一種快速檢測糖化血紅蛋白的試紙條的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種快速定量檢測血液中糖化血紅蛋白的試紙條，采用本試紙條，僅需1ul末梢全血或靜脈全血就可以測試血液中糖化血紅蛋白含量，樣本無需任何處理，操作簡單，方便測試。
【背景技術(shù)】
[0002]糖化血紅蛋白作為反映長期血糖水平的金標(biāo)準(zhǔn)，可以反映最近2?3個月的平均血糖水平。2002年美國糖尿病協(xié)會已明確規(guī)定應(yīng)定期檢測糖化血紅蛋白，將其作為監(jiān)測糖尿病血糖控制的金標(biāo)準(zhǔn)。目前檢測糖化血紅蛋白的方法主要分為兩大類:一類是基于糖化血紅蛋白和血紅蛋白的電荷不同，如離子交換層析法、HPLC法、毛細(xì)管電泳法；另一類是基于血紅蛋白上糖化基團(tuán)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，如親和層析法、免疫法和酶法等。如硼酸親和層析法，是通過游離的硼酸基團(tuán)與血紅蛋白的順位二醇基結(jié)合，從而達(dá)到分離糖化血紅蛋白和血紅蛋白的目的。該方法不受大部分血紅蛋白變異體和降解產(chǎn)物的干擾，目前在臨床上得到廣泛的應(yīng)用。但是該類方法采用間-氨基苯硼酸瓊脂糖層析柱，操作比較復(fù)雜，洗脫時間較長。因此，臨床上急需尋求一種操作簡單、測試時間短的糖化血紅蛋白檢測方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于，針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種快速定量檢測末梢全血或者靜脈全血中糖化血紅蛋白的試紙條，采用硼酸親和層析試紙條技術(shù)，只需要微量的全血樣本，可快速檢測糖化血紅蛋白的含量，具有操作簡單、檢測快速和方便測試的優(yōu)點(diǎn)。
[0004]為達(dá)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種快速檢測糖化血紅蛋白的試紙條，該試紙條是取等長的樣品墊、基板、反應(yīng)膜及吸水紙，且樣品墊的寬比基板寬2mm，反應(yīng)膜寬為10mm，該基板上均勻分布有孔，孔徑為3mm;將基板置于反應(yīng)膜一側(cè)，且基板的寬方向與反應(yīng)膜對齊;再將樣品墊粘貼重疊在基板上，并使樣品墊與反應(yīng)膜的一側(cè)重疊2mm;然后將吸水紙對應(yīng)粘貼在反應(yīng)膜的另一側(cè)，并與反應(yīng)膜重疊3mm，再依基板的長方向裁切成數(shù)條6mm長的試條，以使每一試條的基板上具有一孔，即得。
[0005]其中，上述樣品墊為醋酸纖維素膜。
[000?]上述基板由厚度為0.35mm的聚酯薄膜制成；較佳的，所述聚酯薄膜由聚對苯二甲酸乙二酯、聚氯乙烯或聚乙烯制成。
[0007]上述反應(yīng)膜是取反應(yīng)膜材料，將其浸泡在體積比為1-6:1的濃硫酸和濃硝酸的混合溶液中，于40-80°C處理0.5-4h;取出反應(yīng)膜材料浸泡于純化水中，并調(diào)節(jié)pH值為6.5;取出反應(yīng)膜材料，置于含有5mM的EDC和5mM的NHS的混合溶液1mL中反應(yīng)0.5h，再加入5-40mM的氨基苯硼酸，反應(yīng)0.5-2h，以將硼酸基團(tuán)修飾至反應(yīng)膜材料表面;取出反應(yīng)膜材料，然后浸泡于含有純化水和5-40mM甘氨酸或牛血清蛋白的溶液中進(jìn)行封閉；取出反應(yīng)膜材料烘干，即得。該反應(yīng)膜材料為硝酸纖維素膜、尼龍膜、羧化纖維素膜或純纖維素膜中的一種。較佳的，所述反應(yīng)膜材料為聚丙烯纖維素膜或聚乙烯纖維膜。
[0008]上述吸水紙為市購產(chǎn)品。
[0009]檢測時，只需將1ul末梢全血或靜脈全血滴于反應(yīng)膜上，先加入溶血劑，再加入洗脫液，通過測定450nm的光反射強(qiáng)度，即可測定糖化血紅蛋白的百分比含量。其中，上述溶血劑和洗脫液為血液檢測時使用的常規(guī)試劑，具體地，該溶血劑由濃度為0.1M的磷酸緩沖液(pH=7.4)和0.1%的非離子表面活性劑Triton X-100組成；該洗脫液為pH值為8.4的山梨糖醇緩沖液。
[0010]本發(fā)明的檢測糖化血紅蛋白的試紙條，僅需1ul末梢全血或靜脈全血就可以測試血液中糖化血紅蛋白含量，樣本無需任何處理，操作簡單，方便測試，且試紙條制備方法簡單，易于大規(guī)模生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0011]圖1是本發(fā)明基板示意圖。
[0012]圖2是本發(fā)明糖化血紅蛋白試紙條的示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0013]本發(fā)明是一種利用硼酸親和層析的方法檢測末梢全血或者靜脈全血中糖化血紅蛋白的試紙條，利用溶血劑對紅細(xì)胞破解后測定血紅蛋白的含量，同時通過洗脫液將糖化血紅蛋白進(jìn)行層析，使糖化血紅蛋白固定在反應(yīng)膜表面，從而達(dá)到分離血紅蛋白和糖化血紅蛋白的目的，通過測定450nm的光反射強(qiáng)度，即可測定糖化血紅蛋白的百分比含量。
[0014]本發(fā)明提及的糖化血紅蛋白試紙條制備過程如下，結(jié)合參見圖2:
1.取醋酸纖維素膜，裁切成長為240mm、寬為9mm，作為樣品墊201;
2.取厚度為0.35mm的聚酯薄膜，將聚酯薄膜裁切成長為240_、寬為7_，并對聚酯薄膜進(jìn)行沖孔，以作為基板202;結(jié)合參見圖1，基板202上均勻分布有孔2021，孔徑為3mm;該聚酯薄膜選自聚對苯二甲酸乙二酯(PET)、聚氯乙烯或聚乙烯；
3.取反應(yīng)膜材料，將其浸泡在體積比為1-6:1的濃硫酸和濃硝酸的混合溶液中于40-80°C處理0.5-4h;取出反應(yīng)膜材料，浸泡于純化水中，并加入強(qiáng)堿氫氧化鈉溶液將pH值調(diào)整至6.5，去除溶液，加入含有5mM的EDC和5mM的NHS的混合溶液1mL，反應(yīng)0.5h，再加入5_40mM的氨基苯硼酸，反應(yīng)0.5-2h，將硼酸基團(tuán)修飾至反應(yīng)膜材料表面，取出反應(yīng)膜材料，然后浸泡于含有純化水和5-40mM甘氨酸/牛血清蛋白的溶液中進(jìn)行封閉，取出反應(yīng)膜材料，烘干，裁切成長為240mm、寬為10mm，以作為反應(yīng)膜203。該反應(yīng)膜材料為硝酸纖維素膜、尼龍膜、羧化纖維素膜或純纖維素膜中的一種，優(yōu)選聚丙烯纖維素膜或聚乙烯纖維膜；
4.取市購吸水紙裁切成長為240mm、寬7mm，以作為吸水紙204;
5.將基板202置于反應(yīng)膜203—側(cè)，且基板的寬方向與反應(yīng)膜對齊;再將樣品墊201粘貼重疊在基板202上，并使樣品墊201與反應(yīng)膜203的一側(cè)重疊2mm;然后將吸水紙204對應(yīng)粘貼在反應(yīng)膜203的另一側(cè)，并與反應(yīng)膜重疊3_。將組裝好的材料依基板的長方向裁切成數(shù)條6mm長的試條(如圖2中箭頭所指的虛線，即為一裁切線)，以使每一試條的基板202上具有一孔2021，以制作成檢測糖化血化蛋白的試紙條。
[0015]使用時，取其中任一試條，滴1ul末梢全血或靜脈全血于反應(yīng)膜上，依次加入溶血劑和洗脫液即可。
[0016]實(shí)施例1
取醋酸纖維素膜，裁切成長為240mm、寬為9mm，作為樣品墊201;取厚度