專利名稱：一種金槍魚(yú)碎肉蛋白抗氧化肽及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種金槍魚(yú)碎肉蛋白抗氧化肽，本發(fā)明還涉及該金槍魚(yú)碎肉蛋白抗氧化肽的制備方法，本發(fā)明還涉及該金槍魚(yú)碎肉蛋白抗氧化肽的用途。
背景技術(shù)：
抗氧化劑是一類可以阻止氧氣不良影響，幫助捕獲并中和自由基，從而祛除自由基對(duì)人體損害和保護(hù)食品免受氧化損傷變質(zhì)的一類物質(zhì)?？寡趸瘎┌凑諄?lái)源分為天然抗氧化劑和化學(xué)合成抗氧化劑兩類?；瘜W(xué)合成抗氧化劑(如丁基羥基茴香醚(BHA)、二丁基羥基甲苯(BHT)和特丁基對(duì)苯二酚(TBHQ)等)由于價(jià)格便宜、活性好，因而被廣泛地應(yīng)用到食品工業(yè)中阻止或延緩食品氧化變質(zhì)、提高食品穩(wěn)定性和延長(zhǎng)食品貯存期。然而，世界衛(wèi)生組織(FA0/WH0)、歐共體兒童保護(hù)組織(HACSG)、英國(guó)生物工業(yè)協(xié)會(huì)(BIBRA)、日本、美國(guó)的政府和組織的研究表明，合成抗氧化劑具有諸多副作用，如對(duì)人體的肝、脾、肺均有不利影響，會(huì)誘發(fā)惡性腫瘤等。所以美國(guó)食品藥品管理局(FDA)建議在一般認(rèn)為安全的物質(zhì)中刪去BHT ；日本有關(guān)衛(wèi)生部門(mén)經(jīng)研究曾做出禁止使用BHA的結(jié)論；對(duì)于TBHQ，雖然美國(guó)等少數(shù)國(guó)家批準(zhǔn)了它在某些油脂中的使用，但歐盟、日本等國(guó)家認(rèn)為它的毒理試驗(yàn)資料不完善，尚未批準(zhǔn)使用。因此，基于食品安全的考慮，化學(xué)合成抗氧化劑的應(yīng)用受到了較大影響。事實(shí)也證明，在人們長(zhǎng)期食用的食品中，天然抗氧化劑成分的毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于人工合成的抗氧化劑毒性。因此，近年來(lái)從自然界中尋求天然抗氧化劑的研究引起了各國(guó)科學(xué)家的高度重視。目前，世界各國(guó)已從多種植物、動(dòng)物組織中提取得到了多種抗氧化活性顯著的物質(zhì)，如茶葉中的茶多酚、大豆中的異黃酮、河蟹及蝦外殼中的蝦青素，枸杞中的多糖，蔬菜水果中的類胡蘿卜素和抗壞血酸等物質(zhì)。而已有的研究揭示，多肽類物質(zhì)也具有顯著的抗氧化活性，如存在于肌肉組織中的肌肽不僅可以有效抑制脂肪氧化，而且在肉制品貯藏時(shí)有護(hù)色作用；谷胱甘肽(GSH)亦具有抗氧化作用和整合解毒作用，并具有顯著的抗氧化作用；而以生物蛋白為原料，采用酶解技術(shù)得到的蛋白酶解物及其組成多肽也具有顯著的抗氧化活性，如Suetsuma等從酪蛋白的酶解產(chǎn)物中得到的純度較高的六肽Tyr-Phe-Tyr-Pro-Glu-Leu具有顯著的自由基清除作用；Chen Hua-Ming等從大豆酶解物中制備的五肽Leu-Leu-Pro-His-His具有很強(qiáng)的抗氧化活性；Ali Bougatef等從沙丁魚(yú)蛋白酶解物中制備的三肽Leu-His-Tyr亦顯示出顯著的自由基清除活性；Seung_Jae Lee等從鴨皮酶解物中制備的八肽His-Thr-Val-Gln-Cys-Met-Phe-Gln亦顯示出顯著的自由基清除活性；陳寧等從胡桃酶解物中制備的四肽Ala-Asp-Ala-Phe表現(xiàn)出與谷胱甘肽(GSH)類似的抗氧化活性；王勇剛研究發(fā)現(xiàn)魚(yú)精多肽中的二肽Pro-Arg可顯著清除羥自由基，而且還可有效降低MRC-5 (胚肺細(xì)胞)胞內(nèi)自由基的含量，從而保護(hù)細(xì)胞避免氧化損傷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的第一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)上述的技術(shù)現(xiàn)狀提供一種金槍魚(yú)碎肉蛋白抗氧化肽，該抗氧化肽安全無(wú)毒副作用，抗氧化活性強(qiáng)和易于消化吸收，可清除自由基和抑制脂質(zhì)過(guò)氧化作用。本發(fā)明所要解決的第二個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供一種金槍魚(yú)碎肉蛋白抗氧化肽的制備方法，工藝科學(xué)合理、易操作。本發(fā)明所要解決的第三個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供一種金槍魚(yú)碎肉蛋白抗氧化肽的應(yīng)用。本發(fā)明為解決上述第一個(gè)技術(shù)問(wèn)題所采取的技術(shù)方案為:一種金槍魚(yú)碎肉蛋白抗氧化肽，其特征在于該抗氧化肽的氨基酸序列為T(mén)yr-Glu-Asn-Gly-Gly SEQ ID NO:1,HR-ES1-MS 檢測(cè)給出分子離子峰539.2096 Da[M+H] +。本發(fā)明為解決上述第二個(gè)技術(shù)問(wèn)題所采取的技術(shù)方案為:一種金槍魚(yú)碎肉蛋白抗氧化肽的制備方法，其特征在于包括以下步驟:
1)以脫脂金槍魚(yú)碎肉作為原料，按固液比Ig:15mL 25mL加入磷酸鹽緩沖液(pH
5.5 6.5)，用HCl或NaOH調(diào)節(jié)pH到5.0 7.0，得混合液；
2)將混合液溫度升至55V 65 1:攪拌預(yù)熱10 min 15 min，按照脫脂魚(yú)肉質(zhì)量的1.0 % 1.2 %加入木瓜蛋白酶，酶解溫度為55 V 65 °C，酶解時(shí)間I h 3 h，得酶解產(chǎn)物；
3 )將制備的脫脂魚(yú)肉蛋白酶解產(chǎn)物先經(jīng)滅酶處理得金槍魚(yú)碎肉蛋白酶解液，再將酶解液依次經(jīng)脫鹽、超濾和層析，得到抗氧化肽。作為改進(jìn)，所述步驟I)中的脫脂金槍魚(yú)碎肉的制備過(guò)程為:將洗凈除雜的金槍魚(yú)碎肉按照固液比I g:l mL 2 mL放入磷酸鹽緩沖液(pH 5.5飛.5)中，用高速組織搗碎機(jī)將其處理成勻漿，然后按照體積比1:2 4放入乙醚中脫脂20 25 h，用冷凍離心機(jī)在3 5°C溫度下以4000 5000 rpm離`心10 15 min除去乙醚,收集固形物即得到脫脂金槍魚(yú)碎肉。作為優(yōu)選,所述步驟2)中的木瓜蛋白酶的酶活力>1.5X IO6 U/go作為改進(jìn)，所述步驟3)中的滅酶處理為:將金槍魚(yú)碎肉蛋白酶解產(chǎn)物升溫至90V ~ 100°C，并于此溫度保持10 mirTl5min后，冷卻至15 V ~ 25 °C，然后離心，得金槍魚(yú)碎肉蛋白酶解液。再改進(jìn)，所述步驟3)的脫鹽、超濾和層析的具體過(guò)程為:
脫鹽:將得到的金槍魚(yú)碎肉蛋白酶解液制成濃度為15 mg/ mL 20 mg/mL溶液，加入到大孔樹(shù)脂層析柱進(jìn)行脫鹽，然后用質(zhì)量濃度45飛5%乙醇進(jìn)行洗脫，得脫鹽金槍魚(yú)碎肉蛋白酶解液。脫鹽酶解液于40 °C以下低壓旋蒸除去乙醇后，冷凍干燥得脫鹽酶解物干粉；超濾:將脫鹽后的酶解物干粉溶于pH 5.5飛.5的磷酸鹽緩沖液配成8 12 mg/mL的溶液，于0.1 0.15 MPa的工作壓力和20 25 °C的工作溫度下采用超濾膜進(jìn)行超濾處理，收集分子量小于I kDa部分，得超濾酶解液；
層析:將上述超濾酶解液用pH 5.5飛.5的磷酸鹽緩沖液配成8 12 mg/mL的溶液，經(jīng)過(guò)陰離子交換樹(shù)脂分離，用水、0.09 0.11 mol/L,0.45^0.55 mol/L和0.9 1.1 mol/L NaCl溶液進(jìn)行洗脫，根據(jù)280 nm下的吸光度曲線收集洗脫組分，其中，DPPH自由基清除活性最高組分為離子交換層析酶解物；將上述離子交換層析酶解物用PH 5.5飛.5磷酸鹽緩沖液配成8 12 mg/mL的溶液，經(jīng)過(guò)凝膠柱層析分離，用pH 5.5飛.5磷酸鹽緩沖液進(jìn)行洗脫，根據(jù)280 nm下的吸光度曲線收集洗脫組分，其中，DPPH自由基清除活性最高組分為凝膠層析酶解液，將上述凝膠層析酶解液用PH 5.5飛.5磷酸鹽緩沖液配成45飛5 μ g/mL的溶液，利用反相高效液相色譜(RP-HPLC)進(jìn)行純化，根據(jù)抗氧化活性得I個(gè)高活性抗氧化肽Tyr-Glu-Asn-Gly-Gly SEQ ID NO:1。優(yōu)選，所述大孔樹(shù)脂為DlOl。再優(yōu)選，所述陰離子交換樹(shù)脂為DEAE-52纖維素，所述凝膠為葡聚糖凝膠G_25 ;所述反相高效液相色譜條件為:進(jìn)樣量19 21 μ g;色譜柱為Zorbax C18;柱溫為25 °CV流動(dòng)相:A為含0.1%三氟乙酸的水，B為含0.1%三氟乙酸的乙腈；梯度洗脫:0-55 min乙腈濃度從O至50%,每5 min增加5% ;洗脫速度1.0 mL/min ;紫外檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm。最后，所述金槍魚(yú)碎肉為鰹魚(yú)QKa tsuwonus pelami51)碎肉。本發(fā)明為解決上述第三個(gè)技術(shù)問(wèn)題所采取的技術(shù)方案為:一種金槍魚(yú)碎肉蛋白抗氧化肽的應(yīng)用，其特征在于Tyr-Glu-Asn-Gly-Gly SEQ ID NO:1對(duì)DPPH自由基、羥基自由基、ABTS自由基和超氧陰離子自由基具有良好的清除作用；同時(shí)，Tyr-Glu-Asn-Gly-GlySEQ ID NO:1亦顯示出良好的脂質(zhì)過(guò)氧化抑制作用；Tyr-Glu-Asn-Gly-Gly SEQ ID NO:1具有安全無(wú)毒副作用、抗氧化活性強(qiáng)和易于消化吸收等優(yōu)點(diǎn)，可以作為藥品、保健食品和食品添加劑進(jìn)行應(yīng)用。 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:本發(fā)明工藝科學(xué)合理，選用木瓜蛋白酶作為酶解用酶，通過(guò)生物酶解法同時(shí)融合大孔樹(shù)脂脫鹽、超濾分級(jí)和色譜精制，酶解過(guò)程易監(jiān)控，同時(shí)制得的抗氧化肽具有較高的活性；與化學(xué)合成的抗氧化劑相比較，本發(fā)明制得的抗氧化肽具有安全無(wú)毒副作用、抗氧化活性強(qiáng)和易于消化吸收等優(yōu)點(diǎn)，可以作為藥品、保健食品和食品添加劑等。


圖1是本發(fā)明的陰離子交換樹(shù)脂DEAE-52纖維素層析圖2分離各組分的DPPH自由基清除活性圖3是本發(fā)明的葡聚糖凝膠G-25層析圖(A)和所分離各組分的DPPH自由基清除活性圖(B)；
圖4是本發(fā)明的葡聚糖凝膠G-25制備酶解物(F43)的RP-HPLC分析圖5是本發(fā)明的Tyr-Glu-Asn-Gly-Gly SEQ ID NO:1的反相高效液相色譜(RP-HPLC)；
圖 6 是本發(fā)明的 Tyr-Glu-Asn-Gly-Gly SEQ ID NO:1 的高分辨質(zhì)譜(HR-ES1-MS)圖。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合附實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。實(shí)施例:
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。實(shí)施例:參照?qǐng)D1至圖6，一種金槍魚(yú)碎肉蛋白抗氧化肽的制備方法，制備工藝流程如下:金槍魚(yú)碎肉〃脫脂〃酶解〃酶解物〃大孔樹(shù)脂脫鹽〃超濾〃離子交換層析〃凝膠過(guò)濾層析〃高效液相色譜制備〃抗氧化肽。I)將洗凈除雜的金槍魚(yú)碎肉按照固液比I g:l mL放入磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)中，用高速組織搗碎機(jī)將其處理成勻漿，然后按照體積比1: 3放入乙醚中脫脂24 h，用冷凍離心機(jī)在4°C下以5000 rpm離心15 min除去乙醚，收集固形物，即為脫脂金槍魚(yú)碎肉；
2)將脫脂金槍魚(yú)碎肉按固液比Ig:20mL加入磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)，用0.1 mol/LHCl或0.1 mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH到6.0，得混合液；
3)將混合液溫度升至601:攪拌預(yù)熱10 min，按照脫脂魚(yú)肉質(zhì)量的1.2 %加入木瓜蛋白酶，酶解溫度為60 °C，酶解時(shí)間2 h，得酶解產(chǎn)物；
4)將步驟3)所得的酶解產(chǎn)物先經(jīng)滅酶處理得酶解液，再將酶解液依次經(jīng)脫鹽、超濾和層析，得到抗氧化肽，利用氨基酸序列分析和質(zhì)譜測(cè)定其結(jié)構(gòu)，具體過(guò)程為:
①滅酶:酶解產(chǎn)物升溫至90V 95°C，并于此溫度保持10 mirTl5min后，冷卻至15V 25 °C，然后離心，得酶解液；
②脫鹽:將得到的酶解液制成濃度為15mg/ mL 20 mg/mL溶液，加入到DlOl大孔樹(shù)脂層析柱進(jìn)行脫鹽，然后用50%乙醇進(jìn)行洗脫得洗脫液，洗脫液于40 V以下低壓旋蒸除去乙醇后進(jìn)行冷凍干燥，得脫鹽酶解物干粉；
③超濾:將上述脫鹽酶解物干粉溶于磷酸鹽緩沖液(pH6.0)配成10 mg/mL的溶液，于
0.1 0.15 MPa的工作壓力和20 25 °C的工作溫度下采用超濾膜進(jìn)行超濾處理，收集分子量小于I kDa部分，得超濾酶解液；
④陰離子交換層析:將上述超濾酶解液用磷酸鹽緩沖液(pH6.0)配成10 mg/mL的溶液，經(jīng)過(guò)DEAE-52纖維素 陰離子交換樹(shù)脂分離，用水、0.1 mol/L、0.5 mol/L和1.0 mol/LNaCl溶液進(jìn)行洗脫，根據(jù)280nm下的吸光度曲線收集洗脫組分，其中，DPPH自由基清除活性最高組分為離子交換酶解液(F4)(圖1、2)；
⑤凝膠色譜層析:將所述離子交換酶解液(F4)用磷酸鹽緩沖液(pH6.0)配成10 mg/mL的溶液，經(jīng)過(guò)葡聚糖凝膠G-25柱層析分離，用磷酸鹽緩沖液進(jìn)行洗脫，根據(jù)280nm下的吸光度曲線收集洗脫組分，其中，DPPH自由基清除活性最高組分為凝膠層析酶解液(F43)(圖3)。⑥高效液相色譜精制:將上述凝膠層析酶解液用磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)配成50μ g/mL的溶液，利用反相高效液相色譜(RP-HPLC)進(jìn)行純化(條件:進(jìn)樣量20 μ g ;色譜柱為Zorbax C18 (250 mm X 4.6 mm, 5 μ m);柱溫為室溫；流動(dòng)相:A水(含0.1%三氟乙酸)和B乙腈(含0.1%三氟乙酸);梯度洗脫:0-55 min乙腈濃度從O至50%，每5 min增加5% ；洗脫速度1.0 ml/min;紫外檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm)，根據(jù)抗氧化活性得I個(gè)高活性抗氧化肽(見(jiàn)圖4)。⑦結(jié)構(gòu)檢測(cè):收集活性最高的I個(gè)抗氧化肽經(jīng)檢測(cè)為單一峰(見(jiàn)圖5)，利用蛋白/多肽序列分析儀測(cè)定氨基酸序列為T(mén)yr-Glu-Asn-Gly-Gly SEQ ID NO:1, HR-ES1-MS檢測(cè)給出分子離子峰539.2096 Da (見(jiàn)圖6)。將上述制得的金槍魚(yú)碎肉醇溶蛋白抗氧化肽Tyr-Glu-Asn-Gly-Gly SEQ ID NO:I進(jìn)行DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)、羥基自由基清除實(shí)驗(yàn)、ABTS自由基清除實(shí)驗(yàn)、超氧陰離子自由基清除實(shí)驗(yàn)和脂質(zhì)過(guò)氧化抑制實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明=Tyr-Glu-Asn-Gly-Gly SEQ ID Ν0:1對(duì) DPPH 自由基(EC501.21 mg/mL)、羥基自由基(EC5tl 0.11 mg/mL), ABTS (EC50 0.13 mg/mL)和超氧陰離子自由基均具有良好的清除作用；同時(shí)，Tyr-Glu-Asn-Gly-Gly SEQ IDNO:1亦顯示出良好的脂質(zhì)過(guò)氧化抑制作用。盡管已結(jié)合優(yōu)選的實(shí)施例描述了本發(fā)明，然其并非用以限定本發(fā)明，任何本領(lǐng)域技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，能夠?qū)υ谶@里列出的主題實(shí)施各種改變、同等物的置換和修改 ，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍當(dāng)視所提出的權(quán)利要求限定的范圍為準(zhǔn)。SEQUENCE LISTING<110>浙江海洋學(xué)院
〈120〉一種金槍魚(yú)碎肉蛋白抗氧化肽及其制備方法和用途
〈130〉2012
〈160〉1
<170>PatentIn version 3.3
〈210〉I
〈211〉5
〈212〉PRT
<213>Thunnus sp.
〈400〉I
Tyr Glu Asn Gly GlyI權(quán)利要求
1.一種金槍魚(yú)碎肉蛋白抗氧化肽，其特征在于該抗氧化肽的氨基酸序列為T(mén)yr-Glu-Asn-Gly-Gly SEQ ID NO:1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金槍魚(yú)碎肉蛋白抗氧化肽，其特征在于:所述的抗氧化肽的HR-ES1-MS 檢測(cè)的分子離子峰為539.2096 Da [M+H] +。
3.—種金槍魚(yú)碎肉蛋白抗氧化肽的制備方法，其特征在于包括以下步驟:O以脫脂金槍魚(yú)碎肉作為原料，加入緩沖液調(diào)節(jié)PH到5.0 7.0，得混合液；2)將混合液溫度升至55V 65 °C攪拌預(yù)熱，按照脫脂魚(yú)肉質(zhì)量的0.8 % 1.2 %加入木瓜蛋白酶，酶解溫度為55 V 65 °C，酶解時(shí)間I h 3 h，得酶解產(chǎn)物；3)將得到的酶解產(chǎn)物先經(jīng)滅酶處理得酶解液，再將酶解液依次經(jīng)脫鹽、超濾和層析，得到抗氧化肽。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于所述步驟I)中的脫脂金槍魚(yú)碎肉的制備過(guò)程為:將洗凈除雜的金槍魚(yú)碎肉按照固液比I g:1 mL 2 mL放入緩沖液中，用高速組織搗碎機(jī)將其處理成勻漿，然后按照體積比1:2 4放入乙醚中脫脂20 25 h，用冷凍離心機(jī)在:T5°C溫度下以4000 5000 rpm離心10 15 min除去乙醚，收集固形物即得到脫脂金槍魚(yú)碎肉。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于所述步驟2)中的木瓜蛋白酶的酶活力彡1.5 X IO6 U/g。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于所述步驟3)中的滅酶處理為:將酶解產(chǎn)物升溫至90 °C 95°C ，并于此溫度保持10 mirTl5min后，冷卻至15 °C 25 °C，然后離心，得酶解液。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于所述步驟3)的脫鹽、超濾和層析的具體過(guò)程為:脫鹽:將得到的酶解液制成濃度為15 mg/ mL 20 mg/mL溶液，加入到大孔樹(shù)脂層析柱進(jìn)行脫鹽，然后用質(zhì)量濃度45飛5%乙醇進(jìn)行解析，40 °C以下低壓旋蒸除去乙醇，濃縮液進(jìn)行冷凍干燥，得脫鹽酶解物干粉；超濾:將脫鹽后的酶解物干粉溶于PH 5.5飛.5的磷酸鹽緩沖液配成8 12 mg/mL的溶液，于0.1 0.15 MPa的工作壓力和20 25 °C的工作溫度下采用超濾膜進(jìn)行超濾處理，收集分子量小于I kDa部分，得超濾酶解液；層析:將上述超濾酶解液用PH 5.5飛.5的磷酸鹽緩沖液配成8 12 mg/mL的溶液，經(jīng)過(guò)陰離子交換樹(shù)脂分離，用水、0.09 0.11 mol/L、0.45 0.55 mol/L和0.90 1.10 mol/L NaCl溶液進(jìn)行洗脫，根據(jù)280nm下的吸光度曲線收集洗脫組分，其中，DPPH自由基清除活性最高組分為離子交換層析酶解液；將所述離子交換層析酶解液用PH 5.5飛.5磷酸鹽緩沖液配成8 12 mg/mL的溶液，經(jīng)過(guò)凝膠柱層析分離，用磷酸鹽緩沖液進(jìn)行洗脫，根據(jù)280nm下的吸光度曲線收集洗脫組分，其中，DPPH自由基清除活性最高組分為凝膠層析酶解液，將上述凝膠層析酶解液用PH 6.0磷酸鹽緩沖液配成45飛5 μ g/mL的溶液，利用反相高效液相色譜RP-HPLC進(jìn)行純化。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于所述大孔樹(shù)脂為DlOl;所述陰離子交換樹(shù)脂為DEAE-52纖維素，所述凝膠為葡聚糖凝膠G-25 ;所述反相高效液相色譜條件為:進(jìn)樣量19 21 μ g ;色譜柱為Zorbax C18 ;柱溫為25 V ;流動(dòng)相:A含0.1%三氟乙酸的水，B含0.1%三氟乙酸的乙腈；梯度洗脫:0-55 min乙腈濃度從O至50%，每5 min增加5% ;洗脫速度1.0 ml/min ;紫外檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法,其特征在于所述金槍魚(yú)碎肉為鰹魚(yú)Ofatswro/HAspel ami s )碎肉。
10.一種金槍魚(yú)碎肉蛋白抗氧化肽的應(yīng)用，其特征在于Tyr-Glu-Asn-Gly-Gly SEQID N0:1對(duì)DPPH自由基、羥基自由基、ABTS自由基和超氧陰離子自由基的清除的應(yīng)用；Tyr-Glu-Asn-Gly-Gly SEQ ID NO:1 對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化抑制的應(yīng)用；Tyr-Glu-Asn-Gly-GlySEQ ID NO:1作為藥品、 保健食品和食品添加劑的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種金槍魚(yú)碎肉蛋白抗氧化肽及其制備方法和用途，該抗氧化肽的氨基酸序列為T(mén)yr-Glu-Asn-Gly-Gly，制備時(shí)以脫脂金槍魚(yú)碎肉作為原料，加入磷酸鹽緩沖液，調(diào)節(jié)pH到5.0~7.0，得混合液；將混合液攪拌預(yù)熱，加入木瓜蛋白酶，得酶解產(chǎn)物；將酶解產(chǎn)物先滅酶再依次經(jīng)脫鹽、超濾和層析，得到抗氧化肽。本發(fā)明制備工藝科學(xué)合理，酶解過(guò)程易監(jiān)控，制得的抗氧化肽具有安全無(wú)毒副作用、抗氧化活性強(qiáng)和易于消化吸收等優(yōu)點(diǎn)，可以作為藥品、保健食品和食品添加劑等應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P39/06GK103073621SQ20121055806
公開(kāi)日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2012年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月20日
發(fā)明者王斌, 羅紅宇, 李忠瑞, 胡發(fā)遠(yuǎn) 申請(qǐng)人:浙江海洋學(xué)院