本發(fā)明涉及一種抗腫瘤用的冷凍干燥組合物，特別是涉及一種呈粉末狀的卡巴他賽藥物組合物，其可用于治療腫瘤和/或癌癥。本發(fā)明還涉及上述呈粉末狀的卡巴他賽藥物組合物的制備方法，這種組合物是一種可用于靜脈內(nèi)給予藥理活性物質(zhì)卡巴他賽的微粒載體。本發(fā)明中的卡巴他賽藥物組合物實際上是含卡巴他賽的納米顆粒膠體分散系統(tǒng)?？ò退惐话庠谟傻鞍踪|(zhì)制成的聚合物殼體內(nèi)或與蛋白質(zhì)以締合方式結(jié)合而形成納米顆粒，這種冷凍干燥組合物復(fù)溶于水中時pH介于5.0～7.0范圍，且形成的分散系統(tǒng)中顆粒平均直徑不大于200nm。本發(fā)明冷凍干燥組合物制備不需要使用常規(guī)的表面活性劑或任何聚合物核心基質(zhì)，并可進行無菌過濾。特別是，本發(fā)明具有特定水分含量范圍的粉針劑具有優(yōu)異的穩(wěn)定性。
背景技術(shù)：
卡巴他賽，英文名CABAZITAXEL，其化學(xué)名為4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β,20-環(huán)氧基-1-羥基-7β,10β-二甲氧基-9-氧代紫衫-11-烯-13α-基(2R,3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羥基-3-苯基丙酸酯，分子式為C45H57NO14，結(jié)構(gòu)式如下：
卡巴他賽屬于紫杉烷類抗腫瘤用的冷凍干燥組合物，它通過干擾細胞有絲分裂和分裂間期細胞功能所必需的微管網(wǎng)絡(luò)而起抗腫瘤作用，屬微管解聚抑制劑，它可與游離的微管蛋白結(jié)合，促進微管蛋白裝配成穩(wěn)定的微管，同時抑制其解聚，導(dǎo)致喪失了正常功能微管束的產(chǎn)生和微管的固定，從而抑制細胞的有絲分裂。
卡巴他賽注射液，商品名：JEVTANA，規(guī)格為60mg，一支為60mg卡巴他賽溶于1.5ml吐溫80溶液中，另一支為溶劑，為5.7ml的13％(w/w)乙醇水溶液，由賽諾菲-安萬特(Sanofi-Aventis)公司研發(fā)，于2010年6月17號被FDA批準(zhǔn)上市。JEVTANA被推薦用于與潑尼松聯(lián)用治療既往用含多烯紫杉醇治療方案激素難治轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者。
盡管卡巴他賽具有良好的抗腫瘤作用，但是其水溶性較差，約6μg/ml，因此臨床上使用的卡巴他賽注射液需使用表面活性劑聚山梨酯80(即吐溫-80)及助溶劑乙醇來達到溶解卡巴他賽的目的。雖然使用表面活性劑吐溫80可以配制成注射液，但是吐溫80在臨床應(yīng)用中易產(chǎn)生不良反應(yīng)并引起較多的并發(fā)癥，較為常見的包括嚴(yán)重的過敏反應(yīng)、體液潴留等，因此臨床使用時需采用激素類藥物預(yù)先給藥防止過敏，并需緩慢滴注(通常在1小時以上)。此外，吐溫80還具有溶血性、黏性大，且不能與聚氯乙烯輸送裝置一起使用(傾向于浸出高毒性的鄰苯二甲酸二乙基己酯)等問題，因此給臨床應(yīng)用帶來諸多不便和安全性問題。
為降低注射液靜脈給藥的副作用，一個有效的方法就是將藥理活性物質(zhì)包入微米或納米級的粒子中。一方面，靜脈注射的粒子可以緩釋藥理活性物質(zhì)并延長其體內(nèi)半衰期；另一方面，靶向材料可以將粒子中的藥理活性物質(zhì)靶向的釋放?，F(xiàn)有的涉及納米粒子的制備技術(shù)中，如Abraxane的制備方法(CN1515244A)，將蛋白溶液與有機溶劑均勻混合并高壓均漿，形成以藥理活性物質(zhì)為核心的白蛋白納米顆粒。該專利中明確描述只有在非常低的有機相組分(＜3％，V/V)情況下制備的顆粒才能無菌過濾，有人多次重復(fù)前述專利實施例，嘗試制備不同紫杉烷類化合物(如紫杉醇、多西紫杉醇及卡巴他賽)蛋白質(zhì)納米顆粒，不能實現(xiàn)其實施例及說明書中所描述的結(jié)果，顆粒穩(wěn)定性均不理想，難以滿足靜脈給藥需要，而且非常低的相組分意味著較大的水相體積(有機相中藥物濃度確定時)及較長的制備時間。與異常低的相組分相對應(yīng)的，其實施例中有機相及水相混合物均漿結(jié)束后藥液中藥物濃度均不高于5mg/ml。
其他的納米粒子制備技術(shù)中，中國發(fā)明專利公開CN102048695A通過蛋白的展開與再折疊或自組裝將藥理活性物質(zhì)包入其中，形成蛋白納米顆粒。有人多次重復(fù)前述專利中的實施例，也不能實現(xiàn)其實施例及說明書中所描述的結(jié)果，尤其在通過透析及其他方式去除小分子化合物過程中，蛋白納米顆粒穩(wěn)定性較差，原因可能為有機溶劑及蛋白變性劑長時間存在于納米顆?；鞈乙褐?，在小分子化合物完全除去之前已經(jīng)對蛋白納米顆粒的穩(wěn)定性造成破壞。
藥品要經(jīng)歷較長時間的貯藏和運輸。上述使用蛋白質(zhì)作為藥物載體形成的懸浮在液體中的蛋白納米顆粒，其最終還需要將溶劑除去，通常而言采用冷凍干燥方法除去溶劑。除去溶劑后的載藥蛋白納米顆粒形成冷凍干燥形式的粉末組合物，在冷凍干燥前通常還可以添加適量冷凍干燥賦形劑例如甘露醇、蔗糖、乳糖等。這種經(jīng)冷凍干燥形成的粉末組合物，密封在玻璃瓶中以供長期保存(通常為1～3年)，在臨床使用前將其用溶劑重新溶解(通常亦稱為復(fù)溶、重構(gòu)等)，形成可靜脈注射的混懸液。至關(guān)重要的是，相比于制備過程中納米顆粒的粒度參數(shù)，臨床使用前所配制的可靜脈注射的混懸液，其中的納米顆粒的粒度參數(shù)才是有臨床意義的，因為在有些需要控制微粒大小的藥物中，藥物經(jīng)長期存放(即通常所說的貯藏期)后微粒的大小可能會有變化，一旦存在這種變化，藥物的以粒度表征的物理穩(wěn)定性就是需要特別關(guān)注的。令人遺憾的是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有技術(shù)中使用白蛋白將卡巴他賽制成這些納米顆粒懸液并經(jīng)冷凍干燥后，這種冷凍干燥粉末在長期貯藏過程中微粒大小會發(fā)生不利的變化。
因此，本領(lǐng)域仍然需要有新的方法制備穩(wěn)定的抗腫瘤用的冷凍干燥組合物，特別是可用于靜脈內(nèi)給予藥理活性物質(zhì)卡巴他賽的微粒載體。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的主要目的是提供一種更好的用于體內(nèi)遞送卡巴他賽或其溶劑合物的藥物組合物，此組合物是經(jīng)冷凍干燥獲得的粉末組合物，其在用常規(guī)注射溶媒復(fù)溶后，呈現(xiàn)為一種可用于靜脈內(nèi)給藥的納米顆粒膠體分散系統(tǒng)。本發(fā)明所提供的冷凍干燥組合物不需要使用目前卡巴他賽注射液中的乙醇及吐溫80，避免了過敏反應(yīng)的發(fā)生，解決了卡巴他賽注射液臨床使用中容易發(fā)生嚴(yán)重毒副作用和輸液時間較長的問題。本發(fā)明的另一目的是提供更好的用于體內(nèi)遞送卡巴他賽納米顆粒膠體分散系統(tǒng)的制備方法。通過該方法制備的藥物組合物的優(yōu)點在于可通過孔徑0.22μm的濾器進行除菌過濾，以制備可供靜脈滴注的藥物制劑。
為此，本發(fā)明第一方面提供了一種抗腫瘤用的藥物組合物，其是卡巴他賽與蛋白質(zhì)經(jīng)納米分散技術(shù)處理后，制得的無菌冷凍干燥粉針劑。
根據(jù)本發(fā)明第一方面的藥物組合物，其中所述卡巴他賽被包被在蛋白質(zhì)內(nèi)或與蛋白質(zhì)以締合的方式結(jié)合而形成的納米顆粒。在一個實施方案中，將呈冷凍干燥粉針劑形式的所述藥物組合物1g加至0.9％氯化鈉溶液20～50ml中分散均勻后，照《中華人民共和國藥典》2015年版四部第0982節(jié)粒度和粒度分布測定法中的第三法即光散射法測定粒度和粒度分布，平均粒徑在50～200nm范圍，粒徑小于50nm的微粒少于5％，粒徑大于350nm的微粒少于5％。在一個實施方案中，平均粒徑在100～200nm范圍內(nèi)。
根據(jù)本發(fā)明第一方面的藥物組合物，將該呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物1g加至0.9％氯化鈉溶液20ml中，輕輕振搖，記錄至完全分散均勻且無未分散固體物的時間，作為分散時間，該分散時間為5～20分鐘。在一個實施方案中，該分散時間為5～15分鐘。
根據(jù)本發(fā)明第一方面的藥物組合物，將該呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物1g加至0.9％氯化鈉溶液20ml中，使分散均勻，測定該液體的pH值，該pH值在5.5～7.5范圍內(nèi)，例如在6.0～7.5范圍內(nèi)。
根據(jù)本發(fā)明第一方面的藥物組合物，其照《中華人民共和國藥典》2015年版四部第0832節(jié)水分測定法中的第一法即費休氏法中的容量滴定法測定水分，水分在0.5～5.0％范圍內(nèi)。在一個實施方案中，水分在0.5～3.0％范圍內(nèi)。在一個實施方案中，水分在0.8～2.6％范圍內(nèi)。
根據(jù)本發(fā)明第一方面的藥物組合物，將該呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物壓制成直徑10mm、厚度2.5mm、硬度1kg的圓形片劑并測定該片劑的接觸角，該片劑具有30～80°的接觸角，例如具有35～75°的接觸角，例如具有40～70°的接觸角。將所述呈冷凍干燥粉末形式的藥物組合物壓制成所述片劑的方法是本領(lǐng)域公知的，特別是例如通過藥劑學(xué)中的片劑制備方法壓制成的。
在一個實施方案中，所述接觸角是照這樣的方式測定得到的：在不銹鋼制、內(nèi)徑0.2～0.3mm、外徑0.4～0.6mm的針頭的針尖處形成1μl純水的液滴，再通過接觸角測定裝置測定該水滴加到片劑表面60毫秒后的接觸角。
根據(jù)本發(fā)明第一方面的藥物組合物，將該呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物壓制成直徑10mm、厚度2.5mm、硬度1kg的圓形片劑，該片劑照如下方式測定其接觸角，其接觸角為30～80°(例如為35～75°、例如為40～70°)：在不銹鋼制、內(nèi)徑0.2～0.3mm、外徑0.4～0.6mm的針頭的針尖處形成1μl純水的液滴，再通過接觸角測定裝置測定該水滴加到片劑表面60毫秒后的接觸角。本發(fā)明人已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)使所制得的冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物的水分含量在0.8～2.6％范圍內(nèi)，并且接觸角在40～70°范圍內(nèi)時，所述藥物組合物不但具有優(yōu)異的粒度和粒度分布穩(wěn)定性，而且具有優(yōu)異的分散時間(即復(fù)溶時間)穩(wěn)定性，而不能同時具備上述兩個條件的冷凍干燥粉針劑組合物在粒度和粒度分布穩(wěn)定性以及分散時間(即復(fù)溶時間)穩(wěn)定性方面均不能令人滿意。
根據(jù)本發(fā)明第一方面的藥物組合物，所述卡巴他賽與蛋白質(zhì)組成的納米顆粒，其中卡巴他賽被包被在蛋白質(zhì)內(nèi)或與蛋白質(zhì)以締合的方式結(jié)合。
本文所述接觸角是指與水的接觸角。具體地，接觸角是指滴加于片劑等固體制劑組合物表面的水滴與組合物表面接觸的角度。本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉有許多測定接觸角的方法和裝置，在本發(fā)明中，一個示例性的測定方法如下：在針頭(例如型號為SNSO52/026；HAMILTON公司產(chǎn)，不銹鋼制、內(nèi)徑0.26mm、外徑0.52mm；或者也可用具有類似規(guī)格的針頭)的針尖形成1μl純水(MILLI-Q；MILLIPORE公司)液滴，再通過接觸角測定裝置(例如OCA-15型，Data physics公司；或者具有類似功能的其它品牌或型號的接觸角測定裝置)測定水滴加到片劑表面60毫秒后的接觸角。片劑表面有曲率時，在解析時要校正為直線后再測定接觸角；通常是室溫下測定。在本發(fā)明中，如未另外說明，本發(fā)明所述接觸角是由以下方法測定的：在室溫下，在針頭(SNSO52/026；HAMILTON公司產(chǎn)，不銹鋼制、內(nèi)徑0.26mm、外徑0.52mm)的針尖形成1μl純水(MILLI-Q；MILLIPORE公司)液滴，再通過接觸角測定裝置(OCA-15型，Data physics公司)測定水滴加到片劑表面60毫秒后的接觸角。由于以上述類似條件測定得到的接觸角，在不同環(huán)境(例如不同實驗室)、不同設(shè)備(例如使用其它公司生產(chǎn)的接觸角測定裝置)，這些結(jié)果不會有明顯的區(qū)別，因此在定義本發(fā)明所述組合物的接觸角時，無需對接觸角的具體測定過程和測定條件作限定。
根據(jù)本發(fā)明第一方面的藥物組合物，所述蛋白質(zhì)帶有巰基或二硫鍵。在一個實施方案中，所述的蛋白質(zhì)優(yōu)選天然蛋白質(zhì)；所述的蛋白質(zhì)更優(yōu)選人血白蛋白。
根據(jù)本發(fā)明第一方面的藥物組合物，所述卡巴他賽是卡巴他賽本身或者其溶劑合物。
根據(jù)本發(fā)明第一方面的藥物組合物，所述卡巴他賽為非晶體、結(jié)晶體或兩者的混合物；優(yōu)選卡巴他賽為非晶體，因為非晶體更易于溶解和吸收，從而達到更高的生物利用度。
根據(jù)本發(fā)明第一方面的藥物組合物，所述卡巴他賽溶劑合物選自卡巴他賽與丙酮、乙醇、乙醇/水混合溶劑、丁醇合物、甲基叔丁基醚、正丙醇、異丙醇、水、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺等形成的溶劑合物。
根據(jù)本發(fā)明第一方面的藥物組合物，其中所述冷凍干燥粉針劑形式是無菌凍干的塊狀物或者粉末。
本發(fā)明的卡巴他賽藥物組合物為蛋白質(zhì)包被納米顆粒的無菌冷凍干燥制劑，在所述冷凍干燥制劑中，還可以任選的含有凍干保護劑或稱為凍干賦形劑及蛋白穩(wěn)定劑；其中所述凍干保護劑選自甘露醇、天冬氨酸、蔗糖、山梨醇、乳糖、果糖、海藻糖、麥芽糖、氨基酸、右旋糖苷之一或其任意組合，其中優(yōu)選的凍干保護劑為甘露醇；所述蛋白穩(wěn)定劑選自海藻糖、甘露醇、蔗糖、乙酰色氨酸、辛酸鈉之一或其任意組合。
本發(fā)明中所述藥物組合物是冷凍干燥形式的粉末或塊狀物，其采用適宜的水性介質(zhì)能夠使所述粉末或塊狀物復(fù)溶為含有至少大約0.5mg/ml卡巴他賽的液體混懸液，所述適宜的水性介質(zhì)選自生理鹽水、緩沖生理鹽水、水、緩沖的水性介質(zhì)、氨基酸溶液、維生素溶液、碳水化合物溶液或類似的介質(zhì)之一或其任意組合。特別地，本發(fā)明冷凍干燥形式的粉末或塊狀物，其可使用0.9％氯化鈉注射液復(fù)溶成為含有至少大約1～5mg/ml卡巴他賽的液體混懸液，此混懸液可以直接用于注射給藥。
本發(fā)明所述卡巴他賽藥物組合物由包被蛋白的卡巴他賽納米顆粒及其所結(jié)合的游離蛋白組成，在水性介質(zhì)例如在0.9％氯化鈉注射液中37℃條件下可保持至少48小時的穩(wěn)定性，能夠滿足靜脈點滴治療需要。
本發(fā)明第二方面提供了高壓均質(zhì)乳化法制備該藥物組合物的方法。
本發(fā)明方法的重要特征是通過調(diào)整有機相及水相的相組分，驚奇的發(fā)現(xiàn)在較高有機相組分，即高于5％(V/V)條件下可制備高藥物濃度的蛋白納米顆粒，均漿結(jié)束后藥液中卡巴他賽濃度可達6～16mg/ml，其平均粒徑不大于200nm，穩(wěn)定性顯著優(yōu)于低濃度藥液(＜5mg/ml)且易于除菌過濾，更有利于產(chǎn)業(yè)化。
根據(jù)本發(fā)明第二方面的方法，其包括以下步驟：
1)將卡巴他賽溶于有機溶劑中，作為有機相；所述有機溶劑選自甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷、四氫呋喃、乙腈、甲基吡咯烷酮或類似溶劑之一或其任意組合的混合物[由于卡巴他賽在有機溶劑中的濃度對于納米顆粒的直徑大小有影響，所以有機相中卡巴他賽濃度范圍為5％-40％(w/v)]；
2)將所述蛋白質(zhì)分散于水性介質(zhì)中，作為水相[由于水性介質(zhì)的用量影響著有機相相組分，即影響著均漿時混懸液中藥物濃度，所以，在一個實施方案中，該步驟中蛋白質(zhì)的濃度范圍為5-25％(w/v)]；
3)將步驟1)的有機相與步驟2)的水相混合，用酸堿調(diào)節(jié)劑(如未另外說明，本發(fā)明使用1M鹽酸溶液或1M氫氧化鈉溶液)調(diào)節(jié)混合液的pH值至6.5～7.0，將該混合液置于壓力范圍3,000～30,000psi的高壓均漿器內(nèi)高壓均漿至少3個循環(huán)，制備成的顆粒平均直徑不大于200nm(可以進行無菌過濾)的膠體分散系統(tǒng)[均漿時有機相相組分不低于5％(v/v)，例如為5～10％；混懸液中藥物濃度不低于6mg/ml，優(yōu)選混懸液中藥物濃度不低于8mg/ml]；
4)將步驟3)所得混懸液減壓蒸發(fā)，除去有機溶劑，形成由蛋白質(zhì)包被的卡巴他賽納米顆粒及蛋白質(zhì)組成的膠體系統(tǒng)；
5)將步驟4)中所得膠體系統(tǒng)進行除菌過濾，然后冷凍干燥，即制得卡巴他賽蛋白質(zhì)的無菌冷凍干燥粉針劑藥物組合物。
進一步的，本發(fā)明第三方面提供了一種配制注射用混懸液的方法，該方法包括向呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物中添加0.9％氯化鈉注射液的步驟。
根據(jù)本發(fā)明第三方面的方法，其中所述呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物是卡巴他賽與蛋白質(zhì)經(jīng)納米分散技術(shù)處理后，制得的無菌冷凍干燥粉針劑。
根據(jù)本發(fā)明第三方面的方法，其中藥物組合物中，所述卡巴他賽被包被在蛋白質(zhì)內(nèi)或與蛋白質(zhì)以締合的方式結(jié)合而形成的納米顆粒。在一個實施方案中，將呈冷凍干燥粉針劑形式的所述藥物組合物1g加至0.9％氯化鈉溶液20～50ml中分散均勻后，照《中華人民共和國藥典》2015年版四部第0982節(jié)粒度和粒度分布測定法中的第三法即光散射法測定粒度和粒度分布，平均粒徑在50～200nm范圍，粒徑小于50nm的微粒少于5％，粒徑大于350nm的微粒少于5％。在一個實施方案中，平均粒徑在100～200nm范圍內(nèi)。
根據(jù)本發(fā)明第三方面的方法，其中將該呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物1g加至0.9％氯化鈉溶液20ml中，輕輕振搖，記錄至完全分散均勻且無未分散固體物的時間，作為分散時間，該分散時間為5～20分鐘。在一個實施方案中，該分散時間為5～15分鐘。
根據(jù)本發(fā)明第三方面的方法，其中將該呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物1g加至0.9％氯化鈉溶液20ml中，使分散均勻，測定該液體的pH值，該pH值在5.5～7.5范圍內(nèi)，例如在6.0～7.5范圍內(nèi)。
根據(jù)本發(fā)明第三方面的方法，其中所述藥物組合物照《中華人民共和國藥典》2015年版四部第0832節(jié)水分測定法中的第一法即費休氏法中的容量滴定法測定水分，水分在0.5～5.0％范圍內(nèi)。在一個實施方案中，水分在0.5～3.0％范圍內(nèi)。在一個實施方案中，水分在0.8～2.6％范圍內(nèi)。
根據(jù)本發(fā)明第三方面的方法，其中將該呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物壓制成直徑10mm、厚度2.5mm、硬度1kg的圓形片劑并測定該片劑的接觸角，該片劑具有30～80°的接觸角，例如具有35～75°的接觸角，例如具有40～70°的接觸角。將所述呈冷凍干燥粉末形式的藥物組合物壓制成所述片劑的方法是本領(lǐng)域公知的，特別是例如通過藥劑學(xué)中的片劑制備方法壓制成的。
根據(jù)本發(fā)明第三方面的方法，其中將該呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物壓制成直徑10mm、厚度2.5mm、硬度1kg的圓形片劑，該片劑照如下方式測定其接觸角，其接觸角為30～80°(例如為35～75°、例如為40～70°)：在不銹鋼制、內(nèi)徑0.2～0.3mm、外徑0.4～0.6mm的針頭的針尖處形成1μl純水的液滴，再通過接觸角測定裝置測定該水滴加到片劑表面60毫秒后的接觸角。
根據(jù)本發(fā)明第三方面的方法，其中所述卡巴他賽與蛋白質(zhì)組成的納米顆粒，其中卡巴他賽被包被在蛋白質(zhì)內(nèi)或與蛋白質(zhì)以締合的方式結(jié)合。
根據(jù)本發(fā)明第三方面的方法，其中所述蛋白質(zhì)帶有巰基或二硫鍵。在一個實施方案中，所述的蛋白質(zhì)優(yōu)選天然蛋白質(zhì)；所述的蛋白質(zhì)更優(yōu)選人血白蛋白。
根據(jù)本發(fā)明第三方面的方法，其中所述卡巴他賽是卡巴他賽本身或者其溶劑合物。
根據(jù)本發(fā)明第三方面的方法，其中所述卡巴他賽為非晶體、結(jié)晶體或兩者的混合物；優(yōu)選卡巴他賽為非晶體，因為非晶體更易于溶解和吸收，從而達到更高的生物利用度。
根據(jù)本發(fā)明第三方面的方法，其中所述卡巴他賽溶劑合物選自卡巴他賽與丙酮、乙醇、乙醇/水混合溶劑、丁醇合物、甲基叔丁基醚、正丙醇、異丙醇、水、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺等形成的溶劑合物。
根據(jù)本發(fā)明第三方面的方法，其中所述冷凍干燥粉針劑形式是無菌凍干的塊狀物或者粉末。
根據(jù)本發(fā)明第三方面的方法，所述藥物組合物可使用0.9％氯化鈉注射液復(fù)溶成為含有至少大約1～5mg/ml卡巴他賽的液體混懸液，此混懸液可以直接用于注射給藥。
根據(jù)本發(fā)明第三方面的方法，其所形成的注射用混懸液在37℃條件下可保持至少48小時的穩(wěn)定性，能夠滿足靜脈點滴治療需要。
根據(jù)本發(fā)明第二方面的方法，其中在步驟4)中將所述混懸液減壓蒸發(fā)前，將混懸液用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值至9.0～9.5；在減壓蒸發(fā)除去有機溶劑后用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值至6.5～7.0。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明實施例1-5的全部粉針，它們的水分含量和接觸角無法同時滿足0.8～2.6％和40～70°這兩個范圍，即，在冷凍干燥過程中，當(dāng)將水分抽干至大于2.8％的程度時所得粉針劑的接觸角均大于75°，而當(dāng)將水分抽干至小于2.7％的程度時所得粉針劑的接觸角急劇下降至均小于38°的范圍，且未見有接觸角在40～70°這個范圍的情形；即，對于實施例1-5的全部粉針，即使在制備通過冷凍干燥時控制其水分含量在0.8～2.6％范圍或者更大范圍的值，其接觸角亦無法達到40～70°這個范圍。本發(fā)明實施例11-15的全部粉針，它們的水分含量在0.8～2.6％范圍內(nèi)且接觸角在40～70°范圍內(nèi)，并且對這些補充實施例粉針劑控制其水分含量在0.8～2.6％范圍內(nèi)的不同值時，所得不同水分含量的粉針劑其接觸角仍然在40～70°范圍內(nèi)；例如實施例11未添加凍干賦形劑的粉針以及實施例11添加甘露醇的粉針，兩種粉針劑的水分分別為1.6％和1.9％，而接觸角分別為57°和52°。
本發(fā)明的任一方面的任一實施方案，可以與其它實施方案進行組合，只要它們不會出現(xiàn)矛盾。此外，在本發(fā)明任一方面的任一實施方案中，任一技術(shù)特征可以適用于其它實施方案中的該技術(shù)特征，只要它們不會出現(xiàn)矛盾。
本發(fā)明任一方面或該任一方面的任一實施方案所具有的任一技術(shù)特征同樣適用其它任一實施方案或其它任一方面的任一實施方案，只要它們不會相互矛盾，當(dāng)然在相互之間適用時，必要的話可對相應(yīng)特征作適當(dāng)修飾。下面對本發(fā)明的各個方面和特點作進一步的描述。
本發(fā)明所引述的所有文獻，它們的全部內(nèi)容通過引用并入本文，并且如果這些文獻所表達的含義與本發(fā)明不一致時，以本發(fā)明的表述為準(zhǔn)。此外，本發(fā)明使用的各種術(shù)語和短語具有本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的一般含義，即便如此，本發(fā)明仍然希望在此對這些術(shù)語和短語作更詳盡的說明和解釋，提及的術(shù)語和短語如有與公知含義不一致的，以本發(fā)明所表述的含義為準(zhǔn)。
本發(fā)明制備藥物組合物的過程中，經(jīng)除菌過濾后進行冷凍干燥得到卡巴他賽的蛋白納米顆粒凍干制劑，具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性與物理穩(wěn)定性；其中所述蛋白納米顆?？砂d占蛋白納米顆?？傎|(zhì)量1％～20％的卡巴他賽。
本發(fā)明制備藥物組合物的過程中，卡巴他賽被溶解在一種合適的有機溶劑內(nèi)作為有機相，而在水相中加入蛋白質(zhì)是起穩(wěn)定劑作用，易形成穩(wěn)定的納米液滴，加入蛋白質(zhì)的濃度范圍約為5-25％(w/v)，范圍在10％-20％(w/v)最好。由于白蛋白本身即具有一定的表面活性，與常規(guī)的納米顆粒形成方法不同，混合物內(nèi)不需要加入表面活性劑(例如，十二烷基硫酸鈉、卵磷脂、吐溫80和類似化合物)。本發(fā)明采用白蛋白替代常規(guī)表面活性劑，避免了常規(guī)表面活性劑的嚴(yán)重毒副作用。
本發(fā)明制備藥物組合物的過程中，有機相及水相混合物于高壓均漿器內(nèi)進行均化作用，通常的操作壓力在3,000至30,000磅/英寸2，此過程在6,000至25,000磅/英寸2范圍內(nèi)進行更好。通過調(diào)整處方中有機相及水相的相組分，有機相組分大于5％(V/V)時，藥液中卡巴他賽濃度可達到6～16mg/ml，所得到的含卡巴他賽的白蛋白納米粒平均粒徑不大于200nm，而根據(jù)專利CN1515244A中各實施例描述，高壓均漿結(jié)束后藥液中藥物濃度均不高于5mg/ml。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在本發(fā)明制備方法過程中，在步驟4)中將所述混懸液減壓蒸發(fā)前調(diào)節(jié)至高酸堿度，在減壓蒸發(fā)后調(diào)節(jié)至正常酸堿度，由此處理可以控制所制得的呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物的水分在0.8～2.6％范圍內(nèi)且接觸角在40～70°范圍內(nèi)，而如果在減壓蒸發(fā)前后不進行上述酸堿度的調(diào)節(jié)則水分和接觸角不能同時達到上述范圍。盡管在本發(fā)明中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)通過減壓蒸發(fā)前后控制酸堿度可以獲得水分和接觸角在本發(fā)明所述范圍內(nèi)的呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物，然而并不應(yīng)排除通過其它方式亦能獲得同時具備上述水分和接觸角范圍的粉針劑組合物，即實現(xiàn)上述水分和接觸角特征的粉針劑制備方法是不能窮舉的，在本發(fā)明中亦無必要窮舉，而本發(fā)明對現(xiàn)有技術(shù)的實質(zhì)性貢獻在于發(fā)現(xiàn)特定水分和接觸角的呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物具備出人意料的優(yōu)異的粒度和粒度分布穩(wěn)定性、以及具有優(yōu)異的分散時間穩(wěn)定性。本發(fā)明下文中通過實施例1-5制備了一些粉針組合物。在此提供額外的補充試驗，即補充的實施例11～15，以制備呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物：實施例11～15分別參照下文實施例1-5，不同的僅是在混懸液減壓蒸發(fā)前，將混懸液用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值至9.0～9.5；在減壓蒸發(fā)除去有機溶劑后用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值至6.5～7.0(即調(diào)回到減壓蒸發(fā)前的程度)，得到另一些呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物；對這些補充的實施例11～15所得粉針進行測定，其分散懸浮液冷凍干燥48小時，所得塊狀物加入無菌水或生理鹽水后均很易再構(gòu)成原來的分散液，復(fù)溶后的顆粒大小均與冷凍干燥前相同。
本發(fā)明制備藥物組合物的過程中，步驟3)所述的減壓蒸發(fā)可以使用膜蒸發(fā)器、噴霧干燥器、冷凍干燥器，或類似設(shè)備。減壓蒸發(fā)溫度為40℃，溫度大于40℃時藥液穩(wěn)定性低，溫度小于40℃時溶劑揮發(fā)速度較慢。在蒸發(fā)后藥液穩(wěn)定性考察中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，均漿藥液中主藥濃度低于5mg/ml時，藥液室溫條件下放置3～6小時即出現(xiàn)穩(wěn)定性下降現(xiàn)象，粒徑呈現(xiàn)增大趨勢且除菌過濾后主藥回收率下降。相反的，均漿藥液中主藥濃度不低于6mg/ml時，蒸發(fā)后得到的藥液為穩(wěn)定的納米顆粒膠體分散系統(tǒng)，其室溫穩(wěn)定性可達到36小時，更優(yōu)選的，主藥濃度為8mg/ml時，其室溫穩(wěn)定性可達48小時。
本發(fā)明制備藥物組合物的過程中，蛋白質(zhì)包衣的卡巴他賽納米顆粒經(jīng)冷凍干燥后得到含卡巴他賽及蛋白質(zhì)的凍干制劑，此凍干制劑可采用適宜的水性介質(zhì)復(fù)溶為液體混懸液，這些水性介質(zhì)有生理鹽水、緩沖生理鹽水、水、緩沖的水性介質(zhì)、氨基酸溶液、維生素溶液、碳水化合物溶液或類似的介質(zhì)，以及任何兩種及兩種以上這些介質(zhì)的混合物。
本發(fā)明制備藥物組合物的過程中，為得到直徑小于200nm并可無菌過濾的顆粒，有機相內(nèi)含有一種與水不混溶的有機溶劑是非常必要的。在高壓均漿條件下，上述溶劑在水相中形成極微細的非水性溶劑分散小滴(含溶解的藥理活性物質(zhì))，并在減壓條件下快速去除，形成可無菌過濾納米顆粒。
本發(fā)明制備藥物組合物的過程中，由于蛋白質(zhì)(例如，人血白蛋白)本身起凍干保護劑作用，因此可以不需要添加常規(guī)的凍干保護劑及蛋白穩(wěn)定劑，如甘露醇、甘油或類似化合物及類似化合物組合。盡管不需要，但這些常規(guī)的冷凍保護劑及蛋白穩(wěn)定劑仍然可以加入到本發(fā)明的配方中。
本發(fā)明制備藥物組合物的過程中，有機溶劑去除方式(40℃條件下減壓蒸發(fā))包括但不限于上述減壓蒸發(fā)方法，其它的方法可以包括旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、減壓蒸餾、噴霧干燥或類似方法。
綜上所述，本發(fā)明提供了卡巴他賽蛋白質(zhì)納米顆粒的制備方法，此種方法因未采用卡巴他賽注射液中添加的乙醇及吐溫80而避免了其帶來的嚴(yán)重過敏反應(yīng)。
本發(fā)明方法相比于同類技術(shù)的優(yōu)勢在于：通過調(diào)整處方中有機相及水相相組分，可在較高有機相組分條件下制備出穩(wěn)定性優(yōu)越的高濃度卡巴他賽納米顆粒，且更有利于產(chǎn)業(yè)化。
本發(fā)明制備的卡巴他賽蛋白納米顆粒夠以較小體積輸送高劑量藥理活性物質(zhì)，這可以使病人接受大體積液體輸注時的不適感和住院時間減至最小。此外，蛋白質(zhì)外殼或包衣通常在體內(nèi)可被蛋白水解酶完全降解，因此本藥物組合物不會帶來副作用。
具體實施方式
下面通過具體的制備實例和試驗例進一步說明本發(fā)明，但是，應(yīng)當(dāng)理解為，這些例子僅僅是用于更詳細具體地說明之用，而不應(yīng)理解為用于以任何形式限制本發(fā)明。
本發(fā)明對試驗中所使用到的材料以及試驗方法進行一般性和/或具體的描述。雖然為實現(xiàn)本發(fā)明目的所使用的許多材料和操作方法是本領(lǐng)域公知的，但是本發(fā)明仍然在此作盡可能詳細描述。本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚，在下文中，如果未特別說明，本發(fā)明所用材料和操作方法是本領(lǐng)域公知的。以下實施例1-5中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機溶劑前后藥液的pH值基本相同，無明顯改變。
實施例1：高壓均質(zhì)乳化法制備小于200nm可無菌過濾的納米顆粒
本實施例介紹可無菌過濾的卡巴他賽顆粒的制備過程。將300mg卡巴他賽溶解于1.35ml的三氯甲烷及0.15ml的無水乙醇中，有機相加入到29ml(10.2％,w/v)的人血白蛋白水溶液中，混合物在低轉(zhuǎn)速條件下剪切均漿3分鐘形成粗乳液，轉(zhuǎn)移至高壓均漿器內(nèi)，3,000～30,000psi壓力條件下均漿7次循環(huán)。得到的藥液轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器內(nèi)，40℃條件下減壓(10-15KPa)蒸發(fā)30分鐘除去有機溶劑。得到的分散懸浮液為半透明，pH為6.7，Zeta電位為-25mv，卡巴他賽顆粒平均直徑一般為120～155nm。將分散懸浮液通過0.22μm微孔濾膜過濾器，其渾濁度及顆粒大小無明顯變化。HPLC法測定結(jié)果顯示，過濾后82％以上的卡巴他賽得到回收。
分散懸浮液冷凍干燥48小時，所得塊狀物加入無菌水或生理鹽水后很易再構(gòu)成原來的分散液，復(fù)溶后的顆粒大小與冷凍干燥前相同。
附加實驗：向本實施例所得分散懸浮液中分別添加甘氨酸、甘露醇、蔗糖及乳糖四種凍干賦形劑，它們各自濃度為5％(w/v)，再進行冷凍干燥，所得冷凍干燥粉針劑各種理化性質(zhì)均與未添加它們的粉針劑相同。在后續(xù)的實施例2-4中同法進行附加試驗時，亦具有相同的結(jié)論。另外，在實施例11中亦進行此附加試驗，結(jié)果，這些附加試驗所得粉針的各種理化性質(zhì)均與未添加它們的實施例11粉針劑相同。
實施例2：高壓均質(zhì)乳化法制備小于200nm可無菌過濾的納米顆粒
將300mg卡巴他賽溶解于1.5ml的三氯甲烷及0.15ml的無水乙醇中，有機相加入到24ml(12.5％，w/v)的人血白蛋白水溶液中，混合物在低轉(zhuǎn)速條件下剪切均漿3分鐘形成粗乳液，轉(zhuǎn)移至高壓均漿器內(nèi)，3,000～30,000psi壓力條件下均漿8次循環(huán)。得到的藥液轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器內(nèi)，40℃條件下減壓(10-15KPa)蒸發(fā)30分鐘除去無水乙醇和三氯甲烷。得到的分散懸浮液為半透明，pH為6.5，Zeta電位為-26mv，卡巴他賽顆粒平均直徑一般為125～150nm。將分散懸浮液通過0.22μm微孔濾膜過濾器，其渾濁度及顆粒大小無明顯變化。HPLC法測定結(jié)果顯示，過濾后85％以上的卡巴他賽得到回收。
分散懸浮液冷凍干燥48小時，所得塊狀物加入無菌水或生理鹽水后很易再構(gòu)成原來的分散液，復(fù)溶后的顆粒大小與冷凍干燥前相同。
實施例3：高壓均質(zhì)乳化法制備小于200nm可無菌過濾的納米顆粒
本實施例介紹可無菌過濾的卡巴他賽顆粒的制備過程。將1g卡巴他賽溶解于4.5ml的三氯甲烷及0.5ml的無水乙醇中，有機相加入到57.5ml(20.2％，w/v)的人血白蛋白水溶液中，混合物在低轉(zhuǎn)速條件下剪切均漿3分鐘形成粗乳液，轉(zhuǎn)移至高壓均漿器內(nèi)，3,000～30,000psi壓力條件下均漿7次循環(huán)。得到的藥液轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器內(nèi)，40℃條件下減壓(10-15KPa)蒸發(fā)30分鐘除去有機溶劑。得到的分散懸浮液為半透明，pH為6.9，Zeta電位為-29mv，卡巴他賽顆粒平均直徑一般為120～150nm。將分散懸浮液通過0.22μm微孔濾膜過濾器，其渾濁度及顆粒大小無明顯變化。HPLC法測定結(jié)果顯示，過濾后82％以上的卡巴他賽得到回收。
分散懸浮液冷凍干燥48小時，所得塊狀物加入無菌水或生理鹽水后很易再構(gòu)成原來的分散液，復(fù)溶后的顆粒大小與冷凍干燥前相同。
實施例4：高壓均質(zhì)乳化法制備小于200nm可無菌過濾的納米顆粒
本實施例介紹可無菌過濾的卡巴他賽顆粒的制備過程。將500mg卡巴他賽溶解于3.0ml的三氯甲烷及0.5ml的無水乙醇中，有機相加入到60ml(8.5％,w/v)的人血白蛋白水溶液中，混合物在低轉(zhuǎn)速條件下剪切均漿3分鐘形成粗乳液，轉(zhuǎn)移至高壓均漿器內(nèi)，3,000～30,000psi壓力條件下均漿5次循環(huán)。得到的藥液轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器內(nèi)，40℃條件下減壓(10-15KPa)蒸發(fā)30分鐘除去有機溶劑。得到的分散懸浮液為半透明，pH為6.6，Zeta電位為-23mv，卡巴他賽顆粒平均直徑一般為130～150nm。將分散懸浮液通過0.22μm微孔濾膜過濾器，其渾濁度及顆粒大小無明顯變化。HPLC法測定結(jié)果顯示，過濾后80％以上的卡巴他賽得到回收。
分散懸浮液冷凍干燥48小時，所得塊狀物加入無菌水或生理鹽水后很易再構(gòu)成原來的分散液，復(fù)溶后的顆粒大小與冷凍干燥前相同。
實施例5：高壓均質(zhì)乳化法—有機相溶劑相組分對顆粒大小影響
本實施例說明在本發(fā)明中可在相對較高相組分條件下制備較小粒徑的顆粒。
在有機相內(nèi)將乙醇含量保持在10％(v/v)，改變有機溶劑的相組分，按照實施例1相同步驟進行一系列實驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，并非僅僅在異常低的相組分條件下才可以制備出可無菌過濾的納米顆粒。
表1 有機溶劑相組分對顆粒大小影響
試驗例部分：理化性質(zhì)測定
試驗例1：粒度和粒度分布
將呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物1g加至0.9％氯化鈉溶液20～50ml中分散均勻后，照《中華人民共和國藥典》2015年版四部第0982節(jié)粒度和粒度分布測定法中的第三法即光散射法測定粒度和粒度分布。本發(fā)明提及的全部實施例及補充實施例所得呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物經(jīng)測定，它們的平均粒徑均在100～200nm范圍內(nèi)，粒徑小于50nm的微粒少于5％，粒徑大于350nm的微粒少于5％。
試驗例2：粒度和粒度分布的穩(wěn)定性試驗
使呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物置40℃條件下下放置6個月，測定0月和6月時的粒度和粒度分布。實施例1-5以及實施例11-15所得各種粉針劑經(jīng)此高溫處理6個月后，經(jīng)測定：以6月平均粒徑與0月平均粒徑相比較的平均粒徑增加百分?jǐn)?shù)計，實施例1-5各粉針劑的平均粒徑增加百分?jǐn)?shù)在71～83％范圍內(nèi)，實施例11-15各粉針劑的平均粒徑增加百分?jǐn)?shù)在16～21％范圍內(nèi)；全部實施例11-15粉針劑在0月和6月，其粒徑小于50nm的微粒均少于5％，粒徑大于350nm的微粒均少于5％。
試驗例3：分散時間
將呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物1g加至0.9％氯化鈉溶液20ml中，輕輕振搖，記錄至完全分散均勻且無未分散固體物的時間，作為分散時間。本發(fā)明提及的全部實施例及補充實施例所得呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物經(jīng)測定，它們的分散時間均在5～15分鐘范圍內(nèi)。
試驗例4：分散時間的穩(wěn)定性試驗
使呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物置40℃條件下下放置6個月，測定0月和6月時的分散時間。實施例1-5以及實施例11-15所得各種粉針劑經(jīng)此高溫處理6個月后，經(jīng)測定：以6月分散時間與0月分散時間相比較的分散時間增加百分?jǐn)?shù)計，實施例1-5各粉針劑的分散時間增加百分?jǐn)?shù)在57～64％范圍內(nèi)，實施例11-15各粉針劑的分散時間增加百分?jǐn)?shù)在9～16％范圍內(nèi)。
試驗例5：酸堿度(pH值)
將呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物1g加至0.9％氯化鈉溶液20ml中，使分散均勻，測定該液體的pH值。本發(fā)明提及的全部實施例及補充實施例所得呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物經(jīng)測定，其pH值均在6.0～7.5范圍內(nèi)。
試驗例6：水分
將呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物照《中華人民共和國藥典》2015年版四部第0832節(jié)水分測定法中的第一法即費休氏法中的容量滴定法測定水分。
試驗例7：接觸角
將呈冷凍干燥粉針劑形式的藥物組合物壓制成直徑10mm、厚度2.5mm、硬度1kg的圓形片劑，該片劑照如下方式測定其接觸角：在不銹鋼制、內(nèi)徑0.2～0.3mm、外徑0.4～0.6mm的針頭的針尖處形成1μl純水的液滴，再通過接觸角測定裝置測定該水滴加到片劑表面60毫秒后的接觸角。