具有抗腫瘤功能的益生菌組合物及其制備方法與應(yīng)用
【專利說明】具有抗腫瘤功能的益生菌組合物及其制備方法與應(yīng)用 【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種具有抗腫瘤功能的益生菌組合物及其制 備方法與應(yīng)用。 【【背景技術(shù)】】
[0002] 惡性腫瘤作為全球較大的公共衛(wèi)生問題之一，極大地危害人類的健康，并將成為 新世紀人類的第一殺手。從世界范圍來看，2000年全球新發(fā)癌癥病例1010萬，死亡620萬，現(xiàn) 患癌癥病例2240萬，2008年癌癥發(fā)病人數(shù)和死亡人數(shù)分別上升到1266萬和756萬，估計到 2015年將有1500萬新發(fā)病例。我國作為一個發(fā)展中的大國，由于工業(yè)化、城鎮(zhèn)化和人口老齡 化進程的加快，不良的生活方式以及環(huán)境污染等問題的存在，惡性腫瘤而臨的形勢也愈發(fā) 嚴峻。然而，現(xiàn)有的技術(shù)大多是治療癌癥而不是預防癌癥，并且伴隨著一系列的副作用，對 身體造成極大的傷害。因此，尋求更安全、更有效能抗腫瘤的方法，對人類的健康就顯得尤 為重要。
[0003] 近年來研究表明，益生菌能激活機體巨噬細胞、NK細胞等多種免疫細胞，誘導產(chǎn)生 腫瘤壞死因子-a、0(TNF-a、0)、干擾素 -γ (IFN- γ )、白介素-12(IL_12)、一氧化氮(NO)等效 應(yīng)因子，而發(fā)揮抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用。益生菌減少可導致腸道菌群失調(diào)，病原菌乘機大量 繁殖，其代謝產(chǎn)物中某些細菌酶能催化致癌前體物質(zhì)向致癌物質(zhì)轉(zhuǎn)化，并隨血流到達乳腺 等腸外器官而發(fā)揮致癌作用。益生菌可恢復腸道菌群平衡，拮抗腸道中病原菌生長，使細菌 酶的產(chǎn)生及活性降低，還可結(jié)合致癌物質(zhì)隨糞便排出，減少了其形成、活化及滯留機會。因 此，益生菌制劑可以作為一種抗腫瘤的新方法，并且具有來源安全、效果顯著、無任何毒副 作用等優(yōu)點。 【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種具有抗腫瘤功能的益生菌組合物，該組合物能夠有效 提高機體免疫力，促進人體健康。
[0005] 本發(fā)明的另一目的在于提供上述具有抗腫瘤功能的益生菌組合物的制備方法。
[0006] 本發(fā)明的再一目的在于提供上述具有抗腫瘤功能的益生菌組合物的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)：
[0008] -種具有抗腫瘤功能的益生菌組合物，包含如下按質(zhì)量百分比計的組分:益生菌 干粉60~70 %，黃芪提取物粉20~30 %，蘆筍提取物粉10~20 %。
[0009] 優(yōu)選的，所述的具有抗腫瘤功能的益生菌組合物包含如下按質(zhì)量百分比計的組 分:益生菌干粉70 %，黃芪提取物粉20 %，蘆筍提取物粉10 %。
[0010] 所述的益生菌干粉由鼠李糖乳桿菌、干酪乳桿菌、長雙歧桿菌按質(zhì)量比為1:1:1的 比例組成。
[0011]所述的益生菌干粉可以通過購買上市的原料或自行摸索制備工藝的方式獲得，本 發(fā)明對所選的益生菌干粉的制備工藝進行了優(yōu)化;所述的益生菌干粉制備方法步驟優(yōu)選如 下：
[0012] 1)分別將鼠李糖乳桿菌、干酪乳桿菌、長雙歧桿菌經(jīng)培養(yǎng)基活化后，接種于發(fā)酵培 養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)，使菌體濃度達到對數(shù)生長期〇. 5~1.0 X 109cfu/ml;
[0013] 2)將步驟1)中各菌種發(fā)酵液混合后離心，棄上清，菌體沉淀洗滌，離心，滅菌，得菌 泥；
[0014] 3)配制干粉保護劑；
[0015] 4)將干粉保護劑和菌泥混合，進行成膜反應(yīng)，然后，將混合物預凍，再冷凍干燥，制 成具有包埋層的活性益生菌干粉；
[0016] 黃芪提取物粉為豆科植物蒙古黃芪的根提取物。多年生草本，高50-100厘米。主根 肥厚，木質(zhì)，常分枝，灰白色。莖直立，上部多分枝，有細棱，被白色柔毛。多年生草本，高50-100厘米。產(chǎn)于內(nèi)蒙古、山西、甘肅、黑龍江等地。黃芪的藥用迄今已有2000多年的歷史，具有 增強免疫力，增強能量，抗疲勞，抗突變，保肝，抑制破骨細胞的作用。黃芪多糖具有降血脂， 即降低膽固醇和甘油三酯、升高高密度脂蛋白的作用;能夠預防和治療心腦血管疾病，如動 脈粥樣硬化、冠狀動脈病變、周圍血管病變以及高脂血癥等。另有研究表明，12.5%的黃芪 對雙歧桿菌有明顯的促進生長作用。
[0017] 蘆筍提取物粉為百合科植物石刁柏的嫩莖提取物。蘆筍中含有豐富的抗癌元素之 王一硒，阻止癌細胞分裂與生長，抑制致癌物的活力并加速解毒，甚至使癌細胞發(fā)生逆轉(zhuǎn)， 刺激機體免疫功能，促進抗體的形成，提高對癌的抵抗力;加之所含葉酸、核酸的強化作用， 能有效地控制癌細胞的生長。蘆筍對膀胱癌、肺癌、皮膚癌等有特殊療效，并且?guī)缀鯇λ?的癌癥都有一定的療效。
[0018] 本發(fā)明中使用的黃芪提取物粉、蘆筍提取物粉為中藥原料經(jīng)水提后的產(chǎn)物，其均 已在市場上廣泛應(yīng)用，各種提取物的制備是已有的技術(shù)，得到的產(chǎn)品只是在物質(zhì)濃度上有 所差別，其各種產(chǎn)品均可在本發(fā)明中實施應(yīng)用。
[0019] 本發(fā)明還提供一種具有抗腫瘤功能的益生菌組合物的制備方法，其步驟包括選 料、過篩、配料、混合；
[0020] 所述的選料步驟為:選取含有鼠李糖乳桿菌、干酪乳桿菌、長雙歧桿菌的益生菌干 粉，優(yōu)質(zhì)黃芪提取物粉、蘆筍提取物粉；
[0021] 所述的過篩步驟為:將選好的益生菌干粉、黃芪提取物粉、蘆筍提取物粉分別過80 ~100目篩；
[0022] 所述的配料步驟為:將過篩后的益生菌干粉、黃芪提取物粉、蘆筍提取物粉按所述 質(zhì)量百分比稱量備用；
[0023]所述的混合步驟為:將配好的原料于三維混合機中混合至色澤均勻一致，無色差， 即得到具有抗腫瘤功能的益生菌組合物。
[0024] 本發(fā)明還提供一種具有抗腫瘤功能的益生菌組合物在制備抗腫瘤食品/保健品中 的應(yīng)用，該組合物可以加一種或多種藥學上可接受的載體制成片劑、膠囊、顆粒、口服液等 劑型。
[0025] 本發(fā)明還提供一種抗腫瘤食品/保健品，包含上述具有抗腫瘤功能的益生菌組合 物。
[0026] 芪能增強和調(diào)節(jié)機體免疫功能，對干擾素系統(tǒng)有促進作用，可提高機體的抗病力； 對流感病毒等多種病毒所致細胞病變有輕度抑制作用，對流感病毒感染小鼠有保護作用； 有較廣泛的抗菌作用。蘆筍活性成分之一的槲皮素有較強的抗腫瘤活性，可以誘導多種腫 瘤細胞凋亡。大量研究表明，其可在基因水平上通過下調(diào)變異的P53蛋白、上調(diào)16基因的表 達、下調(diào)bcl-2基因及bcl-2mRNA的表達、抑制ras基因活性以及下調(diào)c-myc的基因擴增和表 達等來誘導人乳腺癌細胞、人肺癌細胞、人結(jié)腸癌細胞、白血病細胞、食管癌細胞等多種腫 瘤細胞的凋亡。兩者均具有毒副作用小、材料容易獲得且可長期服用等優(yōu)勢。
[0027] 傳統(tǒng)上中藥的使用，絕大多數(shù)以方劑的形式通過口服吸收而發(fā)揮作用，中藥中的 有效成分在進入腸道之后不可避免地與腸道菌群發(fā)生關(guān)聯(lián)，某些成分經(jīng)相應(yīng)細菌的作用發(fā) 生生物轉(zhuǎn)化后被吸收，因此，體內(nèi)環(huán)境中腸道菌群是完成中藥有效成分生物轉(zhuǎn)化的重要因 素之一。有益菌和中藥是兩類國際公認的益生物質(zhì)，兩者在基本理論觀點上極為相似、一脈 相通;在作用機理上顯示極大的統(tǒng)一性;在具體使用過程中也能完美互補，共同發(fā)揮優(yōu)勢。 因而中藥對于有益菌而言，是絕佳的益生元。本發(fā)明將益生菌與中藥完美結(jié)合，找出了具有 明顯抗腫瘤效果的益生菌組合物配方。
[0028] 本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明的益生菌組合物以益生菌干粉、黃芪提取物粉、蘆 筍提取物粉為原料直接投料，按重量科學配比而成。其含有維生素 K，維生素 B12、吡哆醇、生 物素、葉酸、煙酸和硫胺素等營養(yǎng)成分，制備工藝簡單，避免了提取時造成的藥物損失和由 于原藥材質(zhì)量差異造成的不同產(chǎn)品質(zhì)量差異較大的缺點，使產(chǎn)品純度更高，雜質(zhì)少，安全性 更高，且不同批次間質(zhì)量差異小，質(zhì)量更均勻穩(wěn)定。通過傳統(tǒng)中藥與益生菌合理配伍用藥， 經(jīng)藥學實驗證明，藥效優(yōu)于單獨使用任何一種原料，各有效成分呈協(xié)同作用，具有抗腫瘤、 促進機體健康等功效。 【【具體實施方式】】
[0029] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此。
[0030] 實施例1
[0031] 1)選料制備益生菌干粉：
[0032] 1)分別將鼠李糖乳桿菌、干酪乳桿菌、長雙歧桿菌經(jīng)培養(yǎng)基活化后，接種于發(fā)酵培 養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)，使菌體濃度達到對數(shù)生長期〇. 5~1.0 X 109cfu/ml;
[0033] 雙歧桿菌種子液的制備:取出菌種保藏管，用雙歧桿菌固體培養(yǎng)基劃平板進行復 蘇，37度厭氧培養(yǎng)72小時。在平板下挑取單個菌落接種50毫升雙歧桿菌培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱 中37度厭氧培養(yǎng)48小時。種子采用5 %的接種量，接種至IOL大三角瓶中（裝液量為9.5L)，37 度厭氧培養(yǎng)20-28小時，檢測其菌液濃度，菌含量超過10億/毫升，即可作為雙歧桿菌液體菌 種接種。其中所述的雙歧桿菌培養(yǎng)基:蛋白胨5. Og/L，酵母提取物5g/L，牛肉膏5. Og/L，胰蛋 白胨10.0 g/L，葡萄糖10.0 g/L，醋酸鈉5. Og/L，檸檬酸二銨2. Og/L，吐溫-801.0ml/L，硫酸鎂 〇. lg/L，硫酸鋅0.25g/L，磷酸氫二鉀2g/L，固體培養(yǎng)基中加入瓊脂2 %。培養(yǎng)基滅菌的條件 為:0 · 10-0.15MPa，121°C 滅菌 30 分鐘。
[0034] 乳桿菌種子液的制備:取出菌種保藏管，用MRS固體培養(yǎng)基劃平板進行復蘇，37度 厭氧培養(yǎng)48小時。在平板下挑取單個菌落接種250毫升MRS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中37度厭氧 培養(yǎng)24小時。種子采用5%的接種量，接種至10L大三角瓶中（裝液量為9L)，37度厭氧培養(yǎng) 20-28小時，檢測其菌液濃度，菌含量超過100億/毫升，即可作為乳桿菌液體菌種接種。其中 所述的MRS培養(yǎng)基：蛋白胨lOg/L，酵母提取物5g/L，牛肉膏l(xiāng)Og/L，葡萄糖20g/L，醋酸鈉5g/ U檸檬酸二銨2g/L，吐溫-801ml/L，硫酸鎂0.6g/L，硫酸錳0.05g/L，磷酸氫二鉀2g/L，瓊脂 20g/L，碳酸鈣20g/L，固體培養(yǎng)基中加入瓊脂2%。其中所述的乳酸菌種子培養(yǎng)基：葡萄糖 5%，蛋白胨1.5%，牛肉膏0.75%，氯化鈉0.1%，硫酸錳0.001%，硫酸鎂0.02%，醋酸鈉 0.05 %，碳酸鈣1 %，pH6.0。各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa，121°C滅菌30分鐘。 [0035] 2)將各菌種發(fā)酵液混合后離心，棄上清，菌體沉淀洗滌，離心，滅菌，得菌泥；
[0036] 3)配制干粉保護劑;其中干粉保護劑的配方組成為:β-環(huán)狀糊精10g、乳糖2_5g、海 藻糖0·5-2g、酵母膏0·5-2g、維生素 E0.05-0.1g、蒸餾水IOOmL。
[0037] 4)將干粉保護劑和菌泥混合，進行成膜反應(yīng)，然后，將混合物預凍，再冷凍干燥，制 成具有包埋層的活性益生菌干粉;黃芪提取物粉、蘆筍提取物粉均購自西安天一生物技術(shù) 有限公司。
[0038] (2)過篩
[0039]將步驟(1)中的益生菌干粉、黃芪提取物粉、蘆筍提取物粉分別過80~100目篩。 [0040] 3)配料:稱量過篩后的原料，按益