，0.014mmol)溶于小瓶丙酮(2ml)中，加入攪拌棒，然后加入30b(10mg，0.012mmol)和碳酸鉀(4.21mg，0.030mmol)。將小瓶密封并在室溫下攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)物濃縮以除去丙酮及然后再溶于二氯甲烷，用水萃取，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，并真空濃縮。將殘余物通過(guò)反相c18hplc純化得到1d(2.1mg，2.125μmol，17.42％收率)。ms(m/z)：實(shí)測(cè)值1010.4(m+na)+,1028.4(m+h2o+na)+。參見(jiàn)圖33。實(shí)施例20化合物1的合成化合物1：向攪拌的1f(226mg，0.24mmol)在ipa(20ml)和去離子水(10ml)的懸浮液中加入亞硫酸氫鈉(50mg，0.48mmol)。將混合物在rt下劇烈攪拌2小時(shí)。用干冰/丙酮將其冷凍并凍干。將所得白色蓬松固體溶解于ch3cn/h2o中，并通過(guò)反相hplc純化(c18柱，ch3cn/h2o)。將含有所需產(chǎn)物的級(jí)分合并并用干冰/丙酮浴冷凍并凍干得到白色蓬松固體狀所需化合物1(179.6mg，5＝71.6％)。ms(m/z)：實(shí)測(cè)值1022.0(m–h)-。參見(jiàn)圖38。實(shí)施例21化合物9c的合成化合物9c：向攪拌的1c(60mg,0.061mmol)在ch3cn(3ml)的溶液中在室溫下加入新制備的tcep溶液(將49mg，0.17mmoltcep的鹽酸鹽用飽和碳酸氫鈉中和至ph～6.5，然后用0.5mlph6.5的磷酸鹽緩沖液稀釋)。加入meoh(2.5ml)并將混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。用二氯甲烷和去離子水稀釋反應(yīng)混合物，分離并用鹽水洗滌有機(jī)層，經(jīng)無(wú)水na2so4干燥并過(guò)濾。將濾液脫溶劑(stripped)并抽高真空，得到60mg淺黃色泡沫狀的1h。ms(m/z)：實(shí)測(cè)值940.1(m+h)+。將其溶于甲醇(1.0ml)和ch3cn(1.4ml)，然后加入碘乙酸(24mg，0.13mmol)、去離子水(0.1ml)和碳酸鉀(27mg，0.19mmol)。將混合物在rt下攪拌過(guò)夜(通過(guò)lcms監(jiān)測(cè))。將其用飽和氯化銨淬滅以使溶液為酸性，然后用二氯甲烷稀釋，分離并用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水na2so4干燥，過(guò)濾并脫溶劑，得到化合物9c(57.8mg,y＝91％)，其無(wú)需純化而直接用于下一步驟。ms(m/z)：實(shí)測(cè)值998.1(m+h)+。參見(jiàn)圖12a?；衔?a：在0℃下，向攪拌的化合物9c(57.8mg,0.058mmol)在無(wú)水二氯甲烷(0.2ml)和無(wú)水乙醇(0.6ml)的溶液中加入nabh4(2.5mg,0.066mmol)。除去冰浴，并將混合物在室溫下攪拌3小時(shí)，然后用飽和氯化銨淬滅，用二氯甲烷稀釋，分離并將有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水na2so4干燥，通過(guò)硅藻土過(guò)濾并脫溶劑。將殘余物通過(guò)反相hplc純化(c18柱，ch3cn/h2o)。將產(chǎn)物級(jí)分用二氯甲烷萃取并脫溶劑，得到化合物9a(13.0mg，y＝22％)。ms(m/z)：實(shí)測(cè)值1000.0(m+h)+,1015.9(m+h2o–h)-。參見(jiàn)圖12a。化合物9a：向游離的硫醇1f(45mg，0.048mmol)和碘乙酸(18mg，0.096mmol)在甲醇(1.0ml)和ch3cn(1.4ml)的溶液加入去離子水(0.1ml)和碳酸鉀(20mg，0.14mmol)。將混合物在rt下攪拌過(guò)夜(通過(guò)lcms監(jiān)測(cè))。將其用飽和氯化銨淬滅以使溶液為酸性，然后用二氯甲烷稀釋，分離并用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水na2so4干燥，過(guò)濾并脫溶劑。將殘余物通過(guò)制備反相hplc純化(c18柱，ch3cn/h2o)。將純產(chǎn)物級(jí)分(基于ms)用二氯甲烷萃取，脫溶劑得到所需酸9a(18mg,y＝38％)。ms(m/z)：實(shí)測(cè)值1000.1(m+h)+。參見(jiàn)圖12b。實(shí)施例22化合物1d的合成化合物1d：向攪拌的化合物1c(178mg，0.18mmol)在無(wú)水二氯甲烷(1.2ml)和無(wú)水乙醇或無(wú)水甲醇(0.1ml)的溶液中逐滴加入5-乙基-2-甲基吡啶硼烷(pemb，0.017ml，0.11mmol)。將混合物在rt下攪拌1小時(shí)并用88％甲酸淬滅。用飽和nahco3堿化并用二氯甲烷稀釋，分離并將有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水na2so4干燥，通過(guò)硅藻土過(guò)濾并脫溶劑。將殘余物溶于ch3cn/h2o/88％hcooh(5:1:0.05)并通過(guò)反相hplc純化(c18，ch3cn/h2o)。將含有純產(chǎn)物的級(jí)分用二氯甲烷萃取并脫溶劑，得到化合物1d(56mg，y＝31％)。ms(m/z)：實(shí)測(cè)值988.1(m+h)+。參見(jiàn)圖39。化合物1d：向攪拌的化合物1c(71mg,0.072mmol)在無(wú)水1,2-二氯乙烷(0.8ml)的溶液中加入三乙酰氧基硼氫化鈉(14mg,0.65mmol)。將混合物在rt下攪拌2小時(shí)，用飽和nahco3淬滅并用二氯甲烷稀釋，分離并將有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水na2so4干燥并通過(guò)硅藻土過(guò)濾并脫溶劑。將殘余物溶于ch3cn/h2o/88％hcooh(5:1:0.05)并通過(guò)反相hplc純化(c18，ch3cn/h2o)。將含有純產(chǎn)物的級(jí)分用二氯甲烷萃取并脫溶劑得到化合物1d(17mg,y＝24％)。ms(m/z)：實(shí)測(cè)值988.1(m+h)+。未反應(yīng)的起始材料1c也得到了回收(24mg,y＝34％)。參見(jiàn)圖40。實(shí)施例23化合物31c的合成化合物31a：向化合物1f(57.8mg,0.061mmol)和甲基4-溴丁酸酯(22mg,0.12mmol)在甲醇(1.0ml)和ch3cn(1.0ml)的溶液中加入去離子水(0.1ml)和碳酸鉀(17mg,0.12mmol)。將混合物在rt下攪拌過(guò)夜，然后用飽和氯化銨淬滅并用二氯甲烷稀釋，分離并用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水na2so4干燥，過(guò)濾并脫溶劑。將殘余物通過(guò)制備反相hplc(c18，ch3cn/h2o)純化，得到淡黃色泡沫狀的所需產(chǎn)物31a(14mg，y＝22％)。ms(m/z)：實(shí)測(cè)值1042.1(m+h)+。參見(jiàn)圖41。化合物31b：向該甲酯31a(14mg，0.013mmol)在無(wú)水1,2-二氯乙烷(1.5ml)的溶液中加入三甲基氫氧化錫(36mg，0.2mmol)。將混合物在80℃油浴中攪拌過(guò)夜直至起始材料完全消耗。將其冷卻至室溫，用二氯甲烷稀釋，用鹽水/數(shù)滴5％hcl和鹽水洗滌，干燥并過(guò)濾。將濾液脫溶劑，并用硅膠色譜(二氯甲烷/meoh)純化，得到淺黃色固體狀酸31b(10.2mg，y＝74％)。ms(m/z)：實(shí)測(cè)值1028.2(m+h)+,1044.1(m+h2o–h)-。參見(jiàn)圖41。化合物31c：向酸31b(10.2mg，0.0099mmol)在無(wú)水二氯甲烷(0.5ml)的溶液中加入n-羥基丁二酰亞胺(3.4mg，0.03mmol)和pl-dcc(26mg，0.04mmol，1.55mmol/g)。將混合物在室溫下攪拌過(guò)夜并過(guò)濾以除去樹(shù)脂。將樹(shù)脂用二氯甲烷洗滌，然后用乙酸乙酯洗滌。將濾液脫溶劑并將殘余物通過(guò)反相hplc純化(c18，ch3cn/h2o)。將含有產(chǎn)物的級(jí)分合并并凍干，得到白色固體狀的nhs酯31c(3.6mg，y＝32％)。ms(m/z)：實(shí)測(cè)值1125.1(m+h)+。參見(jiàn)圖41。實(shí)施例24化合物32c的合成化合物32a：向攪拌的苯胺1a(339mg,1.1mmol)在無(wú)水四氫呋喃(4.0ml)的溶液中加入boc酸酐(272mg,1.2mmol)。將該混合物在室溫下繼續(xù)攪拌三天。將反應(yīng)混合物減壓濃縮并將殘余物通過(guò)硅膠色譜純化(ch2cl2/meoh)，得到無(wú)色油狀的化合物32a(405mg,y＝90％)。1hnmr(400hz,cdcl3)：δ7.00(s,2h),6.97(s,1h),4.38(s,4h),4.12(s,2h),3.64(t,j＝5.6hz,2h),3.48-3.44(m,8h),3.40-3.38(m,2h),3.21(s,3h),1.31(s,9h)；13cnmr(400hz,cdcl3)：δ154.65,142.3,142.1,124.1,122.7,80.2,71.6,70.3,70.1,69.9,68.5,63.9,58.65,49.4,28.1.參見(jiàn)圖42?；衔?2b：在-5～-10℃下，向攪拌的化合物32a(51mg,0.128mmol)在無(wú)水二氯甲烷的溶液中加入三乙胺(0.053ml,0.383mmol)。然后在15分鐘內(nèi)用注射器緩慢加入甲磺酰氯(0.026ml，0.332mmol)。將混合物在-5-10℃下攪拌1小時(shí)(tlc,dcm/meoh10:1)。將反應(yīng)物用冰/水淬滅，用冷acoet稀釋，分離并將有機(jī)層用冷水洗滌，經(jīng)無(wú)水na2so4/mgso4干燥，過(guò)濾并脫溶劑。將殘余物用二氯甲烷轉(zhuǎn)移至小反應(yīng)燒瓶中，脫溶劑并抽高真空。將其溶于無(wú)水dmf(0.8ml)，然后加入ibd單體(90mg，0.31mmol)和鉀(53mg，0.38mmol)。將混合物在rt下攪拌過(guò)夜。將其用二氯甲烷稀釋，用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并脫溶劑。將殘余物通過(guò)反相hplc純化(c18，ch3cn/h2o)，得到淡黃色固體狀的化合物32b(56mg，46％)。％).1hnmr(400hz,cdcl3):δ8.29(d,j＝8.0hz,2h),7.87(d,j＝4.8hz,2h),7.60(s,2h),7.38-7.36(m,3h),7.33-7.27(m,4h),7.13(t,j＝7.6hz,2h),6.88(s,2h),5.21(dd,j1＝20.0hz,j2＝12.4hz,4h),4.49(dt,j1＝11.2hz,j2＝4.0hz,2h),3.99(s,6h),3.83(t,j＝6.0hz,2h),3.76-3.48(m,14h),3.35(s,3h),1.43(s,9h)；ms(m/z)：實(shí)測(cè)值992.2(m+h2o+na)+,1010.2(m+2h2o+na)+。參見(jiàn)圖42。化合物32c：在0℃下，向攪拌的化合物32b(56mg,0.059mmol)在無(wú)水二氯甲烷(0.3ml)和無(wú)水乙醇(0.9ml)的溶液中加入nabh4(2.7mg,0.07mmol)。除去冰浴，并將混合物在室溫下攪拌3小時(shí)，然后用飽和氯化銨淬滅，用二氯甲烷稀釋，分離并將有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水na2so4干燥，通過(guò)硅藻土過(guò)濾并脫溶劑。將殘余物通過(guò)反相hplc純化(c18柱，ch3cn/h2o)?；厥盏钠鹗疾牧?2b重量為12mg，使其再經(jīng)受還原條件并通過(guò)反相hplc純化。將含有純產(chǎn)物的所有級(jí)分用二氯甲烷萃取并脫溶劑，得到淺黃色固體狀的化合物32c(20.7mg,y＝37％)。ms(m/z)：實(shí)測(cè)值954.2(m+h)+。參見(jiàn)圖42。實(shí)施例25在雌性cd-1小鼠中研究humy9-6綴合物的耐受性。在研究開(kāi)始前觀察動(dòng)物七天，發(fā)現(xiàn)沒(méi)有疾病或病癥。給小鼠施用單次靜脈注射綴合物，并且每天監(jiān)測(cè)動(dòng)物的體重降低、發(fā)病率或死亡率。表10示出humy9-6-spdb-1c含有二亞胺二硫化物的綴合物在劑量低于300μg/kg時(shí)是耐受的。相比之下，發(fā)現(xiàn)單亞胺二硫化物綴合物humy9-6-spdb-1f和humy9-6-磺基-spdb-1f具有更好的耐受性，它們的最大耐受劑量分別>729μg/kg和<750μg/kg。表10.(a)humy9-6-spdb-1c，(b)humy9-6-spdb-1f，(c)humy9-6-磺基-spdb-1f，和(d)humy9-6-bmps-1f綴合物的耐受性比較數(shù)據(jù)。實(shí)施例26化合物33b：加入化合物33a(20g，77mmol)在無(wú)水二氯甲烷(100ml)中的濃稠懸浮液并冷卻至0℃。加入乙酸(191ml)，得到澄清的溶液，將該溶液在0℃下攪拌直至冷卻。通過(guò)加料漏斗逐滴緩慢加入硝酸(26ml，581mmol)。除去冰浴并將溶液在室溫下繼續(xù)攪拌。3小時(shí)后，將反應(yīng)物用去離子水稀釋并用二氯甲烷萃取。將有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鎂干燥并將濾液真空濃縮。將粗殘余物用乙酸乙酯和己烷重結(jié)晶。將固體過(guò)濾并用己烷洗滌得到黃色蓬松固體狀的化合物33b(13.8g，y＝59％)。1hnmr(400hz,cdcl3)：δ7.48-7.43(m,6h),7.25(s,1h),5.25(s,2h),4.02(s,3h),ms(m/z):326.1(m+na)+。參見(jiàn)圖45。實(shí)施例273,5-雙(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-n-(2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基)苯胺：將(5-氨基-1,3-亞苯基)二甲醇(11.78g，77mmol)、4-甲基苯磺酸2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基酯(15.3g,48.1mmol)和碳酸鉀(13.28g,96mmol)在dmf(96ml)中的溶液的混合物回流20小時(shí)。將反應(yīng)物冷卻至環(huán)境溫度并用二氯甲烷稀釋。將混合物通過(guò)硅藻土過(guò)濾并真空濃縮。將所得橙色油狀物溶于二氯甲烷(240ml)并加入叔丁基二甲基氯硅烷(18.09g，120mmol)和咪唑(9.80g，144mmol)。將反應(yīng)物在環(huán)境溫度下攪拌20小時(shí)，此時(shí)，用二氯甲烷稀釋并通過(guò)硅藻土過(guò)濾。通過(guò)硅膠色譜(etoac/hex)純化得到3,5-雙(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-n-(2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基)苯胺(13g，52％)。1hnmr(400hz,cdcl3)：δ6.52(s,1h),6.40(s,2h),4.56(s,4h),3.60(t,2h,j＝5.2hz),3.56(m,6h),3.46(m,2h),3.29(s,3h),3.20(t,2h,j＝5.2hz),0.84(s,18h),0.00(s,12h)。ms(m/z)：實(shí)測(cè)值550.1(m+na)+。參見(jiàn)圖46。3,5-雙(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-n-(2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基)-n-(2-甲基-2-(甲基二硫烷基)丙基)苯胺：向3,5-雙(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-n-(2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基)苯胺(6.7g，12.69mmol)在無(wú)水1,2-二氯乙烷(50ml)的溶液中加入2-(甲基二硫代)異丁醛(2.74ml，19.04mmol)、三乙酰氧基硼氫化鈉(2.8g，1當(dāng)量)、鋅(ii)氯化物(0.865g，6.35mmol)和硫酸鎂(2.292g，19.04mmol)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌5小時(shí)。加入三乙酰氧基硼氫化鈉(2.8g，1當(dāng)量)。將反應(yīng)物在環(huán)境溫度下繼續(xù)攪拌20小時(shí)。將混合物通過(guò)硅藻土過(guò)濾，用二氯甲烷沖洗，并減壓濃縮，然后用乙酸乙酯和水萃取。將有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾，濃縮并通過(guò)combiflash(etoac/hex)純化得到3,5-雙(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-n-(2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基)-n-(2-甲基-2-(甲基二硫烷基)丙基)苯胺(3.5g，40％)。1hnmr(400hz,cdcl3)：δ6.73(s,2h),6.59(s,1h),4.56(s,4h),3.65-3.51(m,14h),3.30(s,3h),2.38(s,3h),1.28(s,6h),0.84(s,18h),0.00(s,12h)。ms(m/z)：實(shí)測(cè)值684.2(m+na)+。參見(jiàn)圖46。(5-((2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基)(2-甲基-2-(甲基二硫烷基)丙基)氨基)-1,3-亞苯基)二甲醇(1b)：將氟化四丁銨(1m在thf中)(10.57ml，10.57mmol)逐滴加入至0℃冰浴中攪拌的3,5-雙(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-n-(2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基)-n-(2-甲基-2-(甲基二硫烷基)丙基)苯胺(3.5g，5.29mmol)在無(wú)水thf(65ml)的溶液中。添加之后，將混合物在環(huán)境溫度下攪拌兩小時(shí)。用飽和氯化銨溶液淬滅混合物并用乙酸乙酯萃取。將萃取物用水和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。通過(guò)硅膠色譜(meoh/dcm)純化得到(5-((2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基)(2-甲基-2-(甲基二硫烷基)丙基)氨基)-1,3-亞苯基)二甲醇(2g，87％)。1hnmr(400hz,cdcl3):δ6.76(s,2h),6.63(s,1h),4.55(s,4h),3.65-3.51(m,14h),3.35(s,3h),2.44(s,3h),1.33(s,6h)；13cnmr(400hz,cdcl3):δ149.0,142.35,114.0,111.1,71.98,70.7,70.6,70.5,67.6,65.5,59.75,59.1,53.9,51.9,26.6,25.7,20.75；ms(m/z):實(shí)測(cè)值456.2(m+na)+。參見(jiàn)圖46。實(shí)施例28(5-(2-甲基-2-(甲基二硫烷基)丙胺基)-1,3-亞苯基)二甲醇：在環(huán)境溫度下將(5-氨基-1,3-亞苯基)二甲醇(2.5g，16.32mmol)和2-(甲基二硫代)異丁醛(2.347ml，16.32mmol)在無(wú)水乙醇(82ml)中攪拌直至完全溶解(3小時(shí))。將混合物在冰浴中冷卻至0℃并加入硼氫化鈉(0.741g，19.59mmol)。將該反應(yīng)在0℃下攪拌1小時(shí)，然后緩慢地用冷5％hcl溶液淬滅。將混合物用二氯甲烷稀釋并用飽和碳酸氫鈉溶液將ph調(diào)節(jié)至ph＝8然后用二氯甲烷萃取及用鹽水洗滌。將有機(jī)萃取物經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾并減壓濃縮。通過(guò)硅膠色譜(meoh/dcm)純化得到白色固體狀的(5-(2-甲基-2-(甲基二硫烷基)丙基氨基)-1,3-亞苯基)二甲醇(3g，65％)。1hnmr(400hz,cdcl3):δ6.62(s,1h),6.54(s,2h),4.53(s,4h),3.13(s,2h),2.30(s,3h),1.32(s,6h)。參見(jiàn)圖47。實(shí)施例299-羥基-8-甲氧基-6-氧代-12a,13-二氫-6h-苯并[5,6][1,4]二氮雜[1,2-a]吲哚-11(12h)-羧酸叔丁酯：向9-羥基-8-甲氧基-11,12,12a,13-四氫-6h-苯并[5,6][1,4]二氮雜[1,2-a]吲哚-6-酮3b(0.3g，1.012mmol)在甲醇(5.06ml)的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(0.265g，1.215mmol)、三乙胺(0.212ml，1.519mmol)和dmap(6.18mg，0.051mmol)。在環(huán)境溫度下攪拌5小時(shí)后，將反應(yīng)混合物真空濃縮。將殘余物再溶于二氯甲烷并通過(guò)硅藻土過(guò)濾。通過(guò)硅膠色譜(20％etoac/dcm)純化得到白色固體狀的9-羥基-8-甲氧基-6-氧代-12a,13-二氫-6h-苯并[5,6][1,4]二氮雜[1,2-a]吲哚-11(12h)-羧酸叔丁酯(0.21g，52％)。1hnmr(400hz,cdcl3):δ8.25(d,j＝8.0hz,1h),7.44(s,1h),7.18(t,j＝7.2hz,1h),7.11(d,j＝7.2hz,1h),6.98(t,j＝7.2hz,1h),6.39(s,1h),4.37(m,1h),3.75(s,3h),3.42(m,3h),2.74(dd,j＝3.6,16.4hz,1h),1.47(s,9h)。參見(jiàn)圖48。實(shí)施例30humy9-6-31c的制備和測(cè)試將含有2.0mg/ml的humy9-6抗體和5摩爾當(dāng)量的化合物31c(用5倍過(guò)量的亞硫酸氫鈉于90:10dma:水中預(yù)處理)在50mmhepes(4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸)ph8.5緩沖液和10％v/vdma(n,n-二甲基乙酰胺)助溶劑的反應(yīng)物在25℃下綴合6小時(shí)。反應(yīng)后，使用nap脫鹽柱(illustrasephadexg-25dnagrade,gehealthcare)來(lái)純化綴合物，并將緩沖液更換為250mm甘氨酸、10mm組氨酸、1％蔗糖、0.01％tween-20、50μm亞硫酸氫鈉制劑緩沖液，ph6.2。在相同緩沖液中在室溫下利用slide-a-lyzer透析盒(thermoscientific20,000mwco)進(jìn)行4小時(shí)的透析。發(fā)現(xiàn)純化的綴合物具有平均3.1個(gè)ign分子連接于每個(gè)抗體(通過(guò)紫外-可見(jiàn)，對(duì)1使用摩爾消光系數(shù)ε330nm＝15,484cm-1m-1和ε280nm＝30,115cm-1m-1，及對(duì)my9-6抗體，ε280nm＝207,000cm-1m-1)、98％單體(通過(guò)尺寸排阻色譜法)，<0.2％未綴合藥物(通過(guò)雙柱反相hplc分析)和最終0.4mg/ml的蛋白濃度。帶有31c的humy9-6綴合物在兩種不同的藥物負(fù)荷下的體外效能測(cè)量示于下文。兩種綴合物對(duì)抗原陽(yáng)性hl60-qc細(xì)胞具有高效能，它們的ic50值在1.3-1.8pm之間。用1μm未綴合的humy9-6阻斷的抗原顯著降低效能，這表明細(xì)胞毒性作用的抗原特異性。實(shí)施例31各種綴合物在具有腫瘤的裸鼠中的體內(nèi)效力在本研究中，本發(fā)明若干綴合物的抗腫瘤活性在免疫缺陷小鼠(裸鼠或scid)，優(yōu)選具有各種腫瘤的雌性裸鼠中進(jìn)行研究。在一些情況下，除此之外或作為替代，可以使用裸大鼠。待測(cè)試的綴合物包括本文所述的任一種或多種綴合物?？捎糜诮臃N裸鼠的各種腫瘤細(xì)胞系包括hl60/qc、molm-13、nb4、hel92.1.7、oci-aml3、kb，和/或本領(lǐng)域認(rèn)為用于疾病指示的任何其它癌細(xì)胞系(如，癌癥)?？捎糜谶x擇適于體內(nèi)評(píng)估的腫瘤細(xì)胞系的一些標(biāo)準(zhǔn)包括：a)腫瘤細(xì)胞上靶抗原的表達(dá)，和，b)腫瘤細(xì)胞對(duì)未綴合藥物的體外的敏感性。例如，體外細(xì)胞系敏感性篩選，諸如60-細(xì)胞系篩選描述于美國(guó)國(guó)家癌癥研究所(參見(jiàn)voskoglou-nomikos等人,2003,clinicalcancerres.9；42227-4239，其通過(guò)引入并入本文)可被用作指南之一，以確定可適合于用本發(fā)明的化合物進(jìn)行治療的癌癥類型。對(duì)各種綴合物對(duì)各種腫瘤細(xì)胞系的效能(由ic50值(nm)表示)進(jìn)行了相應(yīng)的測(cè)量。使用與實(shí)施例15概述的基本相同的方案，將各種腫瘤細(xì)胞系接種于裸鼠或scid小鼠。例如，將約1×106–5×107個(gè)腫瘤細(xì)胞(通常1×107個(gè)細(xì)胞/小鼠)以0.1-0.2ml/小鼠的體積皮下接種至6周齡的雌性無(wú)胸腺裸鼠的右肩區(qū)中。當(dāng)腫瘤達(dá)到～100mm3的平均大小時(shí)(通常在腫瘤細(xì)胞接種后6-8天)，將小鼠根據(jù)腫瘤體積隨機(jī)分組(如，n＝5-8只/組)。隨機(jī)化后第二天開(kāi)始進(jìn)行處理，且組包括以合適媒介物(200μl/注射)給藥的對(duì)照組，或?qū)⑸鲜鰠⒖嫉乃幬锞Y合物(50μg/kg連接的劑量相當(dāng)于約2mg/kg抗體劑量)以不同劑量(5至700μg/kg)的單次處理。也可使用多個(gè)給藥方案(例如在第1、3、5天或1、4、7天進(jìn)行處理)。測(cè)量中值和平均腫瘤體積對(duì)比時(shí)間，數(shù)據(jù)表明主題綴合物的劑量依賴性抗腫瘤活性。然后計(jì)算最低有效劑量并與最大耐受劑量相比較。實(shí)施例32使用4-硝基-磺基-spdb連接子制備humy9-6-磺基-spdb-1d將含有6mg/ml的humy9-6抗體和5摩爾當(dāng)量的高反應(yīng)性的n-琥珀酰亞胺基-4-(4-硝基吡啶基-2-二硫代)丁酸酯連接子(20mm在乙醇中的儲(chǔ)備液)的反應(yīng)在25℃下于50mmepps緩沖液(ph8)中孵育3h。使用nap脫鹽柱(illustrasephadexg-25dna級(jí),gehealthcare)除去未反應(yīng)的連接子?；诳贵w濃度和通過(guò)紫外-可見(jiàn)(對(duì)于2-硫代-4-硝基吡啶酮，ε394nm＝14205cm-1m-1)的dtt-釋放的硝基吡啶基-2-硫酮濃度，連接子抗體比率(lar)測(cè)定為約2.3。將連接子修飾的humy9-6在50mmhepes緩沖液(ph8.5,10％v/vdma)中稀釋至2mg/ml，并與2摩爾當(dāng)量的化合物1d/連接子(5mm在dma中的儲(chǔ)備液；4.6當(dāng)量/抗體)在25℃下反應(yīng)30分鐘。通過(guò)監(jiān)測(cè)在394nm下的紫外吸收的增加來(lái)確定二硫化物交換反應(yīng)的完成。反應(yīng)后，使用脫鹽柱(g-25sephadex，細(xì)粒級(jí)，gehealthcare)來(lái)純化綴合物，將緩沖液更換為ph6.2下的250mm甘氨酸、10mm組氨酸、1％蔗糖、0.01％tween-20、50μm亞硫酸氫鈉。發(fā)現(xiàn)純化的綴合物具有平均每個(gè)抗體連接有2.1分子的1d(通過(guò)紫外-可見(jiàn)，對(duì)1d使用摩爾消光系數(shù)ε330nm＝15,484cm-1m-1和ε280nm＝30,115cm-1m-1，對(duì)humy9-6，ε280nm＝207,000cm-1m-1)、98％單體(通過(guò)尺寸排阻色譜法)、<1％未綴合的1d(用丙酮萃取/反相hplc)、70％蛋白質(zhì)產(chǎn)量和32％的1d的總收率。參見(jiàn)圖60。序列表<110>immunogen,inc.<120>細(xì)胞毒性苯并二氮雜卓衍生物<130>121162-00220<140><141><150>61/483,499<151>2011-05-06<150>61/443,062<151>2011-02-15<150>61/443,092<151>2011-02-15<160>14<170>patentin3.5版<210>1<211>5<212>prt<213>人工序列<220><221>來(lái)源<223>/注釋="人工序列的描述：合成肽"<400>1glytyrphemetasn15<210>2<211>17<212>prt<213>人工序列<220><221>來(lái)源<223>/注釋="人工序列的描述：合成肽"<220><221>變體<222>(14)..(14)<223>/替代="gln"或"his"或"arg"<220><221>misc_feature<222>(14)..(14)<223>/注釋="序列中給定的殘基對(duì)于所述位置的注釋無(wú)偏好性"<220><221>變體<222>(16)..(16)<223>/替代="his"或"asn"或"arg"<220><221>變體<222>(17)..(17)<223>/替代="glu"或"thr"或"ser"或"ala"或"val"<220><221>misc_feature<222>(16)..(17)<223>/注釋="序列中給定的殘基對(duì)于在所述位置注釋中的那些無(wú)偏好性"<400>2argilehisprotyraspglyaspthrphetyrasnglnlysphegln151015gly<210>3<211>9<212>prt<213>人工序列<220><221>來(lái)源<223>/注釋="人工序列的描述：合成肽"<400>3tyraspglyserargalametasptyr15<210>4<211>15<212>prt<213>人工序列<220><221>來(lái)源<223>/注釋="人工序列的描述:合成肽"<400>4lysalaserglnservalserphealaglythrserleumethis151015<210>5<211>7<212>prt<213>人工序列<220><221>來(lái)源<223>/注釋="人工序列的描述：合成肽"<400>5argalaserasnleugluala15<210>6<211>9<212>prt<213>人工序列<220><221>來(lái)源<223>/注釋="人工序列的描述：合成肽"<400>6glnglnserargglutyrprotyrthr15<210>7<211>17<212>prt<213>人工序列<220><221>來(lái)源<223>/注釋="人工序列的描述：合成肽"<400>7argilehisprotyraspglyaspthrphetyrasnglnlysphegln151015gly<210>8<211>448<212>prt<213>人工序列<220><221>來(lái)源<223>/注釋="人工序列的描述：合成多肽"<400>8glnvalglnleuvalglnserglyalagluvalvallysproglyala151015servallysilesercyslysalaserglytyrthrphethrglytyr202530phemetasntrpvallysglnserproglyglnserleuglutrpile354045glyargilehisprotyraspglyaspthrphetyrasnglnlysphe505560glnglylysalathrleuthrvalasplysserserasnthralahis65707580metgluleuleuserleuthrsergluaspphealavaltyrtyrcys859095thrargtyraspglyserargalametasptyrtrpglyglnglythr100105110thrvalthrvalserseralaserthrlysglyproservalphepro115120125leualaproserserlysserthrserglyglythralaalaleugly130135140cysleuvallysasptyrpheprogluprovalthrvalsertrpasn145150155160serglyalaleuthrserglyvalhisthrpheproalavalleugln165170175serserglyleutyrserleuserservalvalthrvalproserser180185190serleuglythrglnthrtyrilecysasnvalasnhislysproser195200205asnthrlysvalasplyslysvalgluprolyssercysasplysthr210215220histhrcysproprocysproalaprogluleuleuglyglyproser225230235240valpheleupheproprolysprolysaspthrleumetileserarg245250255thrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalserhisgluasppro260265270gluvallyspheasntrptyrvalaspglyvalgluvalhisasnala275280285lysthrlysproargglugluglntyrasnserthrtyrargvalval290295300servalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasnglylysglutyr305310315320lyscyslysvalserasnlysalaleuproalaproileglulysthr325330335ileserlysalalysglyglnproarggluproglnvaltyrthrleu340345350proproserargaspgluleuthrlysasnglnvalserleuthrcys355360365leuvallysglyphetyrproseraspilealavalglutrpgluser370375380asnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrproprovalleuasp385390395400seraspglyserphepheleutyrserlysleuthrvalasplysser405410415argtrpglnglnglyasnvalphesercysservalmethisgluala420425430leuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleuserproglylys435440445<210>9<211>218<212>prt<213>人工序列<220><221>來(lái)源<223>/注釋="人工序列的描述：合成多肽"<400>9aspilevalleuthrglnserproleuserleualavalserleugly151015glnproalaileilesercyslysalaserglnservalserpheala202530glythrserleumethistrptyrhisglnlysproglyglnglnpro354045argleuleuiletyrargalaserasnleuglualaglyvalproasp505560argpheserglyserglyserlysthraspphethrleuasnileser65707580provalglualagluaspalaalathrtyrtyrcysglnglnserarg859095glutyrprotyrthrpheglyglyglythrlysleugluilelysarg100105110thrvalalaalaproservalpheilepheproproseraspglugln115120125leulysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphetyr130135140proargglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnser145150155160glyasnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspserthr165170175tyrserleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglulys180185190hislysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserserpro195200205valthrlysserpheasnargglyglucys210215<210>10<211>218<212>prt<213>人工序列<220><221>來(lái)源<223>/注釋="人工序列的描述：合成多肽"<400>10aspilevalleuthrglnserproleuserleualavalserleugly151015glnproalaileilesercyslysalaserglnservalserpheala202530glythrserleumethistrptyrhisglnlysproglyglnglnpro354045argleuleuiletyrargalaserasnleuglualaglyvalproasp505560argpheserglyserglyserlysthraspphethrleuthrileser65707580provalglualagluaspalaalathrtyrtyrcysglnglnserarg859095glutyrprotyrthrpheglyglyglythrlysleugluilelysarg100105110thrvalalaalaproservalpheilepheproproseraspglugln115120125leulysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphetyr130135140proargglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnser145150155160glyasnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspserthr165170175tyrserleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglulys180185190hislysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserserpro195200205valthrlysserpheasnargglyglucys210215<210>11<211>118<212>prt<213>人工序列<220><221>來(lái)源<223>/注釋="人工序列的描述：合成多肽"<400>11glnvalglnleuvalglnserglyalagluvalvallysproglyala151015servallysilesercyslysalaserglytyrthrphethrglytyr202530phemetasntrpvallysglnserproglyglnserleuglutrpile354045glyargilehisprotyraspglyaspthrphetyrasnglnlysphe505560glnglylysalathrleuthrvalasplysserserasnthralahis65707580metgluleuleuserleuthrsergluaspphealavaltyrtyrcys859095thrargtyraspglyserargalametasptyrtrpglyglnglythr100105110thrvalthrvalserser115<210>12<211>112<212>prt<213>人工序列<220><221>來(lái)源<223>/注釋="人工序列的描述：合成多肽"<400>12aspilevalleuthrglnserproleuserleualavalserleugly151015glnproalaileilesercyslysalaserglnservalserpheala202530glythrserleumethistrptyrhisglnlysproglyglnglnpro354045argleuleuiletyrargalaserasnleuglualaglyvalproasp505560argpheserglyserglyserlysthraspphethrleuasnilese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