專利名稱：一種鱷魚血紅蛋白肽的組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鱷魚血紅蛋白肽的組合物，本發(fā)明還涉及該組合物的制備方法，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
鱷魚與恐龍同時代，是地球上最古老的動物之一，有“活化石”之稱。鱷魚同時還是地球上壽命最長的動物之一，壽命高達兩百多歲，比龜和鱉還長。此外，鱷魚長期生活在沼澤地帶，并且經(jīng)常撕咬，可是他們的傷口從來都不會感染細(xì)菌，擁有超強的免疫力。事實上，早在兩千年前，我們的老祖宗就對鱷魚有了很深的了解。秦漢時代的《神農(nóng)本草經(jīng)》稱鱷魚為鉈魚，主治心腹癥瘕，伏堅積聚，寒熱，女子崩中下血五色，小腹陰中相引痛，疥瘡死肌。唐朝“藥王”孫思邈的《千金要方》里記載鱷甲湯主治“風(fēng)癲”。明朝李時珍的《本草綱目》里記載:鱷魚“主治少呼吸，足不立地，濕氣邪氣，諸它腹內(nèi)，癥痞惡瘡?！笨梢婘{魚在治療哮喘、風(fēng)濕類風(fēng)濕、皮膚病、五臟疾病、腫瘤乃至癲癇、老年癡呆癥等多種疾病方面具有極高的藥用價值，是“中醫(yī)瑰寶級”的珍稀動物。鱷魚長壽的秘密的是什么？鱷魚超強的免疫力源自哪里？鱷魚為什么可以治療這么多種疑難病癥？研究鱷魚的生命密碼，讓鱷魚長期服務(wù)于人類健康，成為生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一個重大課題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種增強人體免疫力和抗氧化能力，減少人體自由基的形成，改善心血管疾病的鱷魚血紅蛋白肽的組合物及其制備該組合物的方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的前一技術(shù)方案是這樣的:該鱷魚血紅蛋白肽的組合物，包括下述質(zhì)量百分比的原料:鱷魚血紅蛋白肽I 90%，鱷魚肉蛋白I 50%，輔酶QlOl 50%,各組分之和為100%。優(yōu)選的，所述的鱷魚血紅蛋白肽的組合物，該組合物包括下述質(zhì)量百分比的原料:鱷魚血紅蛋白肽10 80%，鱷魚肉蛋白5 40%，輔酶QlO 5 40%，各組分之和為100%。更優(yōu)的，所述的鱷魚血紅蛋白肽的組合物，該組合物包括下述質(zhì)量百分比的原料:鱷魚血紅蛋白肽25 65%，鱷魚肉蛋白10 30%，輔酶QlO 10 30，各組分之和為100%。進一步的，所述的鱷魚血紅蛋白肽的組合物，該組合物還包括下述質(zhì)量百分比的原料:5-10%麥芽糊精；5-10%粘合劑。本發(fā)明提供的后一技術(shù)方案是這樣的:該鱷魚血紅蛋白肽的組合物的制備方法，依次包括下述步驟:稱取鱷魚血紅蛋白肽，鱷魚肉蛋白，輔酶Qio，麥芽糊精和食品粘合劑；2)將步驟I)稱取的鱷魚血紅蛋白肽 和鱷魚肉蛋白多肽通過傳統(tǒng)的噴霧方法制成細(xì)小顆粒，然后和輔酶Qio顆粒混合在一起，充分的攪拌，再添加的麥芽糊精和粘合劑攪拌均勻。
上述的一種鱷魚血紅蛋白肽的組合物的制備方法所述的鱷魚血紅蛋白肽的制備方法依次包括下述步驟:I)血紅蛋白的制備向新鮮鱷魚血加入食用級抗凝劑，充分?jǐn)嚢璨㈦x心分離，將下層血細(xì)胞用生理鹽水洗滌，收集沉淀的血細(xì)胞加入蒸餾水，用超聲波粉碎儀處理，離心去除細(xì)胞膜及雜質(zhì)，得血紅蛋白溶液；2)血紅蛋白的酶解方法取血紅蛋白溶液，用NaOH溶液調(diào)至反pH值6.5-7.5，加入蛋白酶反應(yīng)過程中用NaOH溶液調(diào)至pH值7.5 ;反應(yīng)結(jié)束后滅酶，終止反應(yīng)，得到水解液；3)水解液的預(yù)處理將滅酶的水解液離心分離，上清液進行脫色、脫苦處理，多次離心得到血紅蛋白水解液；4)血紅蛋白肽的提純將血紅蛋白水解液透析處理，得到分子量小于8000的外透液，將外透液真空冷凍干燥，將血紅蛋白肽樣品配制成5ug/ml濃度的溶液，取適量樣品依次通過離子交換色譜、凝膠過濾色譜、高效液相色譜進行純化，最后得到較純的血紅蛋白肽樣品。進一步的，上述的一種鱷魚血紅蛋白肽的組合物的制備方法，所述的蛋白酶為中性蛋白酶和木瓜蛋白酶。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點:本發(fā)明提供的組合可以增強人體免疫力和抗氧化能力，有效減少·人體自由基的形成，抗擊衰老，同時有效改善心血管疾病、和癌癥。
具體實施方案以下將結(jié)合具體實施方式
，對本發(fā)明的的權(quán)利要求作作進一步詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制，任何人在本發(fā)明權(quán)利要求范圍內(nèi)做所的有限次的修改，仍在本發(fā)明的權(quán)利要求保護范圍內(nèi)。實施例1本發(fā)明的一種鱷魚血紅蛋白肽的組合物，包括下述原料:鱷魚血紅蛋白肽IgJf魚肉蛋白49g，輔酶QlO 50g。實施例2本發(fā)明的一種鱷魚血紅蛋白肽的組合物，包括下述原料:鱷魚血紅蛋白肽90g，鱷魚肉蛋白5g，輔酶QlO 5g。實施例3本發(fā)明的一種鱷魚血紅蛋白肽的組合物，包括下述原料:鱷魚血紅蛋白肽50g，鱷魚肉蛋白20g，輔酶Q1020g，麥芽糊精5g ;粘合劑5g。實施例4本發(fā)明的一種鱷魚血紅蛋白肽的組合物，包括下述原料:鱷魚血紅蛋白肽5g，鱷魚肉蛋白45g，輔酶QlO 30g，麥芽糊精IOg ;粘合劑IOgo實施例5本發(fā)明的一種鱷魚血紅蛋白肽的組合物，包括下述原料:鱷魚血紅蛋白肽20，鱷魚肉蛋白20g，輔酶Q1045g，麥芽糊精5g;粘合劑10g。上述的鱷魚血紅蛋白肽的組合物的制備方法，依次包括下述步驟:I)按實施例1至5中任一種稱取鱷魚血紅蛋白肽，鱷魚肉蛋白，輔酶Q10，麥芽糊精和粘合劑；2)將步驟I)稱取的鱷魚血紅蛋白肽和鱷魚肉蛋白多肽通過傳統(tǒng)的噴霧方法制成細(xì)小顆粒，然后和輔酶QlO顆?；旌显谝黄?，充分的攪拌，再添加的麥芽糊精和粘合劑攪拌均勻鱷魚血紅蛋白肽的制備方法:鱷魚生活在沼澤地帶，它們十分兇殘，并且經(jīng)常撕咬到傷痕累累，可是它們的傷口從不感染細(xì)菌。鱷魚的血液中一定有某種物質(zhì)可以抗擊細(xì)菌，甚至病毒。在抗生素濫用，細(xì)菌對抗生素迅速產(chǎn)生耐藥性的今天，研究鱷魚血具有廣泛的現(xiàn)實意義。近年來，研究發(fā)現(xiàn)，蛋白質(zhì)經(jīng)消化道酶促水解后主要以小肽的形式吸收，比完全游離氨基酸更易、更快被 機體吸收利用:這是肽研究理論和實踐的重大突破。酶水解血液可以制備游離氨基酸和功能肽，功能肽在促進免疫細(xì)胞增生、抗腫瘤、抗氧化、增強機體免疫力等方面有一定的功效。本發(fā)明采用雙酶水解鱷魚血紅蛋白，通過正交實驗，確定酶水解最優(yōu)條件，并對水解液進行預(yù)處理，通過粗提、純化等步驟得到血紅蛋白肽樣品。I材料與方法1.1原料與試劑鱷魚血:由廣西欽州華宏特種水產(chǎn)養(yǎng)殖開發(fā)有限公司吳川分公司提供的新鮮、檢疫合格的鱷魚血；酶制劑:均為食品級，廣西南寧龐博生物工程有限公司；Sephadex G-50:上海君創(chuàng)生物科技有限公司；DEAE-32:上海君創(chuàng)生物科技有限公司；其它試劑均為分析純。1.2儀器設(shè)備精密pH計、分析天平、高速離心機、超聲波粉碎儀、高效液相色譜儀等。1.3實驗方法1.3.1 總氮測定方法:微量凱氏定氛法(TN)。1.3.2 酶活測定=Folin-酚法。1.3.3 水解度(DH)測定:甲醛滴定法測定氨基氮含量(AN)，按此式計算:DH=AN/TNX100%1.3.4血紅蛋白的制備:新鮮鱷魚血加入適量食用級抗凝劑，抗凝劑加入體積約為鱷魚血體積的1/10，充分?jǐn)嚢璨㈦x心分離，將下層血細(xì)胞用生理鹽水洗滌，收集沉淀的血細(xì)胞加入適量蒸餾水，使血細(xì)胞的濃度為4-7mu/ml，在用超聲波粉碎儀處理，離心去除細(xì)胞膜及雜質(zhì)，得血紅蛋白溶液。1.3.5血紅蛋白的酶解方法量取一定體積的血紅蛋白溶液，用NaOH溶液調(diào)至反應(yīng)所需的pH值，依照所用酶的活力單位加入蛋白酶，反應(yīng)過程中用NaOH溶液調(diào)至最適pH值。反應(yīng)結(jié)束后滅酶,終止反應(yīng)。1.3.6水解液的預(yù)處理
將滅酶的水解液離心分離，上清液進行脫色、脫苦處理，多次離心得到血紅蛋白水解液。1.3.7血紅蛋白肽的提純將水解蛋白液透析處理，得到分子量小于8000的外透液，將外透液真空冷凍干燥。將血紅蛋白肽樣品配制成一定濃度的溶液，取適量樣品依次通過離子交換色譜、凝膠過濾色譜、高效液相色譜進行純化，最后得到較純的血紅蛋白肽樣品。2 結(jié)果與討論2.1兩種蛋白酶的最佳作用條件經(jīng)反復(fù)試驗，從6種常用的商品蛋白酶進行篩選，初步篩選出了中性蛋白酶和木瓜蛋白酶。中性蛋白酶作用的肽鍵具有廣泛的專一性；木瓜蛋白酶為內(nèi)肽酶，它專門作用于肽鏈內(nèi)部的肽鍵，能將舒展開的蛋白質(zhì)肽鏈切成較長的肽段，使水溶性固形物增多且水解顏色較好。由于同種蛋白酶對不同的底物具有不同的最適作用條件，以水解度(DH)為指標(biāo)，通過正交實驗確定了兩種蛋白酶的最佳作用條件，結(jié)果見表I。表I中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的最佳作用條件
權(quán)利要求
1.一種鱷魚血紅蛋白肽的組合物，其特征在于，該組合包括下述質(zhì)量百分比的原料:鱷魚血紅蛋白肽I 90%，鱷魚肉蛋白I 50%，輔酶QlOl 50%，各組分之和為100%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鱷魚血紅蛋白肽的組合物，其特征在于，該組合物包括下述質(zhì)量百分比的原料:鱷魚血紅蛋白肽10 80%，鱷魚肉蛋白5 40%，輔酶QlO 5 40%，各組分之和為100%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鱷魚血紅蛋白肽的組合物，其特征在于，該組合物包括下述質(zhì)量百分比的原料:鱷魚血紅蛋白肽25 65%，鱷魚肉蛋白10 30%，輔酶QlO 10 30，各組分之和為100%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一所述的鱷魚血紅蛋白肽的組合物，其特征在于，該組合物還包括下述質(zhì)量百分比5-10%的麥芽糊精，5-10%的食品粘合劑。
5.權(quán)利要求4所述的一種鱷魚血紅蛋白肽的組合物的制備方法，其特征在于，依次包括下述步驟: 1)按權(quán)利要求4所述的的百分比稱取鱷魚血紅蛋白肽，鱷魚肉蛋白，輔酶Q10，麥芽糊精和食品粘合劑； 2)將步驟I)稱取的鱷魚血紅蛋白肽和鱷魚肉蛋白多肽通過傳統(tǒng)的噴霧方法制成細(xì)小顆粒，然后和輔酶QlO顆?；旌显谝黄?，充分的攪拌，再添加的麥芽糊精和粘合劑攪拌均勻。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種鱷魚血紅蛋白肽的組合物的制備方法，其特征在于，所述的鱷魚血紅蛋白肽的制備方法依次包括下述步驟: 1)血紅蛋白的制備 向新鮮鱷魚血加入食用級抗凝劑，充分?jǐn)嚢璨㈦x心分離，將下層血細(xì)胞用生理鹽水洗滌，收集沉淀的血細(xì)胞加入蒸餾水，用超聲波粉碎儀處理，離心去除細(xì)胞膜及雜質(zhì)，得血紅蛋白溶液； 2)血紅蛋白的酶解方法 取血紅蛋白溶液，用NaOH溶液調(diào)至反pH值6.5-7.5，加入蛋白酶反應(yīng)過程中用NaOH溶液調(diào)至pH值7.5 ;反應(yīng)結(jié)束后滅酶,終止反應(yīng),得到水解液； 3)水解液的預(yù)處理 將滅酶的水解液離心分離，上清液進行脫色、脫苦處理，多次離心得到血紅蛋白水解液； 4)血紅蛋白肽的提純 將血紅蛋白水解液透析處理，得到分子量小于8000的外透液，將外透液真空冷凍干燥，將血紅蛋白肽樣品配制成5ug/ml濃度的溶液，取適量樣品依次通過離子交換色譜、凝膠過濾色譜、高效液相色譜進行純化，最后得到較純的血紅蛋白肽樣品。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種鱷魚血紅蛋白肽的組合物的制備方法，其特征在于，所述的蛋白酶為中性蛋白酶和木瓜蛋白酶。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種鱷魚血紅蛋白肽的組合物及其制備方法，旨在提供一種增強人體免疫力和抗氧化能力，減少人體自由基的形成，改善心血管疾病的鱷魚血紅蛋白肽的組合物；其技術(shù)要點是該組合包括下述質(zhì)量百分比的原料鱷魚血紅蛋白肽1-90%，鱷魚肉蛋白1-50%，輔酶Q10 1-50%，各組分之和為100%；制備方法是1)稱取鱷魚血紅蛋白肽，鱷魚肉蛋白，輔酶Q10，麥芽糊精和粘合劑；2)將步驟1)稱取的鱷魚血紅蛋白肽和鱷魚肉蛋白多肽通過傳統(tǒng)的噴霧方法制成細(xì)小顆粒，然后和輔酶Q10顆?；旌显谝黄?，充分的攪拌，再添加的麥芽糊精和粘合劑；屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
文檔編號A61P9/00GK103230587SQ20131017367
公開日2013年8月7日 申請日期2013年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月10日
發(fā)明者汪華東 申請人:汪華東