胰高血糖素/GLP-1受體協(xié)同激動(dòng)劑相關(guān)申請的交叉引用本申請要求于2011年6月22日提交的美國臨時(shí)申請第61/500,027號及于2011年10月14日提交的美國臨時(shí)申請第61/547,360號的優(yōu)先權(quán)，所述申請各自以整體援引方式并入本文。以引用方式并入的電子提交的材料以整體援引方式并入的是與本文同時(shí)提交的計(jì)算機(jī)可讀核苷酸/氨基酸序列，并且其標(biāo)識如下：15千字節(jié)ACII(文本)檔案，名稱為“07012KL_PCT_Sequence_Listing.txt”，于2012年5月25日創(chuàng)建。
背景技術(shù)：
：前胰高血糖素原為158個(gè)氨基酸的前體多肽，其在不同組織中經(jīng)加工形成多種不同胰高血糖素原衍生的肽，包括胰高血糖素、胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)、胰高血糖素樣肽-2(GLP-2)以及調(diào)酸素(oxyntomodulin；OXM)，這些肽參與廣泛多種生理功能，包括葡萄糖內(nèi)穩(wěn)態(tài)、胰島素分泌、胃排空和腸生長以及調(diào)節(jié)食物攝取。胰高血糖素為與前胰高血糖素原的氨基酸33至61相對應(yīng)的29個(gè)氨基酸肽，而GLP-1產(chǎn)生為與前胰高血糖素原的氨基酸72至108相對應(yīng)的37個(gè)氨基酸肽。GLP-1(7-36)酰胺或GLP-1(7-37)酸為GLP-1的生物有效形式，其對GLP-1受體顯示出基本相等的活性。在低血糖癥期間，當(dāng)血糖含量下降至低于正常值時(shí)，胰高血糖素通知肝臟分解糖原并釋放葡萄糖，從而使血糖含量向正常水平上升。低血糖癥為患有由糖尿病導(dǎo)致的高血糖癥(血糖水平升高)的患者中胰島素療法的常見副作用。因此，葡萄糖調(diào)節(jié)中胰高血糖素的最公認(rèn)的作用為對抗胰島素的作用并維持血糖水平。GLP-1與胰高血糖素相比具有不同的生物活性。其作用包括刺激胰島素合成及分泌、抑制胰高血糖素分泌及抑制食物攝取。GLP-1已顯示降低糖尿病患者的高血糖。Exendin-4，即來自蜥蜴毒液的與GLP-1共享約50％氨基酸一致性的肽，活化GLP-1受體并同樣顯示降低糖尿病患者的高血糖。還有以下證據(jù)，即GLP-1和Exendin-4可減少食物攝取并促進(jìn)體重減輕，此作用將不僅有益于糖尿病患者而且亦有益于罹患肥胖癥的患者?；加蟹逝职Y的患者具有較高的糖尿病、高血壓、高脂血癥、心血管疾病及肌肉骨骼疾病的風(fēng)險(xiǎn)。發(fā)明概述本公開提供了對胰高血糖素受體顯示活性、對GLP-1受體顯示活性或?qū)σ雀哐撬厥荏w和GLP-1受體各自均顯示活性的肽和變體肽。在示例性實(shí)施方案中，本本所公開的肽和變體肽與天然胰高血糖素相比，對GLP-1受體顯示增強(qiáng)的活性。在示例性方面中，肽和變體肽相對于GIP受體，對人類GLP-1受體顯示至少100倍的選擇性。本公開進(jìn)一步提供了包含與異源部分結(jié)合的本文所述的任何肽和變體肽的結(jié)合物。在示例性方面中，異源部分為肽或蛋白質(zhì)且結(jié)合物為融合肽或嵌合肽。在示例性方面中，異源部分為聚合物，例如聚乙二醇。本公開此外提供了包含本文所述的任何肽和變體肽的二聚物和多聚物。另外，本公開提供了包含本文所述的任何肽和變體肽以及藥學(xué)可接受的載劑的藥物組合物，以及治療或預(yù)防患者的疾病或醫(yī)學(xué)病況(例如代謝綜合征、糖尿病、肥胖癥、肝脂肪變性、神經(jīng)退化性疾病、低血糖癥)的方法。該方法包括向患者以有效治療疾病或醫(yī)學(xué)病況的量給予任選調(diào)配為藥物組合物的本文所公開的肽或變體肽。附圖簡述圖1示出用載體對照或一定劑量的SEQIDNO:12,17,18或19的肽處理的DIO小鼠的累積體重變化(克)的圖，如實(shí)例7中所詳述的。圖2示出用載體對照或一定劑量的SEQIDNO:12,17,18或19的肽處理的DIO小鼠的基礎(chǔ)葡萄糖(mg/dl)的圖，如實(shí)例7中所詳述的。圖3A示出用載體對照、利拉魯肽(Liraglutide；Lira)或一定劑量的SEQIDNO:17或20的肽處理的肥胖獼猴的累積體重變化(％)的圖，如實(shí)例8中所詳述的。圖3B示出用載體對照、利拉魯肽或一定劑量的SEQIDNO:17或20的肽處理的肥胖獼猴的累積食物攝取(表示為第0天食物攝取的百分比)的圖，如實(shí)例8中所詳述的。圖4示出用載體對照或一定劑量的SEQIDNO:17的肽處理的糖尿病獼猴的血糖含量(mg/dL)的圖，如實(shí)例9中所詳述的。發(fā)明詳述定義如本文所用，術(shù)語“約”意指比所述值或值的范圍大或小10％，但不旨在將任何值或值的范圍僅指定為這種較寬泛的定義。之前有術(shù)語“約”的各值或值的范圍也旨在涵蓋所述絕對值或值的范圍的實(shí)施方案。如本文所用，術(shù)語“藥學(xué)可接受的載劑”包括任何標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)藥載劑，諸如磷酸鹽緩沖生理鹽水溶液、水、乳液(諸如油/水或水/油乳液)及各種類型的濕潤劑。該術(shù)語也涵蓋由美國聯(lián)邦政府管理機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)或美國藥典(USPharmacopeia)中所列的用于動(dòng)物(包括人類)的任何藥劑。如本文所用，術(shù)語“藥學(xué)可接受的鹽”是指化合物的保留母體化合物的生物活性且在生物學(xué)上或其他方面并無不妥之處的鹽。本文所公開的許多化合物通過存在氨基和/或羧基或與其類似的基團(tuán)而能夠形成酸和/或堿鹽。藥學(xué)可接受的堿加成鹽可由無機(jī)和有機(jī)堿制備。僅舉例而言，衍生自無機(jī)堿的鹽包括鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽、鈣鹽以及鎂鹽。衍生自有機(jī)堿的鹽包括(但不限于)伯胺、仲胺以及叔胺的鹽。如本文所用，術(shù)語“治療”包括預(yù)防特定病癥或病況，或減輕與特定病癥或病況相關(guān)的癥狀和/或預(yù)防或消除所述癥狀。舉例而言，如本文所用，術(shù)語“治療糖尿病”一般會(huì)指朝正常水平的方向改變葡萄糖血液水平，并且根據(jù)所給定的情形，可包括增加或減少血糖水平。如本文所用，胰高血糖素肽的“有效”量或“治療有效量”是指肽的無毒但足以提供所需作用的量。舉例而言，一種所需作用將為預(yù)防或治療高血糖癥(例如，如通過血糖水平更接近正常水平的變化而測量的)，或誘發(fā)體重減輕/預(yù)防體重增加(例如，如通過體重降低而測量的)，或預(yù)防或減少體重的增加，或使身體脂肪分布標(biāo)準(zhǔn)化?！坝行А钡牧繉⒏鶕?jù)個(gè)體的年齡和一般狀況、給藥模式等而在個(gè)體與個(gè)體之間變化。因此，并不總是可指定精確“有效量”。然而，任何個(gè)別情況的適當(dāng)“有效”量可由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定。術(shù)語“胃腸外”意指不通過消化道，而是通過一些其他途徑，例如皮下、肌肉內(nèi)、脊柱內(nèi)或靜脈內(nèi)。如本文所用，術(shù)語“肽”涵蓋3個(gè)以上氨基酸且通常少于100個(gè)氨基酸的鏈，其中所述氨基酸為天然存在的或編碼的或非天然存在的或非編碼的氨基酸。非天然存在的氨基酸是指在體內(nèi)不天然存在而可并入本文所述的肽結(jié)構(gòu)中的氨基酸。如本文所用，“非編碼”是指不為任何以下20種氨基酸的L-異構(gòu)體的氨基酸：Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp、Tyr。如本文所用，“編碼”是指為任何以下20種氨基酸的L-異構(gòu)體的氨基酸：Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp、Tyr。在一些實(shí)施方案中，本文所述的肽和變體肽與SEQIDNO:1(其長29個(gè)氨基酸)具有大致相同的長度，例如長25-35個(gè)氨基酸。示例性長度包括長29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50個(gè)氨基酸。通常，多肽和蛋白具有大于“肽”的長度的聚合物長度。在本申請通篇中，所有通過數(shù)字而對特定氨基酸位置的提及(例如位置28)是指天然胰高血糖素(SEQIDNO:1)中該位置上或其任何類似物中相應(yīng)氨基酸位置上的氨基酸。舉例而言，本文提及“位置28”將意指SEQIDNO:1的第一氨基酸已刪除的胰高血糖素類似物的相應(yīng)位置27。類似地，本文提及“位置28”將意指SEQIDNO:1的N端之前添加了一個(gè)氨基酸的胰高血糖素類似物的相應(yīng)位置29。如本文所用，“氨基酸修飾”是指(i)SEQIDNO:1的氨基酸取代或置換為不同氨基酸(天然存在的或編碼的或非編碼的或非天然存在的氨基酸)，(ii)添加氨基酸(天然存在的或編碼的或非編碼的或非天然存在的氨基酸)至SEQIDNO:1，或(iii)刪除SEQIDNO:1的一或多個(gè)氨基酸。關(guān)于兩個(gè)氨基酸序列的“一致性百分比”是指當(dāng)將兩個(gè)序列對準(zhǔn)以達(dá)成最大對應(yīng)性(例如可引入空隙以用于最佳對準(zhǔn))時(shí)，第一序列的匹配(一致于)第二參考序列中的氨基酸的氨基酸數(shù)目除以參考序列的長度。氨基酸“修飾”是指插入、刪除一個(gè)氨基酸或一個(gè)氨基酸取代為另一氨基酸。在一些實(shí)施方案中，氨基酸取代或置換為保守性氨基酸取代，例如位置2、5、7、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21、24、27、28或29中一個(gè)或多個(gè)氨基酸的保守性取代。如本文所用，術(shù)語“保守性氨基酸取代”為將一個(gè)氨基酸置換為另一具有類似性質(zhì)(例如尺寸、電荷、疏水性、親水性和/或芳香性)的氨基酸，并且包括在以下五組之一內(nèi)的交換：I.小脂族、非極性或稍帶極性殘基：Ala、Ser、Thr、Pro、Gly；II.極性、帶負(fù)電殘基及其酰胺及酯：Asp、Asn、Glu、Gln、磺基丙氨酸及高磺基丙氨酸；III.極性、帶正電殘基：His、Arg、Lys；鳥氨酸(Orn)IV.大的、脂族、非極性殘基：Met、Leu、Ile、Val、Cys、正亮氨酸(Nle)、高半胱氨酸V.大的、芳族殘基：Phe、Tyr、Trp、乙酰苯丙氨酸在一些實(shí)施方案中，氨基酸取代不為保守性氨基酸取代，例如為非保守性氨基酸取代。如本文所用，術(shù)語“帶電氨基酸”或“帶電殘基”是指包含在生理pH值下于水溶液中帶負(fù)電荷(即去質(zhì)子化)或帶正電荷(即質(zhì)子化)的側(cè)鏈的氨基酸。舉例而言，帶負(fù)電氨基酸包括天冬氨酸、谷氨酸、磺基丙氨酸、高磺基丙氨酸以及高谷氨酸，而帶正電氨基酸包括精氨酸、賴氨酸以及組氨酸。帶電氨基酸包括20種編碼氨基酸中的帶電氨基酸以及非典型或非天然存在或非編碼的氨基酸。如本文所用，術(shù)語“酸性氨基酸”是指包含第二酸性部分(除氨基酸的羧酸以外，包括例如羧酸或磺酸基)的氨基酸。如本文所用，術(shù)語“?；被帷笔侵概c?；漠a(chǎn)生方式無關(guān)(例如氨基酸并入肽之前酰化或并入肽之后?；?，包含對于天然存在氨基酸而言為非原生的?；陌被帷Ｈ绫疚乃?，術(shù)語“烷基化氨基酸”是指與烷基的產(chǎn)生方式無關(guān)，包含對于天然存在氨基酸而言為非原生的烷基的氨基酸。因此，本公開的酰化氨基酸及烷基化氨基酸為非編碼氨基酸。如本文所用，術(shù)語分子相對于第二受體、對第一受體的“選擇性”是指以下比率：分子于第二受體的EC50除以分子于第一受體的EC50。舉例而言，于第一受體具有1nM的EC50且于第二受體具有100nM的EC50的分子具有相對于第二受體、對第一受體100倍的選擇性。如本文所用，術(shù)語“天然胰高血糖素”是指由SEQIDNO:1的序列組成的肽，且術(shù)語“天然GLP-1”為表示GLP-1(7-36)酰胺、GLP-1(7-37)酸或那兩種化合物的混合物的通用術(shù)語。如本文所用，分子的“胰高血糖素效力”或“與天然胰高血糖素相比的效力”是指分子對胰高血糖素受體的EC50除以天然胰高血糖素對胰高血糖素受體的EC50的反比。如本文所用，分子的“GLP-1效力”或“與天然GLP-1相比的效力”是指分子對GLP-1受體的EC50除以天然GLP-1對GLP-1受體的EC50的反比。實(shí)施方案本公開提供了對GLP-1受體、對胰高血糖素受體或?qū)LP-1受體和胰高血糖素受體兩者顯示活性的肽和變體肽。對此，本公開提供GLP-1受體激動(dòng)劑肽、胰高血糖素受體激動(dòng)劑肽及GLP-1/胰高血糖素協(xié)同激動(dòng)劑肽。在示例性實(shí)施方案中，本文公開的肽和變體肽與天然人類胰高血糖素(SEQIDNO:1)相比，對GLP-1受體顯示增強(qiáng)的活性或較高的效力。在示例性實(shí)施方案中，本公開的肽和變體肽與天然人類GLP-1(SEQIDNO:2)或其活性形式(SEQIDNO:5和6)之一相比，對GLP-1受體顯示較高的效力。在示例性實(shí)施方案中，肽和變體肽與天然人類GLP-1相比，對胰高血糖素受體顯示較高的效力。在示例性實(shí)施方案中，肽和變體肽與天然人類胰高血糖素相比，對胰高血糖素受體顯示較高的效力。在示例性實(shí)施方案中，本文所述的肽和變體肽相對于天然胰高血糖素或天然GLP-1顯示其他性質(zhì)的改良，諸如較高的穩(wěn)定性、較高的溶解度、延長的循環(huán)半衰期、延遲的作用起始、延長的作用持續(xù)時(shí)間、減幅的峰值(例如相對降低的平均峰值血漿濃度)以及提高的對蛋白酶(諸如DPP-IV)的抗性。本文所述的肽和變體肽是基于天然人類胰高血糖素的氨基酸序列(SEQIDNO:1)，并且在本文中描述為“肽”、“變體肽”、“胰高血糖素類似物”、“類似物”或“胰高血糖素肽”。應(yīng)了解，諸如“類似物”或“變體”或“修飾”的術(shù)語涵蓋從頭合成的肽或蛋白質(zhì)，并且不需要執(zhí)行任何特定修飾步驟。在一些方面中，本文所述的肽或變體肽包括相對于SEQIDNO:1包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15個(gè)氨基酸修飾、且在一些情況下包含16個(gè)以上(例如17、18、19、20、21、22、23、24、25、26個(gè))氨基酸修飾的經(jīng)修飾SEQIDNO:1氨基酸序列，如本文進(jìn)一步所述。因此，胰高血糖素類似物和/或胰高血糖素肽的以下描述適于本文公開的任何肽和變體肽，而與天然人類胰高血糖素(SEQIDNO:1)與本公開的肽或變體肽之間的相似度無關(guān)。預(yù)期本文所述的任何肽序列可通過并入另外氨基酸修飾；例如通過在例如本文所述的位置包括本文所述的任何修飾，或通過并入保守性取代，或通過在該位置恢復(fù)成天然胰高血糖素氨基酸(參見SEQIDNO:1)而進(jìn)一步變化。在示例性實(shí)施方案中，修飾包括例如?；?，烷基化，聚乙二醇化，C端截短，位置1、2、3、7、10、12、15、16、17、18、19、20、21、23、24、27、28和29中一個(gè)或多個(gè)位置的氨基酸的取代。舉例而言，在本文公開的任何肽序列出于聚乙二醇化目的而包括Cys的情況下，變體肽可將不同氨基酸用于聚乙二醇化。作為另一實(shí)例，變體肽可在不同位置聚乙二醇化(例如將現(xiàn)有Cys置換為不同氨基酸、在預(yù)定聚乙二醇化位置插入新的Cys且使新的Cys聚乙二醇化)。作為另一實(shí)例，在本文公開的任何肽序列出于?；康亩↙ys的情況下，可使Lys移動(dòng)至不同位置且使新位置?；Ｔ诒疚乃龅娜魏螌?shí)施方案中，變體肽可與母體肽在母體肽長度上或母體肽的氨基酸1-29上為例如80％、85％、90％或95％一致的(例如相比于母體肽，可并入1、2、3、4或5個(gè)額外修飾)。還涵蓋了本文公開的任何肽序列的結(jié)合物、融合蛋白及多聚物。肽和變體肽的活性對胰高血糖素受體的激動(dòng)劑活性在示例性實(shí)施方案中，本公開的肽和變體肽對胰高血糖素受體顯示約1000μM以下(例如約750μM以下、約500μM以下、約250μM以下、約100μM以下、約75μM以下、約50μM以下、約25μM以下、約10μM以下、約5μM以下或者約1μM以下)的EC50。在示例性實(shí)施方案中，肽和變體肽對于胰高血糖素受體活化顯示在納摩濃度范圍內(nèi)的EC50。舉例而言，本文公開的肽和變體肽對胰高血糖素受體顯示約1000nM以下(例如約750nM以下、約500nM以下、約250nM以下、約100nM以下、約75nM以下、約50nM以下、約25nM以下、約10nM以下、約5nM以下或者約1nM以下)的EC50。在示例性實(shí)施方案中，肽和變體肽對胰高血糖素受體顯示在皮摩濃度范圍內(nèi)的EC50。因此，在示例性方面中，肽和變體肽對于胰高血糖素受體活化顯示約1000pM以下(例如約750pM以下、約500pM以下、約250pM以下、約100pM以下、約75pM以下、約50pM以下、約25pM以下、約10pM以下、約5pM以下或者約1pM以下)的EC50。應(yīng)了解，較低EC50指示于受體的較高活性或效力。在一些實(shí)施方案中，本文所述的胰高血糖素類似物對胰高血糖素受體顯示約0.001pM以上、約0.01pM以上或者約0.1pM以上的EC50。胰高血糖素受體活化(胰高血糖素受體活性)可通過測量過度表達(dá)胰高血糖素受體的HEK293細(xì)胞中的cAMP誘導(dǎo)的體外測試來測量，例如分析與編碼胰高血糖素受體的DNA和實(shí)施例2所述的與cAMP反應(yīng)性組件連接的熒光素酶基因共轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞。在示例性實(shí)施方案中，本文公開的肽和變體肽相對于天然胰高血糖素對胰高血糖素受體顯示約0.001％以上、約0.01％以上、約0.1％以上、約0.5％以上、約1％以上、約5％以上、約10％以上、約20％以上、約30％以上、約40％以上、約50％以上、約60％以上、約75％以上、約100％以上、約125％以上、約150％以上、約175％以上、約200％以上、約250％以上、約300％以上、約350％以上、約400％以上、約450％以上或者約500％或更高的活性(胰高血糖素效力)。在一些實(shí)施方案中，本文所述的肽和變體肽相對于天然胰高血糖素對胰高血糖素受體顯示約5000％以下或者約10,000％以下的活性。胰高血糖素類似物于受體(相對于該受體的天然配位體)的活性計(jì)算為胰高血糖素類似物相對于天然配位體的EC50的反比。在一些實(shí)施方案中，肽和變體肽僅對胰高血糖素受體顯示顯著活性(效力)且對GLP-1受體顯示極小活性至無活性。因此，在一些實(shí)施方案中，肽和變體肽被視為“純胰高血糖素受體激動(dòng)劑”或不被視為“胰高血糖素/GLP-1受體協(xié)同激動(dòng)劑”。在一些實(shí)施方案中，這些肽和變體肽對胰高血糖素受體顯示本文所述的任何水平的活性或效力，但對GLP-1受體具有顯著較低的活性(效力)。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物對GLP-1受體顯示與對胰高血糖素受體的EC50相比100倍以上的EC50。對GLP-1受體的激動(dòng)劑活性在示例性實(shí)施方案中，肽和變體肽對于GLP-1受體活化顯示約1000μM以下(例如約750μM以下、約500μM以下、約250μM以下、約100μM以下、約75μM以下、約50μM以下、約25μM以下、約10μM以下、約5μM以下或者約1μM以下)的EC50。在示例性實(shí)施方案中，肽和變體肽對GLP-1受體顯示約1000nM以下(例如約750nM以下、約500nM以下、約250nM以下、約100nM以下、約75nM以下、約50nM以下、約25nM以下、約10nM以下、約5nM以下或者約1nM以下)的EC50。在示例性實(shí)施方案中，肽和變體肽對GLP-1受體具有在皮摩濃度范圍內(nèi)的EC50。因此，在一些實(shí)施方案中，肽和變體肽對于GLP-1受體活化顯示約1000pM以下(例如約750pM以下、約500pM以下、約250pM以下、約100pM以下、約75pM以下、約50pM以下、約25pM以下、約10pM以下、約5pM以下或者約1pM以下)的EC50。應(yīng)理解，較低的EC50指示于受體的較高的活性或效力。在示例性實(shí)施方案中，本文所述的肽和變體肽對GLP-1受體顯示約0.001pM以上、約0.01pM以上或者約0.1pM以上的EC50。GLP-1受體活化(GLP-1受體活性)可以通過測量過度表達(dá)GLP-1受體的HEK293細(xì)胞中的cAMP誘導(dǎo)的體外測試來測量，例如分析與編碼GLP-1受體的DNA及實(shí)例2所述的與cAMP反應(yīng)性組件連接的熒光素酶基因共轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，本公開的肽和變體肽相對于天然GLP-1，對GLP-1受體顯示約0.001％以上、約0.01％以上、約0.1％以上、約0.5％以上、約1％以上、約5％以上、約10％以上、約20％以上、約30％以上、約40％以上、約50％以上、約60％以上、約75％以上、約100％以上、約125％以上、約150％以上、約175％以上、約200％以上、約250％以上、約3300％以上、約350％以上、約400％以上、約450％以上或者約500％或更高的活性(GLP-1效力)。在一些實(shí)施方案中，本文所述的肽和變體肽相對于天然GLP-1，對GLP-1受體顯示約5000％以下或者約10,000％以下的活性。在一些實(shí)施方案中，肽和變體肽僅對GLP-1受體顯示顯著的活性(效力)且對胰高血糖素受體顯示極小活性至無活性。在一些實(shí)施方案中，肽和變體肽被視為“純GLP-1受體激動(dòng)劑”或不被視為“胰高血糖素/GLP-1受體協(xié)同激動(dòng)劑”。在一些實(shí)施方案中，這些肽和變體肽對GLP-1受體顯示本文所述的任何水平的活性或效力，但對胰高血糖素受體具有顯著較低的活性(效力)。在一些實(shí)施方案中，肽和變體肽對胰高血糖素受體顯示與對GLP-1受體的EC50相比100倍以上的EC50。對GLP-1受體及胰高血糖素受體的激動(dòng)劑活性在示例性實(shí)施方案中，肽和變體肽對GLP-1受體與胰高血糖素受體兩者均顯示活性，并且可被視為“胰高血糖素/GLP-1受體協(xié)同激動(dòng)劑”。在示例性實(shí)施方案中，肽和變體肽對胰高血糖素受體的活性(例如EC50或相對活性或效力)與其對GLP-1受體的活性(例如EC50或相對活性或效力)有約50倍、約40倍、約30倍、約20倍、約10倍或約5倍以內(nèi)的不同(更高或更低)。在示例性方面中，肽或變體肽的胰高血糖素效力與其GLP-1效力有約25倍、約20倍、約15倍、約10倍或約5倍以內(nèi)的不同(更高或更低)。在示例性方面中，肽或變體肽的胰高血糖素效力與其GLP-1效力低約25倍、約20倍、約15倍、約10倍或約5倍以內(nèi)。在示例性實(shí)施方案中，協(xié)同激動(dòng)劑對GLP-1受體與對胰高血糖素受體相比大致等效或相對更有效。舉例而言，肽或變體肽對胰高血糖素受體的相對活性或EC50或效力除以肽或變體肽對GLP-1受體的相對活性或EC50或效力的比率小于X或約為X，其中X選自100、75、60、50、40、30、20、15、10或5。在示例性實(shí)施方案中，肽或變體肽對胰高血糖素受體的EC50或效力或相對活性除以肽或變體肽對GLP-1受體的EC50或效力或相對活性的比率約為1至小于5(例如約4、約3、約2、約1)。在示例性實(shí)施方案中，肽或變體肽對GLP-1受體的EC50或效力或相對活性除以肽或變體肽對胰高血糖素受體的EC50或效力或相對活性的比率小于5(例如約4、約3、約2、約1)。在示例性實(shí)施方案中，肽或變體肽的胰高血糖素效力相比于肽或變體肽的GLP-1效力的比率小于Y或約為Y，其中Y選自100、75、60、50、40、30、20、15、10及5。在示例性實(shí)施方案中，肽或變體肽的胰高血糖素效力相比于肽或變體肽的GLP-1效力的比率小于5(例如約4、約3、約2、約1)。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物對胰高血糖素受體的EC50為對GLP-1受體的EC50的2倍至10倍(例如2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍)。在示例性實(shí)施方案中，肽主要為胰高血糖素激動(dòng)劑且對胰高血糖素受體比對GLP-1受體相對更有效(例如肽對胰高血糖素受體與GLP-1受體相比有效5倍以上)。舉例而言，肽或變體肽對GLP-1受體的相對活性或效力或EC50除以肽或變體肽對胰高血糖素受體的相對活性或效力或EC50的比率小于V或約為V，其中V選自100、75、60、50、40、30、20、15、10或5。在一些實(shí)施方案中，肽或變體肽的GLP-1效力相比于肽或變體肽的胰高血糖素效力的比率小于W或約為W，其中W選自100、75、60、50、40、30、20、15、10及5。在一些實(shí)施方案中，肽或變體肽對GLP-1受體顯示天然GLP-1的活性的至少0.1％(例如約0.5％以上、約1％以上、約5％以上、約10％以上或更高)(GLP-1效力)，并且對胰高血糖素受體顯示天然胰高血糖素的活性的至少0.1％(例如約0.5％以上、約1％以上、約5％以上、約10％以上或更高)(胰高血糖素效力)。對GIP受體的活性除了對胰高血糖素受體和/或GLP-1受體具有活性外，在一些方面中，本文所述的肽和變體肽也對GIP受體顯示低激動(dòng)劑活性。在這樣的方面中，這樣的肽和變體肽優(yōu)選對于GLP-1受體的選擇性相對于GIP受體為至少100倍。然而，在其他方面中，肽或變體肽對GIP受體顯示明顯活性，例如類似物對GIP受體的EC50與其對GLP-1受體的EC50的不同小于約50倍，任選地，其中類似物的GIP效力在該類似物的GLP-1效力的約50倍以內(nèi)。在示例性實(shí)施方案中，肽對于GIP受體活化活性顯示約1μM以下、或100nM以下、或約75、50、25、10、8、6、5、4、3、2或1nM以下的EC50。應(yīng)理解，較低的EC50指示于受體的較高的活性或效力。在一些實(shí)施方案中，本文所述的肽和變體肽對GIP受體顯示約0.001nM、0.01nM或0.1nM的EC50。在一些實(shí)施方案中，本文所述的肽和變體肽對GIP受體顯示不超過約100nM的EC50。受體活化可通過測量過度表達(dá)該受體的HEK293細(xì)胞中的cAMP誘導(dǎo)的體外測試來測量，例如分析與編碼該受體的DNA及實(shí)例2所述的與cAMP反應(yīng)性組件連接的熒光素酶基因共轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，本文公開的肽和變體肽相對于天然GIP，對GIP受體顯示至少約0.1％、1％、10％、50％、100％、150％或200％或更高的活性(GIP效力)。在一些實(shí)施方案中，本文所述的肽和變體肽相對于天然GIP，對GIP受體顯示不超過1000％、10,000％、100,000％或1,000,000％的活性。胰高血糖素肽于受體(相對于該受體的天然配位體)的活性(效力)計(jì)算為該肽相對于天然配位體的EC50的反比。因此，本發(fā)明的一方面提供了對胰高血糖素受體及GIP受體兩者均顯示活性的肽和變體肽(“胰高血糖素/GIP協(xié)同激動(dòng)劑”)。在一些實(shí)施方案中，肽對GIP受體的EC50與其對胰高血糖素受體的EC50的不同小于約50倍、40倍、30倍或20倍(更高或更低)。在一些實(shí)施方案中，肽的GIP效力與其胰高血糖素效力的不同小于約500倍、450倍、400倍、350倍、300倍、250倍、200倍、150倍、100倍、75倍、50倍、25倍、20倍、15倍、10倍或5倍(更高或更低)。在一些實(shí)施方案中，GLP-1活性例如通過位置7上的氨基酸修飾、位置27或28上氨基酸的氨基酸C端方向的刪除、或其組合而顯著降低或破壞。在本公開的可替代方面中，本公開的肽和變體肽例如由于位置3上Gln的氨基酸修飾而于GLP-1和GIP受體顯示活性，但對胰高血糖素受體不顯示顯著活性(“GIP/GLP-1協(xié)同激動(dòng)劑”)。舉例而言，該位置上的用酸性、堿性或疏水性氨基酸(谷氨酸、鳥氨酸、正亮氨酸)的取代降低了胰高血糖素活性。在其他方面中，肽和變體肽于胰高血糖素、GIP及GLP-1受體各自均顯示活性(“胰高血糖素/GIP/GLP-1三重激動(dòng)劑”)。舉例而言，在這些后者方面的任一方面中，肽對GIP受體的EC50與其對GLP-1受體的EC50的不同小于約50倍、40倍、30倍或20倍(更高或更低)。在一些實(shí)施方案中，肽的GIP效力與其GLP-1效力的不同小于約25倍、20倍、15倍、10倍或5倍(更高或更低)。在一些實(shí)施方案中，這些肽對胰高血糖素受體具有天然胰高血糖素的活性的約10％以下，例如約1-10％，或約0.1-10％，或高于約0.1％但低于約10％。結(jié)合物的活性在一些實(shí)施方案中，如上文所述，本文所述的肽和變體肽對胰高血糖素受體顯示活性或效力和/或?qū)LP-1受體顯示活性和/或?qū)IP受體顯示活性，并且當(dāng)該肽或變體肽為結(jié)合物的一部分(例如結(jié)合于異源部分，例如親水性部分，如聚乙二醇)時(shí)，與該肽或變體肽不為結(jié)合物的一部分時(shí)相比，該肽或變體肽顯示較低的活性(即，更低的效力或更高的EC50)。在一些方面中，肽或變體肽在不為結(jié)合物的一部分時(shí)對胰高血糖素受體和/或GLP-1受體所顯示的效力為該肽或變體肽為結(jié)合物的一部分時(shí)的效力的約10倍或更高。在一些方面中，肽或變體肽在未結(jié)合時(shí)對胰高血糖素受體和/或GLP-1受體所顯示的效力為該肽或變體肽在結(jié)合時(shí)的效力的約10倍、約15倍、約20倍、約25倍、約30倍、約35倍、約40倍、約45倍、約50倍、約100倍或甚至更高倍數(shù)。胰高血糖素類似物的結(jié)構(gòu)?；鶕?jù)一些實(shí)施方案，胰高血糖素類似物包含?；被?例如非編碼?；被?例如包含對于天然存在的氨基酸而言為非原生的?；陌被?)。在一些實(shí)施方案中，酰化氨基酸使胰高血糖素類似物具有以下性質(zhì)中的一種或多種：(i)延長的循環(huán)半衰期、(ii)延遲的作用起始、(iii)延長的作用持續(xù)時(shí)間、(iv)提高的對蛋白酶(諸如DPP-IV)的抗性，以及(v)于GLP-1和胰高血糖素受體中之一或兩者的更加的效力。如本文所示，?；雀哐撬仡愃莆锱c相應(yīng)未?；雀哐撬仡愃莆锵啾?，于胰高血糖素和GLP-1受體不顯示降低的活性。相反，在一些情況下，?；雀哐撬仡愃莆飳?shí)際上于GLP-1和胰高血糖素受體顯示增加的活性。因此，酰化胰高血糖素類似物的效力與胰高血糖素類似物的未?；问较喈?dāng)(若未增強(qiáng))。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，胰高血糖素類似物出于延長循環(huán)半衰期和/或延遲作用起始和/或延長作用持續(xù)時(shí)間和/或提高對諸如DPP-IV的蛋白酶的抗性的目的，包含通過酯、硫酯或酰胺鍵聯(lián)而與胰高血糖素類似物連接的?；?。?；稍谝雀哐撬仡愃莆飪?nèi)的任何位置上進(jìn)行，包括以下任何位置：位置1-29、第29氨基酸的C端方向位置(例如位置30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47等、C端延伸內(nèi)的位置或在C端上的氨基酸)，條件是胰高血糖素和/或GLP-1活性得到保留(若未增強(qiáng))。非限制性實(shí)例包括位置5、7、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21、24、27、28或29。在示例性實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物在選自以下的一或多個(gè)位置包含?；被幔?、10、12、16及20。在示例性實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物在選自以下的一或多個(gè)位置包含?；被幔?0、12及16。在示例性實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物在選自以下的一或多個(gè)位置包含酰化氨基酸：9、10、12、16及20。在示例性實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物在一或多個(gè)位置10和12包含?；被?。在示例性實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物在位置12包含?；被?。在示例性實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物包含C端延伸且在選自以下的一或多個(gè)位置包含?；被幔?、10、12、16、20及37-43(例如40)。在特定實(shí)施方案中，?；l(fā)生于胰高血糖素類似物的位置10，并且胰高血糖素類似物缺乏分子內(nèi)橋鍵，例如共價(jià)分子內(nèi)橋鍵(例如內(nèi)酰胺橋鍵)。這樣的缺乏分子內(nèi)橋鍵的酰化胰高血糖素類似物與缺乏共價(jià)分子內(nèi)橋鍵的相應(yīng)未?；愃莆锵啾纫约芭c在除位置10以外的位置?；娜狈Ψ肿觾?nèi)橋鍵的相應(yīng)類似物相比，于GLP-1和胰高血糖素受體顯示增強(qiáng)的活性。如本文所示，位置10上的?；踔量墒箤σ雀哐撬厥荏w具有極低活性的胰高血糖素類似物轉(zhuǎn)化成于胰高血糖素及GLP-1受體兩者均具有活性的胰高血糖素類似物。因此，發(fā)生酰化的位置可改變胰高血糖素類似物的總體活性譜。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物在連接親水性部分的相同氨基酸位置?；蛟诓煌被嵛恢悯；?。非限制性實(shí)例包括在位置10酰化及在胰高血糖素類似物的C端部分中一個(gè)或多個(gè)位置(例如位置24、28或29、C端延伸內(nèi)或在C端(例如通過添加C端Cys))聚乙二醇化。酰基可直接共價(jià)連接于胰高血糖素類似物的氨基酸，或通過間隔子間接共價(jià)連接于胰高血糖素類似物的氨基酸，其中該間隔子位于胰高血糖素類似物的氨基酸與?；g。在特定方面中，胰高血糖素類似物經(jīng)修飾以通過對胰高血糖素類似物的氨基酸側(cè)鏈的胺、羥基或硫醇進(jìn)行直接?；；?。在一些實(shí)施方案中，?；挥谝雀哐撬仡愃莆锏奈恢?0、20、24或29。對此，?；雀哐撬仡愃莆锟砂被嵝蛄蠸EQIDNO:1，或其包含一或多個(gè)本文所述的氨基酸修飾的經(jīng)修飾的氨基酸序列，并且該類似物的位置10、20、24及29上至少一個(gè)氨基酸被修飾成包含側(cè)鏈胺、羥基或硫醇的任何氨基酸。在一些特定實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物的直接?；ㄟ^位置10上氨基酸的側(cè)鏈胺、羥基或硫醇進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，包含側(cè)鏈胺的氨基酸為式I的氨基酸：在一些示例性實(shí)施方案中，式I的氨基酸為其中n為4(Lys)或n為3(Orn)的氨基酸。在其他實(shí)施方案中，包含側(cè)鏈羥基的氨基酸為式II的氨基酸：在一些示例性實(shí)施方案中，式II的氨基酸為其中n為1的氨基酸(Ser)。在其他實(shí)施方案中，包含側(cè)鏈硫醇的氨基酸為式III的氨基酸：在一些示例性實(shí)施方案中，式III的氨基酸為其中n為1的氨基酸(Cys)。在其他實(shí)施方案中，包含側(cè)鏈胺、羥基或硫醇的氨基酸為包含式I、式II或式III的相同結(jié)構(gòu)的二取代氨基酸，但與式I、式II或式III的氨基酸的α碳結(jié)合的氫被第二側(cè)鏈置換。在一些實(shí)施方案中，?；雀哐撬卦陬愃莆锱c?；g包含間隔子。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物共價(jià)結(jié)合于間隔子，該間隔子共價(jià)結(jié)合于?；?。在一些實(shí)施方案中，間隔子為包含側(cè)鏈胺、羥基或硫醇的氨基酸，或包含含有側(cè)鏈胺、羥基或硫醇的氨基酸的二肽或三肽。間隔子所連接的氨基酸可為包含允許連接于間隔子的部分的任何氨基酸(例如單重或雙重α取代的氨基酸)。舉例而言，包含側(cè)鏈NH2、-OH或COOH的氨基酸(例如Lys、Orn、Ser、Asp或Glu)為適合的。對此，?；雀哐撬仡愃莆锟砂被嵝蛄蠸EQIDNO:1，或其包含一或多個(gè)本文所述的氨基酸修飾的經(jīng)修飾的氨基酸序列，并且位置10、20、24及29上至少一個(gè)氨基酸被修飾成包含側(cè)鏈胺、羥基或羧酸酯基的任何氨基酸。在一些實(shí)施方案中，間隔子為包含側(cè)鏈胺、羥基或硫醇的氨基酸，或包含含有側(cè)鏈胺、羥基或硫醇的氨基酸的二肽或三肽。當(dāng)酰化通過間隔子的胺基而發(fā)生時(shí)，?；赏ㄟ^氨基酸的α胺或側(cè)鏈胺發(fā)生。在α胺?；那闆r下，間隔子的氨基酸可為任何氨基酸。舉例而言，間隔子的氨基酸可為疏水性氨基酸，例如Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Trp、Met、Phe、Tyr、6-氨基己酸、5-氨基戊酸、7-氨基庚酸以及8-氨基辛酸?；蛘?，間隔子的氨基酸可為酸性殘基，例如Asp、Glu、高谷氨酸、高磺基丙氨酸、磺基丙氨酸、γ-谷氨酸。在間隔子的氨基酸的側(cè)鏈胺?；那闆r下，間隔子的氨基酸為包含側(cè)鏈胺的氨基酸，例如式I的氨基酸(例如Lys或Orn)。在此情況下，間隔子的氨基酸的α胺和側(cè)鏈胺兩者均可被酰化，使得胰高血糖素類似物被二酰化。本發(fā)明的實(shí)施方案包括這樣的二?；肿?。當(dāng)?；ㄟ^間隔子的羥基發(fā)生時(shí)，氨基酸或二肽或三肽的一個(gè)氨基酸可為式II的氨基酸。在一特定示例性實(shí)施方案中，氨基酸為Ser。當(dāng)酰化通過間隔子的硫醇基發(fā)生時(shí)，氨基酸或二肽或三肽的一個(gè)氨基酸可為式III的氨基酸。在一特定示例性實(shí)施方案中，氨基酸為Cys。在一些實(shí)施方案中，間隔子為親水性雙官能間隔子。在某些實(shí)施方案中，親水性雙官能間隔子包含兩個(gè)以上的反應(yīng)性基團(tuán)，例如胺、羥基、硫醇及羧基或其任何組合。在某些實(shí)施方案中，親水性雙官能間隔子包含羥基和羧酸酯。在其他實(shí)施方案中，親水性雙官能間隔子包含胺基和羧酸酯。在其他實(shí)施方案中，親水性雙官能間隔子包含硫醇基和羧酸酯。在特定實(shí)施方案中，間隔子包含氨基聚(烷氧基)羧酸酯。對此，間隔子可包含例如NH2(CH2CH2O)n(CH2)mCOOH，其中m為1至6的任何整數(shù)且n為2至12的任何整數(shù)，諸如8-胺基3,6-二氧雜辛酸，其可購自PeptidesInternational,Inc.(Louisville,KY)。在一些實(shí)施方案中，間隔子為疏水性雙官能間隔子。疏水性雙官能間隔本領(lǐng)域已知。參見例如BioconjugateTechniques,G.T.Hermanson(AcademicPress,SanDiego,CA,1996)，其以整體援引方式并入本文。在某些實(shí)施方案中，疏水性雙官能間隔子包含兩個(gè)以上的反應(yīng)性基團(tuán)，例如胺、羥基、硫醇及羧基或其任何組合。在某些實(shí)施方案中，疏水性雙官能間隔子包含羥基和羧酸酯。在其他實(shí)施方案中，疏水性雙官能間隔子包含胺基和羧酸酯。在其他實(shí)施方案中，疏水性雙官能間隔子包含硫醇基和羧酸酯。包含羧酸酯和羥基或硫醇基的適合疏水性雙官能間隔子在本領(lǐng)域已知，并且包括例如8-羥基辛酸和8-巰基辛酸。在一些實(shí)施方案中，雙官能間隔子不為在羧酸酯基之間包含具有1-7個(gè)碳原子的未支化亞甲基的二羧酸。在一些實(shí)施方案中，雙官能間隔子為在羧酸酯基之間包含具有1-7個(gè)碳原子的未支化亞甲基的二羧酸。在特定實(shí)施方案中，間隔子(例如氨基酸、二肽、三肽、親水性雙官能間隔子或疏水性雙官能間隔子)長3至10個(gè)原子(例如6至10個(gè)原子(例如6、7、8、9或10個(gè)原子)。在更特定的實(shí)施方案中，間隔子長約3至10個(gè)原子(例如6至10個(gè)原子)且?；鶠镃12至C18脂肪?；?，例如C14脂肪?；?、C16脂肪?；?，使得間隔子與?；目傞L度為14至28個(gè)原子，例如約14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28個(gè)原子。在一些實(shí)施方案中，間隔子與?；拈L度為17至28(例如19至26、19至21)個(gè)原子。根據(jù)某些前述的實(shí)施方案，雙官能間隔子可為包含長3至10個(gè)原子的氨基酸主鏈(例如6-氨基己酸、5-氨基戊酸、7-氨基庚酸和8-氨基辛酸)的合成或天然存在的氨基酸(包括但不限于本文所述那些氨基酸中任一種)?；蛘?，間隔子可為具有長3至10個(gè)原子(例如6至10個(gè)原子)的肽主鏈的二肽或三肽間隔子。二肽或三肽間隔子的每一氨基酸可與該二肽或三肽的其他氨基酸相同或不同，且可獨(dú)立地選自：天然存在或編碼和/或非編碼或非天然存在的氨基酸，包括例如天然存在的氨基酸(Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp、Tyr)的任何D或L異構(gòu)體，或選自以下的非天然存在或非編碼的氨基酸的任何D或L異構(gòu)體：β-丙氨酸(β-Ala)、N-α-甲基-丙氨酸(Me-Ala)、氨基丁酸(Abu)、γ-氨基丁酸(γ-Abu)、氨基己酸(ε-Ahx)、氨基異丁酸(Aib)、氨基甲基吡咯羧酸、氨基哌啶羧酸、氨基絲氨酸(Ams)、氨基四氫吡喃-4-羧酸、精氨酸N-甲氧基-N-甲基酰胺、β-天冬氨酸(β-Asp)、氮雜環(huán)丁烷羧酸、3-(2-苯并噻唑基)丙氨酸、α-叔丁基甘氨酸、2-氨基-5-脲基-正戊酸(瓜氨酸，Cit)、β-環(huán)己基丙氨酸(Cha)、乙酰胺基甲基-半胱氨酸、二氨基丁酸(Dab)、二氨基丙酸(Dpr)、二羥基苯丙氨酸(DOPA)、二甲基噻唑烷(DMTA)、γ-谷氨酸(γ-Glu)、高絲氨酸(Hse)、羥脯氨酸(Hyp)、異亮氨酸N-甲氧基-N-甲基酰胺、甲基-異亮氨酸(Melle)、六氫異煙酸(Isn)、甲基-亮氨酸(MeLeu)、甲基-賴氨酸、二甲基-賴氨酸、三甲基-賴氨酸、甲醇基脯氨酸、甲硫氨酸-亞砜(Met(O))、甲硫氨酸-砜(Met(O2))、正亮氨酸(Nle)、甲基-正亮氨酸(Me-Nle)、正纈氨酸(Nva)、鳥氨酸(Orn)、對氨基苯甲酸(PABA)、青霉胺(Pen)、甲基苯丙氨酸(MePhe)、4-氯苯丙氨酸(Phe(4-Cl))、4-氟苯丙氨酸(Phe(4-F))、4-硝基苯丙氨酸(Phe(4-NO2))、4-氰基苯丙氨酸((Phe(4-CN))、苯基甘氨酸(Phg)、哌啶基丙氨酸、哌啶基甘氨酸、3,4-去氫脯氨酸、吡咯烷基丙氨酸、肌氨酸(Sar)、硒半胱氨酸(Sec)、O-芐基-磷酸絲氨酸、4-氨基-3-羥基-6-甲基庚酸(Sta)、4-氨基-5-環(huán)己基-3-羥基戊酸(ACHPA)、4-氨基-3-羥基-5-苯基戊酸(AHPPA)、1,2,3,4,-四氫-異喹啉-3-羧酸(Tic)、四氫吡喃甘氨酸、噻吩基丙氨酸(Thi)、O-芐基-磷酸酪氨酸、O-磷酸酪氨酸、甲氧基酪氨酸、乙氧基酪氨酸、O-(雙-二甲基氨基-膦酸基)-酪氨酸、硫酸酪氨酸四丁基胺、甲基-纈氨酸(MeVal)及烷基化3-巰基丙酸。在一些實(shí)施方案中，間隔子包含總體負(fù)電荷，例如包含一個(gè)或兩個(gè)帶負(fù)電的氨基酸。在一些實(shí)施方案中，二肽不是一般結(jié)構(gòu)A-B的任何二肽，其中A選自Gly、GIn、Ala、Arg、Asp、Asn、Ile、Leu、Val、Phe及Pro，其中B選自Lys、His、Trp。在一些實(shí)施方案中，二肽間隔子選自：Ala-Ala、β-Ala-β-Ala、Leu-Leu、Pro-Pro、γ-氨基丁酸-γ-氨基丁酸、Glu-Glu及γ-Glu-γ-Glu。在一些示例性實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物經(jīng)修飾以通過對間隔子的胺、羥基或硫醇進(jìn)行酰化而包含?；撻g隔子連接于位置10、20、24或29的氨基酸的側(cè)鏈或胰高血糖素類似物的C端氨基酸。在更特定實(shí)施方案中，?；B接于胰高血糖素類似物的位置10的氨基酸且間隔子與?；拈L度為14至28個(gè)原子。在一些方面中，位置10的氨基酸為式I的氨基酸(例如Lys)或與式I相關(guān)的二取代氨基酸。在更特定實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物缺乏分子內(nèi)橋鍵，例如共價(jià)分子內(nèi)橋鍵。胰高血糖素類似物例如可為包含一或多個(gè)α,α-二取代氨基酸(例如AIB)以使類似物的α螺旋穩(wěn)定的胰高血糖素類似物。通過胺、羥基及硫醇的肽?；倪m合方法在本領(lǐng)域已知。參見例如實(shí)施例19(通過胺進(jìn)行?；姆椒?，Miller，BiochemBiophysResCommun218：377-382(1996)；Shimohigashi和Stammer,IntJPeptProteinRes19：54-62(1982)；及Previero等人，BiochimBiophysActa263：7-13(1972)(通過羥基進(jìn)行酰化的方法)；以及San和Silvius,JPeptRes66：169-180(2005)(通過硫醇進(jìn)行?；姆椒?；BioconjugateChem.“ChemicalModificationsofProteins：HistoryandApplications”第1,2-12頁(1990)；Hashimoto等人，PharmacueticalRes.“SynthesisofPalmitoylDerivativesofInsulinandtheirBiologicalActivity”第6卷，第2期，第171-176頁(1989)。?；被岬孽；删哂腥魏未笮?，例如任何長度的碳鏈，且可為直鏈或支鏈的。在一些特定實(shí)施方案中，?；鶠镃4至C30脂肪酸。舉例而言，酰基可為以下任一種：C4脂肪酸、C6脂肪酸、C8脂肪酸、C10脂肪酸、C12脂肪酸、C14脂肪酸、C16脂肪酸、C18脂肪酸、C20脂肪酸、C22脂肪酸、C24脂肪酸、C26脂肪酸、C28脂肪酸或C30脂肪酸。在一些實(shí)施方案中，酰基為C8至C20脂肪酸，例如C14脂肪酸或C16脂肪酸。在一可替代的實(shí)施方案中，?；鶠槟懼?。膽汁酸可為任何適合膽汁酸，包括但不限于膽酸、鵝脫氧膽酸、脫氧膽酸、石膽酸、?；悄懰帷⒏誓懰峒澳懝檀妓?。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物包含通過胰高血糖素類似物?；L鏈烷烴而?；陌被?。在特定方面中，長鏈烷烴包含與胰高血糖素類似物的羧基或其活化形式反應(yīng)的胺、羥基或硫醇基(例如十八胺、十四醇和十六烷硫醇)。胰高血糖素類似物的羧基或其活化形式可為胰高血糖素類似物的氨基酸(例如谷氨酸、天冬氨酸)的側(cè)鏈的一部分或可為類似物主鏈的一部分。在某些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物經(jīng)修飾以通過連接于胰高血糖素類似物的間隔子酰化長鏈烷烴而包含?；?。在特定方面中，長鏈烷烴包含與間隔子的羧基或其活化形式反應(yīng)的胺、羥基或硫醇基。包含羧基或其活化形式的適合間隔子描述于本文中且包括例如雙官能間隔子，例如氨基酸、二肽、三肽、親水性雙官能間隔子以及疏水性雙官能間隔子。如本文所用，術(shù)語“羧基的活化形式”是指具有通式R(C＝O)X的羧基，其中X為離去基且R為胰高血糖素類似物或間隔子。舉例而言，羧基的活化形式可包括但不限于?；?、酸酐及酯。在一些實(shí)施方案中，活化羧基為具有N-羥基丁二酰亞胺酯(NHS)離去基的酯。關(guān)于其中長鏈烷烴由胰高血糖素類似物或間隔子?；倪@些方面，長鏈烷烴可具有任何大小且可包含任何長度的碳鏈。長鏈烷烴可為直鏈或支鏈的。在某些方面中，長鏈烷烴為C4至C30烷烴。舉例而言，長鏈烷烴可為C4烷烴、C6烷烴、C8烷烴、C10烷烴、C12烷烴、C14烷烴、C16烷烴、C18烷烴、C20烷烴、C22烷烴、C24烷烴、C26烷烴、C28烷烴或C30烷烴中任一種。在一些實(shí)施方案中，長鏈烷烴包含C8至C20烷烴，例如C14烷烴、C16烷烴或C18烷烴。此外，在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物的胺、羥基或硫醇基被膽固醇酸?；?。在特定實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物通過烷基化去-氨基Cys間隔子(即烷基化3-巰基丙酸間隔子)連接于膽固醇酸。烷基化去-氨基Cys間隔子可為例如包含十二乙二醇部分的去-氨基-Cys間隔子。在一個(gè)實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物包含以下結(jié)構(gòu)：本文所述的?；雀哐撬仡愃莆锟山?jīng)進(jìn)一步修飾以包含親水性部分。在一些特定實(shí)施方案中，親水性部分可包含聚乙二醇(PEG)鏈。親水性部分的并入可通過適合方式而實(shí)現(xiàn)，諸如本文所述的任何方法。對此，?；雀哐撬仡愃莆锟砂ū疚乃龅娜魏涡揎椀腟EQIDNO:1，其中類似物的位置10、20、24及29上氨基酸中至少一個(gè)包含?；椅恢?6、17、21、24或29、C端延伸內(nèi)位置上的氨基酸或C端氨基酸中至少一個(gè)被修飾成Cys、Lys、Orn、homo-Cys或Ac-Phe，且該氨基酸的側(cè)鏈共價(jià)結(jié)合于親水性部分(例如PEG)。在一些實(shí)施方案中，?；芜x地通過包含Cys、Lys、Orn、homo-Cys或Ac-Phe的間隔子連接于位置10，且親水性部分在位置24上的Cys殘基處并入?；蛘?，酰化胰高血糖素類似物可包含間隔子，其中該間隔子同時(shí)被酰化和修飾以包含親水性部分。適合的間隔子的非限制性實(shí)例包括包含一或多個(gè)選自Cys、Lys、Orn、homo-Cys和Ac-Phe的氨基酸的間隔子。烷基化根據(jù)一些實(shí)施方案，胰高血糖素類似物包含烷基化氨基酸(例如非編碼烷基化氨基酸(例如包含對于天然存在的氨基酸而言為非原生的烷基的氨基酸))。不受限于任何特定理論，確信胰高血糖素類似物的烷基化實(shí)現(xiàn)與胰高血糖素類似物的?；愃?若非相同)的作用，例如延長的循環(huán)半衰期、延遲的作用起始、延長的作用持續(xù)時(shí)間、提高的對蛋白酶(諸如DPP-IV)的抗性以及增加的于GLP-1和胰高血糖素受體的效力。烷基化可在胰高血糖素類似物內(nèi)的任何位置上進(jìn)行，包括本文描述為用于?；奈稽c(diǎn)的任何位置，包括但不限于以下任何位置：氨基酸位置1-29、第29殘基的C端方向的氨基酸位置(例如30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47等、C端延伸內(nèi)的位置或在C端)，條件是胰高血糖素活性或GLP-1活性得到保留。非限制性實(shí)例包括位置5、7、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21、24、27、28或29。在示例性實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物在選自以下的一個(gè)或多個(gè)位置包含烷基化氨基酸：9、10、12、16及20。在示例性實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物在選自以下的一個(gè)或多個(gè)位置包含烷基化氨基酸：10、12及16。在示例性實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物在選自以下的一個(gè)或多個(gè)位置包含烷基化氨基酸：9、10、12、16及20。在示例性實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物在一個(gè)或多個(gè)位置10和12包含烷基化氨基酸。在示例性實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物在位置12包含烷基化氨基酸。在示例性實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物包含C端延伸且在選自以下的一個(gè)或多個(gè)位置包含烷基化氨基酸：9、10、12、16、20以及37-43(例如40)。烷基可直接共價(jià)連接于胰高血糖素類似物的氨基酸，或通過間隔子間接共價(jià)連接于胰高血糖素類似物的氨基酸，其中該間隔子定位于胰高血糖素類似物的氨基酸與烷基之間。胰高血糖素類似物可在連接親水性部分的相同氨基酸位置烷基化，或在不同氨基酸位置烷基化。非限制性實(shí)例包括在位置10烷基化以及在胰高血糖素類似物的C端部分中一個(gè)或多個(gè)位置(例如位置24、28或29、C端延伸內(nèi)或在C端(例如通過添加C端Cys))而聚乙二醇化。在特定方面中，胰高血糖素類似物經(jīng)修飾以通過對胰高血糖素類似物的氨基酸的側(cè)鏈的胺、羥基或硫醇進(jìn)行直接烷基化而包含烷基。在一些實(shí)施方案中，烷基化位于胰高血糖素類似物的位置10、20、24或29。對此，烷基化胰高血糖素類似物可包含氨基酸序列SEQIDNO：2，或其包含一個(gè)或多個(gè)本文所述的氨基酸修飾的經(jīng)修飾的氨基酸序列，其中位置10、20、24以及29上至少一個(gè)氨基酸被修飾成包含側(cè)鏈胺、羥基或硫醇的任何氨基酸。在一些特定實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物的直接烷基化通過位置10上氨基酸的側(cè)鏈胺、羥基或硫醇而發(fā)生。在一些實(shí)施方案中，包含側(cè)鏈胺的氨基酸為式I的氨基酸。在一些示例性實(shí)施方案中，式I的氨基酸為其中n為4(Lys)或n為3(Orn)的氨基酸。在其他實(shí)施方案中，包含側(cè)鏈羥基的氨基酸為式II的氨基酸。在一些示例性實(shí)施方案中，式II的氨基酸為其中n為1的氨基酸(Ser)。在其他實(shí)施方案中，包含側(cè)鏈硫醇的氨基酸為式III的氨基酸。在一些示例性實(shí)施方案中，式III的氨基酸為其中n為1的氨基酸(Cys)。在其他實(shí)施方案中，包含側(cè)鏈胺、羥基或硫醇的氨基酸為包含式I、式II或式III的相同結(jié)構(gòu)的二取代氨基酸，但與式I、式II或式III的氨基酸的α碳結(jié)合的氫被第二側(cè)鏈替代。在一些實(shí)施方案中，烷基化胰高血糖素類似物在類似物與烷基之間包含間隔子。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物共價(jià)結(jié)合于間隔子，該間隔子共價(jià)結(jié)合于烷基。在一些示例性實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物經(jīng)修飾以通過對間隔子的胺、羥基或硫醇進(jìn)行烷基化而包含酰基，該間隔子連接于胰高血糖素類似物的位置10、20、24或29上的氨基酸的側(cè)鏈。間隔子所連接的氨基酸可為包含允許連接于間隔子的部分的任何氨基酸。舉例而言，包含側(cè)鏈NH2、-OH或COOH的氨基酸(例如Lys、Orn、Ser、Asp或Glu)為適合的。對此，烷基化胰高血糖素類似物可包含含有一個(gè)或多個(gè)本文所述的氨基酸修飾的經(jīng)修飾的氨基酸序列SEQIDNO:1，其中位置10、20、24及29上至少一個(gè)氨基酸被修飾成包含側(cè)鏈胺、羥基或羧酸酯的任何氨基酸。在一些實(shí)施方案中，間隔子為包含側(cè)鏈胺、羥基或硫醇的氨基酸，或包含含側(cè)鏈胺、羥基或硫醇的氨基酸的二肽或三肽。當(dāng)烷基化通過間隔子的胺基而發(fā)生時(shí)，烷基化可通過氨基酸的α胺或側(cè)鏈胺而發(fā)生。在α胺被烷基化的情況下，間隔子的氨基酸可為任何氨基酸。舉例而言，間隔子的氨基酸可為疏水性氨基酸，例如Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Trp、Met、Phe、Tyr、6-氨基己酸、5-氨基戊酸、7-氨基庚酸以及8-氨基辛酸?；蛘?，間隔子的氨基酸可為酸性殘基(例如Asp和Glu)，條件是烷基化在酸性殘基的α胺上發(fā)生。在間隔子的氨基酸的側(cè)鏈胺被烷基化的情況下，間隔子的氨基酸為包含側(cè)鏈胺的氨基酸，例如式I的氨基酸(例如Lys或Orn)。在該情況下，間隔子的氨基酸的α胺和側(cè)鏈胺兩者均可能被烷基化，使得胰高血糖素類似物被二烷基化。本發(fā)明的實(shí)施方案包括這樣的二烷基化分子。當(dāng)烷基化通過間隔子的羥基而發(fā)生時(shí)，氨基酸或二肽或三肽的一個(gè)氨基酸可為式II的氨基酸。在特定示例性實(shí)施方案中，氨基酸為Ser。當(dāng)烷基化通過間隔子的硫醇基而發(fā)生時(shí)，氨基酸或二肽或三肽的一個(gè)氨基酸可為式III的氨基酸。在特定示例性實(shí)施方案中，氨基酸為Cys。在一些實(shí)施實(shí)施方案中，間隔子為親水性雙官能間隔子。在某些實(shí)施方案中，親水性雙官能間隔子包含兩個(gè)以上的反應(yīng)性基團(tuán)，例如胺、羥基、硫醇和羧基或其任何組合。在某些實(shí)施方案中，親水性雙官能間隔子包含羥基和羧酸酯。在其他實(shí)施方案中，親水性雙官能間隔子包含胺基和羧酸酯。在其他實(shí)施方案中，親水性雙官能間隔子包含硫醇基和羧酸酯。在特定實(shí)施方案中，間隔子包含氨基聚(烷氧基)羧酸酯。對此，間隔子可包含例如NH2(CH2CH2O)n(CH2)mCOOH，其中m為1至6的任何整數(shù)且n為2至12的任何整數(shù)，諸如8-氨基3,6-二氧雜辛酸，其可購自PeptidesInternational,Inc.(Louisville,KY)。在一些實(shí)施方案中，間隔子為疏水性雙官能間隔子。在某些實(shí)施方案中，疏水性雙官能間隔子包含兩個(gè)以上的反應(yīng)性基團(tuán)，例如胺、羥基、硫醇及羧基或其任何組合。在某些實(shí)施方案中，疏水性雙官能間隔子包含羥基和羧酸酯。在其他實(shí)施方案中，疏水性雙官能間隔子包含胺基和羧酸酯。在其他實(shí)施方案中，疏水性雙官能間隔子包含硫醇基和羧酸酯。包含羧酸酯和羥基或硫醇基的適合疏水性雙官能間隔子在本領(lǐng)域已知，并且包括例如8-羥基辛酸和8-巰基辛酸。在特定實(shí)施方案中，間隔子(例如氨基酸、二肽、三肽、親水性雙官能間隔子或疏水性雙官能間隔子)長3至10個(gè)原子(例如6至10個(gè)原子(例如6、7、8、9或10個(gè)原子))。在更特定實(shí)施方案中，間隔子長約3至10個(gè)原子(例如6至10個(gè)原子)且烷基為C12至C18烷基，例如C14烷基、C16烷基，使得間隔子與烷基的總長度為14至28個(gè)原子，例如約14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28個(gè)原子。在一些實(shí)施方案中，間隔子與烷基的長度為17至28(例如19至26、19至21)個(gè)原子。根據(jù)某些前述實(shí)施方案，雙官能間隔子可為包含長3至10個(gè)原子的氨基酸主鏈(例如6-氨基己酸、5-氨基戊酸、7-氨基庚酸以及8-氨基辛酸)的合成或非天然存在或非編碼的氨基酸。或者，間隔子可為具有長3至10個(gè)原子(例如6至10個(gè)原子)的肽主鏈的二肽或三肽間隔子。二肽或三肽間隔子可由天然存在或編碼和/或非編碼或非天然存在的氨基酸(包括例如本文教示的任何氨基酸)構(gòu)成。在一些實(shí)施方案中，間隔子包含總體負(fù)電荷，例如包含一個(gè)或兩個(gè)帶負(fù)電的氨基酸。在一些實(shí)施方案中，二肽間隔子選自：Ala-Ala、β-Ala-β-Ala、Leu-Leu、Pro-Pro、γ-氨基丁酸-γ-氨基丁酸以及γ-Glu-γ-Glu。通過胺、羥基和硫醇的肽烷基化的適合方法在本領(lǐng)域已知。舉例而言，Williamson醚合成可用于在胰高血糖素類似物的羥基與烷基之間形成醚鍵聯(lián)。此外，肽與烷基鹵化物的親核取代反應(yīng)可產(chǎn)生醚、硫醚或胺基鍵聯(lián)中任一種。烷基化胰高血糖素類似物的烷基可具有任何大小，例如任何長度的碳鏈，且可為直鏈或支鏈的。在一些實(shí)施方案中，烷基為C4至C30烷基。舉例而言，烷基可為C4烷基、C6烷基、C8烷基、C10烷基、C12烷基、C14烷基、C16烷基、C18烷基、C20烷基、C22烷基、C24烷基、C26烷基、C28烷基或C30烷基中任一種。在一些實(shí)施方案中，烷基為C8至C20烷基，例如C14烷基或C16烷基。在一些特定實(shí)施方案中，烷基包含膽汁酸(例如膽酸、鵝脫氧膽酸、脫氧膽酸、石膽酸、牛磺膽酸、甘膽酸以及膽固醇酸)的類固醇部分。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物包含通過使親核性長鏈烷烴與胰高血糖素類似物反應(yīng)而烷基化的氨基酸，其中該胰高血糖素類似物包含適于親核性取代的離去基。在特定方面中，長鏈烷烴的親核性基團(tuán)包含胺、羥基或硫醇基(例如十八胺、十四醇以及十六烷硫醇)。胰高血糖素類似物的離去基可為氨基酸的側(cè)鏈的一部分或可為肽主鏈的一部分。適合的離去基包括例如N-羥基丁二酰亞胺、鹵素以及磺酸酯。在某些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物被修飾以通過使親核性長鏈烷烴與連接于胰高血糖素類似物的間隔子反應(yīng)而包含烷基，其中該間隔子包含離去基。在特定方面中，長鏈烷烴包含胺、羥基或硫醇基。在某些實(shí)施方案中，包含離去基的間隔子可為還包含適合離去基的本文所述的任何間隔子，例如氨基酸、二肽、三肽、親水性雙官能間隔子以及疏水性雙官能間隔子。關(guān)于本公開的其中長鏈烷烴被胰高血糖素類似物或間隔子烷基化的這些方面，長鏈烷烴可具有任何大小且可包含任何長度的碳鏈。長鏈烷烴可為直鏈或支鏈的。在某些方面中，長鏈烷烴為C4至C30烷烴。舉例而言，長鏈烷烴可為C4烷烴、C6烷烴、C8烷烴、C10烷烴、C12烷烴、C14烷烴、C16烷烴、C18烷烴、C20烷烴、C22烷烴、C24烷烴、C26烷烴、C28烷烴或C30烷烴中任一種。在一些實(shí)施方案中，長鏈烷烴包含C8至C20烷烴，例如C14烷烴、C16烷烴或C18烷烴。此外，在一些實(shí)施方案中，烷基化可在胰高血糖素類似物與膽固醇部分之間發(fā)生。舉例而言，膽固醇的羥基可替換長鏈烷烴上的離去基以形成膽固醇-胰高血糖素類似物產(chǎn)物。本文所述的烷基化胰高血糖素類似物可經(jīng)進(jìn)一步修飾以包含親水性部分。在一些特定實(shí)施方案中，親水性部分可包含聚乙二醇(PEG)鏈。親水性部分的并入可通過適合方式而實(shí)現(xiàn)，諸如本文所述的任何方法。對此，烷基化胰高血糖素類似物可包含含一個(gè)或多個(gè)本文所述的氨基酸修飾的經(jīng)修飾的SEQIDNO:1，其中位置10、20、24以及29上的氨基酸中至少一個(gè)包含烷基且位置16、17、21、24或29、C端延伸內(nèi)位置上的氨基酸或C端氨基酸中至少一個(gè)被修飾成Cys、Lys、Orn、homo-Cys或Ac-Phe，且該氨基酸的側(cè)鏈共價(jià)結(jié)于親水性部分(例如PEG)。在一些實(shí)施方案中，烷基任選地通過包含Cys、Lys、Orn、homo-Cys或Ac-Phe的間隔子連接于位置10，且親水性部分在位置24上的Cys殘基處并入?；蛘?，烷基化胰高血糖素類似物可包含間隔子，其中該間隔子同時(shí)被烷基化和修飾以包含親水性部分。適合間隔子的非限制性實(shí)例包括包含一個(gè)或多個(gè)選自Cys、Lys、Orn、homo-Cys以及Ac-Phe的氨基酸的間隔子。α螺旋和α螺旋促進(jìn)氨基酸的穩(wěn)定化不受限于任何特定理論，本文所述的胰高血糖素類似物包含螺旋結(jié)構(gòu)，例如α螺旋。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物包含使α螺旋結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的氨基酸。因此，在一些方面中，胰高血糖素類似物包含一個(gè)或多個(gè)α螺旋促進(jìn)氨基酸。如本文所用，術(shù)語“α螺旋促進(jìn)氨基酸”是指向α螺旋作為其中一部分的胰高血糖素類似物的該α螺旋提供增加的穩(wěn)定性的氨基酸。α螺旋促進(jìn)氨基酸在本領(lǐng)域已知。參見例如Lyu等人，ProcNatlAcadSciU.S.A.88：5317-5320(1991)；Branden和Tooze,IntroductiontoProteinStructure,GarlandPublishing,NewYork,NY,1991；Fasman,PredictionofProteinStructureandthePrinciplesofProteinConformation,Fasman編，Plenum,NY,1989)。用于本文目的的適合的α螺旋促進(jìn)氨基酸包括但不限于：丙氨酸、正纈氨酸、正亮氨酸、α氨基丁酸、α-氨基異丁酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸等。在一些實(shí)施方案中，α螺旋促進(jìn)氨基酸為作為天然存在的蛋白質(zhì)中得到的α螺旋的一部分的任何氨基酸，例如Leu、Phe、Ala、Met、Gly、Ile、Ser、Asn、Glu、Asp、Lys、Arg。在一些實(shí)施方案中，α螺旋促進(jìn)氨基酸向α螺旋提供比甘氨酸或丙氨酸更大的穩(wěn)定性。在一些實(shí)施方案中，α螺旋促進(jìn)氨基酸為α,α二取代氨基酸。α螺旋：α螺旋促進(jìn)氨基酸的位置在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物包含與天然胰高血糖素(SEQIDNO:1)類似的氨基酸序列，并且該胰高血糖素類似物包含至少一個(gè)α螺旋促進(jìn)氨基酸。在一些實(shí)施方案中，α螺旋促進(jìn)氨基酸位于位置12至29中任一個(gè)(根據(jù)天然胰高血糖素(SEQIDNO:1)的編號)。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物包含經(jīng)修飾的氨基酸序列SEQIDNO:1且例如在位置12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29中一個(gè)或多個(gè)上包含至少一個(gè)α螺旋促進(jìn)氨基酸。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物在位置16、17、20及21中一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)或全部上包含α螺旋促進(jìn)氨基酸。α螺旋：α,α二取代氨基酸在一些實(shí)施方案中，α螺旋促進(jìn)氨基酸為α,α二取代氨基酸。在特定實(shí)施方案中，α,α二取代氨基酸包含各自結(jié)于α碳的R1和R2，其中R1和R2各自獨(dú)立地選自任選被羥基、酰胺、硫醇、鹵基取代的C1-C4烷基，或R1和R2與它們所連接的α碳一起形成環(huán)(例如C3-C8環(huán))。在一些實(shí)施方案中，R1和R2各自選自：甲基、乙基、丙基和正丁基，或R1與R2一起形成環(huán)辛烷或環(huán)庚烷(例如1-氨基環(huán)辛烷-1-羧酸)。在一些實(shí)施方案中，R1與R2相同。在一些實(shí)施方案中，R1與R2不同。在某些方面中，R1和R2各自為C1-C4烷基。在一些方面中，R1和R2各自為C1或C2烷基。在一些實(shí)施方案中，R1和R2各自為甲基，使得α,α二取代氨基酸為α-氨基異丁酸(AIB)。在一些方面中，本文所述的胰高血糖素類似物包含一個(gè)或多個(gè)α,α二取代氨基酸且胰高血糖素類似物明確缺乏共價(jià)分子內(nèi)橋鍵(例如內(nèi)酰胺)，因?yàn)樵摝?α二取代氨基酸能夠在不存在共價(jià)橋鍵的情況下使α螺旋穩(wěn)定。在一些方面中，胰高血糖素類似物在C端(位置12-29附近)包含一個(gè)或多個(gè)α,α二取代氨基酸。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物的位置16、17、18、19、20、21、24、28或29中一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或更多個(gè)被α,α二取代氨基酸取代，該α,α二取代氨基酸為例如氨基異丁酸(AIB)，被選自甲基、乙基、丙基及正丁基的相同或不同基團(tuán)二取代的氨基酸，或被環(huán)辛烷或環(huán)庚烷二取代的氨基酸(例如1-氨基環(huán)辛烷-1-羧酸)。舉例而言，位置16的AIB的取代可在不存在分子內(nèi)橋鍵(例如非共價(jià)分子內(nèi)橋鍵(例如鹽橋)或共價(jià)分子內(nèi)橋鍵(例如內(nèi)酰胺))的情況下增強(qiáng)GLP-1活性。在一些實(shí)施方案中，位置16、20、21或24中一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)或更多個(gè)被AIB取代。在特定實(shí)施方案中，與天然人類胰高血糖素(SEQIDNO:1)的位置2、16相對應(yīng)的氨基酸中之一或兩者被諸如AIB的α,α二取代氨基酸取代。根據(jù)一些實(shí)施方案，缺乏分子內(nèi)橋鍵的胰高血糖素類似物在氨基酸位置12-29內(nèi)包含一個(gè)或多個(gè)用α,α二取代氨基酸的取代且在胰高血糖素類似物的位置10上包含共價(jià)連接于氨基酸的側(cè)鏈的?；蛲榛Ｔ谔囟▽?shí)施方案中，?；蛲榛皇翘烊淮嬖谟诎被嵘?。在某些方面中，?；蛲榛谖恢?0上的氨基酸而言為非原生的。這樣的缺乏分子內(nèi)橋鍵的?；蛲榛雀哐撬仉呐c未?；膶?yīng)肽相比，于GLP-1和胰高血糖素受體顯示增強(qiáng)的活性。于GLP-1和胰高血糖素受體的活性的進(jìn)一步增強(qiáng)可通過在?；蛲榛c類似物位置10上的氨基酸的側(cè)鏈之間并入間隔子來酰化之缺乏分子內(nèi)橋鍵的胰高血糖素肽而實(shí)現(xiàn)。在本文中進(jìn)一步描述并入或未并入間隔子的?；屯榛＆谅菪悍肿觾?nèi)橋鍵在一些實(shí)施方案中，α螺旋促進(jìn)氨基酸為通過分子內(nèi)橋鍵而與胰高血糖素類似物的另一氨基酸連接的氨基酸。在這樣的實(shí)施方案中，通過分子內(nèi)橋鍵而連接的這兩個(gè)氨基酸各自被視為α螺旋促進(jìn)氨基酸。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物包含一個(gè)或兩個(gè)分子內(nèi)橋鍵。在一些特定實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物包含一個(gè)分子內(nèi)橋鍵與至少一個(gè)其他α螺旋促進(jìn)氨基酸(例如α,α二取代氨基酸)的組合。在一些實(shí)施方案中，分子內(nèi)橋鍵為通過非共價(jià)鍵連接胰高血糖素類似物的兩個(gè)部分的橋鍵，所述非共價(jià)鍵包括例如范德華相互作用、氫鍵、離子鍵、疏水相互作用、偶極-偶極相互作用等。對此，在某些方面中，胰高血糖素類似物包含非共價(jià)分子內(nèi)橋鍵。在一些實(shí)施方案中，非共價(jià)分子內(nèi)橋鍵為鹽橋。在一些實(shí)施方案中，分子內(nèi)橋鍵為通過共價(jià)鍵連接類似物的兩個(gè)部分的橋鍵。對此，在某些方面中，胰高血糖素類似物包含共價(jià)分子內(nèi)橋鍵。在一些實(shí)施方案中，分子內(nèi)橋鍵(例如非共價(jià)分子內(nèi)橋鍵、共價(jià)分子內(nèi)橋鍵)形成于間隔3個(gè)氨基酸的兩個(gè)氨基酸(例如位置i及i+4上的氨基酸)之間，其中i為12至25的任何整數(shù)(例如12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24及25)。更特定地，氨基酸對12與16、16與20、20與24或24與28(其中i＝12、16、20或24的氨基酸對)的側(cè)鏈彼此連接，因此使胰高血糖素α螺旋穩(wěn)定?；蛘撸琲可為17。在一些特定實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物在氨基酸17與21之間包含分子內(nèi)橋鍵。在一些特定實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物在位置16與20或12與16上的氨基酸之間包含分子內(nèi)橋鍵且在位置17與21上的氨基酸之間包含第二分子內(nèi)橋鍵。本文涵蓋包含一個(gè)或多個(gè)分子內(nèi)橋鍵的胰高血糖素類似物。在位置i和i+4上的氨基酸由分子內(nèi)橋鍵連接的特定實(shí)施方案中，連接子的大小為約8個(gè)原子或約7-9個(gè)原子。在其他實(shí)施方案中，分子內(nèi)橋鍵形成于間隔兩個(gè)氨基酸的兩個(gè)氨基酸(例如位置j和j+3上的氨基酸)之間，其中j為12至26的任何整數(shù)(例如12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25及26)。在一些特定實(shí)施方案中，j為17。在位置j和j+3上的氨基酸由分子內(nèi)橋鍵連接的特定實(shí)施方案中，連接子的大小為約6個(gè)原子或約5至7個(gè)原子。在其他實(shí)施方案中，分子內(nèi)橋鍵形成于間隔6個(gè)氨基酸的兩個(gè)氨基酸(例如位置k和k+7上的氨基酸)之間，其中k為12至22的任何整數(shù)(例如12、13、14、15、16、17、18、19、20、21及22)。在一些特定實(shí)施方案中，k為12、13或17。在示例性實(shí)施方案中，k為17。α螺旋：分子內(nèi)橋鍵中涉及之氨基酸能夠結(jié)合(共價(jià)或非共價(jià)地)以形成六原子連接橋鍵的氨基酸配對的實(shí)例包括Orn與Asp、Glu與式I的氨基酸(其中n為2)以及高谷氨酸與式I的氨基酸(其中n為1)，其中式I為：能夠結(jié)合以形成七原子連接橋鍵的氨基酸配對的實(shí)例包括Orn-Glu(內(nèi)酰胺環(huán))；Lys-Asp(內(nèi)酰胺)；或Homoser-Homoglu(內(nèi)酯)?？尚纬砂嗽舆B接子的氨基酸配對的實(shí)例包括Lys-Glu(內(nèi)酰胺)；Homolys-Asp(內(nèi)酰胺)；Orn-Homoglu(內(nèi)酰胺)；4-氨基Phe-Asp(內(nèi)酰胺)；或Tyr-Asp(內(nèi)酯)。可形成九原子連接子的氨基酸配對的實(shí)例包括Homolys-Glu(內(nèi)酰胺)；Lys-Homoglu(內(nèi)酰胺)；4-氨基Phe-Glu(內(nèi)酰胺)；或Tyr-Glu(內(nèi)酯)。這些氨基酸的任何側(cè)鏈可額外被其他化學(xué)基團(tuán)取代，只要α螺旋的三維結(jié)構(gòu)不被破壞。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可設(shè)想會(huì)產(chǎn)生類似大小和所需作用的穩(wěn)定化結(jié)構(gòu)的替代配對或替代氨基酸類似物，包括經(jīng)化學(xué)修飾的衍生物。舉例而言，高半胱氨酸-高半胱氨酸二硫橋鍵長6個(gè)原子且可經(jīng)進(jìn)一步修飾以提供所需作用。甚至在無共價(jià)鍵聯(lián)時(shí)，上述氨基酸配對(或本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可設(shè)想的類似配對)可通過非共價(jià)鍵，例如通過形成鹽橋或氫鍵相互作用而向α螺旋提供附加的穩(wěn)定性。因此，鹽橋可于以下之間形成：Orn與Glu；Lys與Asp；高絲氨酸與高谷氨酸；Lys與Glu；Asp與Arg；Homo-lys與Asp；Orn與高谷氨酸；4-氨基Phe與Asp；Tyr與Asp；Homo-Lys與Glu；Lys與Homo-Glu；4-氨基Phe與Glu；或Tyr與Glu。在一些實(shí)施方案中，類似物在任何以下氨基酸對之間包含鹽橋：Orn與Glu；Lys與Asp；Lys與Glu；Asp與Arg；Homo-Lys與Asp；Orn與高谷氨酸；Homo-Lys與Glu；及Lys與Homo-Glu。鹽橋亦可形成于其他帶相反電荷側(cè)鏈的對之間。參見例如Kallenbach等人，RoleofthePeptideBondinProteinStructureandFolding,TheAmideLinkage：StructuralSignificanceinChemistry,Biochemistry,andMaterialsScience,JohnWiley&Sons,Inc.(2000)。在一些實(shí)施方案中，非共價(jià)分子內(nèi)橋鍵為疏水性橋鍵。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，類似物的α螺旋通過在位置j和j+3或i和i+4上并入疏水性氨基酸而穩(wěn)定化。舉例而言，i可為Tyr且i+4可為Val或Leu；i可為Phe且i+4可為Met；或i可為Phe且i+4可為Ile。應(yīng)理解，出于本文的目的，上述氨基酸配對可反轉(zhuǎn)，使得位置i上的所指氨基酸可替代地位于i+4，而i+4氨基酸可位于i位置。還應(yīng)理解，j和j+3可形成適合的氨基酸配對。α螺旋：共價(jià)分子內(nèi)橋鍵在一些實(shí)施方案中，共價(jià)分子內(nèi)橋鍵為內(nèi)酰胺環(huán)或內(nèi)酰胺橋鍵。內(nèi)酰胺環(huán)的大小可根據(jù)氨基酸側(cè)鏈的長度而變化，且在一個(gè)實(shí)施方案中，內(nèi)酰胺通過將鳥氨酸的側(cè)鏈與天冬氨酸側(cè)鏈連接而形成。內(nèi)酰胺橋鍵及其制備方法在本領(lǐng)域已知。參見例如Houston,Jr.等人，JPeptideSci1：274-282(2004)及本文的實(shí)施例1。在一些實(shí)施方案中，類似物包含經(jīng)修飾的序列SEQIDNO:1和i與i+4之間的內(nèi)酰胺橋鍵，其中i如上文所定義。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物包含兩個(gè)內(nèi)酰胺橋鍵：一個(gè)在位置16與20上的氨基酸之間且另一個(gè)在位置17與21上的氨基酸之間。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物包含一個(gè)內(nèi)酰胺橋鍵和一個(gè)鹽橋。其他示例性實(shí)施方案在本文中描述于稱為“實(shí)施例”的部分中。其他示例性實(shí)施方案包括任選具有內(nèi)酰胺橋鍵的以下配對：位置12上的Glu與位置16上的Lys；位置12上的原生Lys與位置16上的Glu；位置16上的Glu與位置20上的Lys；位置16上的Lys與位置20上的Glu；位置20上的Glu與位置24上的Lys；位置20上的Lys與位置24上的Glu；位置24上的Glu與位置28上的Lys；位置24上的Lys與位置28上的Glu。在一些實(shí)施方案中，共價(jià)分子內(nèi)橋鍵為內(nèi)酯。制備內(nèi)酯橋鍵的適合的方法在本領(lǐng)域已知。參見例如Sheehan等人，JAmChemSoc95：875-879(1973)。在一些方面中，烯烴置換作用用于使用全烴交聯(lián)系統(tǒng)使類似物的α螺旋的一個(gè)或兩個(gè)轉(zhuǎn)角交聯(lián)。在此情況下，胰高血糖素類似物在j和j+3或i和i+4位置包含帶有不同長度的烯烴側(cè)鏈且配置成R或S立體化學(xué)的α-甲基化氨基酸。在一些實(shí)施方案中，烯烴側(cè)鏈包含(CH2)n，其中n為1至6的任何整數(shù)。在一些實(shí)施方案中，n對于8個(gè)原子的交聯(lián)長度為3。在一些實(shí)施方案中，n對于6個(gè)原子的交聯(lián)長度為2。包含烯烴交聯(lián)的示例性胰高血糖素類似物在本文中描述為SEQIDNO:17。形成這樣的分子內(nèi)橋鍵的適合方法描述于本領(lǐng)域中。參見例如Schafmeister等人，J.Am.Chem.Soc.122：5891-5892(2000)，以及Walensky等人，Science305：1466-1470(2004)。在可替代的實(shí)施方案中，類似物包含位于相鄰螺旋轉(zhuǎn)角上的O-烯丙基Ser殘基，所述殘基通過釕催化的閉環(huán)置換作用而橋接在一起。這樣的交聯(lián)程序描述于例如Blackwell等人，Angew,Chem.,Int.Ed.37：3281-3284(1998)中。在特定方面中，使用已廣泛用作半胱氨酸的肽模擬物的非天然硫醇-二丙氨酸，即羊毛硫氨酸，用于交聯(lián)α螺旋的一個(gè)轉(zhuǎn)角?；谘蛎虬彼岬沫h(huán)化的適合方法在本領(lǐng)域已知。參見例如Matteucci等人，TetrahedronLetters45：1399-1401(2004)；Mayer等人，J.PeptideRes.51：432-436(1998)；Polinsky等人，J.Med.Chem.35：4185-4194(1992)；Osapay等人，J.Med.Chem.40：2241-2251(1997)；Fukase等人，Bull.Chem.Soc.Jpn.65：2227-2240(1992)；Harpp等人，J.Org.Chem.36：73-80(1971)；Goodman和Shao,PureAppl.Chem.68：1303-1308(1996)；以及Osapay和Goodman,J.Chem.Soc.Chem.Commun.1599-1600(1993)。在一些實(shí)施方案中，位置i和i+7上兩個(gè)Glu殘基之間的α,ω-二氨基烷烴系鏈(例如1,4-二氨基丙烷和1,5-二氨基戊烷)用于使類似物的α螺旋穩(wěn)定。這樣的系鏈導(dǎo)致形成長9個(gè)原子以上的橋鍵，這取決于二氨基烷烴系鏈的長度。產(chǎn)生用這樣的系鏈交聯(lián)的肽的適合方法描述于本領(lǐng)域中。參見例如Phelan等人，J.Am.Chem.Soc.119：455-460(1997)。在其他實(shí)施方案中，二硫橋鍵用于交聯(lián)類似物的α螺旋的一個(gè)或兩個(gè)轉(zhuǎn)角?；蛘撸渲幸粋€(gè)或兩個(gè)硫原子被亞甲基替換而產(chǎn)生電子等排大環(huán)化的經(jīng)修飾的二硫橋鍵用于使類似物的α螺旋穩(wěn)定。用二硫橋鍵或基于硫的環(huán)化來修飾肽的適合方法描述于例如Jackson等人，J.Am.Chem.Soc.113：9391-9392(1991)以及Rudinger和Jost,Experientia20：570-571(1964)中。在其他實(shí)施方案中，類似物的α螺旋通過位于j和j+3或i和i+4的兩個(gè)His殘基或His與Cys對結(jié)合金屬原子而穩(wěn)定化。金屬原子可為例如Ru(III)、Cu(II)、Zn(II)或Cd(II)。這樣的基于金屬結(jié)合的α螺旋穩(wěn)定化的方法在本領(lǐng)域已知。參見例如Andrews和Tabor,Tetrahedron55：11711-11743(1999)；Ghadiri等人，J.Am.Chem.Soc.112：1630-1632(1990)；以及Ghadiri等人，J.Am.Chem.Soc.119：9063-9064(1997)。類似物的α螺旋可替代地通過其他肽環(huán)化方法而穩(wěn)定化，所述方法評述于Davies,J.Peptide.Sci.9：471-501(2003)中。α螺旋可通過形成酰胺橋鍵、硫醚橋鍵、硫酯橋鍵、脲橋鍵、氨基甲酸酯橋鍵、磺酰胺橋鍵等而穩(wěn)定化。舉例而言，可在C端與Cys殘基的側(cè)鏈之間形成硫酯橋鍵?；蛘?，可通過具有硫醇的氨基酸(Cys)和具有羧酸的氨基酸(例如Asp、Glu)的側(cè)鏈形成硫酯。在另一方法中，交聯(lián)劑(諸如二羧酸，例如辛二酸(辛烷二酸)等)可在氨基酸側(cè)鏈的兩個(gè)官能團(tuán)(諸如游離氨基、羥基、硫醇基及其組合)之間引入連接。DPP-IV抗性肽在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物在位置1或2上或在位置1和2兩者上包含使胰高血糖素類似物實(shí)現(xiàn)對二肽基肽酶IV(DPPIV)裂解的抗性的氨基酸。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物在位置1上包含選自以下的氨基酸：D-組氨酸、去氨基組氨酸、羥基-組氨酸、乙?；?組氨酸、高組氨酸、N-甲基組氨酸、α-甲基組氨酸、咪唑乙酸或α,α-二甲基咪唑乙酸(DMIA)。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物在位置2上包含選自以下的氨基酸：D-絲氨酸、D-丙氨酸、纈氨酸、甘氨酸、N-甲基絲氨酸、N-甲基丙氨酸或α氨基異丁酸。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物在位置2上包含使胰高血糖素類似物實(shí)現(xiàn)對DPPIV的抗性的氨基酸，并且使胰高血糖素類似物實(shí)現(xiàn)對DPPIV的抗性的氨基酸不為D-絲氨酸。在一些方面中，包含使胰高血糖素類似物實(shí)現(xiàn)對DPPIV的抗性的氨基酸的胰高血糖素類似物還包含使胰高血糖素C端部分中存在的α螺旋穩(wěn)定(例如通過位置“i”與“i+4”，例如12與16、16與20或20與24上的氨基酸之間的共價(jià)鍵)的氨基酸修飾。在一些實(shí)施方案中，該共價(jià)鍵為位置16上的谷氨酸與位置20上的賴氨酸之間的內(nèi)酰胺橋鍵。在一些實(shí)施方案中，該共價(jià)鍵為除內(nèi)酰胺橋鍵以外的分子內(nèi)橋鍵。舉例而言，適合的共價(jià)結(jié)合方法包括以下中任一種或多種：烯烴置換作用、基于羊毛硫氨酸的環(huán)化、二硫橋鍵或經(jīng)修飾的含硫的橋鍵的形成、使用α,ω-二氨基烷烴系鏈、金屬原子橋鍵的形成以及其他肽環(huán)化手段。位置1的修飾在一些特定實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物包含(a)位置1上的His被大芳族氨基酸的氨基酸取代，以及(b)使分子C端部分(例如位置12-29附近)中的該α螺旋穩(wěn)定的分子內(nèi)橋鍵。在特定實(shí)施方案中，位置1上的氨基酸被Tyr、Phe、Trp、氨基-Phe、硝基-Phe、氯-Phe、磺基-Phe、4-吡啶基-Ala、甲基-Tyr或3-氨基Tyr替代。在一些實(shí)施方案中，分子內(nèi)橋鍵為本文所述的分子內(nèi)橋鍵中任一種。在一些方面中，分子內(nèi)橋鍵位于由三個(gè)插入氨基酸隔開的兩個(gè)氨基酸的側(cè)鏈之間，即在氨基酸i與i+4的側(cè)鏈之間。在一些實(shí)施方案中，分子內(nèi)橋鍵為內(nèi)酰胺橋鍵。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物在位置1上包含大芳族氨基酸且在類似物的位置16與20上的氨基酸之間包含內(nèi)酰胺橋鍵。在一些方面中，這樣的胰高血糖素類似物還包含一個(gè)或多個(gè)(例如兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或更多個(gè))本文所述的其他修飾。舉例而言，胰高血糖素類似物可包含替代C端羧酸酯的酰胺。此外，在一些實(shí)施方案中，這樣的胰高血糖素類似物還包含以下一個(gè)或多個(gè)：位置17上的大脂族氨基酸、位置18上的含咪唑的氨基酸以及位置19上的帶正電的氨基酸。在一些實(shí)施方案中，包含位置1上的修飾和分子內(nèi)橋鍵的胰高血糖素類似物在位置17-19上還包含氨基酸序列Ile-His-Gln。這樣的修飾可在不破壞胰高血糖素類似物對GLP-1受體和胰高血糖素受體的活性的情況下進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物額外包含?；蛲榛被釟埢?。位置3的修飾在一些實(shí)施方案中，將SEQIDNO:1的第三個(gè)氨基酸(Gln3)取代為酸性、堿性或疏水性氨基酸殘基，并且這樣的修飾使胰高血糖素受體活性降低。在一些實(shí)施方案中，酸性、堿性或疏水性氨基酸為谷氨酸、鳥氨酸、正亮氨酸。在一些方面中，用這些殘基之一的修飾使得胰高血糖素類似物顯示顯著降低或破壞的胰高血糖素受體活性。在一些方面中，被例如谷氨酸、鳥氨酸或正亮氨酸取代的胰高血糖素類似物對胰高血糖素受體具有天然胰高血糖素活性的約10％以下，例如約1-10％或約0.1-10％，或高于約0.1％但低于約10％，同時(shí)對GLP-1受體顯示GLP-1活性的至少20％。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物顯示天然胰高血糖素活性的約0.5％、約1％或約7％，同時(shí)對GLP-1受體顯示GLP-1活性的至少20％。在一些實(shí)施方案中，在不顯著損失對胰高血糖素受體的活性的情況下，并且在一些情況下，在增強(qiáng)胰高血糖素受體活性的情況下，在胰高血糖素類似物的SEQIDNO:1位置3上的谷氨酰胺被谷氨酰胺類似物取代。在一些實(shí)施方案中，谷氨酰胺類似物為包含結(jié)構(gòu)I、II或III的側(cè)鏈的天然存在或非天然存在或非編碼的氨基酸：其中R1為C0-3烷基或C0-3雜烷基；R2為NHR4或C1-3烷基；R3為C1-3烷基；R4為H或C1-3烷基；X為NH、O或S；且Y為NHR4、SR3或OR3。在一些實(shí)施方案中，X為NH或Y為NHR4。在一些實(shí)施方案中，R1為C0-2烷基或C1雜烷基。在一些實(shí)施方案中，R2為NHR4或C1烷基。在一些實(shí)施方案中，R4為H或C1烷基。在示例性實(shí)施方案中，提供包含結(jié)構(gòu)I的側(cè)鏈的氨基酸，其中R1為CH2-S，X為NH且R2為CH3(乙酰胺基甲基-半胱氨酸，C(Acm))；R1為CH2，X為NH且R2為CH3(乙?；被∷?，Dab(Ac))；R1為C0烷基，X為NH，R2為NHR4且R4為H(氨基甲?；被?，Dap(urea))；或R1為CH2-CH2，X為NH且R2為CH3(乙?；B氨酸，Orn(Ac))。在示例性實(shí)施方案中，提供包含結(jié)構(gòu)II的側(cè)鏈的氨基酸，其中R1為CH2，Y為NHR4且R4為CH3(甲基谷氨酰胺，Q(Me))。在示例性實(shí)施方案中，提供包含結(jié)構(gòu)III的側(cè)鏈的氨基酸，其中R1為CH2且R4為H(甲硫氨酸-亞砜，M(O))。在特定實(shí)施方案中，位置3上的氨基酸被Dab(Ac)取代。舉例而言，胰高血糖素激動(dòng)劑可包含于2009年6月16日提交的國際專利申請第PCT/US2009/047438號的序列表的SEQIDNO:595、SEQIDNO:601、SEQIDNO:603、SEQIDNO:604、SEQIDNO:605以及SEQIDNO:606的經(jīng)修飾氨基酸序列，該申請以整體援引方式并入本文，其中這些氨基酸序列如本文進(jìn)一步描述的那樣修飾，例如經(jīng)修飾以包含至少三個(gè)α螺旋促進(jìn)氨基酸，經(jīng)修飾以包含(i)位置10上的?；蛲榛被帷?ii)位置16上的α螺旋促進(jìn)氨基酸、(iii)位置17和/或18上的脂族氨基酸，以及(iv)位于位置27的C端方向的至少一個(gè)帶電氨基酸，以及任選地經(jīng)進(jìn)一步修飾；經(jīng)修飾以在胰高血糖素類似物的相應(yīng)位置上包含Exendin-4(SEQIDNO:8)的氨基酸18-24中的至少三個(gè)氨基酸。位置7的修飾在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物包含在位置7上具有氨基酸修飾的經(jīng)修飾的SEQIDNO:1。在一些方面中，SEQIDNO:1位置7上的氨基酸(Thr)被大脂族氨基酸取代，例如Ile、Leu、Ala等。確信這樣的修飾顯著降低胰高血糖素類似物對GLP-1受體的活性。位置15的修飾在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物包含在位置15上具有提高穩(wěn)定性的氨基酸修飾的經(jīng)修飾的SEQIDNO:1。在一些方面中，SEQIDNO:1位置15上的氨基酸被刪除或被谷氨酸、高谷氨酸、磺基丙氨酸或高磺基丙氨酸。這樣的修飾減少類似物隨時(shí)間的降解或裂解，尤其在酸性或堿性緩沖液中，例如pH值在5.5至8范圍內(nèi)的緩沖液。在一些實(shí)施方案中，包含該修飾的胰高血糖素類似物在25℃下24小時(shí)后保留原始類似物的至少75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％。位置16的修飾根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，提供具有增強(qiáng)的效力并任選具有改進(jìn)的溶解度和穩(wěn)定性的胰高血糖素類似物。在一個(gè)實(shí)施方案中，增強(qiáng)的胰高血糖素和GLP-1效力由天然胰高血糖素(SEQIDNO:1)位置16上的氨基酸修飾提供。作為非限制性實(shí)例，這樣的增強(qiáng)的效力可通過將位置16上天然存在的絲氨酸取代為谷氨酸或取代為另一具有長度為4個(gè)原子的側(cè)鏈的帶負(fù)電的氨基酸，或者取代為谷氨酸、高谷氨酸或高磺基丙氨酸或者具有含至少一個(gè)雜原子(例如N、O、S、P)的側(cè)鏈且側(cè)鏈長度為約4(或3-5)個(gè)原子的帶電氨基酸中任一種來提供。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物包含經(jīng)修飾的SEQIDNO:1，其包含位置16上的Ser被選自谷氨酸、谷氨酰胺、高谷氨酸、高磺基丙氨酸、蘇氨酸或甘氨酸的氨基酸的取代。在一些方面中，位置16上的絲氨酸殘基被選自谷氨酸、谷氨酰胺、高谷氨酸和高磺基丙氨酸的氨基酸取代。在一些特定方面中，位置16上的絲氨酸殘基被谷氨酸或其保守性取代(例如Exendin-4氨基酸)取代。在可替代的實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物包含經(jīng)修飾的SEQIDNO:1序列，其通過用Thr或AIB或如上所述的另一α螺旋促進(jìn)氨基酸取代位置16上的Ser而修飾。在一些實(shí)施方案中，α螺旋促進(jìn)氨基酸與j+3或i+4上的氨基酸形成非共價(jià)分子內(nèi)橋鍵。位置17-18上的修飾在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物包含經(jīng)修飾的SEQIDNO:1，其中位置17和18上的二堿性Arg-Arg位點(diǎn)被消除。不受限于任何特定理論，確信在一些實(shí)施方案中，該二堿性位點(diǎn)的消除提高了胰高血糖素類似物的體內(nèi)效能。在一些方面中，胰高血糖素類似物在此通過用非堿性的氨基酸、例如脂族氨基酸來取代SEQIDNO:1的位置17和18上的氨基酸之一者或兩者而修飾。在一些實(shí)施方案中，位置17或18上的氨基酸之一被刪除，或在位置17與18之間插入氨基酸。在一些實(shí)施方案中，位置17上的Arg被本文所述的另一氨基酸取代，例如Gln、包含親水性部分的氨基酸、α螺旋促進(jìn)氨基酸。在一些實(shí)施方案中，α螺旋促進(jìn)氨基酸與j+3或i+4上的氨基酸形成非共價(jià)分子內(nèi)橋鍵。在一些實(shí)施方案中，位置18上的Arg被本文所述的另一氨基酸取代。在示例性方面中，位置18上的氨基酸為α,α二取代氨基酸，例如AIB。在一些方面中，位置18上的氨基酸為小脂族氨基酸，例如Ala。在一些方面中，位置18上的氨基酸為小脂族氨基酸，例如Ala，且位置17上的Arg保持未修飾。位置20的修飾對GLP-1受體的增強(qiáng)的活性也由位置20上的氨基酸修飾提供。在一些實(shí)施方案中，位置20上的谷氨酰胺被上文所述的α螺旋促進(jìn)氨基酸，例如AIB取代。在一些實(shí)施方案中，α螺旋促進(jìn)氨基酸與j-3或i-4上的氨基酸形成非共價(jià)分子內(nèi)橋鍵。在一些特定實(shí)施方案中，該氨基酸為具有帶電荷或能夠氫結(jié)且長至少約5(或約4-6)個(gè)原子的側(cè)鏈的親水性氨基酸，例如賴氨酸、瓜氨酸、精氨酸或鳥氨酸，且任選地與位置16上的另一α螺旋促進(jìn)氨基酸(例如帶負(fù)電的氨基酸)形成鹽橋。在一些特定方面中，這樣的修飾減少了通過Gln的去酰胺化而發(fā)生的降解，且在一些實(shí)施方案中，增加了胰高血糖素類似物對GLP-1受體的活性。在一些方面中，位置20上的氨基酸為Glu或Lys或AIB。位置21、23、24以及28上的修飾在一些實(shí)施方案中，位置21和/或位置24通過使用α螺旋促進(jìn)氨基酸的取代而修飾。在一些實(shí)施方案中，α螺旋促進(jìn)氨基酸與j-3或i-4上的氨基酸形成非共價(jià)分子內(nèi)橋鍵。在一些方面中，α螺旋促進(jìn)氨基酸為AIB。在示例性實(shí)施方案中，位置23上的氨基酸為Ile。在示例性方面中，位置28上的氨基酸為α,α二取代氨基酸，例如AIB。帶電的C端在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物通過在類似物的C端部分中引入帶電氨基酸的氨基酸取代和/或添加而修飾。在一些實(shí)施方案中，這樣的修飾增強(qiáng)了穩(wěn)定性和溶解度。如本文所用，術(shù)語“帶電氨基酸”或“帶電殘基”是指包含在生理pH值下于水溶液中帶負(fù)電荷(即去質(zhì)子化)或帶正電荷(即質(zhì)子化)的側(cè)鏈的氨基酸。在一些方面中，引入帶電氨基酸修飾的這些氨基酸取代和/或添加位于SEQIDNO:1位置27的C端方向位置。在一些實(shí)施方案中，在C端部分內(nèi)(例如位置27的C端方向位置)引入一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)(且在一些情況下多于三個(gè))帶電氨基酸。根據(jù)一些實(shí)施方案中，位置28和/或29上的天然氨基酸被帶電氨基酸取代，和/或在其他實(shí)施方案中，也向類似物的C端添加一個(gè)至三個(gè)帶電氨基酸。在示例性實(shí)施方案中，帶電氨基酸中的一個(gè)、兩個(gè)或全部帶負(fù)電荷。在一些實(shí)施方案中，帶負(fù)電氨基酸為天冬氨酸、谷氨酸、磺基丙氨酸、高磺基丙氨酸或高谷氨酸。在一些方面中，這些修飾增加溶解度，例如當(dāng)在25℃下24小時(shí)后測量時(shí)，在約5.5至8的指定pH值(例如pH7)下，提供相對于天然胰高血糖素至少2倍、5倍、10倍、15倍、25倍、30倍或更多倍的溶解度。C端截短根據(jù)一些實(shí)施方案，本文所公開的胰高血糖素類似物通過使C端截短一個(gè)或兩個(gè)氨基酸殘基而修飾。如本文所示，這樣的經(jīng)修飾的胰高血糖素肽對胰高血糖素受體和GLP-1受體保留類似活性和效力。對此，胰高血糖素肽可包含天然胰高血糖素類似物(SEQIDNO:1)的氨基酸1-27或1-28，任選地具有本文所述的任何其他修飾。電中性C端在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物包含經(jīng)修飾的SEQIDNO:1，其中C端氨基酸的羧酸被電中性基團(tuán)如酰胺或酯替代。不受限于任何特定理論，在某些方面中，這樣的修飾增加了胰高血糖素類似物對GLP-1受體的活性。因此，在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物為酰胺化的肽，使得C端殘基包含替代氨基酸的α羧酸酯的酰胺。如本文所用，對肽或類似物的一般性提及旨在涵蓋具有經(jīng)修飾的氨基端、羧基端或氨基端和羧基端兩者的肽。舉例而言，包含替代末端羧酸的酰胺基的氨基酸鏈旨在由表示標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的氨基酸序列涵蓋。其他修飾在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物另外或可替代地包含以下氨基酸修飾：(i)位置2上的Ser被Ala的取代；(ii)位置10上的Tyr被Val或Phe或Trp的取代；(iii)位置12上的Lys被Arg的取代；(iv)位置17上的Arg被Gln或小脂族氨基酸(例如Ala)或大脂族氨基酸(例如Ile)的取代；(v)位置18上的Arg被小脂族氨基酸(例如Ala)或含咪唑的氨基酸(例如His)的取代；(vi)位置19上的Ala被帶正電氨基酸(例如Gln)的取代；(vii)位置23上的Val被Ile的取代，以及(viii)位置29上的Thr被Gly或Gln的取代。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物的穩(wěn)定性通過修飾位置27上的甲硫氨酸(例如通過取代為亮氨酸或正亮氨酸)而增加。這樣的修飾可減少氧化降解。穩(wěn)定性也可通過修飾位置20或24或28上的Gln(例如通過取代為Ala、Ser、Thr或AIB)而增加。這樣的修飾可減少通過Gln去酰胺化而發(fā)生的降解。穩(wěn)定性可通過修飾位置21上的Asp(例如通過取代為另一酸性殘基，例如Glu)而增加。這樣的修飾可減少通過Asp脫水形成環(huán)狀丁二酰亞胺中間物、然后異構(gòu)化成異天冬氨酸而發(fā)生的降解。在一些實(shí)施方案中，本文所述的胰高血糖素類似物被糖基化、酰胺化、羧化、磷酸化、酯化、N-酰化、通過例如二硫橋鍵的環(huán)化，或轉(zhuǎn)化為鹽(例如酸加成鹽、堿加成鹽)，和/或任選地二聚化、多聚化或聚合或結(jié)合。本文所述的任何修飾(包括例如增加或降低胰高血糖素受體活性并增加GLP-1受體活性的修飾)可單獨(dú)或組合地應(yīng)用。增加GLP-1受體活性的修飾的組合可提供比單獨(dú)采用任何這樣的修飾更高的GLP-1活性。示例性實(shí)施方案本公開提供包含與天然人類胰高血糖素的結(jié)構(gòu)類似的結(jié)構(gòu)且與天然人類胰高血糖素相比顯示對GLP-1受體的激動(dòng)劑活性增強(qiáng)的肽。胰高血糖素通常具有天然GLP-1對GLP-1受體的活性的約1％，而GLP-1通常具有天然胰高血糖素對胰高血糖素受體的活性的小于約0.01％。因此，本公開的肽顯示天然GLP-1對GLP-1受體的活性的大于1％。在示例性實(shí)施方案中，本公開的肽顯示天然GLP-1對GLP-1受體的活性的大于5％或約5％、大于10％或約10％、大于15％或約15％、大于20％或約20％、大于25％或約25％、大于30％或約30％、大于35％或約35％、大于40％或約40％、大于45％或約45％、大于50％或約50％、大于55％或約55％、大于60％或約60％、大于65％或約65％、大于70％或約70％、大于75％或約75％、大于80％或約80％、大于85％或約85％、大于90％或約90％或大于95％或約95％。在示例性方面中，本公開的肽顯示大于天然GLP-1的對GLP-1受體的活性。因此，在示例性方面中，本公開的肽顯示天然GLP-1對GLP-1受體的活性的大于100％或約100％。在示例性方面中，本公開的肽顯示天然GLP-1對GLP-1受體的活性的大于150％或約150％、大于200％或約200％、大于250％或約250％、大于300％或約300％、大于350％或約350％、大于400％或約400％、大于450％或約450％、大于500％或約500％、大于550％或約550％、大于600％或約600％、大于650％或約650％、大于700％或約700％、大于750％或約750％、大于800％或約800％、大于850％或約850％、大于900％或約900％、大于950％或約950％或大于1,000％或約1,000％。在示例性實(shí)施方案中，肽包含氨基酸序列SEQIDNO:12。在示例性實(shí)施方案中，肽包含氨基酸序列SEQIDNO:13。在示例性實(shí)施方案中，肽包含氨基酸序列SEQIDNO:14。在示例性實(shí)施方案中，肽包含氨基酸序列SEQIDNO:15。在示例性實(shí)施方案中，肽包含氨基酸序列SEQIDNO:16且顯示相對于GIP受體，對人類GLP-1受體至少100倍的選擇性。在示例性實(shí)施方案中，肽包含氨基酸序列SEQIDNO:17。本公開進(jìn)一步提供包含與本文所公開的肽之一的氨基酸序列高度類似的氨基酸序列的變體肽。在示例性實(shí)施方案中，本公開的變體肽包含與SEQIDNO:12-17中任一個(gè)的肽的氨基酸序列的氨基酸1-29至少80％、85％、90％或95％一致的氨基酸序列，其中該變體肽保留母體肽對GLP-1受體、胰高血糖素受體及GIP受體的活性(例如顯示相對于GIP受體，對人類GLP-1受體至少100倍的選擇性)，并任選地，至少1％的GLP-1效力；或其中該肽對GIP受體的EC50與其對GLP-1受體的EC50的不同小于100倍)。在示例性實(shí)施方案中，本公開的變體肽顯示對人類GLP-1受體的選擇性為對GIP受體的選擇性的至少100倍。在示例性實(shí)施方案中，本公開的變體肽包含基于本公開的肽的氨基酸序列的氨基酸序列，但在一或多個(gè)氨基酸位置上不同，所述氨基酸位置包括但不限于位置1、位置2、位置3、位置7、位置10、位置12、位置15、位置16、位置17、位置18、位置20、位置21、位置23、位置24、位置27、位置28、位置29。在示例性方面中，變體肽可包含相對于母體肽的保守性取代，可包含本文所述的任何氨基酸修飾，或可包含恢復(fù)成在天然胰高血糖素序列(SEQIDNO:1)的該位置上存在的氨基酸的氨基酸修飾。在示例性方面中，本公開的變體肽包含基于本公開的肽的氨基酸序列的氨基酸序列，但以下列方式中一種或多種而不同：a)該變體肽包含?；被峄蛲榛被幔籦)?；被峄蛲榛被岜惶烊灰雀哐撬?SEQIDNO:1)在該位置上的相應(yīng)氨基酸或天然氨基酸的保守性取代替代，并任選地在不同位置引入新的?；蛲榛被幔籧)該變體肽包含共價(jià)連接于親水性部分的氨基酸；d)共價(jià)連接于親水性部分的氨基酸被天然胰高血糖素(SEQIDNO:1)在該位置上的相應(yīng)氨基酸替代，并任選地在不同位置引入新的共價(jià)連接于親水性部分的氨基酸；e)該變體肽的C端氨基酸包含替代C端α羧酸酯的C端酰胺；f)位置1至29中任一位置上的氨基酸被天然胰高血糖素(SEQIDNO:1)在該位置上的相應(yīng)氨基酸替代；g)或其任何組合。關(guān)于任何前述變體肽，在示例性實(shí)施方案中，該變體肽包含與位置16、17、21、24、29、C端延伸內(nèi)的位置或C端上的氨基酸共價(jià)連接的親水性部分。在示例性方面中，變體肽包含與親水性部分共價(jià)連接的Cys、Lys、Orn、高半胱氨酸及Ac-Phe，任選地，其中該Cys、Lys、Orn、高半胱氨酸或Ac-Phe位于該變體肽的位置16、17、21、24、29、C端延伸內(nèi)的位置或C端。在示例性方面中，親水性部分為聚乙二醇。在示例性方面中，變體肽任選地在位置10上包含?；蛲榛被?。在示例性方面中，變體肽包含含C8至C20烷基鏈、C12至C18烷基鏈或C14或C16烷基鏈的?；蛲榛被?。在示例性方面中，變體肽包含為式I、式II或式III的酰化或烷基化氨基酸的?；蛲榛被?，任選地，其中該式I的氨基酸為Lys。在示例性方面中，本公開的變體肽包含?；蛲榛被幔渲絮；蛲榛ㄟ^間隔子共價(jià)連接于氨基酸，任選地，其中該間隔子為氨基酸或二肽。在示例性實(shí)施方案中，間隔子包含一個(gè)或兩個(gè)酸性殘基。在任何前述示例性實(shí)施方案中，任何本公開的肽或變體肽顯示(對胰高血糖素受體的EC50)/(對GLP-1受體的EC50)為約20或20以下(例如20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、0.5、0.25、0.10、0.05、0.025、0.01、0.001)。在任何前述示例性實(shí)施方案中，任何本公開的肽或變體肽顯示(對胰高血糖素受體的EC50)/(對GLP-1受體的EC50)大于20(例如21、25、30、40、50、60、70、80、90、100、250、500、750、1000或1000以上)。在任何前述示例性實(shí)施方案中，任何本公開的肽或變體肽顯示的對GLP-1受體的EC50為對胰高血糖素受體的EC50的兩倍至十倍(例如3、4、5、6、7、8、9倍)。排除在示例性實(shí)施方案中，以下肽中任一個(gè)從本文所述的胰高血糖素類似物排除，不過包含一個(gè)或多個(gè)如本文所述的對其的進(jìn)一步修飾且顯示所需GLP-1或協(xié)同激動(dòng)劑活性的任何以下肽、藥物組合物、試劑盒及使用這樣的化合物的治療方法可包括在本發(fā)明中：具有[Arg12]取代且具有C端酰胺的SEQIDNO:1的肽；具有[Arg12,Lys20]取代且具有C端酰胺的SEQIDNO:1的肽；具有[Arg12,Lys24]取代且具有C端酰胺的SEQIDNO:1的肽；具有[Arg12,Lys29]取代且具有C端酰胺的SEQIDNO:1的肽；具有[Glu9]取代的SEQIDNO:1的肽；缺失His1、具有[GIu9,Glu16,Lys29]取代和C端酰胺的SEQIDNO:1的肽；具有[Glu9,Glu16,Lys29]取代且具有C端酰胺的SEQIDNO:1的肽；具有通過內(nèi)酰胺橋鍵連接的[Lys13,Glu17]取代且具有C端酰胺的SEQIDNO:1的肽；具有通過內(nèi)酰胺橋鍵連接的[Lys17,Glu21]取代且具有C端酰胺的SEQIDNO:1的肽；缺失His1、具有通過內(nèi)酰胺橋鍵連接的[Glu20,Lys24]取代的SEQIDNO:1的肽。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物不為任何以下所公開的任何肽：于2009年2月19日提交且于2010年8月26日公開為WO2010/096052的國際專利申請第PCT/US2009/034448號；于2009年12月18日提交且于2010年8月26日公開為WO2010/096142的國際專利申請第PCT/US2009/068678號；于2009年6月16日提交且于2009年12月23日公開為WO2009/155258的國際專利申請第PCT/US2009/047438號；于2008年2月13日申請且于2008年8月21日公開為WO2008/101017的國際專利申請第PCT/US2008/053857號；于2010年12月9日提交的國際專利申請第PCT/US2010/059724號；于2009年6月16日提交且于2010年1月28日公開為WO2010/011439的國際專利申請第PCT/US2009/047447號；于2010年6月16日提交且于2010年12月23日公開為WO2010/148089的國際專利申請第PCT/US2010/38825號；于2011年1月26日提交國際專利申請第PCT/US2011/022608號；以及于2010年12月22日提交的美國臨時(shí)申請第61/426,285號；這些各自以整體援引方式并入本文。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物不包括位置29之后與C端連接的序列KRNRNNIA的全部或一部分，例如KRNR。制備肽的方法本公開的胰高血糖素類似物可通過本領(lǐng)域已知的方法獲得。從頭合成肽的適合方法描述于：例如Chan等人，F(xiàn)mocSolidPhasePeptideSynthesis,OxfordUniversityPress,Oxford,UnitedKingdom,2005；PeptideandProteinDrugAnalysis,Reid,R.編，MarcelDekker,Inc.,2000；EpitopeMapping,Westwood等人編，OxfordUniversityPress,Oxford,UnitedKingdom,2000；以及美國專利第5,449,752號。此外，在本公開的類似物不包含任何非編碼或非天然氨基酸的情況下，胰高血糖素類似物可使用編碼該類似物的氨基酸序列的核酸、使用標(biāo)準(zhǔn)重組方法而重組制造。參見例如Sambrook等人，MolecularCloning：ALaboratoryManual.第3版，ColdSpringHarborPress,ColdSpringHarbor,NY2001；以及Ausubel等人，CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingAssociatesandJohnWiley&Sons,NY,1994。在一些實(shí)施方案中，本公開的胰高血糖素類似物被分離。在一些實(shí)施方案中，本公開的胰高血糖素類似物被純化。應(yīng)認(rèn)識到，“純度”為相對術(shù)語，且不必解釋為絕對純度或絕對富集或絕對選擇。在一些方面中，純度為至少或約50％，為至少或約60％，為至少或約70％，為至少或約80％，為至少或約90％(例如至少約91％或約91％，至少約92％或約92％，至少約93％或約93％，至少約94％或約94％，至少約95％或約95％，至少約96％或約96％，至少約97％或約97％，至少約98％或約98％，至少約99％或約99％，或?yàn)榧s100％。在一些實(shí)施方案中，本文所述的肽是由公司商業(yè)合成的，所述公司例如Synpep(Dublin,CA)、PeptideTechnologiesCorp.(Gaithersburg,MD)以及MultiplePeptideSystems(SanDiego,CA)。為此，所述肽可為合成、重組、分離和/或純化的。結(jié)合物本發(fā)明進(jìn)一步提供包含與異源部分結(jié)合的本文所述的一種或多種胰高血糖素類似物的結(jié)合物，其中該結(jié)合物與天然胰高血糖素相比，顯示對GLP-1受體的活性增強(qiáng)，且顯示對人類GLP-1受體的選擇性為對GIP受體的選擇性的至少100倍。如本文所用，術(shù)語“異源部分”與術(shù)語“結(jié)合物部分”同義且是指與本文所述的胰高血糖素類似物不同的任何分子(化學(xué)或生物化學(xué)、天然存在或非編碼)?？膳c本文所述的任何類似物連接的示例性結(jié)合物部分包括但不限于異源肽或多肽(包括例如血漿蛋白質(zhì))、靶向劑、免疫球蛋白或其部分(例如可變區(qū)、CDR或Fc區(qū))、診斷標(biāo)記(諸如放射性同位素、熒光團(tuán)或酶標(biāo)記)、聚合物(包括水溶性聚合物)或其他治療劑或診斷劑。在一些實(shí)施方案中，提供包含本發(fā)明的類似物和血漿蛋白的結(jié)合物，其中血漿蛋白選自白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖維蛋白原及球蛋白。在一些實(shí)施方案中，結(jié)合物的血漿蛋白部分為白蛋白或轉(zhuǎn)鐵蛋白。在一些實(shí)施方案中，結(jié)合物包含一種或多種本文所述的胰高血糖素類似物及以下的一種或多種：肽(其不同于本文所述的胰高血糖素和/或GLP-1受體活性胰高血糖素類似物)、多肽、核酸分子、抗體或其片段、聚合物、量子點(diǎn)、小分子、毒素、診斷劑、碳水化合物、氨基酸。在一些實(shí)施方案中，異源部分為不同于本文所述的胰高血糖素和/或GLP-1受體活性類似物的肽，并且結(jié)合物為融合肽或嵌合肽。在一些實(shí)施方案中，異源部分為1-21個(gè)氨基酸的肽延伸。在特定實(shí)施方案中，該延伸連接于胰高血糖素類似物的C端，例如連接于位置29上的氨基酸。在一些特定方面中，該延伸為單個(gè)氨基酸或二肽。在特定實(shí)施方案中，該延伸包含選自以下的氨基酸：帶電氨基酸(例如帶負(fù)電氨基酸(例如Glu)、帶正電氨基酸)、包含親水性部分的氨基酸。在一些方面中，該延伸為Gly、Glu、Cys、Gly-Gly、Gly-Glu。在一些實(shí)施方案中，該延伸包含氨基酸序列SEQIDNO:9(GPSSGAPPPS)、SEQIDNO:10(GGPSSGAPPPS)、SEQIDNO:8(KRNRNNIA)或SEQIDNO:11(KRNR)。在特定實(shí)施方案中，該氨基酸序列通過胰高血糖素類似物的C端氨基酸，例如位置29上的氨基酸連接。在一些實(shí)施方案中，氨基酸序列SEQIDNO:13-16通過肽鍵結(jié)合于胰高血糖素類似物的氨基酸29。在一些特定實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物位置29上的氨基酸為Gly且該Gly融合于氨基酸序列SEQIDNO:8-11之一。在一些實(shí)施方案中，異源部分為聚合物。在一些實(shí)施方案中，聚合物選自：聚酰胺、聚碳酸酯、聚亞烷基及其衍生物(包括聚亞烷基二醇、聚環(huán)氧烷、聚對苯二甲酸亞烷基酯)、丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的聚合物(包括聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸異丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸異癸酯)、聚(甲基丙烯酸月桂酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸異丙酯)、聚(丙烯酸異丁酯)及聚(丙烯酸十八烷酯))、聚乙烯基聚合物(包括聚乙烯醇、聚乙烯醚、聚乙烯酯、聚乙烯基鹵化物、聚(乙酸乙烯酯)及聚乙烯基吡咯烷酮)、聚乙交酯、聚硅氧烷、聚氨酯及其共聚物、纖維素(包括烷基纖維素、羥烷基纖維素、纖維素醚、纖維素酯、硝化纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丁基甲基纖維素、乙酸纖維素、丙酸纖維素、乙酸丁酸纖維素、乙酸鄰苯二甲酸纖維素、羧乙基纖維素、三乙酸纖維素及硫酸纖維素鈉鹽)、聚丙烯、聚亞乙基(包括聚(乙二醇)、聚(環(huán)氧乙烷)及聚(對苯二甲酸亞乙酯))及聚苯乙烯。在一些方面中，聚合物為可生物降解聚合物，包括合成可生物降解聚合物(例如乳酸和乙醇酸的聚合物、聚酸酐、聚(原)酯、聚氨酯、聚(丁酸)、聚(戊酸)及聚(丙交酯-共己內(nèi)酯))，及天然可生物降解聚合物(例如藻酸鹽和其他多醣，包括葡聚糖和纖維素、膠原蛋白、其化學(xué)衍生物(取代、添加化學(xué)基團(tuán)(例如烷基、亞烷基)、羥基化、氧化及本領(lǐng)域技術(shù)人員常規(guī)進(jìn)行的其他修飾)、白蛋白及其他親水性蛋白(例如玉米蛋白和其他醇溶谷蛋白及疏水性蛋白))，以及它們的任何共聚物或混合物。一般而言，這些物質(zhì)通過酶水解或體內(nèi)暴露于水、通過表面或整體侵蝕而降解。在一些方面中，聚合物為生物粘性聚合物，諸如由H.S.Sawhney,C.P.Pathak和J.A.Hubbell于Macromolecules,1993,26,581-587(其所的教示并入本文中)中描述的生物侵蝕性水凝膠、聚透明質(zhì)酸、酪蛋白、明膠、明膠蛋白、聚酸酐、聚丙烯酸、藻酸鹽、幾丁聚醣、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸異丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸異癸酯)、聚(甲基丙烯酸月桂酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸異丙酯)、聚(丙烯酸異丁酯)及聚(丙烯酸十八烷酯)。在一些實(shí)施方案中，聚合物為水溶性聚合物或親水性聚合物。親水性聚合物在本文中進(jìn)一步描述于“親水性部分”。適合的水溶性聚合物在本領(lǐng)域已知，并且包括例如聚乙烯基吡咯烷酮、羥丙基纖維素(HPC；Klucel)、羥丙基甲基纖維素(HPMC；Methocel)、硝化纖維素、羥丙基乙基纖維素、羥丙基丁基纖維素、羥丙基戊基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素(Ethocel)、羥乙基纖維素、各種烷基纖維素及羥烷基纖維素、各種纖維素醚、乙酸纖維素、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣、乙酸乙烯酯/巴豆酸共聚物、聚甲基丙烯酸羥烷基酯、甲基丙烯酸羥甲酯、甲基丙烯酸共聚物、聚甲基丙烯酸、聚甲基丙烯酸甲酯、順丁烯二酸酐/甲基乙烯基醚共聚物、聚乙烯醇、鈉和鈣聚丙烯酸、聚丙烯酸、酸性羧基聚合物、羧基聚亞甲基、羧基乙烯基聚合物、聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物、聚甲基乙烯基醚共-順丁烯二酸酐、羧甲基酰胺、甲基丙烯酸鉀二乙烯基苯共聚物、聚氧乙二醇、聚環(huán)氧乙烷及其衍生物、鹽和組合。在特定實(shí)施方案中，聚合物為聚烷二醇，包括例如聚乙二醇(PEG)。在一些實(shí)施方案中，異源部分為碳水化合物。在一些實(shí)施方案中，碳水化合物為單醣(例如葡萄糖、半乳糖、果糖)、二醣(例如蔗糖、乳糖、麥芽糖)、寡醣(例如棉籽糖、水蘇糖)、多醣(淀粉、淀粉酶、淀粉果膠、纖維素、幾丁質(zhì)、愈創(chuàng)聚葡糖、昆布糖、木聚糖、甘露聚糖、巖藻聚糖、半乳甘露聚糖。在一些實(shí)施方案中，異源部分為脂質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，脂質(zhì)為脂肪酸、二十碳烯酸、前列腺素、白三烯、血栓素、N-?；掖及?、甘油脂質(zhì)(例如單取代、二取代、三取代甘油)、甘油磷脂(例如磷脂酰膽固醇、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸)、神經(jīng)脂質(zhì)(例如神經(jīng)胺醇、神經(jīng)酰胺)、固醇脂質(zhì)(例如類固醇、膽固醇)、異戊烯醇脂質(zhì)、醣脂或聚酮、油、蠟、膽固醇、固醇、脂溶性維生素、單甘油酯、二甘油酯、三甘油酯、磷脂。在一些實(shí)施方案中，異源部分通過非共價(jià)或共價(jià)結(jié)合而連接于本公開的類似物。在某些方面中，異源部分通過連接子而連接于本公開的類似物。連接可通過共價(jià)化學(xué)鍵、物理力(諸如靜電、氫、離子、范德華)或者疏水性或親水性相互作用來實(shí)現(xiàn)?？墒褂枚喾N非共價(jià)偶合系統(tǒng)，包括生物素-抗生物素蛋白、配體/受體、酶/底物、核酸/核酸結(jié)合蛋白、脂質(zhì)/脂質(zhì)結(jié)合蛋白、細(xì)胞粘附分子伴侶(partener)；或其彼此具有親和力的任何結(jié)合伴侶或片段。在一些實(shí)施方案中，通過使類似物的靶標(biāo)氨基酸殘基與能夠與這些靶標(biāo)氨基酸的所選側(cè)鏈或N端或C端殘基反應(yīng)的有機(jī)衍生劑反應(yīng)來使胰高血糖素類似物通過直接共價(jià)鍵聯(lián)而連接于結(jié)合物部分。類似物或結(jié)合物部分上的反應(yīng)性基團(tuán)包括例如醛、氨基、酯、硫醇、α-鹵代乙?；㈨樁∠┒啺坊螂禄?。衍生劑包括例如順丁烯二酰亞胺基苯甲?；腔《啺孵?通過半胱氨酸殘基結(jié)合)、N-羥基丁二酰亞胺(通過賴氨酸殘基)、戊二醛、丁二酸酐或本領(lǐng)域已知的其他試劑?；蛘撸Y(jié)合物部分可歐諾個(gè)過中間載體，諸如多醣或多肽載體間接連接于類似物。多醣載體的實(shí)例包括氨基葡聚糖。適合的多肽載體的實(shí)例包括聚賴氨酸、聚谷氨酸、聚天冬氨酸、其共聚物，以及這些氨基酸與其他(例如絲氨酸)的混合聚合物，從而向所得的負(fù)載載體賦予所需的溶解度性質(zhì)。最通常使半胱氨酰基殘基與α-鹵代乙酸鹽(及相應(yīng)的胺)(諸如氯乙酸、氯乙酰胺)反應(yīng)以得到羧甲基或羧酰氨基甲基衍生物。半胱氨?；餐ㄟ^與溴三氟丙酮、α-溴-β-(5-咪唑基)丙酸、氯乙?；姿狨ァ-烷基順丁二酰亞胺、3-硝基-2-吡啶基二硫化物、甲基2-吡啶基二硫化物、對氯汞基苯甲酸酯、2-氯汞基-4-硝基苯酚或氯-7-硝基苯并-2-氧雜-1,3-二唑反應(yīng)而衍生化。組氨酰基殘基通過與二乙基焦碳酸酯在pH5.5-7.0下反應(yīng)而衍生化，因?yàn)樵撛噭M氨酰基側(cè)鏈相對具特異性。對溴苯甲酰甲基溴也是可用的；該反應(yīng)優(yōu)選在0.1M二甲胂酸鈉中在pH6.0下進(jìn)行。賴氨?；桶被藲埢c丁二酸酐或其他羧酸酐反應(yīng)。用這些試劑衍生化具有逆轉(zhuǎn)賴氨?；鶜埢姾傻淖饔?。用于衍生化含α-氨基的殘基的其他適合的試劑包括酰亞胺酯，諸如甲基吡啶亞胺甲酯、磷酸吡哆醛、吡哆醛、氯硼氫化物、三硝基苯磺酸、O-甲基異脲、2,4-戊二酮及轉(zhuǎn)胺酶催化的與乙醛酸酯的反應(yīng)。精氨酰基殘基通過與一種或多種常規(guī)試劑反應(yīng)而修飾，所述試劑有苯基乙二醛、2,3-丁二酮、1,2-環(huán)己二酮及茚三酮。精氨酸殘基的衍生化由于胍官能團(tuán)的高pKa而需要反應(yīng)在堿性條件下進(jìn)行。此外，這些試劑可與賴氨酸的基團(tuán)以及精氨酸ε-氨基反應(yīng)?？蛇M(jìn)行對酪氨?；鶜埢奶囟ㄐ揎棧渲刑貏e關(guān)注通過與芳族重氮化合物或四硝基甲烷反應(yīng)而將光譜標(biāo)記引入酪氨?；鶜埢?。最通常使用N-乙酰基咪唑和四硝基甲烷來分別形成O-乙?；野滨；镔|(zhì)和3-硝基衍生物。羧基側(cè)基(天冬氨?；蚬劝滨；?通過與碳二亞胺(R-N＝C＝N-R')反應(yīng)來選擇性修飾，其中R與R'為不同的烷基，諸如1-環(huán)己基-3-(2-嗎啉基-4-乙基)碳二亞胺或1-乙基-3-(4-氮陽離子-4,4-二甲基戊基)碳二亞胺。此外，天冬氨酰基和谷氨?；鶜埢ㄟ^與銨離子反應(yīng)而轉(zhuǎn)化為天冬酰胺酰基和谷氨酰胺?；鶜埢?。其他修飾包括脯氨酸和賴氨酸的羥基化；絲氨酰基或蘇氨?；鶜埢牧u基的磷酸化；賴氨酸、精氨酸和組氨酸側(cè)鏈的α-氨基的甲基化(T.E.Creighton,Proteins：StructureandMolecularProperties,W.H.Freeman&Co.,SanFrancisco，第79-86頁(1983))；天冬酰胺或谷氨酰胺的去酰胺化；N端胺的乙?；?；和/或C端羧酸基團(tuán)的酰胺化或酯化。另一類型的共價(jià)修飾包括糖苷與類似物的化學(xué)或酶結(jié)合。糖可連接于(a)精氨酸和組氨酸，(b)游離羧基，(c)游離巰基，諸如半胱氨酸的游離巰基，(d)游離羥基，諸如絲氨酸、蘇氨酸或羥脯氨酸的游離羥基，(e)芳族殘基，諸如酪氨酸或色氨酸的芳族殘基，或(f)谷氨酰胺的酰胺基。這些方法描述于1987年9月11日公開的WO87/05330以及Aplin和Wriston,CRCCrit.Rev.Biochem.，第259-306頁(1981)中。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物通過胰高血糖素類似物的氨基酸的側(cè)鏈與異源部分之間的共價(jià)鍵聯(lián)而結(jié)合于異源部分。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物通過位置16、17、21、24或29、C端延伸內(nèi)的位置或C端氨基酸或這些位置的組合之上的氨基酸的側(cè)鏈而結(jié)合于異源部分。在一些方面中，共價(jià)連接于異源部分的氨基酸(例如包含異源部分的氨基酸)為Cys、Lys、Orn、homo-Cys或Ac-Phe，且該氨基酸的側(cè)鏈共價(jià)鍵結(jié)于異源部分。在一些實(shí)施方案中，結(jié)合物包含連接胰高血糖素類似物與異源部分的連接子。在一些方面中，連接子包含1至約60個(gè)原子、或1至30個(gè)原子或更長、2至5個(gè)原子、2至10個(gè)原子、5至10個(gè)原子或10至20個(gè)原子長的鏈。在一些實(shí)施方案中，鏈原子全部為碳原子。在一些實(shí)施方案中，連接子的主鏈中的鏈原子選自C、O、N及S。鏈原子和連接子可根據(jù)其預(yù)期溶解性(親水性)進(jìn)行選擇以提供更可溶的結(jié)合物。在一些實(shí)施方案中，連接子提供可由靶標(biāo)組織或器官或細(xì)胞中存在的酶或其他催化劑或水解條件裂解的官能團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，連接子的長度足夠長以減少位阻的可能。若連接子為共價(jià)鍵或肽鍵且結(jié)合物為多肽，則整個(gè)結(jié)合物可為融合蛋白。這樣的肽基連接子可為任何長度。示例性連接子長約1至50個(gè)氨基酸，長5至50個(gè)、3至5個(gè)、5至10個(gè)、5至15個(gè)或10至30個(gè)氨基酸。這樣的融合蛋白可替代地通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的重組基因工程方法制造。結(jié)合物：Fc融合體如上所述，在一些實(shí)施方案中，使類似物結(jié)合，例如融合于免疫球蛋白或其部分(例如可變區(qū)、CDR或Fc區(qū))。已知類型的免疫球蛋白(Ig)包括IgG、IgA、IgE、IgD或IgM。Fc區(qū)為Ig重鏈的C端區(qū)，其負(fù)責(zé)結(jié)合執(zhí)行諸如再循環(huán)(產(chǎn)生延長的半衰期)、抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)及補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)的活性的Fc受體。舉例而言，根據(jù)一些定義，人類IgG重鏈Fc區(qū)自Cys226伸展至重鏈的C端?！般q鏈區(qū)”通常自人類IgG1的Glu216延伸至Pro230(其他IgG同型的鉸鏈區(qū)可通過對準(zhǔn)半胱氨酸結(jié)合所涉及的半胱氨酸而與IgG1序列比對)。IgG的Fc區(qū)包括兩個(gè)恒定域CH2和CH3。人類IgGFc區(qū)的CH2域通常自氨基酸231延伸至氨基酸341。人類IgGFc區(qū)的CH3域通常自氨基酸342延伸至447。提及免疫球蛋白或免疫球蛋白片段或區(qū)的氨基酸編號均基于Kabat等人1991,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,U.S.DepartmentofPublicHealth,Bethesda,Md。在相關(guān)實(shí)施方案中，F(xiàn)c區(qū)可包含一個(gè)或多個(gè)來自免疫球蛋白重鏈的除CH1以外的天然或經(jīng)修飾的恒定區(qū)，例如IgG和IgA的CH2和CH3區(qū)，或IgE的CH3和CH4區(qū)。適合的結(jié)合物部分包括免疫球蛋白序列中包括FcRn結(jié)合位點(diǎn)的部分。補(bǔ)救受體FcRn負(fù)責(zé)免疫球蛋白的再循環(huán)并使其返回至血液循環(huán)中。IgG的Fc部分中結(jié)合FcRn受體的區(qū)已基于X射線結(jié)晶學(xué)進(jìn)行了描述(Burmeister等人1994,Nature372：379)。Fc與FcRn的主要接觸區(qū)在CH2與CH3的接點(diǎn)附近。Fc-FcRn接觸全部在單一Ig重鏈內(nèi)。主要接觸位點(diǎn)包括CH2域的氨基酸殘基248、250-257、272、285、288、290-291、308-311和314以及CH3域的氨基酸殘基385-387、428和433-436。一些結(jié)合物部分可包括或可不包括FcγR結(jié)合位點(diǎn)。FcγR負(fù)責(zé)ADCC和CDC。Fc區(qū)內(nèi)與FcγR直接接觸的位置的實(shí)例為氨基酸234-239(下鉸鏈區(qū))、氨基酸265-269(B/C環(huán))、氨基酸297-299(C'/E環(huán))及氨基酸327-332(F/G)環(huán)(Sondermann等人，Nature406：267-273,2000)。還已發(fā)現(xiàn)IgE的下鉸鏈區(qū)涉及FcRI結(jié)合(Henry等人，Biochemistry36,15568-15578,1997)。IgA受體結(jié)合所涉及的殘基描述于Lewis等人(Jlmmunol.175：6694-701,2005)。IgE受體結(jié)合所涉及的氨基酸殘基描述于Sayers等人(JBiolChem.279(34)：35320-5,2004)?？蓪γ庖咔虻鞍椎腇c區(qū)進(jìn)行氨基酸修飾。這樣的變異型Fc區(qū)包含F(xiàn)c區(qū)CH3域(殘基342-447)中至少一個(gè)氨基酸修飾和/或Fc區(qū)CH2域(殘基231-341)中至少一個(gè)氨基酸修飾。確信使對FcRn的親和力增加的突變包括T256A、T307A、E380A及N434A(Shields等人2001,J.Biol.Chem.276：6591)。其他突變可減弱Fc區(qū)與FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIB和/或FcγRIIIA的結(jié)合而不顯著減弱對FcRn的親和力。舉例而言，F(xiàn)c區(qū)位置297上的Asn取代為Ala或另一氨基酸移除了高度保守的N-糖基化位點(diǎn)且可產(chǎn)生降低的免疫原性并同時(shí)延長Fc區(qū)的半衰期，以及減弱與FcγR的結(jié)合(Routledge等人1995,Transplantation60：847；Friend等人1999,Transplantation68：1632；Shields等人1995,J.Biol.Chem.276：6591)。已進(jìn)行使與FcγR的結(jié)合減弱的IgG1位置233-236上的氨基酸修飾(Ward和Ghetie1995,TherapeuticImmunology2：77以及Armour等人1999,Eur.J.Immunol.29：2613)。一些示例性氨基酸取代描述于美國專利7,355,008和7,381,408，所述專利各自以整體援引方式并入本文。結(jié)合物：親水性部分本文所述的胰高血糖素類似物可經(jīng)進(jìn)一步修飾以改進(jìn)其在水溶液中于生理pH值下的溶解度和穩(wěn)定性，同時(shí)保留相對于天然胰高血糖素的高生物活性?？稍谟糜谑沟鞍着c活化的聚合物分子反應(yīng)的任何適合條件下將諸如PEG基團(tuán)的親水性部分連接于類似物?？墒褂帽绢I(lǐng)域已知的任何方式，包括通過?；?、還原烷基化、邁克爾加成、硫醇烷基化或通過PEG部分上的反應(yīng)性基團(tuán)(例如醛、氨基、酯、硫醇、α-鹵代乙?；㈨樁∠┒啺坊螂禄?與靶標(biāo)化合物上的反應(yīng)性基團(tuán)(例如醛、氨基、酯、硫醇、α-鹵代乙?；㈨樁∠┒啺坊螂禄?的其他化學(xué)選擇性結(jié)合/連接方法。可用于連接水溶性聚合物與一種或多種蛋白的活化基團(tuán)包括但不限于砜、順丁烯二酰亞胺、巰基、硫醇、三氟甲磺酸酯、三氟乙磺酸酯、氮雜環(huán)丙烷、環(huán)氧乙烷、5-吡啶基及α-鹵化?；?例如α-碘乙酸、α-溴乙酸、α-氯乙酸)。若通過還原烷基化而連接于類似物，則所選聚合物應(yīng)具有單一還原性醛以使聚合度得到控制。參見例如Kinstler等人，Adv.Drug.DeliveryRev.54：477-485(2002)；Roberts等人，Adv.DrugDeliveryRev.54：459-476(2002)；以及Zalipsky等人，Adv.DrugDeliveryRev.16：157-182(1995)。在特定方面中，類似物中具有硫醇的氨基酸殘基經(jīng)諸如PEG的親水性部分修飾。在一些實(shí)施方案中，硫醇在邁克爾加成反應(yīng)中經(jīng)順丁烯二酰亞胺活化的PEG修飾以產(chǎn)生包含以下所示的硫醚鍵聯(lián)的聚乙二醇化類似物：在一些實(shí)施方案中，硫醇在親核取代反應(yīng)中經(jīng)鹵代乙?；罨腜EG修飾以產(chǎn)生包含以下所示的硫醚鍵聯(lián)的聚乙二醇化類似物：適合親水性部分包括聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、聚氧乙基化多元醇(例如POG)、聚氧乙基化山梨糖醇、聚氧乙基化葡萄糖、聚氧乙基化甘油(POG)、聚氧亞烷基、聚乙二醇丙醛、乙二醇/丙二醇的共聚物、單甲氧基-聚乙二醇、單-(C1-C10)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇、羧甲基纖維素、聚縮醛、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯基吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊環(huán)、聚-1,3,6-三氧雜環(huán)己烷、乙烯/順丁烯二酸酐共聚物、聚(β-氨基酸)(均聚物或無規(guī)共聚物)、聚(正乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物(PPG)及其他聚環(huán)氧烷、聚環(huán)氧丙烷/環(huán)氧乙烷共聚物、結(jié)腸酸或其他多醣聚合物、聚蔗糖(Ficoll)或葡聚糖及其混合物。葡聚糖為葡萄糖亞單元的多醣聚合物，主要由α1-6鍵聯(lián)連接。葡聚糖可以許多分子量范圍獲得，例如約1kD至約100kD，或約5、10、15或20kD至約20、30、40、50、60、70、80或90kD。涵蓋了線性或支化聚合物。所得的結(jié)合物制劑可基本上為單分散性或多分散性的，并且每個(gè)類似物可具有約0.5、0.7、1、1.2、1.5或2個(gè)聚合物部分。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物通過胰高血糖素類似物的氨基酸的側(cè)鏈與親水性部分之間的共價(jià)鍵聯(lián)而結(jié)合于親水性部分。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物通過位置16、17、21、24或29、C端延伸內(nèi)的位置或C端氨基酸或這些位置的組合之上的氨基酸的側(cè)鏈而結(jié)合于親水性部分。在一些方面中，共價(jià)連接于親水性部分的氨基酸(例如包含親水性部分的氨基酸)為Cys、Lys、Orn、homo-Cys或Ac-Phe，且該氨基酸的側(cè)鏈共價(jià)鍵結(jié)于親水性部分(例如PEG)。結(jié)合物：rPEG在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的結(jié)合物包含融合于能夠形成與化學(xué)PEG類似的延伸構(gòu)形的輔助類似物(例如重組PEG(rPEG)分子)的具有胰高血糖素和/或GLP-1激動(dòng)劑活性的類似物，所述輔助類似物例如國際專利申請公開第WO2009/023270號和美國專利申請公開第US20080286808號中所述的那些。在一些方面中，rPEG分子為包含甘氨酸、絲氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸或脯氨酸中一種或多種的多肽。在一些方面中，rPEG為均聚物，例如聚甘氨酸、聚絲氨酸、聚谷氨酸、聚天冬氨酸、聚丙氨酸或聚脯氨酸。在其他實(shí)施方案中，rPEG包含兩種類型的重復(fù)氨基酸，例如聚(Gly-Ser)、聚(Gly-Glu)、聚(Gly-Ala)、聚(Gly-Asp)、聚(Gly-Pro)、聚(Ser-Glu)等。在一些方面中，rPEG包含三種不同類型的氨基酸，例如聚(Gly-Ser-Glu)。在特定方面中，rPEG使胰高血糖素和/或GLP-1激動(dòng)劑類似物的半衰期增加。在一些方面中，rPEG包含凈正電荷或凈負(fù)電荷。在一些方面中，rPEG缺乏二級結(jié)構(gòu)。在一些實(shí)施方案中，rPEG的長度大于或等于10個(gè)氨基酸，且在一些實(shí)施方案中，長度為約40至約50個(gè)氨基酸。在一些方面中，輔助肽通過肽鍵或蛋白酶裂解位點(diǎn)而融合于本發(fā)明類似物的N端或C端，或插入本發(fā)明類似物的環(huán)中。在一些方面中，rPEG包含親和力標(biāo)簽或連接于大于5kDa的PEG。在一些實(shí)施方案中，rPEG使本發(fā)明的類似物具有增加的流體動(dòng)力學(xué)半徑、血清半衰期、蛋白酶抗性或溶解度，且在一些方面中使類似物具有降低的免疫原性。結(jié)合物：多聚物本發(fā)明進(jìn)一步提供本文所公開的類似物的多聚物或二聚物，包括均多聚物、雜多聚物或均二聚物或雜二聚物。兩個(gè)或更多個(gè)類似物可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)連接劑和程序而連接在一起。舉例而言，可通過使用雙官能硫醇交聯(lián)劑和雙官能胺交聯(lián)劑在兩個(gè)肽之間形成二聚物，尤其對于已被半胱氨酸、賴氨酸鳥氨酸、高半胱氨酸或乙?；奖彼釟埢〈念愃莆?。二聚物可為均二聚物或者可為雜二聚物。在某些實(shí)施方案中，連接兩個(gè)(或更多個(gè))類似物的連接子為PEG，例如5kDaPEG、20kDaPEG。在一些實(shí)施方案中，連接子為二硫鍵。舉例而言，二聚物的各單體可包含Cys殘基(例如末端或內(nèi)部定位的Cys)且各Cys殘基的硫原子參與二硫鍵的形成。在一些方面中，單體通過末端氨基酸(例如N端或C端)、通過內(nèi)部氨基酸或通過至少一個(gè)單體的末端氨基酸及至少一個(gè)其他單體的內(nèi)部氨基酸而連接。在特定方面中，單體不通過N端氨基酸連接。在一些方面中，多聚物的單體以“尾對尾”方向連接在一起，其中各單體的C端氨基酸連接在一起。藥物組合物、用途及試劑盒鹽在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物為鹽形式，例如藥學(xué)上可接受的鹽。如本文所用，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指化合物的保留母體化合物的生物活性且在生物學(xué)上或其他方面并不是不期望的鹽。這樣的鹽可在類似物的最終分離和純化期間原位制備，或通過使游離堿官能團(tuán)與適合酸反應(yīng)而單獨(dú)制備。本文所公開的許多化合物憑借存在氨基和/或羧基或與其類似的基團(tuán)而能夠形成酸和/或堿鹽。藥學(xué)上可接受的酸加成鹽可由無機(jī)和有機(jī)酸制備。典型的酸加成鹽包括但不限于乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、硫酸氫鈉、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡萄糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、反丁烯二酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽(乙磺酸鹽)、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲烷磺酸鹽、煙堿酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、磷酸鹽、谷氨酸鹽、碳酸氫鹽、對苯磺酸鹽以及十一烷酸鹽。衍生自無機(jī)酸的鹽包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及其類似物。衍生自有機(jī)酸的鹽包括乙酸、三氟乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、丙二酸、丁二酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、杏仁酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、對苯磺酸、水楊酸及其類似物?？捎糜谛纬伤帉W(xué)上可接受的酸加成鹽的酸的實(shí)例包括例如無機(jī)酸，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸及磷酸；以及有機(jī)酸，例如草酸、順丁烯二酸、丁二酸及檸檬酸。堿加成鹽也可在水楊酸來源的最終分離和純化期間原位制備或通過使含羧酸的部分與適合的堿(諸如藥學(xué)上可接受的金屬陽離子的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽)或與氨或有機(jī)伯、仲或叔胺反應(yīng)來制備。藥學(xué)上可接受的鹽包括但不限于基于堿金屬或堿土金屬的陽離子，諸如鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽和鋁鹽及其類似物，以及無毒季氨和胺陽離子，包括銨、四甲基銨、四乙基銨、甲基銨、二甲基銨、三甲基銨、三乙基銨、二乙基銨和乙基銨，等。適用于形成堿加成鹽的其他典型有機(jī)胺包括例如乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等。衍生自有機(jī)堿的鹽包括但不限于伯胺、仲胺和叔胺的鹽。此外，可用本發(fā)明的類似物以低碳烷基鹵化物(諸如甲基、乙基、丙基以及丁基的氯化物、溴化物和碘化物)；長鏈鹵化物(諸如癸基、月桂基、肉豆蔻基以及硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物)；芳烷基鹵化物(如芐基和苯乙基的溴化物)等形式來季銨化含堿性氮的基團(tuán)。由此獲得水或油可溶性或可分散性產(chǎn)物。制劑根據(jù)一些實(shí)施方案，提供了藥物組合物，其中該組合物包含本公開的胰高血糖素類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的載劑。藥物組合物可包含任何藥學(xué)上可接受的成分，包括例如酸化劑、添加劑、吸附劑、氣霧劑推進(jìn)劑、排氣劑、堿化劑、防結(jié)塊劑、抗凝劑、抗微生物防腐劑、抗氧化劑、殺菌劑、基質(zhì)、粘合劑、緩沖劑、螯合劑、包衣劑、著色劑、干燥劑、清潔劑、稀釋劑、消毒劑、崩解劑、分散劑、溶解增強(qiáng)劑、染料、潤膚劑、乳化劑、乳液穩(wěn)定劑、填充劑、成膜劑、增味劑、調(diào)味劑、流動(dòng)增強(qiáng)劑、膠凝劑、造粒劑、保濕劑、潤滑劑、黏膜粘附劑、軟膏基質(zhì)、軟膏、油性載體、有機(jī)基質(zhì)、糖錠基質(zhì)、顏料、塑化劑、拋光劑、防腐劑、掩蔽劑、皮膚滲透劑、增溶劑、溶劑、穩(wěn)定劑、栓劑基質(zhì)、表面活性劑、表面活性劑(surfactants)、懸浮劑、甜味劑、治療劑、增稠劑、張力劑、毒性劑、增粘劑、吸水劑、水可混溶共溶劑、水軟化劑或濕潤劑。在一些實(shí)施方案中，藥物組合物包含以下組分中任一種或其組合：阿拉伯膠、乙酰舒泛鉀(acesulfamepotassium)、檸檬酸乙酰三丁酯、檸檬酸乙酰三乙酯、瓊脂、白蛋白、酒精、脫水酒精、變性酒精、稀酒精、油桐酸、藻酸、脂族聚酯、氧化鋁、氫氧化鋁、硬脂酸鋁、淀粉果膠、α-直鏈淀粉、抗壞血酸、抗壞血酸棕櫚酸酯、阿斯巴甜、注射用抑菌水、膨潤土、膨潤土糊劑、氯芐烷銨、芐索氯銨、苯甲酸、芐醇、苯甲酸芐酯、溴硝丙二醇、丁基化羥基甲氧苯、丁基化羥基甲苯、羥苯甲酸丁酯、羥苯甲酸丁酯鈉、藻酸鈣、抗壞血酸鈣、碳酸鈣、環(huán)己氨磺酸鈣、無水磷酸氫鈣、脫水磷酸氫鈣、磷酸鈣、丙酸鈣、硅酸鈣、山梨酸鈣、硬脂酸鈣、硫酸鈣、半水合硫酸鈣、菜籽油、卡波姆、二氧化碳、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、β-胡蘿卜素、角叉菜膠、蓖麻油、氫化蓖麻油、陽離子乳化蠟、乙酸纖維素、乙酸鄰苯二甲酸纖維素、乙基纖維素、微晶纖維素、粉狀纖維素、硅酸化微晶纖維素、羧甲基纖維素鈉、鯨蠟硬脂醇、溴化十六基三甲銨、鯨蠟醇、氯己定、氯丁醇、氯甲酚、膽固醇、乙酸氯己定、葡萄糖酸氯己定、鹽酸氯己定、氯二氟乙烷(HCFC)、氯二氟甲烷、氯氟烴(CFC)氯苯氧基乙醇、氯二甲苯酚、玉米糖漿固體、無水檸檬酸、檸檬酸單水合物、可可脂、著色劑、玉米油、棉籽油、甲酚、間甲酚、鄰甲酚、對甲酚、交聯(lián)羧甲纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮、環(huán)己烷氨基磺酸、環(huán)糊精、葡萄糖結(jié)合劑、糊精、右旋糖、無水右旋糖、重氮烷基咪唑脲、鄰苯二甲酸二丁酯、癸二酸二丁酯、二乙醇胺、鄰苯二甲酸二乙酯、二氟乙烷(HFC)、二甲基-β-環(huán)糊精、環(huán)糊精型化合物(諸如)、二甲醚、鄰苯二甲酸二甲酯、依地酸二鉀、依地酸二鈉、磷酸氫二鈉、多庫酯鈣、多庫酯鉀、多庫酯鈉、沒食子酸十二烷酯、溴化十二烷基三甲基銨、依地酸鈣二鈉、依地酸、乙葡胺、乙醇、乙基纖維素、沒食子酸乙酯、月桂酸乙酯、乙基麥芽醇、油酸乙酯、羥苯甲酸乙酯、羥苯甲酸乙酯鉀、羥苯甲酸乙酯鈉、乙基香草素、果糖、液體果糖、研磨果糖、無熱原質(zhì)果糖、粉狀果糖、反丁烯二酸、明膠、葡萄糖、液體葡萄糖、飽和植物脂肪酸的甘油酯混合物、甘油、山崳酸甘油酯、單油酸甘油酯、單硬酯酸甘油酯、自乳化單硬酯酸甘油酯、棕櫚基硬脂酸甘油酯、甘氨酸、二醇、四氫呋喃聚乙二醇醚、瓜爾膠、七氟丙烷(HFC)、溴化十六烷基三甲基銨、高果糖糖漿、人類血清白蛋白、烴(HC)、稀鹽酸、II型氫化植物油、羥乙基纖維素、2-羥乙基-β-環(huán)糊精、羥丙基纖維素、低取代羥丙基纖維素、2-羥丙基-β-環(huán)糊精、羥丙基甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、咪唑烷脲、靛胭脂、離子交換劑、鐵氧化物、異丙醇、肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、等張生理鹽水、高嶺土、乳酸、乳糖醇、乳糖、羊毛脂、羊毛脂醇、無水羊毛脂、卵磷脂、硅酸鎂鋁、碳酸鎂、常態(tài)碳酸鎂、無水碳酸鎂、堿式碳酸鎂、氫氧化鎂、月桂基硫酸鎂、氧化鎂、硅酸鎂、硬脂酸鎂、三硅酸鎂、無水三硅酸鎂、蘋果酸、麥芽、麥芽醇、麥芽醇溶液、麥芽糊精、麥芽酚、麥芽糖、甘露糖醇、中鏈三甘油酯、葡甲胺、薄荷腦、甲基纖維素、甲基丙烯酸甲酯、油酸甲酯、羥苯甲酸甲酯、羥苯甲酸甲酯鉀、羥苯甲酸甲酯鈉、微晶纖維素和羧甲基纖維素鈉、礦物油、輕質(zhì)礦物油、礦物油和羊毛脂醇、油、橄欖油、單乙醇胺、蒙脫土、沒食子酸辛酯、油酸、棕櫚酸、石蠟、花生油、石蠟油、石蠟油和羊毛脂醇、醫(yī)藥用釉料、苯酚、液化苯酚、苯氧基乙醇、苯氧基丙醇、苯乙醇、乙酸苯汞、硼酸苯汞、硝酸苯汞、波拉克林、波拉克林鉀、帕洛沙姆、葡聚糖、聚乙二醇、聚環(huán)氧乙烷、聚丙烯酸酯、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚甲基丙烯酸酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、藻酸鉀、苯甲酸鉀、碳酸氫鉀、硫酸氫鉀、氯化鉀、檸檬酸鉀、無水檸檬酸鉀、磷酸氫鉀、偏亞硫酸氫鉀、磷酸二氫鉀、丙酸鉀、山梨酸鉀、普維酮、丙醇、丙酸、碳酸丙二酯、丙二醇、丙二醇海藻酸酯、沒食子酸丙酯、羥苯甲酸丙酯、羥苯甲酸丙酯鉀、羥苯甲酸丙酯鈉、硫酸魚精蛋白、菜籽油、林格氏溶液、糖精、糖精銨、糖精鈣、糖精鈉、葵花籽油、皂土、血清蛋白質(zhì)、芝麻油、膠態(tài)硅石、膠態(tài)二氧化硅、藻酸鈉、抗壞血酸鈉、苯甲酸鈉、碳酸氫鈉、亞硫酸氫鈉、氯化鈉、無水檸檬酸鈉、脫水檸檬酸鈉、氯化鈉、環(huán)己氨磺酸鈉、依地酸鈉、十二烷基硫酸鈉、月桂基硫酸鈉、偏亞硫酸氫鈉、磷酸鈉、磷酸氫鈉、磷酸二氫鈉、無水磷酸鈉、丙酸鈉、山梨酸鈉、淀粉乙醇酸鈉、硬脂基反丁烯二酸鈉、亞硫酸鈉、山梨酸、脫水山梨糖醇酯(脫水山梨糖醇脂肪酸酯)、山梨糖醇、70％山梨糖醇溶液、大豆油、鯨蠟、淀粉、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、預(yù)膠凝化淀粉、可滅菌玉米淀粉、硬脂酸、純化硬脂酸、硬脂醇、蔗糖、糖、可壓縮糖、調(diào)味糖、糖丸、轉(zhuǎn)化糖、蔗糖-轉(zhuǎn)化糖聚合物(Sugartab)、日落黃FCF、合成石蠟、滑石、酒石酸、酒石黃、四氟乙烷(HFC)、可可油、硫柳汞、二氧化鈦、α生育酚、生育酚乙酸酯、酸式琥珀酸α生育酚酯、β-生育酚、δ-生育酚、γ-生育酚、黃芪膠、三乙酰甘油、檸檬酸三丁酯、三乙醇胺、檸檬酸三乙酯、三甲基-β-環(huán)糊精、溴化三甲基十四烷銨、tris緩沖液、依地酸三鈉、香草素、I型氫化植物油、水、軟水、硬水、無二氧化碳水、無熱原質(zhì)水、注射用水、吸入用無菌水、注射用無菌水、灌洗用無菌水、蠟、陰離子乳化蠟、棕櫚蠟、陽離子乳化蠟、鯨蠟酯蠟、微晶蠟、非離子乳化蠟、栓劑蠟、白蠟、黃蠟、白石蠟油、羊毛脂、三仙膠、木糖醇、玉米蛋白、丙酸鋅、鋅鹽、硬脂酸鋅或以下文獻(xiàn)中的任何賦形劑：HandbookofPharmaceuticalExcipients，第三版，A.H.Kibbe(PharmaceuticalPress,London,UK,2000)，該文獻(xiàn)以整體援引方式并入本文。以整體援引方式并入本文的Remington'sPharmaceuticalSciences，第十六版，E.W.Martin(MackPublishingCo.,Easton,Pa.,1980)公開了用于配制藥學(xué)上可接受的組合物的各種組分及其已知的制備技術(shù)。除非任何常規(guī)藥劑與藥物組合物不兼容，否則涵蓋其在藥物組合物中的用途。補(bǔ)充活性成分也可并入組合物中。在一些實(shí)施方案中，前述組分可以以任何濃度(諸如至少A)存在于藥物組合物中，其中A為0.0001％w/v、0.001％w/v、0.01％w/v、0.1％w/v、1％w/v、2％w/v、5％w/v、10％w/v、20％w/v、30％w/v、40％w/v、50％w/v、60％w/v、70％w/v、80％w/v或90％w/v。在一些實(shí)施方案中，前述組分可以以任何濃度(諸如至多B)存在于藥物組合物中，其中B為90％w/v、80％w/v、70％w/v、60％w/v、50％w/v、40％w/v、30％w/v、20％w/v、10％w/v、5％w/v、2％w/v、1％w/v、0.1％w/v、0.001％w/v或0.0001％。在其他實(shí)施方案中，前述組分可以以任何濃度范圍(諸如約A至約B)存在于藥物組合物中。在一些實(shí)施方案中，A為0.0001％且B為90％。藥物組合物可經(jīng)配制以實(shí)現(xiàn)生理上相容的pH值。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)制劑和給藥途徑，藥物組合物的pH值可為至少5、至少5.5、至少6、至少6.5、至少7、至少7.5、至少8、至少8.5、至少9、至少9.5、至少10或至少10.5直至且包括pH11。在某些實(shí)施方案中，藥物組合物可包含緩沖劑以實(shí)現(xiàn)生理上相容的pH值。緩沖劑可包括能夠在所需pH值下緩沖的任何化合物，諸如磷酸鹽緩沖液(例如)、三乙醇胺、Tris、N,N-二羥乙基甘氨酸、TAPS、N-三(羥甲基)甲基甘氨酸、HEPES、TES、MOPS、PIPES、二甲胂酸鹽、MES等。在某些實(shí)施方案中，緩沖液的濃度為至少0.5mM、至少1mM、至少5mM、至少10mM、至少20mM、至少30mM、至少40mM、至少50mM、至少60mM、至少70mM、至少80mM、至少90mM、至少100mM、至少120mM、至少150mM或至少200mM。在一些實(shí)施方案中，緩沖液的濃度不超過300mM(例如至多200mM、至多100mM、至多90mM、至多80mM、至多70mM、至多60mM、至多50mM、至多40mM、至多30mM、至多20mM、至多10mM、至多5mM、至多1mM)。給藥途徑以下對給藥途徑的論述僅用于說明示例性實(shí)施方案且不應(yīng)以任何方式解釋為限制范圍。適于經(jīng)口給藥的制劑可由以下組成：(a)液體溶液，諸如溶解于諸如水、生理鹽水或橙汁的稀釋劑中的有效量的本發(fā)明類似物；(b)膠囊、藥囊、片劑、糖錠劑和錠劑，各自含有預(yù)定量的活性成分，形式為固體或顆粒；(c)散劑；(d)于適當(dāng)液體中的懸浮液；以及(e)適合的乳液。液體制劑可包括稀釋劑，諸如水和醇，例如乙醇、芐醇和聚乙二醇，其添加有或未添加藥學(xué)上可接受的表面活性劑。膠囊形式可為普通硬殼或軟殼明膠型，其含有例如表面活性劑、潤滑劑以及惰性填充劑，諸如乳糖、蔗糖、磷酸鈣和玉米淀粉。片劑形式可包括以下一種或多種：乳糖、蔗糖、甘露糖醇、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、藻酸、微晶纖維素、阿拉伯膠、明膠、瓜爾膠、膠態(tài)二氧化硅、交聯(lián)羧甲纖維素鈉、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅、硬脂酸及其他賦形劑、著色劑、稀釋劑、緩沖劑、崩解劑、濕潤劑、防腐劑、調(diào)味劑及其他藥理學(xué)上相容的賦形劑。糖錠劑形式可包含于調(diào)味劑(通常為蔗糖)及阿拉伯膠或黃芪膠中的本發(fā)明類似物，以及香錠劑(pastilles)包含于惰性基質(zhì)(諸如明膠和甘油)或蔗糖及阿拉伯膠、乳液、凝膠等中的本發(fā)明類似物，另外含有本領(lǐng)域已知的賦形劑。本公開的類似物單獨(dú)或與其他適合組分組合可通過肺部給藥來遞送，并且可制備成氣霧劑制劑以便通過吸入而給藥。這些氣霧劑制劑可置于加壓可接受的推進(jìn)劑(諸如二氯二氟甲烷、丙烷、氮?dú)獾?中。它們也可配制成用于非加壓制劑的藥物，諸如于噴霧器或霧化器中。這樣的噴霧制劑也可用于噴射黏膜。在一些實(shí)施方案中，將類似物配制成粉末摻合物或微粒或納米顆粒。適合的肺部制劑在本領(lǐng)域已知。參見例如Qian等人，IntJPharm366：218-220(2009)；Adjei和Garren,PharmaceuticalResearch,7(6)：565-569(1990)；Kawashima等人，JControlledRelease62(1-2)：279-287(1999)；Liu等人，PharmRes10(2)：228-232(1993)；國際專利申請公開第WO2007/133747號和第WO2007/141411號。適于胃腸外給藥的制劑包括水性和非水性等張無菌注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑及使配制劑與預(yù)定接受者的血液等張的溶質(zhì)；以及水性和非水性無菌懸浮液，其可包括懸浮劑、增溶劑、增稠劑、穩(wěn)定劑及防腐劑。術(shù)語“胃腸外”意謂不通過消化道，而是通過一些其他途徑，諸如皮下、肌肉內(nèi)、脊柱內(nèi)或靜脈內(nèi)。本公開的類似物可于藥學(xué)載劑中與生理上可接受的稀釋劑一起給藥，該藥學(xué)載劑例如無菌液體或液體混合物，包括水、生理鹽水、右旋糖水溶液及相關(guān)糖溶液、醇(諸如乙醇或十六烷醇)、二醇(諸如丙二醇或聚乙二醇)、二甲亞砜、甘油、縮酮(諸如2,2-二甲基-l53-二氧戊環(huán)-4-甲醇)、醚、聚(乙二醇)400、油、脂肪酸、脂肪酸酯或甘油酯或乙?；舅岣视王ィ涮砑佑谢蛭刺砑铀帉W(xué)上可接受的表面活性劑，諸如皂類或清潔劑、懸浮劑(諸如果膠、卡波姆、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素或羧甲基纖維素)或乳化劑及其他藥學(xué)佐劑?？捎糜谖改c外制劑的油包括礦油、動(dòng)物、植物或合成油。油的特定實(shí)例包括花生油、大豆油、芝麻油、棉籽油、玉米油、橄欖油、石蠟油及礦物油。用于胃腸外制劑的適合的脂肪酸包括油酸、硬脂酸及異硬脂酸。油酸乙酯和肉豆蔻酸異丙酯為適合的脂肪酸酯的實(shí)例。適用于胃腸外制劑的皂類包括脂肪堿金屬鹽、銨鹽及三乙醇胺鹽，并且適合的清潔劑包括(a)陽離子清潔劑，諸如二甲基二烷基鹵化銨和烷基吡錠鹵化物，(b)陰離子清潔劑，諸如磺酸烷酯、芳酯和烯烴酯、硫酸烷酯、烯烴酯、醚酯和單甘油酯、以及磺基丁二酸酯，(c)非離子清潔劑，諸如脂肪胺氧化物、脂肪酸烷醇酰胺以及聚氧乙烯聚丙烯共聚物，(d)兩性清潔劑，諸如烷基-β-氨基丙酸酯和2-烷基-咪唑啉季銨鹽，以及(e)其混合物。胃腸外配制劑可于單位劑量或多劑量密封容器(諸如安瓿和小瓶)中提供，且可儲(chǔ)存于冷凍干燥(凍干)條件下，僅需要在臨使用前添加無菌液體賦形劑，例如注射用水。臨時(shí)注射溶液和懸浮液可由本領(lǐng)域已知種類的無菌粉末、顆粒及錠劑制備?？勺⑸渲苿┗诒景l(fā)明。用于可注射組合物的有效藥學(xué)載劑的要求為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的(參見例如PharmaceuticsandPharmacyPractice,J.B.LippincottCompany,Philadelphia,PA,Banker和Chalmers編，第238-250頁(1982)，以及ASHPHandbookonInjectableDrugs,Toissel，第4版，第622-630頁(1986))。另外，本發(fā)明的類似物可通過與多種基質(zhì)(諸如乳化基質(zhì)或水溶性基質(zhì))混合而制備成用于直腸給藥的栓劑。適于陰道給藥的制劑可提供為子宮托、衛(wèi)生棉塞、乳膏、凝膠、糊劑、泡沫體或噴霧劑配方，其除活性成分外還含有諸如本領(lǐng)域已知為適當(dāng)?shù)妮d劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，除上述藥物組合物外，本發(fā)明的類似物也可配制成包合復(fù)合物，諸如環(huán)糊精包合復(fù)合物，或脂質(zhì)體。劑量確信本發(fā)明的類似物可用于治療其中胰高血糖素受體激動(dòng)作用、GLP-1受體激動(dòng)作用或胰高血糖素受體/GLP-1受體協(xié)同激動(dòng)作用發(fā)揮作用的疾病或醫(yī)學(xué)病況。出于本公開的目的，所給藥的本公開的類似物的量或劑量應(yīng)足以于個(gè)體或動(dòng)物體中在合理時(shí)間框內(nèi)實(shí)現(xiàn)例如治療或預(yù)防反應(yīng)。舉例而言，本公開的類似物的劑量應(yīng)在自給藥時(shí)間開始約1至4分鐘、1至4小時(shí)或1至4周或更長，例如5至20周或更久的時(shí)段內(nèi)足以刺激cAMP自如本文所述的細(xì)胞分泌或足以降低哺乳動(dòng)物的血糖含量、脂肪含量、食物攝取量或體重。在某些實(shí)施方案中，該時(shí)段可甚至更長。劑量將由本公開的特定類似物的功效和動(dòng)物(例如人類)的狀況以及待治療動(dòng)物(例如人類)的體重決定。許多用于測定給藥劑量的測試在本領(lǐng)域已知。出于本文的目的，以下測定可用于確定向哺乳動(dòng)物給藥的起始劑量，所述測定包括比較當(dāng)向在一組各自給予不同劑量的類似物的哺乳動(dòng)物中的哺乳動(dòng)物給藥指定劑量的本公開的類似物后血糖水平降低的程度。當(dāng)給藥某一劑量后血糖水平降低的程度可通過本領(lǐng)域已知的方法來分析，所述方法包括例如本文實(shí)例4中所述的方法。本公開的類似物的劑量也可通過可能伴隨本公開特定類似物的給藥的任何不良副作用的存在、性質(zhì)及程度來確定。通常，主治醫(yī)師將考慮多種因素來決定用于治療單個(gè)患者的本公開的類似物的劑量，所述因素例如年齡、體重、一般健康狀況、飲食、性別、待給藥的本公開的類似物、給藥途徑及所治療的病況的嚴(yán)重性。例如但不旨在限制本發(fā)明，本公開的類似物的劑量可為約0.0001至約1g/每公斤所治療的個(gè)體的體重/天，約0.0001至約0.001g/每公斤體重/天，或約0.01mg至約1g/公斤體重/天。在一些實(shí)施方案中，藥物組合物包含適于向患者給藥的純度水平的本文所公開的任何類似物。在一些實(shí)施方案中，類似物具有至少約90％、約91％、約92％、約93％、約94％、約95％、約96％、約97％、約98％或約99％的純度水平，以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑、載劑或賦形劑。在一些方面中，藥物組合物包含濃度為至少A的本公開的類似物，其中A為約0.001mg/ml、約0.01mg/ml、0約1mg/ml、約0.5mg/ml、約1mg/ml、約2mg/ml、約3mg/ml、約4mg/ml、約5mg/ml、約6mg/ml、約7mg/ml、約8mg/ml、約9mg/ml、約10mg/ml、約11mg/ml、約12mg/ml、約13mg/ml、約14mg/ml、約15mg/ml、約16mg/ml、約17mg/ml、約18mg/ml、約19mg/ml、約20mg/ml、約21mg/ml、約22mg/ml、約23mg/ml、約24mg/ml、約25mg/ml或更高。在一些實(shí)施方案中，藥物組合物包含濃度為至多B的類似物，其中B為約30mg/ml、約25mg/ml、約24mg/ml、約23,mg/ml、約22mg/ml、約21mg/ml、約20mg/ml、約19mg/ml、約18mg/ml、約17mg/ml、約16mg/ml、約15mg/ml、約14mg/ml、約13mg/ml、約12mg/ml、約11mg/ml、約10mg/ml、約9mg/ml、約8mg/ml、約7mg/ml、約6mg/ml、約5mg/ml、約4mg/ml、約3mg/ml、約2mg/ml、約1mg/ml或約0.1mg/ml。在一些實(shí)施方案中，組合物可含有濃度范圍為A至Bmg/ml的類似物，例如約0.001至約30.0mg/ml。靶向形式本領(lǐng)域普通技術(shù)人員會(huì)容易地理解，本公開的類似物可以以任何數(shù)量的方式而修飾，以使得本公開的類似物的治療或預(yù)防功效通過該修飾而增加。舉例而言，本公開的類似物可直接或通過連接子間接結(jié)合于靶向部分。將化合物(例如本文所述的胰高血糖素類似物)與靶向部分進(jìn)行結(jié)合的實(shí)踐在本領(lǐng)域已知。參見例如Wadhwa等人，JDrugTargeting,3,111-127(1995)以及美國專利第5,087,616號。如本文所用，術(shù)語“靶向部分”是指特異性識別并結(jié)合于細(xì)胞表面受體的任何分子或藥劑，以使得靶向部分引導(dǎo)本公開的類似物遞送至表面上表達(dá)該受體(胰高血糖素受體、GLP-1受體)的細(xì)胞群。靶向部分包括但不限于抗體或其片段、肽、激素、生長因子、細(xì)胞激素及結(jié)合細(xì)胞表面受體(例如上皮生長因子受體(EGFR)、T細(xì)胞受體(TCR)、B細(xì)胞受體(BCR)、CD28、血小板衍生生長因子受體(PDGF)、煙堿乙酰膽堿受體(nAChR)等)的任何其他天然或非天然配體。如本文所用，“連接子”為使兩個(gè)單獨(dú)實(shí)體彼此結(jié)合的鍵、分子或分子基團(tuán)。連接子可提供兩個(gè)實(shí)體的最佳間隔或可進(jìn)一步供應(yīng)允許兩個(gè)實(shí)體彼此隔開的不穩(wěn)定鍵聯(lián)。不穩(wěn)定鍵聯(lián)包括光可裂解基團(tuán)、酸不穩(wěn)定性部分、堿不穩(wěn)定性部分及酶可裂解基團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，術(shù)語“連接子”是指橋接本公開的類似物與靶向部分的任何藥劑或分子。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員認(rèn)識到，本公開的類似物上的本公開類似物的功能所不必需的位點(diǎn)為連接連接子和/或靶向部分的理想位點(diǎn)，條件是連接子和/或靶向部分在連接于本公開的類似物后不干擾本公開類似物的功能，即刺激cAMP自細(xì)胞分泌、治療糖尿病或肥胖癥的能力。控釋制劑或者，本文所述的胰高血糖素類似物可被修飾成儲(chǔ)庫形式，以使得本公開類似物釋放至待給藥的身內(nèi)的方式對于時(shí)間和體內(nèi)位置為受控的(參見例如美國專利第4,450,150號)。本公開的類似物的儲(chǔ)庫形式可為例如包含本公開類似物和多孔或無孔物質(zhì)(諸如聚合物)的可植入組合物，其中本公開的類似物由該物質(zhì)封裝或擴(kuò)散于該物質(zhì)中和/或由無孔物質(zhì)的降解而擴(kuò)散。然后，將儲(chǔ)庫植入體內(nèi)所需位置，且本公開的類似物以預(yù)定速率自植入物釋放。在某些方面中，藥物組合物經(jīng)修飾以具有任何類型的體內(nèi)釋放譜。在一些方面中，藥物組合物為即釋、控釋、緩釋、延釋、遲釋或雙相釋放制劑。配制用于控釋的肽的方法在本領(lǐng)域已知。參見例如Qian等人，JPharm374：46-52(2009)以及國際專利申請公開第WO2008/130158號；第WO2004/033036號；第WO2000/032218號；和第WO1999/040942號。本文組合物可進(jìn)一步包含例如膠束或脂質(zhì)體或一些其他封裝形式，或可以以延釋形式給藥以提供延長的儲(chǔ)存和/或遞送作用。所公開的藥物組合物可根據(jù)任何方案給藥，該方案包括例如每天(每天1次、每天2次、每天3次、每天4次、每天5次、每天6次)、每兩天一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次、每六天一次、每周一次、每兩周一次、每三周一次、每月一次或每兩月一次。組合本文所述的胰高血糖素類似物可單獨(dú)或與其他旨在治療或預(yù)防本文所述的任何疾病或醫(yī)學(xué)病況的治療劑組合給藥。舉例而言，本文所述的胰高血糖素類似物可與(同時(shí)或依次)抗糖尿病藥劑或抗肥胖藥劑共給藥。本領(lǐng)域已知或正在研究的抗糖尿病劑包括胰島素、瘦素、肽YY(PYY)、胰腺肽(PP)、纖維母細(xì)胞生長因子21(FGF21)、Y2Y4受體激動(dòng)劑、磺酰脲(諸如甲苯磺酰丁脲(Orinase)、乙酰苯磺酰環(huán)己脲(Dymelor)、甲磺氮草脲(Tolinase)、氯磺丙脲(Diabinese)、格列吡嗪(Glucotrol)、格列苯脲(Diabeta、Micronase、Glynase)、格列美脲(Amaryl)或格列齊特(Diamicron)；美格列奈，諸如瑞格列奈(Prandin)或那格列奈(Starlix)；雙胍，諸如二甲雙胍(Glucophage)或苯乙雙胍；噻唑烷二酮，諸如羅格列酮(Avandia)、比格列酮(Actos)或曲格列酮(Rezulin)，或其他PPARγ抑制劑；抑制碳水化合物消化的α葡糖苷酶抑制劑，諸如米格列醇(Glyset)、阿卡波糖(Precose/Glucobay)；艾塞那肽(Byetta)或普蘭林肽；二肽基肽酶-4(DPP-4)抑制劑，諸如維達(dá)列汀或西他列??；SGLT(鈉依賴性葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體1)抑制劑；葡萄糖激酶活化因子(GKA)；胰高血糖素受體拮抗劑(GRA)；或FBPase(果糖1,6-雙磷酸酯酶)抑制劑。本領(lǐng)域已知或正在研究的抗肥胖藥劑包括食欲抑制劑，包括苯乙胺型刺激物、苯丁胺(任選與氯苯丙胺或右芬氟拉明)、二乙胺苯丙酮苯二甲嗎啉芐非他明西布曲明利莫那班其他大麻受體拮抗劑；胃泌酸調(diào)節(jié)素(oxyntomodulin)；鹽酸氟西汀(Prozac)；Qnexa(托吡酯與苯丁胺)、Excalia(安非他酮與唑尼沙胺)或Contrave(安非他酮與納曲酮)；或脂肪酶抑制劑，其類似于XENICAL(Orlista)或Cetilistat(也稱為ATL-962)或GT389-255。在一些實(shí)施方案中，本文所述的肽與用于治療非酒精性脂肪肝病或NASH的藥劑共給藥。用于治療非酒精性脂肪肝病的藥劑包括熊脫氧膽酸(也稱為Actigall、URSO及Ursodiol)、二甲雙胍(Glucophage)、羅格列酮(Avandia)、安妥明、吉非羅齊、多粘菌素B及甜菜堿。在一些實(shí)施方案中，本文所述的肽與用于治療神經(jīng)退化性疾病(例如帕金森氏病)的藥劑共給藥。此外，抗帕金森氏病藥劑在本領(lǐng)域已知，并且包括但不限于左旋多巴、卡比多巴、抗膽堿能藥物、溴隱亭、普拉克索及羅匹尼羅、金剛烷胺及雷沙吉蘭。鑒于前述內(nèi)容，本發(fā)明進(jìn)一步提供了額外包含這些其他治療劑之一的藥物組合物和試劑盒。該額外的治療劑可與本公開的類似物同時(shí)或依次給藥。在一些方面中，類似物在額外的治療劑之前給藥，而在其他方面中，類似物在額外的治療劑之后給藥。用途預(yù)期本文所述的胰高血糖素類似物和相關(guān)藥物組合物可用于治療疾病或醫(yī)學(xué)病況，在所述疾病或醫(yī)學(xué)病況中，例如對胰高血糖素受體、GLP-1受體或該兩種受體的活性的缺乏為該疾病或醫(yī)學(xué)病況發(fā)作和/或進(jìn)展的因素。因此，本發(fā)明提供治療或預(yù)防患者的疾病或醫(yī)學(xué)病況的方法，其中該疾病或醫(yī)學(xué)病況為其中GLP-1受體活化和/或胰高血糖素受體活化的缺乏與該醫(yī)學(xué)病況的疾病的發(fā)作和/或進(jìn)展相關(guān)的醫(yī)學(xué)病況的疾病。所述方法包括向患者以有效治療或預(yù)防疾病或醫(yī)學(xué)病況的量提供基于任何本文所述類似物的類似物。在一些實(shí)施方案中，疾病或醫(yī)學(xué)病況為代謝綜合征。代謝綜合征(也稱為代謝綜合征X、胰島素抗性綜合征或Reaven綜合征)為影響超過5千萬美國人的病癥。代謝綜合征的特征通常在于簇集至少三種以上的以下風(fēng)險(xiǎn)因素：(1)腹部肥胖(腹部內(nèi)或周圍脂肪組織過多)，(2)致動(dòng)脈粥樣硬化血脂異常(血脂失調(diào)，包括高三甘油酯、低HDL膽固醇及高LDL膽固醇，其增強(qiáng)動(dòng)脈壁中斑塊的積累)，(3)血壓升高，(4)胰島素抗性或葡萄糖耐受不良，(5)血栓前狀態(tài)(例如血液中高纖維蛋白原或纖溶酶原活化因子抑制劑-1)，以及(6)促發(fā)炎狀態(tài)(例如血液中C反應(yīng)性蛋白升高)。其他風(fēng)險(xiǎn)因素可包括老化、激素失衡及遺傳素因。代謝綜合征與冠心病和與血管斑塊積累相關(guān)的其他病癥的風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)，例如中風(fēng)和外周血管疾病，稱為粥樣動(dòng)脈硬化心血管病(ASCVD)?；加写x綜合征的患者可自處于早期的胰島素抗性狀態(tài)發(fā)展成完全成熟的II型糖尿病，并且ASCVD的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)一步增加。不旨在受限于任何特定理論，胰島素抗性、代謝綜合征及血管疾病之間的關(guān)系可以涉及一種或多種共同發(fā)病機(jī)制，包括胰島素刺激的血管舒張障礙、由氧化應(yīng)力增強(qiáng)所導(dǎo)致的胰島素抗性相關(guān)性NO可用性降低，以及脂肪細(xì)胞衍生激素(諸如脂聯(lián)素)異常(Lteif和Mather,Can.J.Cardiol.20(增刊B)：66B-76B(2004))。根據(jù)2001國家膽固醇教育計(jì)劃成人治療組(ATPIII)，在同一個(gè)體中任何三種以下性狀符合代謝綜合征的標(biāo)準(zhǔn)：(a)腹部肥胖(男性腰圍超過102cm，而女性腰圍超過88cm)；(b)血清三甘油酯(150mg/dl或更高)；(c)HDL膽固醇(男性40mg/dl更低，而女性50mg/dl或更低)；(d)血壓(130/85或更高)；以及(e)空腹血糖(110mg/dl或更高)。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)，具有高胰島素水平(單獨(dú)的空腹血糖升高或餐后葡萄糖升高)和至少兩種以下標(biāo)準(zhǔn)的個(gè)體符合代謝綜合征的標(biāo)準(zhǔn)：(a)腹部肥胖(腰臀比大于0.9、身體質(zhì)量指數(shù)為至少30kg/m2?；蜓繙y量值超過37英寸)；(b)膽固醇檢查(cholesterolpanel)顯示三甘油酯水平為至少150mg/dl或HDL膽固醇低于35mg/dl；(c)血壓為140/90或更高，或正在治療高血壓)。(Mathur,Ruchi,“MetabolicSyndrome,”Shiel,Jr.編，WilliamC.,MedicineNet.com,2009年5月11日)。出于本文的目的，如果個(gè)體符合2001國家膽固醇教育計(jì)劃成人治療組或WHO所述的標(biāo)準(zhǔn)中任一個(gè)或兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，則該個(gè)體視為罹患代謝綜合征。不受限于任何特定理論，本文所述的肽適用于治療代謝綜合征。因此，本發(fā)明提供了預(yù)防或治療個(gè)體的代謝綜合征或減少其一種、兩種、三種或更多種風(fēng)險(xiǎn)因素的方法，其包括向該個(gè)體以有效預(yù)防或治療代謝綜合征或其風(fēng)險(xiǎn)因素的量提供本文所述的類似物。在一些實(shí)施方案中，該方法治療高血糖醫(yī)學(xué)病況。在某些方面中，高血糖醫(yī)學(xué)病況為糖尿病、I型糖尿病、II型糖尿病或胰島素依賴性或非胰島素依賴性妊娠期糖尿病。在一些方面中，該方法通過減少糖尿病之一種或多種并發(fā)癥(包括腎病變、視網(wǎng)膜病變及血管疾病)來治療高血糖醫(yī)學(xué)病況。在一些方面中，疾病或醫(yī)學(xué)病況為肥胖癥。在一些方面中，肥胖癥為藥物誘發(fā)的肥胖癥。在一些方面中，該方法通過預(yù)防或減少體重增加或增加患者的體重減輕來治療肥胖癥。在一些方面中，該方法通過降低食欲、減少食物攝取、降低患者體內(nèi)脂肪水平或降低食物移動(dòng)穿過胃腸系統(tǒng)的速率來治療肥胖癥。因?yàn)榉逝职Y與其他疾病的發(fā)作或進(jìn)展相關(guān)，所以治療肥胖癥的方法還可用于減少與肥胖癥相關(guān)的并發(fā)癥的方法，所述并發(fā)癥包括血管疾病(冠心病、中風(fēng)、外周血管疾病、缺血再灌注等)、高血壓、II型糖尿病發(fā)作、高脂血癥及肌肉骨骼疾病。本發(fā)明因此提供治療或預(yù)防這些肥胖癥相關(guān)性并發(fā)癥的方法。在一些實(shí)施方案中，疾病或醫(yī)學(xué)病況為非酒精性脂肪肝病(NAFLD)。NAFLD是指廣譜肝臟疾病，范圍自單純脂肪肝(脂肪變性)至非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)至肝硬化(肝臟的不可逆晚期瘢痕形成)。NAFLD的所有病期均共同具有在肝臟細(xì)胞(肝細(xì)胞)中的脂肪累積(脂肪浸潤)。單純脂肪肝為某類型的脂肪、三甘油酯在肝臟細(xì)胞中異常累積，但無發(fā)炎或瘢痕形成。在NASH中，脂肪累積與不同程度的肝臟發(fā)炎(肝炎)和瘢痕形成(纖維化)相關(guān)。發(fā)炎性細(xì)胞可破壞肝臟細(xì)胞(肝細(xì)胞壞死)。在術(shù)語“脂肪變性肝炎”和“脂肪變性壞死”中，脂肪變性是指脂肪浸潤，肝炎是指肝臟中的炎癥，并且壞死是指經(jīng)破壞的肝臟細(xì)胞。NASH可最終導(dǎo)致肝臟瘢痕形成(纖維化)且接著導(dǎo)致不可逆晚期瘢痕形成(肝硬化)。由NASH導(dǎo)致的肝硬化為NAFLD譜內(nèi)的最后且最嚴(yán)重的病期。(Mendler,Michel,“FattyLiver：NonalcoholicFattyLiverDisease(NAFLD)andNonalcoholicSteatohepatitis(NASH)”，Schoenfield編，LeslieJ.,MedicineNet.com,2005年8月29日)。酒精性肝病或酒精誘發(fā)的肝病涵蓋與酒精過度消費(fèi)相關(guān)或由酒精過度消費(fèi)引起的三種病理不同的肝?。褐靖?脂肪變性)、慢性或急性肝炎及肝硬化。酒精性肝炎的范圍可為輕度肝炎(具有僅指示疾病的異常實(shí)驗(yàn)室測試)至伴有并發(fā)癥的重度肝功能異常，所述并發(fā)癥諸如黃疸病(由膽紅素滯留引起的黃色皮膚)、肝性腦病變(由肝衰竭引起的神經(jīng)功能異常)、腹水(腹部中的體液累積)、出血性食道靜脈曲張(食道中的靜脈曲張)、凝血異常及昏迷。在組織學(xué)上，酒精性肝炎具有伴有肝細(xì)胞脹大性退化的特征性外觀、伴隨嗜中性白血球且有時(shí)伴隨馬洛里小體(Mallorybody)(細(xì)胞中間絲蛋白的異常聚集)的發(fā)炎。肝硬化在解剖學(xué)上的特征在于肝臟中與纖維化組合的廣泛結(jié)節(jié)。(Worman,HowardJ.,“AlcoholicLiverDisease”,ColumbiaUniversityMedicalCenter網(wǎng)站)。不受限于任何特定理論，本文所述的類似物可用于治療酒精性肝病、NAFLD或其任何病期，包括例如肝硬化、脂肪變性肝炎、肝炎、肝臟發(fā)炎、NASH、肝硬化或其并發(fā)癥。因此，本發(fā)明提供預(yù)防或治療個(gè)體的酒精性肝病、NAFLD或其任何病期的方法，其包括向個(gè)體以有效預(yù)防或治療酒精性肝病、NAFLD或其任何病期的量提供本文所述的類似物。這樣的治療方法包括以下中一種、兩種、三種或更多種的降低：肝臟脂肪含量、肝硬化的發(fā)生率或進(jìn)展、肝細(xì)胞癌的發(fā)生率、發(fā)炎征象，例如異常肝酶水平(例如天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶AST和/或丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶ALT或LDH)、血清鐵蛋白升高、血清膽紅素升高，和/或纖維化征象，例如TGF-β水平升高。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，肽用于治療發(fā)展至超過單純脂肪肝(脂肪變性)且顯示發(fā)炎或肝炎征象的患者。這樣的方法可導(dǎo)致例如AST和/或ALT含量降低。GLP-1和exendin-4已顯示具有一些神經(jīng)保護(hù)作用。本發(fā)明還提供本文所述的胰高血糖素類似物在治療神經(jīng)退化性疾病中的用途，所述神經(jīng)退化性疾病包括但不限于阿茲海默氏病，帕金森氏病，多發(fā)性硬化癥，肌萎縮性側(cè)索硬化，其他脫髓鞘相關(guān)病癥，老年性癡呆，皮質(zhì)下癡呆，動(dòng)脈硬化性癡呆，AIDS相關(guān)性癡呆或其他癡呆，中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌癥，外傷性腦損傷，脊髓損傷，中風(fēng)或腦缺血，腦血管炎，癲癇、亨廷頓氏病，妥瑞氏綜合征(Tourette'ssyndrome)，格林巴利綜合征(GuillainBarresyndrome)，威爾森氏病，匹克氏病，神經(jīng)發(fā)炎性病癥，腦炎，病毒、真菌或細(xì)菌起源的腦脊髓炎或腦膜炎，或其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染，朊病毒疾病，小腦性共濟(jì)失調(diào)，小腦退化，脊髓小腦退化綜合征，弗里德里希共濟(jì)失調(diào)(Friedreichsataxia)，共濟(jì)失調(diào)微血管擴(kuò)張癥、脊髓發(fā)育不良、進(jìn)行性核上麻痹，肌張力不全，肌痙攣，震顫，色素性視網(wǎng)膜炎，紋狀體黑質(zhì)變性，粒線體腦肌病，神經(jīng)性蠟脂樣褐質(zhì)病，肝性腦病變、腎性腦病變、代謝性腦病變、毒素誘發(fā)的腦病變以及輻射誘發(fā)的腦損傷。在一些實(shí)施方案中，疾病或醫(yī)學(xué)病況為低血糖癥。在一些實(shí)施方案中，患者為糖尿病患者且低血糖癥由胰島素給藥誘發(fā)。在特定方面中，方法包括提供本發(fā)明類似物與胰島素的組合以使得類似物緩沖推注給藥胰島素的低血糖作用。在一些實(shí)施方案中，胰高血糖素類似物與在醫(yī)院設(shè)置中向非糖尿病患者(例如接受胃腸外營養(yǎng)或總胃腸外營養(yǎng)的患者)胃腸外給藥營養(yǎng)物結(jié)合使用。非限制性實(shí)例包括手術(shù)患者、昏迷患者、消化道疾病患者或無功能胃腸道，例如由于手術(shù)移除、吸收能力阻斷或障礙、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、胃腸道阻塞、胃腸道瘺、急性胰臟炎、腸缺血、胃腸大手術(shù)、某些先天性胃腸道異常、長期腹瀉或由手術(shù)導(dǎo)致的短腸綜合征、休克患者和經(jīng)歷愈合過程的患者通常接受胃腸外給藥碳水化合物連同脂質(zhì)、電解質(zhì)、礦物質(zhì)、維生素和氨基酸的各種組合。胰高血糖素類似物和胃腸外營養(yǎng)組合物可在相同時(shí)間、不同時(shí)間、彼此之前或之后給藥，條件是胰高血糖素類似物在胃腸外營養(yǎng)組合物正被消化時(shí)發(fā)揮所需生物作用。舉例而言，胃腸外營養(yǎng)物可每天給予1次、2次或3次，而胰高血糖素類似物每隔一天一次、每周三次、每周兩次、每周一次、每2周一次、每3周一次或每月一次給予。如本文所用，術(shù)語“治療”和“預(yù)防”以及以其為詞干的用語不必表示100％或完全治療或預(yù)防。相反，存在本領(lǐng)域普通技術(shù)人員認(rèn)為具有潛在效益或治療效果的不同程度的治療或預(yù)防。在此方面，本發(fā)明的方法可提供以任何水平治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物的疾病或醫(yī)學(xué)病況的任何量。此外，由該方法提供的治療或預(yù)防可包括治療或預(yù)防該疾病或醫(yī)學(xué)病況的一種或多種病況或癥狀。舉例而言，關(guān)于治療肥胖癥的方法，在一些實(shí)施方案中，該方法實(shí)現(xiàn)患者的食物攝取或脂肪水平的降低。此外，出于本文的目的，“預(yù)防”可涵蓋延遲疾病或其癥狀或病況的發(fā)作。關(guān)于上述治療方法，患者為任何宿主。在一些實(shí)施方案中，宿主為哺乳動(dòng)物。如本文所用，術(shù)語“哺乳動(dòng)物”是指哺乳綱的任何脊椎動(dòng)物，包括但不限于單孔類動(dòng)物、有袋類動(dòng)物及胎盤類動(dòng)物中任一種。在一些實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物為嚙齒目哺乳動(dòng)物(諸如小鼠及倉鼠)及兔形目(orderLogomorpha)哺乳動(dòng)物(諸如兔)中之一。在某些實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物來自食肉目，包括貓科動(dòng)物(貓)和犬科動(dòng)物(狗)。在某些實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物來自偶蹄目(包括?？苿?dòng)物(奶牛)和豬科動(dòng)物(豬))或奇蹄目(orderPerssodactyla)(包括馬科動(dòng)物(馬))。在一些情況下，哺乳動(dòng)物為靈長目、四足猴類或猴類(猴)或類人猿目(人類及猿)。在特定實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物為人類。試劑盒根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，本公開的胰高血糖素類似物可作為試劑盒的一部分來提供。因此，在一些實(shí)施方案中，提供用于向有需要的患者給予胰高血糖素類似物(例如胰高血糖素激動(dòng)劑肽)的試劑盒，其中該試劑盒包括如本文所述的胰高血糖素類似物。在一個(gè)實(shí)施方案中，試劑盒具有用于向患者給藥胰高血糖素組合物的裝置，例如注射器針、筆式裝置、噴射注射器或其他無針注射器。試劑盒可替代地或額外地包括一個(gè)或多個(gè)容器，例如小瓶、管、瓶、單隔室的或多隔室的預(yù)填充注射器、藥筒、輸注泵(外用或可植入)、噴射注射器、預(yù)填充筆式裝置等，任選地包括凍干形式或水溶液形式的胰高血糖素類似物。在一些實(shí)施方案中，試劑盒包括使用說明書。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，試劑盒的裝置為氣霧劑分配裝置，其中組合物預(yù)包裝在該氣霧劑裝置內(nèi)。在另一實(shí)施方案中，試劑盒包括注射器和針，且在一個(gè)實(shí)施方案中，無菌胰高血糖素組合物預(yù)包裝在該注射器內(nèi)。給出以下實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，且不以任何方式限制其范圍。實(shí)施例實(shí)施例1合成胰高血糖素的肽片段材料：除非另外規(guī)定，否則本文在實(shí)例中所述的所有肽均經(jīng)酰胺化。MBHA樹脂(在肽合成期間使用4-甲基二苯甲基胺聚苯乙烯樹脂。MBHA樹脂，100-180目，1％DVB交聯(lián)聚苯乙烯；負(fù)載量0.7-1.0mmol/g)、經(jīng)Boc保護(hù)且經(jīng)Fmoc保護(hù)的氨基酸購自MidwestBiotech。在AppliedBiosystem430A肽合成儀上使用經(jīng)Boc保護(hù)的氨基酸進(jìn)行固相肽合成。使用AppliedBiosystems433型肽合成儀進(jìn)行經(jīng)Fmoc保護(hù)的氨基酸的合成。肽合成(Boc氨基酸/HF裂解)：在AppliedBiosystem430A型肽合成儀上進(jìn)行這些類似物的合成。通過依次添加氨基酸至含有2mmol經(jīng)Boc保護(hù)的氨基酸的筒柱中構(gòu)建合成肽。具體地，使用經(jīng)BocDEPBT活化的單偶合進(jìn)行該合成。在偶合步驟結(jié)束時(shí)，用TFA處理肽基樹脂以移除N端Boc保護(hù)基。將其用DMF反復(fù)洗滌，且對所需數(shù)目的偶合步驟重復(fù)該重復(fù)循環(huán)。組裝后，通過20％哌啶處理移除側(cè)鏈保護(hù)，即Fmoc，并使用DIC進(jìn)行?；?。整個(gè)合成結(jié)束時(shí)的肽基樹脂通過使用DCM而干燥，并且用無水HF將肽自樹脂裂解。對于內(nèi)酰胺化，選擇正交保護(hù)基以用于Glu和Lys(例如Glu(Fm)、Lys(Fmoc))。在移除保護(hù)基之后且在HF裂解之前，如先前所述進(jìn)行環(huán)化(參見例如國際專利申請公開第WO2008/101017號)。肽基樹脂的HF處理用無水HF處理肽基樹脂，這通常產(chǎn)生約350mg(約50％產(chǎn)率)的粗制除保護(hù)的肽。具體地，將肽基樹脂(30mg至200mg)置于氟化氫(HF)反應(yīng)容器中進(jìn)行裂解。添加500μL對甲酚至該容器中作為碳陽離子去除劑。將容器連接至HF系統(tǒng)且浸入甲醇/干冰混合物中。將容器用真空泵抽真空且蒸餾10mlHF至反應(yīng)容器中。這種肽基樹脂與HF的反應(yīng)混合物在0℃下攪拌一小時(shí)，之后建立真空且將HF快速抽空(10-15min)。小心移除容器且用約35ml乙醚填充以使肽沉淀，并且萃取對甲酚和由HF處理產(chǎn)生的小分子有機(jī)保護(hù)基。利用鐵氟龍(teflon)過濾器過濾該混合物且重復(fù)兩次以移除全部的過量甲酚。棄去該濾液。沉淀的肽溶解于約20ml10％乙酸(水溶液)中。收集含有所需肽的這種濾液且凍干。在以下條件下進(jìn)行溶解的粗制肽的分析型HPLC分析[4.6×30mmXterraC8，1.50mL/min，220nm，A緩沖液0.1％TFA/10％CAN，B緩沖液0.1％TFA/100％CAN，梯度經(jīng)15分鐘為5-95％B]。萃取物用水稀釋兩倍且加載至2.2×25cmVydacC4制備型逆相柱上且在WatersHPLC系統(tǒng)上使用乙腈梯度洗脫(A緩沖液為0.1％TFA/10％CAN，B緩沖液為0.1％TFA/10％CAN且梯度經(jīng)120分鐘為0-100％B，流速為15.00ml/min)。經(jīng)純化的肽的HPLC分析顯示純度大于95％且使用電噴霧電離質(zhì)譜分析來證實(shí)肽的特性。肽酰化如下制備?；?。使用CSBio4886肽合成儀或AppliedBiosystems430A肽合成儀在固體負(fù)載樹脂上合成肽。如Schnolzer等人，Int.J.PeptideProteinRes.40：180-193(1992)所述那樣使用原位中和化學(xué)。對于酰化肽，將待?；陌袠?biāo)氨基酸殘基(例如相對于SEQIDNO:3的氨基酸位置編號的位置10)取代為Nε-FMOC賴氨酸殘基。用20％哌啶于DMF中的溶液處理完成的N端BOC保護(hù)肽30分鐘移除了FMOC/甲?；Ｍㄟ^在DMF/DIEA中偶合10倍摩爾過量的經(jīng)FMOC保護(hù)的間隔子氨基酸(例如FMOC-Glu-OtBu)或?；?例如CH3(CH2)14-COOH)和PyBOP或DEPBT偶合試劑來實(shí)現(xiàn)與游離ε-氨基Lys殘基的偶合。隨后移除間隔子氨基酸的FMOC基團(tuán)，接著重復(fù)與?；湹呐己?。最終用100％TFA的處理使任何側(cè)鏈保護(hù)基和N端BOC基團(tuán)被移除。將肽樹脂用5％DIEA/DMF中和，干燥，接著使用HF/對甲酚95:5在0℃下于一小時(shí)內(nèi)自支撐物裂解。乙醚萃取后，使用5％HOAc溶液來使粗制肽溶劑化。接著通過ESI-MS驗(yàn)證溶液的樣品含有正確分子量的肽。通過使用線性梯度10％CH3CN/0.1％TFA至0.1％TFA于100％CH3CN中的RP-HPLC來純化正確的肽。VydacC1822mm×250mm蛋白柱用于純化。?；念愃莆锿ǔＳ?0:80的緩沖液比率而完全洗脫。將各部分匯集在一起且在分析型RP-HPLC上檢查純度。凍干純的餾分，產(chǎn)生白色固體肽。如果肽包含內(nèi)酰胺橋鍵和待酰化的靶標(biāo)殘基，則在向肽主鏈添加該氨基酸后如上所述那樣來進(jìn)行酰化。肽聚乙二醇化對于肽聚乙二醇化，使40kDa甲氧基聚(乙二醇)碘乙酰胺(NOF)與摩爾當(dāng)量的肽于使用使肽和PEG兩者溶解成澄清溶液所需的最少量的溶劑(對于使用2-3mg肽的反應(yīng)通常少于2mL)的7M脲、50mMTris-HCl緩沖液中反應(yīng)。在室溫下劇烈攪拌4-6小時(shí)，并通過分析型RP-HPLC對反應(yīng)進(jìn)行分析。聚乙二醇化產(chǎn)物隨停留時(shí)間減少而表現(xiàn)得與起始物質(zhì)不同。于VydacC4柱上利用與初始肽純化所用類似的條件進(jìn)行純化。洗脫在約50:50的緩沖液比率下發(fā)生。得到純聚乙二醇化肽的餾分并凍干。產(chǎn)率高于50％，根據(jù)反應(yīng)而變。使用質(zhì)譜的分析使用具有標(biāo)準(zhǔn)ESI離子源的SciexAPI-III電噴霧四極質(zhì)譜儀獲得質(zhì)譜。所用電離條件如下：ESI為正離子模式；離子噴霧電壓3.9kV；孔口電位60V。所用霧化氣體和氣簾為流速為0.9L/min的氮?dú)?。質(zhì)譜以每步0.5Th和2msec停留時(shí)間自600湯姆遜(Thompson)記錄至1800湯姆遜。將樣品(約1mg/mL)溶解于含1％乙酸的50％乙腈水溶液中，并通過外部注射泵以5μL/min的速率引入。當(dāng)通過ESIMS在PBS溶液中分析肽時(shí)，首先使用含有0.6μLC4樹脂的ZipTip固相萃取尖端根據(jù)制造商提供的說明使其脫鹽(MilliporeCorporation,Billerica,MA，參見萬維網(wǎng)的Millipore網(wǎng)站millipore.com/catalogue.nsf/docs/C5737)。高效液相層析(HPLC)分析使用高效液相層析(HPLC)和MALDI分析于磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS)緩沖液(pH7.2)中用這些粗制肽進(jìn)行初步分析以獲得其相對轉(zhuǎn)化率的近似值。將粗制肽樣品以1mg/ml的濃度溶解于PBS緩沖液中。將1ml所得溶液儲(chǔ)存于1.5mlHPLC小瓶中，然后將該小瓶密封并于37℃孵育。以不同時(shí)間間隔取出100μl的等份部分，冷卻至室溫且由HPLC進(jìn)行分析。使用Beckman系統(tǒng)金層析系統(tǒng)，使用UV檢測器在214nm進(jìn)行HPLC分析。在150mm×4.6mmC18Vydac柱上進(jìn)行HPLC分析。流速為1ml/min。溶劑A含有于蒸餾水中的0.1％TFA，且溶劑B含有于90％CH3CN中的0.1％TFA。采用線性梯度(15分鐘內(nèi)40％至70％B)。收集數(shù)據(jù)且使用峰值簡單層析(PeakSimpleChromatography)軟件進(jìn)行分析。水解的初始速率用于測量各前藥解離的速率常數(shù)。前藥和藥物的濃度分別根據(jù)它們的峰面積進(jìn)行估算。通過將前藥在不同時(shí)間間隔處的濃度的對數(shù)繪圖來測定前藥的一階解離速率常數(shù)。該圖的斜率給出速率常數(shù)‘k’。接著通過使用式t1/2＝.693/k來計(jì)算各種前藥降解的半衰期。實(shí)施例2合成SeqIDNo.17的肽使用Fmoc/t-Bu化學(xué)通過固相來合成肽seqIDno.17。對于該肽的制備，將0.5g2-氯三苯甲基-樹脂(100-200目，1.18mmol/g)(GLBiochem)首先通過與0.8當(dāng)量(eq.)Fmoc-Gln(Trt)-OH、相對于氨基酸4當(dāng)量的二異丙基乙胺(DIPEA)于無水DCM(二氯甲烷)中一起孵育2小時(shí)而衍生化。接著在肽多合成儀APEX396(AdvancedBiotech)上進(jìn)行肽序列組裝。將所有氨基酸以0.5M濃度溶解于DMF(N,N-二甲基甲酰胺)中。用相對于樹脂游離氨基的6倍過量的活化氨基酸進(jìn)行?；磻?yīng)60分鐘。對于Aib2、Aib16、Asp15、His1進(jìn)行雙重酰化。氨基酸用等摩爾量的HATU(2-(1H-7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基六氟磷酸脲；于DMF中的0.5M溶液)和2倍摩爾過量的DIEA(N,N-二異丙基乙胺；于NMP(1-甲基-2-吡咯烷酮)中的2M溶液)活化。側(cè)鏈保護(hù)基為：叔丁基用于Asp和Glu、Ser、Thr及Tyr；三苯甲基用于Asn、Gln及His；叔丁氧基-羰基用于Lys、Trp；且2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺?；糜贏rg；在合成中使用Boc-His(Trt)-OH。在側(cè)鏈上待衍生化的位置10上的賴氨酸以Lys(Alloc)形式并入。組裝結(jié)束時(shí)，移除Alloc保護(hù)基，并且通過使用HBTU(4eq.；(O-苯并三唑-1-基-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸脲)和作為活化劑的DIPEA(8eq.)縮合兩個(gè)γ-羧基谷氨酸殘基(4eq.)和棕櫚酸(4eq.)來完成合成。合成結(jié)束時(shí)，用25mL裂解混合物，即88％三氟乙酸(TFA)、5％苯酚、2％三異丙基硅烷及5％水，在室溫下單獨(dú)處理無水肽樹脂2小時(shí)。過濾樹脂且縮減溶液體積，接著添加至冷甲基叔丁醚中以使肽沉淀。離心后，用新鮮的冷甲基叔丁醚洗滌肽微球以移除有機(jī)去除劑。該過程重復(fù)兩次。干燥最終的微球，再懸浮于H2O、20％乙腈中且凍干。通過使用制備型WatersXBridgeC18(50×150mm，5μm)并使用(A)于水中的0.1％TFA和(B)于乙腈中的0.1％TFA作為洗脫液的逆相HPLC對粗制肽進(jìn)行純化。在WatersChromatograph上，用BEH130,C18Acquity,1.7μm柱,2.1×100mm(Waters)，于45℃下，使用H2O、0.1％TFA(A)和CH3CN、0.1％TFA(B)作為溶劑，進(jìn)行分析型UPLC。經(jīng)純化的肽通過電噴霧質(zhì)譜在WatersSQ檢測器上進(jìn)行表征。實(shí)施例3在基于螢火蟲熒光素酶的報(bào)告分析中測量各肽誘導(dǎo)cAMP的能力。所誘導(dǎo)的cAMP產(chǎn)生與同胰高血糖素或GLP-1受體結(jié)合的胰高血糖素片段成正比。該生物分析采用分別與胰高血糖素或GLP-1受體以及連接于cAMP反應(yīng)性組件的熒光素酶基因共轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞。細(xì)胞通過在補(bǔ)充有0.25％牛生長血清(HyClone,Logan,UT)的Dulbecco改良最低必需培養(yǎng)基(Invitrogen,Carlsbad,CA)中培養(yǎng)16小時(shí)為進(jìn)行血清剝奪，然后在37℃、5％CO2下于96孔聚D-賴氨酸涂覆的“Biocoat”板(BDBiosciences,SanJose,CA)中與胰高血糖素片段的連續(xù)稀釋液一起孵育5小時(shí)。在孵育結(jié)束時(shí)，向各孔中添加100μLLucLite發(fā)光底物試劑(PerkinElmer,Wellesley,MA)。短暫地振蕩板，在黑暗中孵育10分鐘，并在MicroBeta-1450液體閃爍計(jì)數(shù)器(Perkin-Elmer,Wellesley,MA)上測量光輸出。通過使用Origin軟件(OriginLab,Northampton,MA)計(jì)算有效50％濃度(EC50)。實(shí)施例4使用穩(wěn)定表達(dá)人類GLP-1R、GCGR或GIPR的中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO-K1)測定SEQIDNO.17的肽的體外激動(dòng)劑效能。GLP-1R和GCGR穩(wěn)定細(xì)胞系同基因池由InvitrogenTM使用其Jump-InTM靶向整合技術(shù)來產(chǎn)生，而穩(wěn)定CHO/GIPR細(xì)胞系通過經(jīng)典克隆和轉(zhuǎn)染技術(shù)(隨機(jī)整合)通過有限稀釋進(jìn)行克隆選擇來產(chǎn)生。使用DiscoveRxHithunterTMcAMPXS+分析試劑盒(目錄號90-0075L)，根據(jù)試劑盒說明書，在體外測試肽在各種細(xì)胞系中刺激cAMP產(chǎn)生的相對能力。通過非線性回歸分析4參數(shù)曲線擬合，用GraphPadPrism4軟件(GraphPadSoftware,SanDiego,CA)，通過將發(fā)光值相對于肽劑量來繪圖，從而計(jì)算肽50％有效濃度(EC50)。實(shí)施例5基本上如實(shí)施例1或2所述的那樣制備具有如序列表所述的氨基酸序列的肽，隨后基本上如實(shí)施例3或4所述的那樣測試對胰高血糖素受體和GLP-1受體的每一受體的體外激動(dòng)劑活性。在一些情況下，還測試對GIP受體的體外激動(dòng)劑活性。結(jié)果示于下表1中。如表1所示，許多肽顯示對GLP-1受體的EC50在納摩爾濃度或皮摩爾濃度范圍內(nèi)。實(shí)施例6將飲食誘發(fā)性肥胖癥(DIO)小鼠分成每組八只小鼠的組，并且測定各組的最初平均體重。每天一次向各組的小鼠皮下注射一定劑量的肽或載體對照，持續(xù)一周。該研究中測試的肽為SEQIDNO:12-16的肽。對于所測試的每個(gè)肽，所給予的劑量在1nmol/kg與10nmol/kg之間變化。在整個(gè)測試期中定期測定體重、身體組成、食物攝取和血糖水平。為更好地測定這些肽對血糖水平的影響，用db/db小鼠進(jìn)行第二次實(shí)驗(yàn)。在該實(shí)驗(yàn)中，將db/db小鼠分成每組八只小鼠的組，并且測定各組的最初平均體重。向各組的小鼠皮下注射單劑量的SEQIDNO:12-16之一的肽，其中該劑量在3nmole/kg與30nmole/kg范圍內(nèi)。在整個(gè)測試期中定期測定體重、身體組成、食物攝取和血糖水平。實(shí)施例7在保持高脂肪飲食16周且最初體重為約47g的飲食誘發(fā)性肥胖癥(DIO)小鼠中確認(rèn)本發(fā)明的某些肽的體內(nèi)作用。每天一次向小鼠給予載體對照或一定劑量的肽，持續(xù)9天。該研究中測試的肽包括SEQIDNO:12的肽、SEQIDNO:17的肽、SEQIDNO:18的肽及SEQIDNO:19的肽。各肽的劑量不同——SEQIDNO:12、17及19的各肽以3nmol/kg或9nmol/kg的劑量給予，而SEQIDNO:18的肽以1nmol/kg、3nmol/kg或9nmol/kg的劑量給予。研究的每一天測量累積體重變化(以克計(jì))且結(jié)果示于圖1中。數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM。該研究中測試的各肽顯示體重降低作用。以3nmol/kg劑量或9nmol/kg劑量給予肽的各組小鼠在早在研究的第1天即顯示體重降低(與載體治療的小鼠相比)。在研究的第9天，給予3nmol/kg的SEQIDNO:12的肽的小鼠顯示約5.3％體重降低，而給予9nmol/kg劑量的SEQIDNO:12的肽的小鼠顯示約29.8％體重減輕。在研究的第9天，給予3nmol/kg的SEQIDNO:17的肽的小鼠顯示約9.6％體重降低，而給予9nmol/kg的SEQIDNO:17的肽的小鼠顯示約35.5％體重減輕。在研究的第9天，給予3nmol/kg的SEQIDNO:18的肽的小鼠顯示約12.3％體重降低，而給予9nmol/kg的SEQIDNO:18的肽的小鼠顯示約26.8％體重減輕。在研究的第9天，給予3nmol/kg的SEQIDNO:19的肽的小鼠顯示約8.1％體重降低，而給予9nmol/kg的SEQIDNO:19的肽的小鼠顯示約31.5％體重減輕。除累積體重變化外，還測量DIO小鼠的周圍葡萄糖水平。如圖2所示，給予3nmol/kg或9nmol/kg劑量的SEQIDNO:18的肽的小鼠顯示到第4天周圍葡萄糖顯著降低(與載體相比為-29％；P<0.05)。給予9nmol/kg的SEQIDNO:19的肽的小鼠顯示在第4天葡萄糖水平降低約40％(相比于載體對照小鼠；P<0.05)、在第7天葡萄糖水平降低約39％(相比于載體對照小鼠；P<0.05)以及在第9天葡萄糖水平降低約26％(相比于載體對照小鼠；P<0.05)。給予9nmol/kg的SEQIDNO:17的肽的小鼠顯示在第4天和第7天葡萄糖水平降低約48％(相比于載體對照小鼠；P<0.05)、在第9天葡萄糖水平降低約45％(相比于載體對照小鼠；P<0.05)。給予3nmol/kg的SEQIDNO:17的肽的小鼠顯示在第7天葡萄糖水平降低約28％(相比于載體對照小鼠；P<0.05)以及在第9天葡萄糖水平降低約19％(相比于載體對照小鼠；P<0.05)。實(shí)施例8通過每天一次給予載體對照、市售產(chǎn)品(利拉魯肽)、SEQIDNO:20的肽或SEQIDNO:17的肽持續(xù)21天，在肥胖獼猴中確認(rèn)本發(fā)明的肽的體內(nèi)作用。利拉魯肽以20μg/kg的劑量皮下給予，而SEQIDNO:17和SEQIDNO:20的肽以3μg/kg的劑量皮下給予。所有肽在獼猴體內(nèi)具有相當(dāng)?shù)乃幬飫?dòng)力學(xué)(t1/2為約10小時(shí))和類似的血漿蛋白結(jié)合(>98％)。測量體重和食物攝取。如圖3A所示，給予SEQIDNO:17的肽的肥胖猴與利拉魯肽和SEQIDNO:20的肽相比，顯示優(yōu)異的體重減輕(與基線和載體相比為-1.2kg，P<0.05)。用利拉魯肽(-13.1±1.9％)或用SEQIDNO:17的肽(-25.7％±3.2％，相對于利拉魯肽，P<0.05)治療后，觀察到食物攝取顯著減少(圖3B中表示為相對于基線的變化％)。一周洗出后，用SEQIDNO:17的肽治療的動(dòng)物再次獲得在長期治療期間減輕的大部分體重(第28天)。在圖3A和3B中，數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM。＊相對于載體P<0.05，^SEQIDNO:17的肽相對于利拉魯肽P<0.05。實(shí)施例9在年齡為16-26歲且平均體重為約22kg的糖尿病獼猴(n＝7)中測試本發(fā)明的肽的體內(nèi)作用。向年齡為16-26歲且平均體重為約22kg的糖尿病獼猴(n＝7)給予載體對照、10μg/kg皮下劑量的利拉魯肽或1μg/kg皮下劑量的SEQIDNO:17的肽，持續(xù)10天。在研究期間測量體重，并且發(fā)現(xiàn)在治療期內(nèi)于這些動(dòng)物中未觀察到體重影響。在各治療結(jié)束時(shí)，首先測量空腹血糖(FBG)，接著進(jìn)行膳食耐測量試(MTT)以評估葡萄糖耐受性。如圖4所示，用SEQIDNO:17的肽治療的糖尿病猴顯示FBG顯著降低(120±20mg/mL對158±15mg/mL，SEQIDNO:17的肽對載體(-25％)，P<0.05；圖4)。此外，用SEQIDNO:17的肽治療的猴顯示與載體對照猴相比在MTT期間的葡萄糖耐受性提高(圖4)。數(shù)據(jù)在圖4中表示為平均值±SEM。＊相對于載體P<0.05。本文所引用的包括公開、專利申請和專利在內(nèi)的所有文獻(xiàn)以援引方式并入本文，程度如同各文獻(xiàn)個(gè)別地且明確地指示以援引方式并入且其全文在本文中闡明。除非本文另有指示或與上下文明顯沖突，否則在描述本發(fā)明的上下文中(尤其在以下權(quán)利要求的上下文中)，術(shù)語“一(a/an)”和“該(the)”及類似指示物的使用解釋為涵蓋單數(shù)和復(fù)數(shù)。除非另外說明，否則術(shù)語“包含(comprising)”、“具有”、“包括(including)”及“含有(containing)”解釋為開放式術(shù)語(即表示“包括但不限于”)。除非本文另有指示，否則本文中引述值的范圍僅旨在用作個(gè)別地提及屬于該范圍內(nèi)的每一單獨(dú)值以及各端點(diǎn)的縮寫方法，并且每一單獨(dú)值以及端點(diǎn)并入本說明書中，如同其在本文中個(gè)別地引述。除非本文另有指示或以其他方式與上下文明顯沖突，否則本文所述的所有方法可以任何適合的次序執(zhí)行。除非另有聲明，否則本文提供的任何及所有實(shí)例或示例性用語(例如“諸如”)的使用僅旨在更好地說明本發(fā)明且并不對本發(fā)明的范圍施加限制。本說明書的用語均不應(yīng)解釋為指示任何未主張的要素為實(shí)施本發(fā)明所必需的。本文描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，包括本發(fā)明人已知的用于實(shí)施本發(fā)明的最佳方式。這些優(yōu)選實(shí)施方案的變化在本領(lǐng)域普通技術(shù)人員閱讀前述描述后變得顯而易見。本發(fā)明人預(yù)期技術(shù)人員適當(dāng)時(shí)采用這樣的變化，并且本發(fā)明人預(yù)期以與本文具體說明不同的其他方式實(shí)施本發(fā)明。因此，當(dāng)適用法律允許時(shí)，本發(fā)明包括隨附權(quán)利要求所引述的主題的所有修改和等同物。此外，除非本文另有指示或以其他方式與上下文明顯沖突，否則本發(fā)明涵蓋了上述要素以其所有可能變化形式的任何組合。當(dāng)前第1頁1 2 3