專利名稱：吸附無細胞百白破-Sabin株脊髓灰質炎聯(lián)合疫苗及其制備的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種吸附無細胞百日咳、白喉、破傷風和Sabin株脊髓灰質炎聯(lián)合疫苗及其制備工藝，屬于醫(yī)學生物技術領域。
背景技術：
百日咳是由百日咳桿菌引起的小兒呼吸道傳染病，傳染性很強。臨床特征為咳嗽逐漸加重、呈陣發(fā)性痙攣性咳嗽，未經(jīng)治療的病人，病程可延續(xù)2 3月，百日咳病是影響兒童健康和導致死亡的主要疾病之一，在未實行計劃免疫前，5歲以下兒童發(fā)病率達到 20-60%。白喉是由白喉桿菌引起的急性呼吸道傳染病，以咽、喉等處粘膜充血、腫脹并有灰白色偽膜形成為突出臨床特征，嚴重者可引起心肌炎與末梢神經(jīng)麻痹。因呼吸道堵塞和心臟衰竭的致死率高達10%。破傷風是由破傷風桿菌侵入傷口，并在傷口內(nèi)繁殖、分泌毒素而引起的急性特異性感染，主要表現(xiàn)為全身或局部肌肉的持續(xù)性收縮和陣發(fā)性痙攣。破傷風桿菌是一種革蘭氏陽性厭氧芽胞桿菌，廣泛存在于泥土、糞便之中，對環(huán)境有很強的抵抗力。破傷風桿菌主要通過其在繁殖過程中所產(chǎn)生的外毒素對人體造成危害的，外毒素分為痙攣毒素和溶血毒素兩種，前者對人體神經(jīng)有特別親和力，會引起全身橫紋肌群的緊張性收縮和陣發(fā)性痙攣；后者則會引起組織局部壞死和心肌損害，死亡率高達10-20%。自二十世紀70年代后期實施計劃免疫后，全菌體百白破(Daphtheria Tetanus and whole Pertussis Combined Vaccine，，簡稱DTwP)聯(lián)合疫苗覆蓋率大大提高。近年來，吸附無細胞白百破聯(lián)合疫苗(Diphtheria, Tetanus and acellular Pertusis Combined Vaccine, absorbed，簡稱DTaP)，因具有良好的免疫原性和安全性，而廣泛用于兒童的預防接種。 DTaP是經(jīng)培養(yǎng)，提純百日咳抗原成分、精制白喉類毒素、精制破傷風類毒素，用氫氧化鋁吸附制成，DTaP聯(lián)合疫苗的人群血清學效果和人群保護率與DTwP疫苗相近，副反應明顯低于 DTwP疫苗。隨著免疫規(guī)劃工作的深入開展，2007年中國政府將DTaP納入國家免疫規(guī)劃， 以取代DTwP常規(guī)免疫。脊髓灰質炎(WPV)是由脊髓灰質炎病毒I、II、III型引起的傳播廣泛且危害極大的急性傳染病，能侵襲任何年齡段人群，但主要是3歲以下的兒童(占所有病例的50%)，嚴重造成肢體不可逆轉的麻痹甚至死亡。在疫苗問世前，該病在全世界范圍內(nèi)流行。50年代中后期，美國的兩位科學家Mlk和Sabin先后研制成功脊髓灰質炎滅活疫苗(Inactivated Poliovirus Vaccine,，簡稱IPV)和口服脊髓灰質炎減毒活疫苗(Oral Poliovirus Vaccine，簡稱0PV)。從此人們有了預防和消滅脊髓灰質炎的有力武器，實踐證明這兩種疫苗都是安全有效的。世界衛(wèi)生組織(World Health Organization, WHO) 1988年發(fā)起全球范圍內(nèi)消滅脊髓灰質炎的倡議，此后，消滅脊髓灰質炎的活動在降低脊髓灰質炎的發(fā)病率和減少脊髓灰質炎病毒的傳播范圍方面都取得了重大進展。2007年1月 2008年6月，16個國家從AFP病例的糞便標本中檢測到野毒株(wPV)，只檢測到wPVI型和wPVIII型，自1999年以來在全球范圍內(nèi)未檢測到wPVII型，這些進步的取得歸功于全世界共同實施的消滅脊髓灰質炎策略。在全球消滅脊髓灰質炎(wPV)行動中，口服脊髓灰質炎減毒活疫苗(。PV)得到廣泛應用，已大幅度降低全球脊髓灰質炎的發(fā)病率。然而，由于疫苗相關麻痹型脊髓灰質炎(VaCCine ASS。Ciated ParalytiC P?！?mye“tiS，VAPP)和疫苗衍生脊髓灰質炎病毒(VaCCine—deriVed P?！啊iruS， VDPV)風險，今后必須停止口服脊髓灰質炎減毒活疫苗。PV的使用，以徹底根除脊髓灰質炎。只有使用脊髓灰質炎滅活疫苗IPV才能避免VAPP和VDPV風險。脊髓灰質炎滅活疫苗IPV可預防脊髓灰質炎爆發(fā)，并能產(chǎn)生群體免疫力，是消滅脊髓灰質炎后續(xù)階段的最佳選擇。目前全球有6個廠商在生產(chǎn)IPV，但所使用的生產(chǎn)毒種均為野毒株。用野毒株生產(chǎn)IPV需達到生物安全水平3級(BS[+一3)的要求，全世界消滅脊髓灰質炎后，甚至BS[+一4的條件亦非絕對保證。對于疫苗生產(chǎn)廠家難以達到如此嚴格的生物安全要求，因而wH。鼓勵疫苗生產(chǎn)廠家研發(fā)減毒株脊髓灰質炎滅活疫苗SabinIPV (InaCtiVated P。l i。ViruS VaCCine， Sabin Strain，簡稱SIPV)。
在我國實施的兒童計劃免疫中，無細胞百白破疫苗、脊髓灰質炎滅活疫苗都是分開接種的，較多的接種針次，復雜化的免疫程序，不僅給家長們帶來諸多麻煩，給兒童帶來痛苦，且增加各種費用，而且會影響接種率，增加交叉感染機會，不利于計劃免疫的推進。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種方便、安全、有效的吸附無細胞百白破一Sabin株脊髓灰質炎聯(lián)合疫苗(DTaP—SIPV)，以徹底消滅脊髓灰質炎和預防白百破，保障兒童健康成長。
本發(fā)明提供的是這樣一種吸附無細胞百白破一Sabin脊髓灰質炎聯(lián)合疫苗，其特征在于每lOO ml聯(lián)合疫苗中含有下列組份無細胞百曰咳原液AP400…1800u曠N破傷風類毒素TT300—700Lf白喉類毒素DT100…0”2500 LfAl(。H)s126一154 mgSIPV I型3000…6000 DUSIPV II型5’700…7100[)USIPV III型4500…9000I)UNaCl765…935mg2一苯氧乙醇o…600mgH，。余量。
所述AP、TT、DT、Al(。H)，、I型SIPV、II型SIPV、III型SIPV、NaCl、2一苯氧乙醇均是常規(guī)產(chǎn)品。
所述H，。為醫(yī)用注射用水。
本發(fā)明提供的吸附無細胞百白破一Sabin株脊髓灰質炎聯(lián)合疫苗經(jīng)過下列方法制得1)制備DTaP和SIPV原液按常規(guī)方法分別制備無細胞百曰咳病毒原液(AP)、破傷風類毒素(TT)和白喉類毒素(DT)，以及I、II、III型Sabin株脊髓灰質炎病毒滅活液sIPV I型、sIPV II型、sIPV III型；
2)按下列配方取料 無細胞百日咳原液AP 破傷風類毒素TT 白喉類毒素DT Al (OH)3 sIPV I 型 sIPV II 型 sIPV III型 NaCl
2-苯氧乙醇 H2O
3)氫氧化鋁吸附
按步驟2)的配比，將Al (OH) 3 (終濃度為1.沈 1. 54mg/ml), NaCl (終濃度為 7. 65、. 35mg/ml)及注射用水混合后，進行高壓滅菌；在室溫及連續(xù)攪拌狀態(tài)下，依次加 Λ DT (終濃度為10 25Lf/ml)、TT (終濃度為3 7Lf/ml)、AP (終濃度為4 18ugPN/ml)及 sIPV I型(終濃度為3(T60DU/ml)、sIPV II型(終濃度為57 71DU/ml)、sIPV III型(終濃度為 45 90DU/ml)；調(diào)節(jié)pH值為5. 8 7. 2，加入2-苯氧乙醇(終濃度為(T6mg/ml)防腐劑，分裝，得IOOml吸附無細胞百白破-Sabin株脊髓灰質炎聯(lián)合疫苗。所述步驟1)的常規(guī)方法是根據(jù)中華人民共和國藥典2010年版要求來制備各原液的，其中所用的百日咳I相CS菌株(菌號為58003-3)、破傷風梭狀芽孢桿菌(菌號為64008) 和白喉桿菌PW8株(菌號為38007)均購自中國食品藥品檢定研究院血清室；所用脊髓灰質炎病毒I型為SabinS0+2, II型為SabinS0+2，III型為PfizerSOR+Ι，均購自世界衛(wèi)生組織 WHO。所述步驟2 )的PH值控制用pH8. 0的PB液進行調(diào)節(jié)。本發(fā)明與傳統(tǒng)疫苗相比具有以下優(yōu)點和效果
1、聯(lián)合疫苗為兒童免疫規(guī)劃的連續(xù)、簡化和擴大所必需，具有預防多種目標疾病，減少接種針次，簡化免疫程序，提高接種率，降低交叉感染機會，為廣大家長和兒童樂于接受，而且節(jié)約各種費用，有利于擴大免疫計劃(Expanded Program on Immunization, EPI)的推廣等優(yōu)越性，因此，制備多價聯(lián)合疫苗是當今世界疫苗研究的發(fā)展方向。2、國內(nèi)外疫苗的生產(chǎn)廠家尚未研發(fā)出DTaP-sIPV，該新型疫苗的研發(fā)成功，在生物安全性及疫苗副反應等方面優(yōu)于現(xiàn)有產(chǎn)品，能夠進一步推進SlPV的使用，對全球和中國最終消滅脊髓灰質炎和預防白百破具有重要意義，并為進一步開發(fā)以DTaP-SlPV為基礎的多價聯(lián)合疫苗打下良好基礎。
具體實施例方式實施例1
1)將購自中國食品藥品檢定研究院血清室的百日咳I相CS菌株(菌號為58003-3)、 破傷風梭狀芽孢桿菌(菌號為64008)和白喉桿菌PW8株(菌號為38007)，以及購自世界衛(wèi)生
400 1800ugPN 300 700Lf 1000^2500 Lf 126 154 mg 3000 6000 DU 5700 7100DU 4500 9000DU 765"935mg 0 600mg 余量；組織WHO的脊髓灰質炎病毒I型SabinS0+2，II型SabinS0+2，III型PfizerSOR+Ι，分別按中華人民共和國藥典2010年版要求，制備成無細胞百日咳原液AP、破傷風類毒素TT、白喉類毒素DT、I、II、III型Sabin株脊髓灰質炎病毒滅活液sIPV I型、sIPV II型、sIPV III型，備
2)按下列配方取料無細胞百日咳原液AP400ugPN破傷風類毒素TT700Lf白喉類毒素DT2500LfAl (OH)3154mgsIPV I 型6000DUsIPV II 型7100DUsIPV III型9000DUNaCl935mg2-苯氧乙醇600mgH2O28. Ig ；
3)氫氧化鋁吸附
按步驟2)的配比，取154mg Al(OH)3 (終濃度為1. 54mg/ml)、935mgNaCl (終濃度為 9.Ig注射用水混合后，進行高壓滅菌；在室溫及連續(xù)攪拌狀態(tài)下，依次加入
2500Lf 的 DT (終濃度為 25Lf/ml)、700Lf 的 TT (終濃度為 7Lf/ml )、400ugPN 的 AP (終濃度為 4ugPN/ml)及 6000DU 的 sIPV I 型(終濃度為 60DU/ml )、7100DU 的 sIPV II 型(終濃度為 71DU/ml)、9000DU的sIPVIII型(終濃度為90DU/ml);加pH8. 0的PB液調(diào)節(jié)pH值為5. 8，加入 600mg的2-苯氧乙醇(終濃度為6mg/ml)防腐劑，分裝，得IOOml吸附無細胞百白破-Sabin 株脊髓灰質炎聯(lián)合疫苗。
實施例2
1)同實施例1的步驟1);
2)按下列配方取料
無細胞百日咳原液AP1800ugPN
破傷風類毒素TT300Lf
白喉類毒素DTIOOOLf
Al (OH)3126mg
sIPV I 型6000DU
sIPV II 型5700DU
sIPV III型9000DU
NaCl765mg
H2O8. 6g ；
3)氫氧化鋁吸附
按步驟2)的配比，取126mgAl (OH)3 (終濃度為1. 26mg/ml),935mgNaCl (終濃度為 9. 35mg/ml)及8. 6g注射用水混合后，進行高壓滅菌；在室溫及連續(xù)攪拌狀態(tài)下，依次加入 IOOOLf 的 DT (終濃度為 10Lf/ml)、300Lf 的 TT (終濃度為 3Lf/ml )、1800ugPN 的 AP (終濃度為18ugPN／m1)及6000DU的sIPV I型(終濃度為60DU／m1)、5700DU的sIPV II型(抗原濃度為57DU／m1)、9000DU的sIPV III型(抗原濃度為90DU／m1)；加pH8．OPB液調(diào)節(jié)pH值為7．2，分裝，得lOOml吸附無細胞百白破一Sabin株脊髓灰質炎聯(lián)合疫苗。[OOl 7] 實施例31)同實施例l的步驟1)；2)按下列配方取料無細胞百曰咳原液APllOOugPN破傷風類毒素TT500Lf白喉類毒素DT1800LfAl(OH)，140mgsIPV I型4500DUsIPV II型6400DUs IPV III型6600DUNaCl850mg2一苯氧乙醇300mgH027．2g；3)氫氧化鋁吸附按步驟2)的配比，取140mgAl(OH)，(終濃度為1．40mg／m1)、850mgNaCl(終濃度為8．50mg／m1)及27．2g注射用水混合后，進行高壓滅菌；在室溫及連續(xù)攪拌狀態(tài)下，依次加入1800Lf的DT(終濃度為18Lf／m1)、500Lf的TT(終濃度為5Lf／m1)、llOOugPN的AP(終濃度為l lugPN／m1)及4500DU的sIPV I型(終濃度為45DU／m1)、6400DU的sIPV II型(終濃度為64DU／m1)、6600DU的sIPV III型(終濃度為66DU／m1)；加pH8．OPB液調(diào)節(jié)pH值為6．8，加入300mg的2一苯氧乙醇(終濃度為3mg／m1)防腐劑，分裝，得lOOml吸附無細胞百白破一Sabin株脊髓灰質炎聯(lián)合疫苗。[OOl 8] 實施例41)同實施例l的步驟1)；2)按下列配方取料無細胞百曰咳原液AP1600ugPN破傷風類毒素TT700Lf白喉類毒素DT2500LfAl(OH)，145mgsIPV I型3000DUsIPV II型6400DUs IPV III型4500DUNaCl850mg2一苯氧乙醇400mgH025g；3)氫氧化鋁吸附按步驟2)的配比，取145mgAl(OH)，(終濃度為1．45mg／m1)、850mgNaCl(終濃度為8. 50mg/ml)及25g注射用水混合后，進行高壓滅菌；在室溫及連續(xù)攪拌狀態(tài)下，依次加入 2500Lf 的 DT (終濃度為 25Lf/ml)、700Lf 的 TT (終濃度為 7Lf/ml )U600ugPN 的 AP (終濃度為 18ugPN/ml)及 3000DU 的 sIPV I 型(終濃度為 30DU/ml )、6400DU 的 sIPV II 型(終濃度為64DU/ml)、4500DU的sIPV III型(終濃度為45DU/ml);加pH8. OPB液調(diào)節(jié)pH值為6. 2，加入 400mg的2-苯氧乙醇(終濃度為％ig/ml)防腐劑，分裝，得IOOml吸附無細胞百白破-Sabin 株脊髓灰質炎聯(lián)合疫苗。各實施例成品檢定
實施例1-4制備的各DTaP-sIPV聯(lián)合疫苗分別按《中國藥典》三部(2005版)要求進行毒性試驗、抗原效力試驗、無菌檢查及熱原質試驗，結果見表1、表2。表1疫苗檢定結果
權利要求
1.一種吸附無細胞百白破一Sabin脊髓灰質炎聯(lián)合疫苗，其特征在于每100 ml聯(lián)合疫苗中含有下列組份 無細胞百曰咳原液AP400…1800ugPN 破傷風類毒素TT300—700Lf 白喉類毒素DT1000…2500 Lf Al(。H)，126一154 mg sIPV I型3000…6000 DU SIPV II型5700.7100DU S IPV III型4500.9000DU NaCl765..935mg 2一苯氧乙醇0"600mg H20余量。
2.如權利要求l所述的吸附無細胞百白破一Sabin株脊髓灰質炎聯(lián)合疫苗，其特征在于經(jīng)過下列方法制得 1)制備DTaP和sIPV原液 按常規(guī)方法分別制備無細胞百曰咳病毒原液AP、破傷風類毒素TT和白喉類毒素DT，以及I、II、III型Sabin株脊髓灰質炎病毒滅活液； 2)按下列配方取料 無細胞百曰咳原液AP400…1800ugPN 破傷風類毒素TT300—700Lf 白喉類毒素DT1000…2500 Lf Al(。H)，126一154 mg sIPV I型3000…6000 DU SIPV II型5700.7100DU S IPV III型4500.9000DU NaCl765..935mg 2一苯氧乙醇0"600mg H20余量； 3)氫氧化鋁吸附 按步驟2)的配比，將Al(OH)，(終濃度為1.26一1.54mg／m1)、NaCl(終濃度為7.65…9.35mg／m1)及注射用水混后合，進行高壓滅菌；在室溫及連續(xù)攪拌狀態(tài)下，依次加入DT(終濃度為10…25Lf／m1)、TT(終濃度為3…7Lf／m1)、aP(終濃度為4…18ugPN／m1)及sIPV I型(終濃度為30…60DU／m1)、sIPV II型(終濃度為57…71DU／m1)、sIPV III型(終濃度為45…90DU／m1)；調(diào)節(jié)PH值為5.8—7.2，加入2一苯氧乙醇(終濃度為0"6mg／m1)防腐劑，分裝，得100ml吸附無細胞百白破一Sabin株脊髓灰質炎聯(lián)合疫苗。
3.如權利要求2所述的吸附無細胞百白破一Sabin株脊髓灰質炎聯(lián)合疫苗，其特征在于所述步驟2)的PH值控制用PH8.0的PB液進行調(diào)節(jié)。
全文摘要
本發(fā)明提供一種吸附無細胞百白破-Sabin脊髓灰質炎聯(lián)合疫苗，其特征在于每100ml聯(lián)合疫苗中含有下列組份無細胞百日咳原液AP400～1800ugPN，破傷風類毒素TT300～700Lf，白喉類毒素DT1000~2500Lf，Al(OH)3126～154mg，sIPVⅠ型3000~6000DU，sIPVⅡ型5700~7100DU，sIPVⅢ型4500~9000DU，NaCl765~935mg，2-苯氧乙醇0~600mg，余量為H2O。其生物安全性及疫苗副反應等優(yōu)于現(xiàn)有產(chǎn)品，并具有預防多種目標疾病，減少接種針次，簡化免疫程序，提高接種率，降低交叉感染機會，為廣大家長和兒童樂于接受，而且節(jié)約各種費用，有利于免疫計劃的順利推進。
文檔編號A61P31/04GK102178949SQ201110123949
公開日2011年9月14日 申請日期2011年5月13日 優(yōu)先權日2011年5月13日
發(fā)明者周健, 奚光躍, 姜莉, 姜述德, 姬光, 孫明波, 宋霞, 廖國陽, 楊凈思, 梁疆莉, 衡燮, 陳洪波, 馬艷, 高娜 申請人:中國醫(yī)學科學院醫(yī)學生物學研究所