本發(fā)明涉及醫(yī)藥化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種具抗腫瘤活性的不對(duì)稱雙7-N雜靛紅席夫堿類化合物的合成方法。
背景技術(shù)：
席夫堿化合物因其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)特征，即核心基團(tuán)含有帶孤對(duì)電子的N原子，從而具有很好的配對(duì)能力，而該基團(tuán)兩邊均可與各種類型的基團(tuán)反應(yīng)從而得到性質(zhì)不一的衍生物，這使得其在實(shí)際應(yīng)用上極具特色，尤其在化學(xué)、生物學(xué)方面應(yīng)用廣泛。不對(duì)稱雙席夫堿，由于其結(jié)構(gòu)的不對(duì)稱性，使得擁有很多特殊的用途，如可用作載氧載體、催化劑、殺蟲(chóng)劑、抑菌劑、生物模擬過(guò)程的模擬分子等，近年來(lái)此類化合物的合成和性質(zhì)研究也成為化學(xué)領(lǐng)域中一個(gè)十分活躍的課題。
靛紅及其衍生物(含N雜靛紅)具有獨(dú)特的電子特性和優(yōu)越的生物活性，在抗腫瘤、抗病毒、神經(jīng)保護(hù)等方面的活性有重要意義。靛紅目前可以作為工業(yè)品大量合成，是相對(duì)較便宜的原料，其1、2、3位及苯環(huán)上可以發(fā)生多種類型的化學(xué)反應(yīng)，為其衍生物的合成提供了廣闊的空間，因此目前對(duì)靛紅及其衍生物的合成和活性的研究非?；钴S。
含O、S、N的席夫堿及其金屬配合物,以其良好的抑菌、抗癌和抗病毒的生物活性一直受到人們的重視。靛紅類化合物(含N雜靛紅)具有較好的抑菌、抗病毒、神經(jīng)保護(hù)活性。因此，筆者利用7-N雜靛紅及其衍生物和水合肼為原料，設(shè)計(jì)合成了一類結(jié)構(gòu)新穎的不對(duì)稱雙7-N雜靛紅席夫堿類化合物。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種具抗腫瘤活性的不對(duì)稱雙7-N雜靛紅席夫堿類化合物的合成方法，具有原料環(huán)保，生產(chǎn)成本低，操作安全性高，反應(yīng)條件溫和，反應(yīng)原料利用充分的特點(diǎn)。
一種具有抗腫瘤活性的不對(duì)稱雙7-N雜靛紅席夫堿類化合物，其結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)：
其中：
R1、R2、R3、R4可以為氫、硝基、烷氧基、鹵素，取代或未取代的苯基，取代或未取代的低級(jí)烷基或環(huán)烷基、低級(jí)烷基-環(huán)烷基、環(huán)烷基-低級(jí)烷基；
優(yōu)選R1表示下列基團(tuán)：氫、甲氧基、硝基、鹵素，取代或未取代的低級(jí)烷基或環(huán)烷基；
優(yōu)選R2表示下列基團(tuán)：氫、硝基、鹵素，取代或未取代的低級(jí)烷基或環(huán)烷基；
優(yōu)選R3表示下列基團(tuán)：氫、甲氧基、硝基、甲基、鹵素，取代或未取代的苯基，取代或未取代的低級(jí)烷基或環(huán)烷基；
優(yōu)選R4表示下列基團(tuán)：氫、硝基、甲基、鹵素，取代或未取代的苯基，取代或未取代的低級(jí)烷基或環(huán)烷基。
一種具有抗腫瘤活性的不對(duì)稱雙7-N雜靛紅席夫堿類化合物的合成方法，由7-N雜靛紅及其衍生物和水合肼為原料，在乙醇作為反應(yīng)溶劑的條件下的合成路線如下：
以下為詳細(xì)制備過(guò)程：
1)將適量7-N雜靛紅或其衍生物用有機(jī)溶劑溶解，置于錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到水合肼的有機(jī)溶劑中，加熱到60℃～100℃，反應(yīng)4～9小時(shí)；
2)薄層層析方法跟蹤反應(yīng)至完全，將反應(yīng)體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體；
3)將步驟2)所述的中間體與另一不同取代基的7-N雜靛紅或其衍生物按摩爾比1:1～1:2置于反應(yīng)器中，加入適量有機(jī)溶劑繼續(xù)加熱、攪拌，60℃～100℃下回流反應(yīng)2～6小時(shí)；
4)TCL跟蹤至反應(yīng)完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應(yīng)體系的固液混合物減壓濃縮，然后冷卻至室溫過(guò)濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對(duì)稱雙7-N雜靛紅席夫堿粗品；
5)將不對(duì)稱雙7-N雜靛紅席夫堿粗品加入到反應(yīng)器中，加入有機(jī)溶劑進(jìn)行重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得到不對(duì)稱雙7-N雜靛紅席夫堿類化合物目標(biāo)產(chǎn)物。
所述的步驟1)、的步驟3)、的步驟5)中的有機(jī)溶劑優(yōu)選甲醇、乙醇或異丙醇，進(jìn)一步優(yōu)選為乙醇。
所述的步驟1)中7-N雜靛紅或其衍生物與水合肼的摩爾比為1:1～1:2.5，進(jìn)一步優(yōu)選為1:1.5～1:2。
所述的步驟1)中的反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為5～6小時(shí)。
所述的上驟1)、上驟3)中的溫度為75℃～85℃。
所述的步驟3)中的中間體與另一不同取代基的7-N雜靛紅或其衍生物按摩爾比為1:1～1:1.5。
所述的步驟(3)中的反應(yīng)時(shí)間為3～4小時(shí)。
結(jié)構(gòu)式(I)部分優(yōu)選實(shí)施方案中的化合物結(jié)構(gòu)式如下所示：
本發(fā)明的有益效果是：
本合成路線的優(yōu)點(diǎn)在于：原料環(huán)保，生產(chǎn)成本低，操作安全性高，反應(yīng)條件溫和，反應(yīng)原料利用充分，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式：
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步敘述，但本發(fā)明不局限與以下實(shí)施例。
實(shí)施例1
化合物(1)
(Z)-6-chloro-3-((Z)-(5-methyl-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-1H-p yrrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的制備。
將適量1.82g(10mmol)5-氯-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置于錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應(yīng)6小時(shí)。薄層層析方法跟蹤反應(yīng)至完全，將反應(yīng)體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與1.62g(10mmol)5-甲基-7-N雜靛紅置于反應(yīng)器中，加入50mL乙醇，繼續(xù)加熱、攪拌，80℃下回流反應(yīng)4小時(shí)。TCL跟蹤至反應(yīng)完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應(yīng)體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫后過(guò)濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對(duì)稱5-氯-5’-甲基-雙7-N雜靛紅席夫堿(1)粗品。將該粗品加入到反應(yīng)器中，加入25mL乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得到淡黃色結(jié)晶性粉末(1.52克)，總收率44.6％。
淡黃色結(jié)晶粉末，M.P.174.5℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.42(1H,s,J＝1.5Hz),8.13(1H,s,J＝1.5Hz),8.1(1H,s,J＝0.4Hz),2.33(3H,s,J＝0.4Hz)；13C-NMR(75MHz,DMSOd6)δ(ppm):167.2,161.0,159.5,158.8,146.4,140.9,139.4,138.2,137.5,136.6,119.3,118.6,110.9,18.1；HRMS(ESI)for(M+H)+:calcd:340.0475,found:340.0479.
實(shí)施例2
化合物(2)
(Z)-3-((Z)-(5-bromo-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-6-chloro-1H-p yrrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的制備。
將適量1.82g(10mmol)5-氯-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置于錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應(yīng)6小時(shí)。薄層層析方法跟蹤反應(yīng)至完全，將反應(yīng)體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與2.26g(10mmol)5-溴-7-N雜靛紅置于反應(yīng)器中，加入50mL乙醇，繼續(xù)加熱、攪拌，80℃下回流反應(yīng)4小時(shí)。TCL跟蹤至反應(yīng)完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應(yīng)體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫后過(guò)濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對(duì)5-氯-5’-溴-雙7-N雜靛紅席夫堿(2)粗品。將該粗品加入到反應(yīng)器中，加入25mL乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得到黃棕色色結(jié)晶性粉末(3.11克)，總收率76.9％。
黃棕色結(jié)晶粉末，M.P.199.5℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.53(1H,s,J＝1.5Hz),8.42(1H,s,J＝1.5Hz),8.10(1H,s,J＝1.5Hz),8.06(2H,s),7.76(1H,s,J＝1.5Hz)；13C-NMR(75MHz,DMS O-d6)δ(ppm):167.2,160.9,160.8,155.4,146.5,141.3,141.0,139.4,138.1,137.5,118.6,112.9,104.8；HRMS(ESI)for(M+H)+:calcd:403.9426,found:403.94249.
實(shí)施例3
化合物(3)
(Z)-3-((Z)-(5-bromo-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-6-methyl-1H-p yrrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的制備。
將適量1.62(10mmol)5-甲基-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置于錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應(yīng)6小時(shí)。薄層層析方法跟蹤反應(yīng)至完全，將反應(yīng)體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與2.26g(10mmol)5-溴-7-N雜靛紅置于反應(yīng)器中，加入50mL乙醇，繼續(xù)加熱、攪拌，80℃下回流反應(yīng)4小時(shí)。TCL跟蹤至反應(yīng)完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應(yīng)體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫后過(guò)濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對(duì)稱5-甲基-5’-溴-雙7-N雜靛紅席夫堿(3)粗品。將該粗品加入到反應(yīng)器中，加入25mL乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得到紅褐色結(jié)晶性粉末(2.75克)，總收率71.6％。
紅褐色結(jié)晶粉末，M.P.210.6℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.53(1H,s,J＝1.5Hz),8.23(1H,s,J＝1.5Hz),8.10(1H,s,J＝1.5Hz),8.02(2H,s),7.46(1H,s,J＝1.5Hz),2.33(3H,s,J＝1.5Hz)；13C-N MR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):167.2,161.0,155.4,144.9,141.6,141.1,139.3,138.5,138.2,116.8,112.9,104.7,18.2；HRMS(ESI)for(M+H)+:calcd:383.9971,found:383.9974.
實(shí)施例4
化合物(4)
(Z)-3-((Z)-(1-benzyl-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-1-methyl-1H-p yrrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的制備。
將適量1.62g(10mmol)1-甲基-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置于錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應(yīng)6小時(shí)。薄層層析方法跟蹤反應(yīng)至完全，將反應(yīng)體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與2.38g(10mmol)1-芐基-7-N雜靛紅置于反應(yīng)器中，加入50mL乙醇，繼續(xù)加熱、攪拌，80℃下回流反應(yīng)4小時(shí)。TCL跟蹤至反應(yīng)完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應(yīng)體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫后過(guò)濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對(duì)稱1-甲基-1’-芐基-雙7-N雜靛紅席夫堿(4)粗品。將該粗品加入到反應(yīng)器中，加入25mL乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得到灰褐色結(jié)晶性粉末(2.51克)，總收率63.5％。
灰褐色結(jié)晶性粉末，M.P.214.3℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.33,8.31(2H,t,J＝1.5Hz,7.5Hz),7.96(1H,d,J＝7.5Hz),7.32-7.22(6H,m,J＝1.5Hz,7.5Hz),6.88(1H,t,J＝1.5Hz),4.79(2H,s,J＝7.5Hz),3.42(3H,s,J＝1.5Hz)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.7,161.5,160.9,153.3,145.8,140.8,138.7,138.5,138.2,136.3,128.7,127.1,126.9,120.7,113.6,111.8,49.6,30.3；HRMS(ESI)for(M+H)+:calcd:396.1336,found:396.1339.
實(shí)施例5
化合物(5)
(Z)-3-((Z)-(1-ethyl-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-1-methyl-1H-py rrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的制備。
將適量1.62g(10mmol)1-甲基-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置于錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應(yīng)6小時(shí)。薄層層析方法跟蹤反應(yīng)至完全，將反應(yīng)體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與1.76g(10mmol)1-乙基-7-N雜靛紅置于反應(yīng)器中，加入50mL乙醇，繼續(xù)加熱、攪拌，80℃下回流反應(yīng)4小時(shí)。TCL跟蹤至反應(yīng)完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應(yīng)體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫后過(guò)濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對(duì)稱1-甲基-1’-乙基-雙7-N雜靛紅席夫堿(5)粗品。將該粗品加入到反應(yīng)器中，加入25mL乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得到白色結(jié)晶性粉末(1.18克)，總收率35.2％。
白色結(jié)晶粉末，M.P.195.6℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.33,8.31(2H,t,J＝7.5Hz),7.96(1H,d,J＝7.5Hz),7.68(1H,t,J＝7.5Hz),7.36(1H,d,J＝7.5Hz),6.88(1H,t,J＝7.5Hz),4.30(2H,q,J＝7.5Hz),3.42(3H,s,J＝8.0Hz),1.39(3Ht,J＝8.0Hz)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.7,163.4,161.8,161.0,153.3,145.8,140.7,138.7,138.5,138.2,127.3,120.7,113.6,111.8,48.9,30.3,13.9；HRMS(ESI)for(M+Na)+:calcd:334.1176,found:334.11179.
實(shí)施例6
化合物(6)
(Z)-1-ethyl-3-((Z)-(1-isopropyl-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-1H-pyrrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的制備。
將適量1.76g(10mmol)1-乙基-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置于錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應(yīng)6小時(shí)。薄層層析方法跟蹤反應(yīng)至完全，將反應(yīng)體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與1.90g(10mmol)1-異丙基-7-N雜靛紅置于反應(yīng)器中，加入50mL乙醇，繼續(xù)加熱、攪拌，80℃下回流反應(yīng)4小時(shí)。TCL跟蹤至反應(yīng)完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應(yīng)體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫后過(guò)濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對(duì)稱1-乙基-1’-異丙基-雙7-N雜靛紅席夫堿(6)粗品。將該粗品加入到反應(yīng)器中，加入25mL乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得到紅色結(jié)晶性粉末(2.49克)，總收率68.7％。
紅色結(jié)晶粉末，M.P.191.9℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.33,8.31(2H,t,J＝7.5Hz),7.96(1H,d,J＝7.5Hz),7.68(1H,t,J＝1.5Hz),7.36(1H,d,J＝1.5Hz),6.88(1H,d,J＝7.5Hz),4.30(2H,q,J＝6.8Hz),3.96(1H,m,J＝6.8Hz),1.40(3H,t,J＝6.8Hz),1.29(6H,d,J＝6.8Hz)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.4,161.8,160.9,153.3,145.7,140.8,138.5,138.2,127.4,120.7,113.6,111.8,58.6,42.4,20.8,13.9；HRMS(ESI)for(M+Na)+:calcd:362.1494,found:362.1497.
實(shí)施例7
化合物(7)
(Z)-3-((Z)-(1-isopropyl-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-1-methyl-1H-pyrrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的制備。
將適量1.62g(10mmol)1-甲基-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置于錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應(yīng)6小時(shí)。薄層層析方法跟蹤反應(yīng)至完全，將反應(yīng)體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與1.90g(10mmol)1-異丙基-7-N雜靛紅置于反應(yīng)器中，加入50mL乙醇，繼續(xù)加熱、攪拌，80℃下回流反應(yīng)4小時(shí)。TCL跟蹤至反應(yīng)完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應(yīng)體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫后過(guò)濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對(duì)稱1-甲基-1’-異丙基-雙7-N雜靛紅席夫堿(7)粗品。將該粗品加入到反應(yīng)器中，加入25mL乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得到紅色結(jié)晶性粉末(1.90克)，總收率54.5％。
紅色粉末，M.P.182.5℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.33,8.31(2H,t,J＝7.5Hz),7.96(1H,d,J＝7.5Hz),7.68(1H,t,J＝1.5Hz),7.36(1H,d,J＝1.5Hz),6.88(1H,t,J＝7.5Hz),3.96(1H,m,J＝7.5Hz),3.42(1H,s,J＝6.8Hz),1.29(6Hd,J＝6.8Hz)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.7,163.1,161.8,161.0,1583.3,145.8,140.7,138.6,138.5,127.3,120.6,113.5,111.7,58.6,30.2,20.8；HRMS(ESI)for(M+Na)+:calcd:348.1336,found:348.1339.
實(shí)施例8
化合物(8)
(Z)-6-chloro-3-((Z)-(5-chloro-1-methyl-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-1-ethyl-1H-pyrrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的制備。
將適量2.10g(10mmol)1-乙基-5-氯-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置于錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應(yīng)6小時(shí)。薄層層析方法跟蹤反應(yīng)至完全，將反應(yīng)體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與1.96g(10mmol)1-甲基-5-氯-7-N雜靛紅置于反應(yīng)器中，加入50mL乙醇，繼續(xù)加熱、攪拌，80℃下回流反應(yīng)4小時(shí)。TCL跟蹤至反應(yīng)完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應(yīng)體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫后過(guò)濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對(duì)稱1-乙基-1’-甲基-5,5’-二氯雙7-N雜靛紅席夫堿(8)粗品。將該粗品加入到反應(yīng)器中，加入25mL乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得到黃色結(jié)晶性粉末(3.07克)，總收率76.4％。
黃色結(jié)晶粉末，M.P.186.9℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)8.42(1H,s,J＝1.5Hz),8.34,8.30(2H,d,J＝1.5Hz),7.76(1H,s,J＝1.5Hz),4.30(2H,q,J＝8.0Hz),3.42(3H,s,J＝7.5Hz),1.40(3H,t,J＝8.0Hz)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.7,163.4,160.9,160.4,153.1,146.5,141.0,139.4,138.5,138.2,137.4,123.7,118.6,112.5,42.4,31.3,13.9；HRMS(ESI)for(M+H)+:calcd:402.0398,found:402.0401.
實(shí)施例9
化合物(9)
(Z)-6-bromo-3-((Z)-(5-chloro-1-ethyl-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-1-methyl-1H-pyrrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的制備。
將適量2.40g(10mmol)1-甲基-5-溴-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置于錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應(yīng)6小時(shí)。薄層層析方法跟蹤反應(yīng)至完全，將反應(yīng)體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與2.11g(10mmol)1-乙基-5-氯-7-N雜靛紅置于反應(yīng)器中，加入50mL乙醇，繼續(xù)加熱、攪拌，80℃下回流反應(yīng)4小時(shí)。TCL跟蹤至反應(yīng)完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應(yīng)體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫后過(guò)濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對(duì)稱1-乙基-1’-甲基-5-溴-5’-氯雙7-N雜靛紅席夫堿(9)粗品。將該粗品加入到反應(yīng)器中，加入25mL乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得到紅棕色結(jié)晶性粉末(3.54克)，總收率79.3％。
紅棕色結(jié)晶粉末，M.P.205.2℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.42(1H,s,J＝1.5Hz),8.34,8.30(2H,d,J＝1.5Hz),7.95(1H,s,J＝1.5Hz),4.31(2H,q,J＝8.0Hz),3.42(3H,s),1.30(3H,t,J＝8.0Hz)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.7,161.0,160.4,153.1,147.0,143.3,139.8,138.5,138.2,123.7,118.5,118.4,112.5,48.8,30.3,13.9；HRMS(ESI)for(M+Na)+:calcd:445.9893,found:445.9897.
實(shí)施例10
化合物(10)
(Z)-3-((Z)-(1-benzyl-5-bromo-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-6-chloro-1-ethyl-1H-pyrrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的制備。
將適量2.10g(10mmol)1-乙基-5-氯-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置于錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應(yīng)6小時(shí)。薄層層析方法跟蹤反應(yīng)至完全，將反應(yīng)體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與3.16g(10mmol)1-苯乙基-5-溴-7-N雜靛紅置于反應(yīng)器中，加入50mL乙醇，繼續(xù)加熱、攪拌，80℃下回流反應(yīng)4小時(shí)。TCL跟蹤至反應(yīng)完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應(yīng)體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫后過(guò)濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對(duì)稱1-乙基-5-氯-1’-苯乙基-5’-溴-雙7-N雜靛紅席夫堿(10)粗品。將該粗品加入到反應(yīng)器中，加入25mL乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得到黃棕色結(jié)晶性粉末(3.73克)，總收率71.5％。
黃棕色結(jié)晶粉末，M.P.233.8℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.53(1H,s,J＝1.5Hz),8.42(1H,s,J＝1.5Hz),8.10(1H,s,J＝1.5Hz),7.76(1H,s,J＝1.5Hz),7.32-7.22(5H,m,J＝7.5Hz),4.79(2H,s),4.30(2H,q,J＝8.0Hz),1.39(3Ht,J＝8.0Hz)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.7,163.4,160.9,160.8,155.4,146.5,141.6,140.9,139.4,138.2,137.5,136.3,128.7,127.1,126.9,118.6,113.0,104.8,49.6,42.4,13.9；HRMS(ESI)for(M+Na)+:calcd:522.0208,found:522.0211.
實(shí)施例11
化合物(11)
(Z)-6-chloro-3-((Z)-(1-ethyl-5-methyl-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-1-methyl-1H-pyrrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的制備。
將適量1.96g(10mmol)1-甲基-5-氯-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置于錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應(yīng)6小時(shí)。薄層層析方法跟蹤反應(yīng)至完全，將反應(yīng)體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與1.90g(10mmol)1-乙基-5-甲基-7-N雜靛紅置于反應(yīng)器中，加入50mL乙醇，繼續(xù)加熱、攪拌，80℃下回流反應(yīng)4小時(shí)。TCL跟蹤至反應(yīng)完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應(yīng)體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫后過(guò)濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對(duì)稱1-甲基-5-氯-1’-乙基-5’-甲基-雙7-N雜靛紅席夫堿(11)粗品。將該粗品加入到反應(yīng)器中，加入25mL乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得到黃色結(jié)晶性粉末(2.67克)，總收率69.8％。
黃色結(jié)晶粉末，M.P.189.2℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.42(1H,s,J＝1.5Hz),8.12,8.11(2H,s,J＝1.5Hz),7.76(1H,s,J＝1.5Hz),4.30(2H,q,J＝8.0Hz),3.42(3H,s,J＝7.5Hz),2.33(3H,s,J＝7.5Hz),1.40(3H,t,J＝8.0Hz)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.7,162.5,160.9,159.5,155.3,146.5,140.9,139.4,138.2,137.5,136.6,119.3,118.6,111.0,48.9,30.3,18.2,13.9；HRMS(ESI)for(M+Na)+:calcd:382.0943,found:382.0947.
實(shí)施例12
本發(fā)明化合物的抗腫瘤活性測(cè)試
對(duì)本發(fā)明的化合物進(jìn)行了腫瘤細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)，試驗(yàn)方法采用常規(guī)的MTT法。
細(xì)胞株選用：人肝癌細(xì)胞(HepG2)，人肺癌細(xì)胞(A-549)，人胃癌細(xì)胞(SGC-7901)。培養(yǎng)液為DMEM+15％NBS+雙抗。
樣品液的配制：用DMSO(Merck)溶解后，加入PBS(-)配成的100μmol/L的溶液或者均勻的混懸液，然后用DMSO的PBS(-)稀釋，最終濃度分別為0.1，1，10，20，40，60，80，100μmol/L。
將上市的抗腫瘤藥物阿糖胞苷(Ara-C)以同樣的條件配成對(duì)照品溶液。
細(xì)胞培養(yǎng)：貼壁生長(zhǎng)腫瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)于含10％滅活新生牛血清和青霉素、鏈霉素(各100萬(wàn)U/L)的1640培養(yǎng)液中，置于37℃，5％CO2，飽和濕度的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，每2～3天傳代1次，傳代時(shí)首先倒出培養(yǎng)液，PBS洗2次，胰酶消化后，加入新鮮的培養(yǎng)液吹打均勻，調(diào)整細(xì)胞至適當(dāng)濃度移入新的培養(yǎng)瓶中，添加培養(yǎng)液至適量。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。
MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性及IC50的測(cè)定：
實(shí)驗(yàn)原理：活細(xì)胞線粒體中脫氫酶能將黃色的MTT還原成不溶于水的藍(lán)紫色產(chǎn)物甲臜(MTT formazan)，并沉積在細(xì)胞中，生成的量與活細(xì)胞數(shù)目成正比，而死細(xì)胞沒(méi)有這種功能。DMSO能溶解藍(lán)紫色結(jié)晶物，顏色深淺與所含的量成正比，因此用酶標(biāo)儀測(cè)定的光吸收值可反映細(xì)胞存活率。
實(shí)驗(yàn)方法：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，消化、計(jì)數(shù)，以2×104/mL的密度接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100μl。培養(yǎng)24小時(shí)后，將待測(cè)化合物以0.1，1，10，20，40，60，80，100μmol/L濃度處理細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組每個(gè)濃度設(shè)5個(gè)復(fù)孔，以含0.4％DMSO的培養(yǎng)液作對(duì)照。藥物作用48小時(shí)后，去上清，每孔加入100μl MTT(2-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-3，5-二苯基-2H-四唑氫溴酸鹽)(1mg/mL)，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，棄上清，每孔加入100μl DMSO，振蕩混勻，用酶標(biāo)儀在570nm處測(cè)定吸光度值，采用IC50計(jì)算軟件求出半數(shù)抑制濃度(IC50)。
試驗(yàn)結(jié)果詳見(jiàn)表1，其中，樣品是指相應(yīng)實(shí)施例中制備的不對(duì)稱雙7-N雜靛紅席夫堿類化合物，樣品編號(hào)對(duì)應(yīng)制備實(shí)施例中所得到的化合物的具體編號(hào)。
表1化合物對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC50(單位：μmol/L)
化合物2在所測(cè)試的3種細(xì)胞株中均表現(xiàn)出了良好的抗腫瘤活性，化合物10和9次之，在不同的細(xì)胞株中也表現(xiàn)出了良好的抗腫瘤活性。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的化合物具有良好的抗腫瘤活性，特別是部分不對(duì)稱雙7-N雜靛紅席夫堿類化合物的活性在特定細(xì)胞株中抗腫瘤活性優(yōu)于或等同于阿糖胞苷，可用于抗腫瘤藥物的研究與開(kāi)發(fā)。