本發(fā)明涉及一種注射用頭孢孟多酯鈉粉針制劑的制備方法，屬于原料藥物的制備領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
頭孢孟多酯鈉作為頭孢品種中的較大品種，目前市場潛力巨大，本品為第二代頭孢菌素類抗生素。其結(jié)構(gòu)式為：
本品為化學(xué)名稱：(6R，7R)-7(R)-(2-甲酰氧基-2-苯乙酰胺基]-3[[(1-甲基-1H-四唑-5-基)硫代]甲基]-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[4.2.0]辛-2-烯-2-羧酸鈉鹽。按無水物計(jì)算，含頭孢孟多(C18H17N6NaO6S2)84.0％～93.0％。
在頭孢孟多酯鈉生產(chǎn)研究過程中，通過對原料的7-ACA的發(fā)酵方式的改進(jìn)使得影響了頭孢孟多酯鈉粉針制劑的反應(yīng)效率和產(chǎn)品的質(zhì)量，目前，缺少一種提高產(chǎn)品反應(yīng)效率和質(zhì)量的生產(chǎn)反應(yīng)的技術(shù)方法。
本課題依托“創(chuàng)新藥物研究與開發(fā)技術(shù)體系建設(shè)”國家重點(diǎn)專項(xiàng)，對生物菌種資源庫及新藥篩選和先導(dǎo)化合物的發(fā)現(xiàn)、微生物來源創(chuàng)新藥物的研發(fā)與孵化、產(chǎn)業(yè)化試驗(yàn)等系列技術(shù)創(chuàng)新平臺(tái)的建設(shè)，形成以微生物發(fā)酵藥物和關(guān)鍵技術(shù)研究為主線的包括“原始創(chuàng)新-新產(chǎn)品研發(fā)和中試研究-產(chǎn)業(yè)化孵化”在內(nèi)的完整的技術(shù)創(chuàng)新體系，完成了10個(gè)以上的微生物發(fā)酵類新藥、新產(chǎn)品的試孵化。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是如何提供一種通過對于7-ACA制備過程的改進(jìn)，進(jìn)而改進(jìn)頭孢孟多的產(chǎn)品質(zhì)量的方法。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：
一種注射用頭孢孟多酯鈉粉針制劑的制備方法，包括以下步驟：
①菌種制備：將保藏的冷凍管恢復(fù)至室溫后涂斜面，培養(yǎng)一段時(shí)間后冷藏，使用時(shí)向斜面種子中倒入無菌水制成種子液；
②種子罐的準(zhǔn)備及培養(yǎng)：在配料罐1中將原料投料后由配料罐壓入種子罐中，用蒸汽對種子罐進(jìn)行高溫滅菌，并將料液降溫；步驟①中的種子液經(jīng)過產(chǎn)孢發(fā)酵后得到的孢子液，孢子液接入一級種子罐中在一定通氣量、溫度和pH下培養(yǎng)一段時(shí)間；移種至二級種子罐，孢子液在二級種子罐中在一定通氣量、溫度和pH下培養(yǎng)一段時(shí)間；移種至三級種子罐，孢子液在三級種子罐中在一定通氣量、溫度和pH下培養(yǎng)一段時(shí)間，效價(jià)長至一定值時(shí)的發(fā)酵液1移種至發(fā)酵罐中備用；
③發(fā)酵罐的準(zhǔn)備及培養(yǎng)：在配料罐2中將原料投料后由配料罐壓入種子罐中，用蒸汽進(jìn)行高溫滅菌，并用冷媒水將料液降溫；將培養(yǎng)好的發(fā)酵液1移種至發(fā)酵罐，保持前期、中后期溫度、通氣量為保持一定范圍，并根據(jù)體系中參數(shù)補(bǔ)加碳源、氮源并用氨水調(diào)節(jié)pH，當(dāng)pH和殘油量達(dá)到一定值時(shí)放罐，得到發(fā)酵液2；
④過濾：將發(fā)酵液壓入酸化罐，加入硫酸進(jìn)行酸化，控制pH得到酸化的料液，將酸化后的料液用陶瓷膜過濾得到澄清的濾液和濾渣；
⑤脫色、濃縮：將濾液用樹脂對預(yù)處理脫色、吸附解析附和再次脫色得到脫色的料液，將脫色的料液采用納濾濃縮，得到CPC料液備用，結(jié)晶得到頭C鈉鹽；
⑥反應(yīng)罐和管路的準(zhǔn)備：將反應(yīng)罐和管路在使用前用氫氧化鈉溶液浸泡，并用水洗滌，將?；竿度氲睫D(zhuǎn)化罐中，純水清洗后，吹干待用；
⑦酶催化反應(yīng)的準(zhǔn)備：向配料罐中加入純水，控溫下加入頭C鈉鹽，攪拌至完全溶解，調(diào)節(jié)pH至弱堿性，加純水，得到反應(yīng)液；
⑧酶催化反應(yīng)：將反應(yīng)液在控溫下攪拌，用氨水控制pH值，當(dāng)反應(yīng)液中濃度為1.0mg/ml，停止加入氨水，維持pH在10min保持不變，終止反應(yīng)；
⑨結(jié)晶：將步驟⑧中的料液打入至結(jié)晶罐中，攪拌下加入結(jié)晶助劑，加入鹽酸調(diào)節(jié)pH至6.0時(shí)減慢加酸的速度，在一定時(shí)間內(nèi)調(diào)節(jié)pH至pH5.2～5.8，停止加酸，攪拌，再次加入鹽酸調(diào)節(jié)pH至3.0～4.2，控制溫度0～5℃，停止攪拌，養(yǎng)晶一段時(shí)間，放料；
⑩離心、真空干燥：將步驟⑨中的晶體中加入冷純水并頂洗，再用冷丙酮頂洗后進(jìn)行真空干燥，得到7-ACA；
7-ATCA的制備：向乙腈、甲巰四氮唑、B3F-乙腈中加入7-ACA，攪拌溶解得到溶液，升溫至35℃，反應(yīng)一段時(shí)間后降溫至5℃，將溶液轉(zhuǎn)入裝有預(yù)冷純化水中，緩慢攪拌并調(diào)節(jié)pH至強(qiáng)酸性，在一定溫度下養(yǎng)晶，過濾并干燥，得到7-ATCA；
頭孢孟多酯酸的制備：將7-ATCA加入到乙酸乙酯中，攪拌下加入N,O-雙三甲硅基乙酰胺，升溫至35℃，反應(yīng)一段時(shí)間至澄清，降溫至-10℃，向體系中滴加甲?；馓宜狨Ｂ?，升溫至0℃，反應(yīng)60min，加入純化水?dāng)嚢韬箪o置；在有機(jī)相中脫水、脫色、過濾，將濾液進(jìn)行濃縮，得到頭孢孟多酯酸溶液；
頭孢孟多酯鈉的制備：將異辛酸鈉溶于丙酮和無水乙醇中，得到異辛酸鈉溶液，將步驟中的頭孢孟多酯酸溶液降溫至10℃，并加入到加入異辛酸鈉溶液中，攪拌升溫至30℃，養(yǎng)晶一段時(shí)間，過濾、真空干燥，得到頭孢孟多酯鈉固體；
無菌分裝：無菌分裝得到注射用頭孢孟多酯鈉粉針制劑。
本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)在于：所述步驟①中培養(yǎng)時(shí)間為7～10天，冷藏溫度為27～29℃。
本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)在于：所述步驟②中原材料為花生餅粉、豆餅粉、葡萄糖、玉米漿的一種或幾種，用冷媒水將料液降溫，步驟②和步驟③中高溫滅菌的溫度為121～123℃，降溫至27～29℃，一級種子罐中通氣量為1:0.8～1:1.5,溫度為27～29℃，pH為6.8～7.8，培養(yǎng)時(shí)間為80～100h；二級種子罐中通氣量為1:0.8～1:1.5,溫度為27～29℃，pH為6.8～7.8，培養(yǎng)時(shí)間為40～60h；三級種子罐中通氣量為1:0.8～1:1.5,溫度為27～29℃，pH為6.8～7.8，培養(yǎng)時(shí)間為40～60h，效價(jià)長至1000～3000u/ml時(shí)移種至發(fā)酵罐。
本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)在于：所述步驟③中原材料為花生餅粉、玉米餅粉、玉米漿、糊精、谷朊粉中的一種或幾種，前期溫度為27～29℃、中后期溫度為24～26℃、通氣量為1:0.8～1：1.5，步驟③中參數(shù)為pH、氨氮、溶氧、效價(jià)增長、菌絲形態(tài)和菌絲量，碳源、氮源為液糖、豆油、硫酸銨；放罐時(shí)pH為5.0～5.7，殘油量為1％以下。
本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)在于：所述步驟④中硫酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25～30％，pH為2.4～2.8，步驟⑥中氫氧化鈉的濃度為1mol/L。
本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)在于：所述步驟⑦中溫度為18～20℃，用3～5mol/L的氨水調(diào)節(jié)pH為7～8，加水至5～6m3；步驟⑧中3～5mol/L氨水控制pH值為7.8～8.5。
本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)在于：所述步驟⑨中結(jié)晶助劑的加入量為料液體積比的0.1‰，鹽酸的濃度為12mol/L，在5～30min內(nèi)調(diào)節(jié)pH，養(yǎng)晶時(shí)間為30～60min。
本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)在于：所述步驟⑩中冷純水頂洗的次數(shù)為3～5次，每批料冷純水總用量1～1.5m3，冷丙酮頂洗2～3次，總用量0.5～1m3，真空干燥的溫度為35～40℃，真空度為≤-0.098Mpa，干燥時(shí)間為1～4h。
本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)在于：所述步驟反應(yīng)時(shí)間為2～3h，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的氨水調(diào)節(jié)pH至3.0，養(yǎng)晶溫度為0～5℃，養(yǎng)晶時(shí)間為90min。
本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)在于：所述步驟中反應(yīng)3～4h，脫水劑為無水硫酸鎂，脫色劑為活性炭；步驟中養(yǎng)晶時(shí)間為60～70min。
由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明取得的技術(shù)進(jìn)步是：
本發(fā)明通過改進(jìn)7-ACA制備過程中的發(fā)酵和提取技術(shù)，7-ACA的質(zhì)量有所改進(jìn)，從而，提高了注射用頭孢孟多酯鈉粉針制劑的質(zhì)量。
本發(fā)明中通過陶瓷膜過濾得到澄清的濾液進(jìn)行預(yù)處理脫色、、吸附解析附和再次脫色，由于三個(gè)過程中所用的是不孔徑的樹脂其具有比表面積和網(wǎng)孔孔徑不同，使得每個(gè)孔徑的料液都可以實(shí)現(xiàn)脫色的效果，也保證了最終產(chǎn)品頭孢孟多酯鈉粉針制劑的質(zhì)量。
本發(fā)明中利用納濾濃縮的方法，將完成脫色處理的料液中含有少量、濃度低的原料液使用納濾濃縮的方法回收，相較于傳統(tǒng)的結(jié)晶方法回收率更高，損失小，同時(shí)，也保護(hù)了其抗菌的活性，保證了得到的頭C鈉鹽的純度，進(jìn)而也提高了在后續(xù)過程中生產(chǎn)注射用頭孢孟多酯鈉粉針制劑的質(zhì)量。
本發(fā)明在結(jié)晶后在晶體中加入冷純水和冷丙酮并進(jìn)行頂洗，既可以保證結(jié)晶能提高濾液質(zhì)量和產(chǎn)率，又能簡化操作工藝流程的提純產(chǎn)品，減小了濾液中產(chǎn)品的損失，提高了濾液效價(jià)。
具體實(shí)施方式
下面對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明，包括以下步驟：
①菌種制備：將保藏的冷凍管恢復(fù)至室溫后涂斜面，培養(yǎng)7～10天后冷藏，冷藏溫度為27～29℃，使用時(shí)向斜面種子中倒入無菌水制成種子液；
②種子罐的準(zhǔn)備及培養(yǎng)：在配料罐1中將葡萄糖、玉米漿投料,投料后由配料罐壓入種子罐中，用蒸汽對種子罐進(jìn)行溫度為121～123℃的高溫滅菌，并將料液用冷媒水將料液降溫至27～29℃；步驟①中的種子液經(jīng)過產(chǎn)孢發(fā)酵后得到的孢子液，孢子液接入一級種子罐中在通氣量為1:0.8～1:1.5,溫度為27～29℃，pH為6.8～7.8的條件下培養(yǎng)時(shí)間為80～100h；移種至二級種子罐，孢子液在二級種子罐中在通氣量為1:0.8～1:1.5,溫度為27～29℃，pH為6.8～7.8的條件下培養(yǎng)時(shí)間為40～60h；然后，移種至三級種子罐，孢子液在三級種子罐中在通氣量為1:0.8～1:1.5,溫度為27～29℃，pH為6.8～7.8的條件下培養(yǎng)時(shí)間為40～60h，效價(jià)長至1000～3000u/ml時(shí)移種至發(fā)酵罐中備用；
③發(fā)酵罐的準(zhǔn)備及培養(yǎng)：在配料罐2中將花生餅粉谷朊粉中投料，由配料罐壓入種子罐中，用蒸汽進(jìn)行高溫滅菌，滅菌溫度121～123℃，滅菌結(jié)束后用冷媒水將料液降溫至27～29℃；將培養(yǎng)好的發(fā)酵液1移種至發(fā)酵罐，前期溫度27～29℃，中后期溫度24～26℃，通氣量1:0.8～1：1.5，發(fā)酵過程中，根據(jù)pH、氨氮、溶氧、效價(jià)增長、菌絲形態(tài)、菌絲量進(jìn)行綜合分析，適量補(bǔ)加液糖、豆油、硫酸銨、氨水，放罐前控制pH在5～6、殘油量在1％以下，得到發(fā)酵液2；
④過濾：將發(fā)酵液壓入酸化罐，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25～30％硫酸進(jìn)行酸化，控制pH為2.4～2.8得到酸化的料液，將酸化后的料液用膜進(jìn)行過濾至得到澄清的濾液和濾渣；
⑤脫色、濃縮：將濾液經(jīng)過膜過濾，用藍(lán)曉廠家生產(chǎn)的LX1180樹脂對濾液進(jìn)行預(yù)脫色處理，脫色后的料液用LX18樹脂進(jìn)行吸附后進(jìn)行解析，解析后的料液再通過LX67進(jìn)行脫色，將脫色的料液采用納濾濃縮，得到CPC料液備用，結(jié)晶得到頭C鈉鹽；
⑥反應(yīng)罐和管路的準(zhǔn)備：反應(yīng)罐和管路在使用前用1mol/L左右的氫氧化鈉溶液浸泡，用工業(yè)用水清洗，再用純水徹底清洗，將要使用的?；竿度氲较鄳?yīng)的轉(zhuǎn)化罐，酶的投量18～20MU，用純水清洗，每次加2～3m3純水，清洗4～5遍，清洗完畢吹干待用；
⑦酶催化反應(yīng)的準(zhǔn)備：向配料罐中加入純水，控制溫度為18～20℃下加入頭C鈉鹽，攪拌至完全溶解，用3～5mol/L的氨水調(diào)節(jié)pH為7～8，加純水至5～6m3，得到反應(yīng)液；
⑧酶催化反應(yīng)：將反應(yīng)液在控溫下攪拌，用濃度為3～5mol/L的氨水控制pH值在7.8～8.5的范圍內(nèi)，當(dāng)反應(yīng)液中濃度為1.0mg/ml，停止加入氨水，維持pH在10min保持不變，終止反應(yīng)；
⑨結(jié)晶：將步驟⑧中的料液打入至結(jié)晶罐中，攪拌下加入結(jié)晶助劑，結(jié)晶助劑的加入量為料液體積比的0.1‰，加入濃度為12mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至6.0時(shí)減慢加酸的速度，在5～30min時(shí)間內(nèi)調(diào)節(jié)pH至pH5.2～5.8，停止加酸，攪拌，再次加入鹽酸調(diào)節(jié)pH至3.0～4.2，控制溫度0～5℃，停止攪拌，養(yǎng)晶30～60min，放料；
⑩離心、真空干燥：將步驟⑨中的晶體中加入冷純水頂洗，次數(shù)為3～5次，每批料冷純水總用量1～1.5m3，再用冷丙酮頂洗，冷丙酮頂洗2～3次，總用量0.5～1m3后進(jìn)行真空干燥，真空干燥的溫度為35～40℃，真空度為≤-0.098Mpa，干燥時(shí)間為1～4h，得到7-ACA；
7-ATCA的制備：向乙腈、甲巰四氮唑、B3F-乙腈中加入7-ACA，攪拌溶解得到溶液，升溫至35℃，反應(yīng)2～3h后降溫至5℃，將溶液轉(zhuǎn)入裝有預(yù)冷純化水中，緩慢攪拌并用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的氨水調(diào)節(jié)pH至3.0，在0～5℃下養(yǎng)晶90min，過濾并干燥，得到7-ATCA；
頭孢孟多酯酸的制備：將7-ATCA加入到乙酸乙酯中，攪拌下加入N,O-雙三甲硅基乙酰胺，升溫至35℃，反應(yīng)3～4h至澄清，降溫至-10℃，向體系中滴加甲?；馓宜狨Ｂ?，升溫至0℃，反應(yīng)60min，加入純化水?dāng)嚢韬箪o置；有機(jī)相中用無水硫酸鎂脫水、活性炭脫色并過濾，將濾液進(jìn)行濃縮，得到頭孢孟多酯酸溶液；
頭孢孟多酯鈉的制備：將異辛酸鈉溶于丙酮和無水乙醇得到異辛酸鈉溶液，將步驟中的頭孢孟多酯酸溶液降溫至10℃，并加入到加入異辛酸鈉溶液中，攪拌升溫至30℃，養(yǎng)晶60～70min，過濾、真空干燥，得到頭孢孟多酯鈉固體。
無菌分裝：無菌分裝得到注射用頭孢孟多酯鈉粉針制劑。
下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明：
實(shí)施例1、
①菌種制備：將保藏的冷凍管恢復(fù)至室溫后涂斜面，培養(yǎng)7天后冷藏，冷藏溫度為27℃，使用時(shí)向斜面種子中倒入無菌水制成種子液；
②種子罐的準(zhǔn)備及培養(yǎng)：在配料罐1中將花生餅粉、豆餅粉、葡萄糖、玉米漿的一種或幾種投料,投料后由配料罐壓入種子罐中，用蒸汽對種子罐進(jìn)行溫度為121℃的高溫滅菌，并將料液用冷媒水將料液降溫至27℃；步驟①中的種子液經(jīng)過產(chǎn)孢發(fā)酵后得到的孢子液，孢子液接入一級種子罐中在通氣量為1:0.8,溫度為27℃，pH為6.8的條件下培養(yǎng)時(shí)間為80h；移種至二級種子罐，孢子液在二級種子罐中在通氣量為1:0.8，溫度為27℃，pH為6.8的條件下培養(yǎng)時(shí)間為40～h；然后，移種至三級種子罐，孢子液在三級種子罐中在通氣量為1:0.8,溫度為27，pH為6.8的條件下培養(yǎng)時(shí)間為40，效價(jià)長至1000～u/ml時(shí)移種至發(fā)酵罐中備用；
③發(fā)酵罐的準(zhǔn)備及培養(yǎng)：在配料罐2中將花生餅粉投料，由配料罐壓入種子罐中，用蒸汽進(jìn)行高溫滅菌，滅菌溫度121℃，滅菌結(jié)束后用冷媒水將料液降溫至27℃；將培養(yǎng)好的發(fā)酵液1移種至發(fā)酵罐，前期溫度27℃，中后期溫度24℃，通氣量1:0.8，發(fā)酵過程中，根據(jù)pH、氨氮、溶氧、效價(jià)增長、菌絲形態(tài)、菌絲量進(jìn)行綜合分析，適量補(bǔ)加液糖、豆油、硫酸銨、氨水，放罐前控制pH為5，殘油量1％以下，得到發(fā)酵液2；
④過濾：將發(fā)酵液壓入酸化罐，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25％硫酸進(jìn)行酸化，控制pH為2.4得到酸化的料液，將酸化后的料液用膜進(jìn)行過濾至得到澄清的濾液和濾渣；
⑤脫色、濃縮：將濾液經(jīng)過膜過濾，用藍(lán)曉廠家生產(chǎn)的LX1180樹脂對濾液進(jìn)行預(yù)脫色處理，脫色后的料液用LX18樹脂進(jìn)行吸附后進(jìn)行解析，解析后的料液再通過LX67進(jìn)行脫色，將脫色的料液采用納濾濃縮，得到CPC料液備用，結(jié)晶得到頭C鈉鹽；
⑥反應(yīng)罐和管路的準(zhǔn)備：反應(yīng)罐和管路在使用前用1mol/L左右的氫氧化鈉溶液浸泡，用工業(yè)用水清洗，再用純水徹底清洗，將要使用的?；竿度氲较鄳?yīng)的轉(zhuǎn)化罐，酶的投量18MU，用純水清洗，每次加2m3純水，清洗4遍，清洗完畢吹干待用；
⑦酶催化反應(yīng)的準(zhǔn)備：向配料罐中加入純水，控制溫度為18℃下加入頭C鈉鹽，攪拌至完全溶解，用3mol/L的氨水調(diào)節(jié)pH為7，加純水至5m3，得到反應(yīng)液；
⑧酶催化反應(yīng)：將反應(yīng)液在控溫下攪拌，用濃度為3mol/L的氨水控制pH值在7.8的范圍內(nèi)，當(dāng)反應(yīng)液中濃度為1.0mg/ml，停止加入氨水，維持pH在10min保持不變，終止反應(yīng)；
⑨結(jié)晶：將步驟⑧中的料液打入至結(jié)晶罐中，攪拌下加入結(jié)晶助劑，結(jié)晶助劑的加入量為料液體積比的0.1‰，加入濃度為12mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至6.0時(shí)減慢加酸的速度，在5min時(shí)間內(nèi)調(diào)節(jié)pH至pH5.2，停止加酸，攪拌，再次加入鹽酸調(diào)節(jié)pH至3.0，控制溫度0℃，停止攪拌，養(yǎng)晶30min，放料；
⑩離心、真空干燥：將步驟⑨中的晶體中加入冷純水頂洗，次數(shù)為3次，每批料冷純水總用量1m3，再用冷丙酮頂洗，冷丙酮頂洗2次，總用量0.5m3后進(jìn)行真空干燥，真空干燥的溫度為35℃，真空度為-0.098Mpa，干燥時(shí)間為1h，得到7-ACA；
7-ATCA的制備：向乙腈、甲巰四氮唑、B3F-乙腈中加入7-ACA，攪拌溶解得到溶液，升溫至35℃，反應(yīng)2h后降溫至5℃，將溶解后的溶液轉(zhuǎn)入裝有預(yù)冷純化水中，緩慢攪拌并用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的氨水調(diào)節(jié)pH至3.0，在0℃下養(yǎng)晶90min，過濾并干燥，得到7-ATCA；
頭孢孟多酯酸的制備：將7-ATCA加入到乙酸乙酯中，攪拌下加入N,O-雙三甲硅基乙酰胺，升溫至35℃，反應(yīng)3h至澄清，降溫至-10℃，向體系中滴加甲?；馓宜狨Ｂ?，升溫至0℃，反應(yīng)60min，加入純化水?dāng)嚢韬箪o置；有機(jī)相中用無水硫酸鎂脫水，活性炭脫色，過濾，將濾液進(jìn)行濃縮，得到頭孢孟多酯酸溶液；
頭孢孟多酯鈉的制備：將異辛酸鈉溶于丙酮和無水乙醇得到異辛酸鈉溶液，將步驟中的頭孢孟多酯酸溶液降溫至10℃，并加入到加入異辛酸鈉溶液中，攪拌升溫至30℃，養(yǎng)晶60min，過濾、真空干燥，得到頭孢孟多酯鈉固體。
無菌分裝：無菌分裝得到注射用頭孢孟多酯鈉粉針制劑。
實(shí)施例2、
①菌種制備：將保藏的冷凍管恢復(fù)至室溫后涂斜面，培養(yǎng)8天后冷藏，冷藏溫度為28℃,使用時(shí)向斜面種子中倒入無菌水制成種子液；
②種子罐的準(zhǔn)備及培養(yǎng)：在配料罐1中將花生餅粉、豆餅粉、葡萄糖、玉米漿的一種或幾種投料,投料后由配料罐壓入種子罐中，用蒸汽對種子罐進(jìn)行溫度為122℃的高溫滅菌，并將料液用冷媒水將料液降溫至28℃；步驟①中的種子液經(jīng)過產(chǎn)孢發(fā)酵后得到的孢子液，孢子液接入一級種子罐中在通氣量為1:1.0,溫度為28℃，pH為7.0的條件下培養(yǎng)時(shí)間為90h；移種至二級種子罐，孢子液在二級種子罐中在通氣量為1:1.0,溫度為28℃，pH為7.0的條件下培養(yǎng)時(shí)間為50h；然后，移種至三級種子罐，孢子液在三級種子罐中在通氣量為1:1.0,溫度為28℃，pH為7.0的條件下培養(yǎng)時(shí)間為50h，效價(jià)長至2000u/ml時(shí)移種至發(fā)酵罐中備用；
③發(fā)酵罐的準(zhǔn)備及培養(yǎng)：在配料罐2中將花生餅粉、玉米餅粉投料，由配料罐壓入種子罐中，用蒸汽進(jìn)行高溫滅菌，滅菌溫度121-123℃，滅菌結(jié)束后用冷媒水將料液降溫至28℃；將培養(yǎng)好的發(fā)酵液1移種至發(fā)酵罐，前期溫度28℃，中后期溫度25℃，通氣量1:0.8～1.5，發(fā)酵過程中，根據(jù)pH、氨氮、溶氧、效價(jià)增長、菌絲形態(tài)、菌絲量等進(jìn)行綜合分析，適量補(bǔ)加液糖、豆油、硫酸銨、氨水，放罐前控制pH5.5左右，殘油量1％以下，得到發(fā)酵液2；
④過濾：將發(fā)酵液壓入酸化罐，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25～30％硫酸進(jìn)行酸化，控制pH為2.4～2.8得到酸化的料液，將酸化后的料液用膜進(jìn)行過濾至得到澄清的濾液和濾渣；
⑤脫色、濃縮：將濾液經(jīng)過膜過濾，用藍(lán)曉廠家生產(chǎn)的LX1180樹脂對濾液進(jìn)行預(yù)脫色處理，脫色后的料液用LX18樹脂進(jìn)行吸附后進(jìn)行解析，解析后的料液再通過LX67進(jìn)行脫色，將脫色的料液采用納濾濃縮，得到CPC料液備用，結(jié)晶得到頭C鈉鹽；
⑥反應(yīng)罐和管路的準(zhǔn)備：將反應(yīng)罐和管路在使用前用濃度為1mol/L的氫氧化鈉溶液浸泡，并用水洗滌，將?；竿度氲睫D(zhuǎn)化罐中，純水清洗后，吹干待用；
⑦酶催化反應(yīng)的準(zhǔn)備：向配料罐中加入純水，控制溫度為19℃下加入頭C鈉鹽，攪拌至完全溶解，用4mol/L的氨水調(diào)節(jié)pH為8，加純水至5.5m3，得到反應(yīng)液；
⑧酶催化反應(yīng)：將反應(yīng)液在控溫下攪拌，用濃度為3～5mol/L的氨水控制pH值在8，當(dāng)反應(yīng)液中濃度為1.0mg/ml，停止加入氨水，維持pH在10min保持不變，終止反應(yīng)；
⑨結(jié)晶：將步驟⑧中的料液打入至結(jié)晶罐中，攪拌下加入結(jié)晶助劑，結(jié)晶助劑的加入量為料液體積比的0.1‰，加入濃度為12mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至6.0時(shí)減慢加酸的速度，在20min內(nèi)調(diào)節(jié)pH至pH5.6，停止加酸，攪拌，再次加入鹽酸調(diào)節(jié)pH至4.0，控制溫度2℃，停止攪拌，養(yǎng)晶40min，放料；
⑩離心、真空干燥：將步驟⑨中的晶體中加入冷純水頂洗，次數(shù)為5次，每批料冷純水總用量1.5m3，再用冷丙酮頂洗，冷丙酮頂洗3次，總用量0.8m3后進(jìn)行真空干燥，真空干燥的溫度為38℃，真空度為-0.098Mpa，干燥時(shí)間為3h，得到7-ACA；
7-ATCA的制備：向乙腈、甲巰四氮唑、B3F-乙腈中加入7-ACA，攪拌溶解得到溶液，升溫至35℃，反應(yīng)3h后降溫至5℃，將溶解后的溶液轉(zhuǎn)入裝有預(yù)冷純化水中，緩慢攪拌并用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的氨水調(diào)節(jié)pH至3.0，在3℃下養(yǎng)晶90min，過濾并干燥，得到7-ATCA；
頭孢孟多酯酸的制備：將7-ATCA加入到乙酸乙酯中，攪拌下加入N,O-雙三甲硅基乙酰胺，升溫至35℃，反應(yīng)4h至澄清，降溫至-10℃，向體系中滴加甲?；馓宜狨Ｂ龋郎刂?℃，反應(yīng)60min，加入純化水?dāng)嚢韬箪o置；有機(jī)相中用無水硫酸鎂脫水，活性炭脫色，過濾，將濾液進(jìn)行濃縮，得到頭孢孟多酯酸溶液；
頭孢孟多酯鈉的制備：將異辛酸鈉溶于丙酮和無水乙醇得到異辛酸鈉溶液，將步驟中的頭孢孟多酯酸溶液降溫至10℃，并加入到加入異辛酸鈉溶液中，攪拌升溫至30℃，養(yǎng)晶70min，過濾、真空干燥，得到頭孢孟多酯鈉固體；
無菌分裝：無菌分裝得到注射用頭孢孟多酯鈉粉針制劑。
實(shí)施例3、
①菌種制備：將保藏的冷凍管恢復(fù)至室溫后涂斜面，培養(yǎng)10天后冷藏，冷藏溫度為29℃,使用時(shí)向斜面種子中倒入無菌水制成種子液；
②種子罐的準(zhǔn)備及培養(yǎng)：在配料罐1中將葡萄糖、玉米漿投料,投料后由配料罐壓入種子罐中，用蒸汽對種子罐進(jìn)行溫度為123℃的高溫滅菌，并將料液用冷媒水將料液降溫至29℃；步驟①中的種子液經(jīng)過產(chǎn)孢發(fā)酵后得到的孢子液，孢子液接入一級種子罐中在通氣量為1:1.5,溫度為29℃，pH為7.8的條件下培養(yǎng)時(shí)間為100h；移種至二級種子罐，孢子液在二級種子罐中在通氣量為1:1.5,溫度為29℃，pH為7.8的條件下培養(yǎng)時(shí)間為60h；然后，移種至三級種子罐，孢子液在三級種子罐中在通氣量為1:1.5,溫度為29℃，pH為7.8的條件下培養(yǎng)時(shí)間為60h，效價(jià)長至3000u/ml時(shí)移種至發(fā)酵罐中備用；
③發(fā)酵罐的準(zhǔn)備及培養(yǎng)：在配料罐2中將花生餅粉谷朊粉中投料，由配料罐壓入種子罐中，用蒸汽進(jìn)行高溫滅菌，滅菌溫度123℃，滅菌結(jié)束后用冷媒水將料液降溫至29℃；將培養(yǎng)好的發(fā)酵液1移種至發(fā)酵罐，前期溫度29℃，中后期溫度26℃，通氣量1:1.5，發(fā)酵過程中，根據(jù)pH、氨氮、溶氧、效價(jià)增長、菌絲形態(tài)、菌絲量進(jìn)行綜合分析，適量補(bǔ)加液糖、豆油、硫酸銨、氨水，放罐前控制pH為6，殘油量0.8％時(shí)，得到發(fā)酵液2；
④過濾：將發(fā)酵液壓入酸化罐，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30％硫酸進(jìn)行酸化，控制pH為2.8得到酸化的料液，將酸化后的料液用膜進(jìn)行過濾至得到澄清的濾液和濾渣；
⑤脫色、濃縮：將濾液經(jīng)過膜過濾，用藍(lán)曉廠家生產(chǎn)的LX1180樹脂對濾液進(jìn)行預(yù)脫色處理，脫色后的料液用LX18樹脂進(jìn)行吸附后進(jìn)行解析，解析后的料液再通過LX67進(jìn)行脫色，將脫色的料液采用納濾濃縮，得到CPC料液備用，結(jié)晶得到頭C鈉鹽；
⑥反應(yīng)罐和管路的準(zhǔn)備：將反應(yīng)罐和管路在使用前用濃度為1mol/L的氫氧化鈉溶液浸泡，并用水洗滌，將?；竿度氲睫D(zhuǎn)化罐中，純水清洗后，吹干待用；
⑦酶催化反應(yīng)的準(zhǔn)備：向配料罐中加入純水，控制溫度為20℃下加入頭C鈉鹽，攪拌至完全溶解，用5mol/L的氨水調(diào)節(jié)pH為8，加純水至6m3，得到反應(yīng)液；
⑧酶催化反應(yīng)：將反應(yīng)液在控溫下攪拌，用濃度為5mol/L的氨水控制pH值在8.5的范圍內(nèi)，當(dāng)反應(yīng)液中濃度為1.0mg/ml，停止加入氨水，維持pH在10min保持不變，終止反應(yīng)；
⑨結(jié)晶：將步驟⑧中的料液打入至結(jié)晶罐中，攪拌下加入結(jié)晶助劑，結(jié)晶助劑的加入量為料液體積比的0.1‰，加入濃度為12mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至6.0時(shí)減慢加酸的速度，在30min時(shí)間內(nèi)調(diào)節(jié)pH至5.8時(shí)，停止加酸，攪拌，再次加入鹽酸調(diào)節(jié)pH至4.2，控制溫度5℃，停止攪拌，養(yǎng)晶60min，放料；
⑩離心、真空干燥：將步驟⑨中的晶體中加入冷純水，頂洗5次，每批料冷純水總用量1.5m3，再用冷丙酮頂洗，頂洗3次，總用量1m3后進(jìn)行真空干燥，真空干燥的溫度為40℃，真空度為-0.1Mpa，干燥時(shí)間為4h，得到7-ACA；
7-ATCA的制備：向乙腈、甲巰四氮唑、B3F-乙腈中加入7-ACA，攪拌溶解得到溶液，升溫至35℃，反應(yīng)3h后降溫至5℃，將溶解后的溶液轉(zhuǎn)入裝有預(yù)冷純化水中，緩慢攪拌并用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的氨水調(diào)節(jié)pH至3.0，在5℃下養(yǎng)晶90min，過濾并干燥，得到7-ATCA；
頭孢孟多酯酸的制備：將7-ATCA加入到乙酸乙酯中，攪拌下加入N,O-雙三甲硅基乙酰胺，升溫至35℃，反應(yīng)4h至澄清，降溫至-10℃，向體系中滴加甲?；馓宜狨Ｂ?，升溫至0℃，反應(yīng)60min后加入純化水?dāng)嚢韬箪o置；有機(jī)相中用無水硫酸鎂脫水，活性炭脫色，過濾，將濾液進(jìn)行濃縮，得到頭孢孟多酯酸溶液；
頭孢孟多酯鈉的制備：將異辛酸鈉溶于丙酮和無水乙醇得到異辛酸鈉溶液，將步驟中的頭孢孟多酯酸溶液降溫至10℃，并加入到加入異辛酸鈉溶液中，攪拌升溫至30℃后養(yǎng)晶70min，過濾、真空干燥，得到頭孢孟多酯鈉固體；
無菌分裝：無菌分裝得到注射用頭孢孟多酯鈉粉針制劑。
本發(fā)明方法制備注射用頭孢孟多酯鈉粉針制劑完成后，得到的注射用頭孢孟多酯鈉粉針制劑具有高質(zhì)量，質(zhì)量指標(biāo)比較如表1。由表中可以看出，經(jīng)過本方法制備的頭孢孟多酯鈉粉針制劑雜質(zhì)少，純度高，質(zhì)量更好。
表1改進(jìn)前后質(zhì)量比