專利名稱：用于耐受誘導(dǎo)的包含含牛奶肽的水解產(chǎn)物和/或其衍生肽的營養(yǎng)配方的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于在人受試者中誘導(dǎo)耐受的營養(yǎng)配方或補充物，其包含含牛奶肽的水解產(chǎn)物和/或所述水解產(chǎn)物的含肽部分和/或一種或多種來源于牛奶中存在的蛋白質(zhì)的肽，其中所述包含于所述水解產(chǎn)物或水解產(chǎn)物部分中的肽包含含有T細(xì)胞表位的肽，或其中所述ー種或多種肽為含有T細(xì)胞表位的肽，以及其中在攝入所述營養(yǎng)配方后，所述含有T細(xì)胞表位的肽能夠驅(qū)使免疫反應(yīng)朝向耐受。在本說明書中，引用了包括專利申請和制造商手冊在內(nèi)的多個文件。這些文件的公開內(nèi)容，雖然不認(rèn)為與本發(fā)明的專利性相關(guān)，但以其整體通過引用結(jié)合于此。更具體地，所有參考文件通過引用結(jié)合，引用程度如同具體和単獨地指出每ー篇獨立的文件通過引用
彡ロロ。
背景技術(shù)：
牛奶過敏是幼兒中最常見的食物過敏之一，其中所有嬰兒的大約2 %-2. 5 %經(jīng)歷對牛奶的過敏。大多數(shù)兒童在3歲前失去其對牛奶的過敏反應(yīng)，但這些嬰兒中的15%會將其對牛奶的敏感性保留到生命的第二個十年中。因此，有牛奶過敏的受試者存在于所有的年齡組。過敏性疾病如奶過敏是由分泌包括IL-4、IL-5和/或IL-13在內(nèi)的過敏性、炎癥因子的T細(xì)胞亞類的激活所引起的免疫病癥(Schmidt-Weber等，Allergy 2002，第57卷，第762-768頁)。T細(xì)胞的該亞類控制抗原特異性B細(xì)胞至IgE的同種型轉(zhuǎn)換，并因此在過敏性癥狀的起始和耐受誘導(dǎo)中起關(guān)鍵作用。(Kondo等,Pediatr. Allergy Immunol. 2008,第19卷，第592-598頁)。因此，過敏原特異性T細(xì)胞的調(diào)節(jié)是控制過敏性疾病的有前景的策略。為了避免在牛奶過敏受試者中，尤其在有牛奶過敏的嬰兒中在暴露于牛奶后的過敏反應(yīng)，目前大部分使用代替牛奶營養(yǎng)的奶代替物配方。這些配方還為受試者提供完全的營養(yǎng)源。奶代替物包括游離氨基酸(例如Nutrami gen AA, Neocate)、基于大豆的配方(例如Pregomin)或基于部分水解蛋白質(zhì)或廣泛水解蛋白質(zhì)的低變應(yīng)原配方(例如Nutramigen > Alimentum和Pregestemil)。如果過敏受試者對蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物配方無反應(yīng)，則非奶來源的基于氨基酸的配方既適合于治療輕度-中度奶過敏，又適合于治療嚴(yán)重的奶過敏?；诖蠖沟呐浞接羞^敏性敏感的風(fēng)險，因為ー些對奶過敏的受試者也可能對大豆過敏。與廣泛水解產(chǎn)物相比，部分水解產(chǎn)物配方的特征在于更大比例的長氨基酸鏈(肽)，認(rèn)為該配方更可ロ。它們通常打算用于預(yù)防應(yīng)用，一般不被認(rèn)為適于治療奶過敏/不耐受。另ー方面，廣泛水解蛋白質(zhì)主要包含游離氨基酸和短肽。因為其高營養(yǎng)質(zhì)量及其氨基酸組成，酪蛋白和乳清是最常用的用于水解產(chǎn)物的蛋白質(zhì)來源。因此，市場上大多數(shù)的當(dāng)前的牛奶代替物配方是以已水解到不同程度的牛奶和/或氨基酸配方為基礎(chǔ)的。將這些牛奶配方用于代替牛奶，從而減少在牛奶過敏受試者中的過敏反應(yīng)。此外，牛奶配方可在處于形成奶過敏的風(fēng)險中的受試者中潛在地預(yù)防牛奶過敏的形成。然而，偶然觀察到即使廣泛水解產(chǎn)物也在敏化嬰兒中引起過敏反應(yīng)(Rosendal等。Journal of Dairy Science 2000,第 83 卷,第 10 期,第 2200-2210 頁)。因此，對奶過敏的現(xiàn)時治療是完全避免牛奶和食物。因此，以下物質(zhì)會大大地提升有牛奶過敏或有形成牛奶過敏的風(fēng)險的受試者的生命質(zhì)量在攝入所述物質(zhì)后，其可驅(qū)使免疫反應(yīng)朝向?qū)εＤ袒蚝信Ｄ痰氖澄锏哪褪堋１景l(fā)明解決了該需要。
_7] 發(fā)明公開 因此，在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種用于誘導(dǎo)人受試者的耐受的營養(yǎng)配方或補充物，所述營養(yǎng)配方或補充物包含含牛奶肽的水解產(chǎn)物和/或所述水解產(chǎn)物的含肽組分和/或一種或多種來源于牛奶中存在的蛋白質(zhì)的肽，其中所述包含于所述水解產(chǎn)物或水解產(chǎn)物部分中的肽包含含有T細(xì)胞表位的肽，或其中所述ー種或多種肽為含有T細(xì)胞表位的肽，以及其中在攝入所述營養(yǎng)配方后，所述含有T細(xì)胞表位的肽能夠驅(qū)使免疫反應(yīng)朝向耐受。本文所用的術(shù)語“營養(yǎng)配方”描述固態(tài)或液態(tài)配方，因此其可被人受試者作為營養(yǎng)而食用或飲用。本發(fā)明的營養(yǎng)配方對于液態(tài)配方優(yōu)選具有至少I kcal (千卡)/IOOml，更優(yōu)選至少10 kcal/100ml,以及甚至更優(yōu)選50 kcal/100ml的營養(yǎng)價值；對于干燥食物配方優(yōu)選具有至少I kcal/100g,更優(yōu)選至少10 kcal/100g,甚至更優(yōu)選至少50 kcal/100g例如至少100 kcal/100g,以及最優(yōu)選至少300 kcal/100g的營養(yǎng)價值。在本發(fā)明的ー個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的營養(yǎng)配方對于液態(tài)配方具有至少50-200 kcal/100ml的營養(yǎng)價值和對于干燥食物配方具有至少300-600 kcal/lOOg的營養(yǎng)價值。營養(yǎng)配方區(qū)別于疫苗。與疫苗相比，營養(yǎng)配方不包含任何佐劑(除非因為污染)、活化或滅活的病毒化合物(除非因為污染)、活化或滅活的細(xì)菌化合物(除非因為污染)以及致病化合物(除非因為污染)。本文所用的術(shù)語“補充物”涉及營養(yǎng)補充物，其為營養(yǎng)或者其它帶有營養(yǎng)或生理作用的物質(zhì)的濃縮來源，其目的在于補充正常飲食。除以上敘述的成分之外，還可從脂質(zhì)、礦物質(zhì)、碳水化合物、氨基酸、氨基酸螯合物、合成代謝性營養(yǎng)物、維生素、抗氧化劑、益生菌菌株和抗脂肪肝劑中選擇另外的成分以提供最佳的持續(xù)能量和合成代謝性營養(yǎng)配方。所述營養(yǎng)配方可為營養(yǎng)補充物或可提供完整的營養(yǎng)。優(yōu)選所述營養(yǎng)配方呈干燥食物濃縮物的形式。本發(fā)明的營養(yǎng)配方以遞增優(yōu)選為人受試者提供至少5%、至少10%、至少25%、至少50%、至少75%或至少90%的人受試者的每日卡路里需求。本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知每日卡路里需求取決于人受試者的性別、身高和年齡。例如，一名體重80kg以及身高180cm的30歲男性有約2900 cal (卡路里)的每日卡路里需求以維持其體重，而一名體重55kg以及身高165cm的30歲女性有約2100 cal的每日卡路里需求量以維持其體重。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的營養(yǎng)配方是嬰兒配方或用于嬰兒或青少年的營養(yǎng)產(chǎn)品。 本文所用的術(shù)語“肽”描述氨基酸線性分子鏈，包括單鏈分子或其片段。本發(fā)明的肽以以遞增優(yōu)選包含約2-100個氨基酸，約5-50個氨基酸，或約5-40個氨基酸。肽可進(jìn)一步形成由至少兩個相同或相異的分子組成的寡聚物。將這樣的多聚體的相應(yīng)高級結(jié)構(gòu)相應(yīng)地稱為同ニ聚體或異ニ聚體、同三聚體或異三聚體等。此外，術(shù)語“肽”也包括其中氨基酸和/或肽鍵已被功能類似物所置換的這類肽的肽模擬物。這樣的功能類似物包括除20種基因編碼氨基酸之外的所有已知的氨基酸，例如硒代半胱氨酸。術(shù)語“肽”也涉天然修飾的肽，其中修飾例如通過糖基化、こ酰化、磷酸化和本領(lǐng)域熟知的類似修飾來實現(xiàn)。在本發(fā)明中必須將肽與蛋白質(zhì)區(qū)別開。本發(fā)明的蛋白質(zhì)描述了由氨基酸構(gòu)成的有機復(fù)合物，所述氨基酸以直鏈形式排列并折疊成球狀形式。此外，本發(fā)明的蛋白質(zhì)描述多于100個氨基酸的氨基酸。肽可例如重組地、(半)合成地制備，或獲取自天然來源(例如在蛋白質(zhì)水解之后)，全部根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行。本文所用的術(shù)語“含牛奶肽的水解產(chǎn)物”定義包含來源于水解牛奶蛋白質(zhì)(例如牛酪蛋白或牛乳清)的肽的配方。 在這點上，水解蛋白質(zhì)是已分解成肽和/或組分氨基酸的蛋白質(zhì)。雖然有很多實現(xiàn)蛋白質(zhì)水解的方法，但最常用方法中的兩種為在強酸或強堿中長期煮沸，或使用酶(例如胰蛋白酶)以刺激天然存在的水解過程。優(yōu)選使用酶或酶的混合物實現(xiàn)來源于奶的蛋白質(zhì)的水解。牛奶水解產(chǎn)物可包含來源于奶的肽，其中已將所述奶的蛋白質(zhì)水解至不同程度。因此，可區(qū)分部分水解的含牛奶肽的水解產(chǎn)物和廣泛水解的含牛奶肽的水解產(chǎn)物。在這點上，部分水解的含牛奶肽的水解產(chǎn)物包含多于20%的完整牛奶蛋白質(zhì)，而廣泛水解的含牛奶肽的水解產(chǎn)物包含少于1%的大小大于I. 5kD的肽。此外，廣泛水解的含牛奶肽的水解產(chǎn)物優(yōu)選為低變應(yīng)原的。本文所用的術(shù)語“來源于牛奶的肽”定義這樣的肽，所述肽有作為牛奶蛋白質(zhì)的部分氨基酸序列的氨基酸序列。這樣的肽可如上述通過水解獲得或可通過技術(shù)人員已知的方法以及本發(fā)明實施例中描述的方法在體外合成。本發(fā)明的術(shù)語“含有T細(xì)胞表位的肽”描述這樣的肽，所述肽包含能夠與存在于T細(xì)胞上的表面受體結(jié)合的表位。優(yōu)選所述表位能夠與T細(xì)胞受體(TCR)結(jié)合。術(shù)語“水解產(chǎn)物的含肽部分”是指包含至少2個，優(yōu)選至少5個，更優(yōu)選至少10個和最優(yōu)選至少20個氨基酸的肽的混合物，所述肽已通過技術(shù)人員已知的過濾技術(shù)從本發(fā)明的水解產(chǎn)物中分離。此外，本文在下文描述了從本發(fā)明的水解產(chǎn)物中分離肽的技術(shù)。本發(fā)明的術(shù)語“耐受”是指免疫耐受。免疫耐受在本文定義為淋巴組織對特定抗原或抗原組形成特異性惰性或部分惰性。該特定抗原或抗原組能夠在攝入特定抗原或抗原組后的特應(yīng)性人受試者中誘導(dǎo)免疫反應(yīng)。因此，在攝入本發(fā)明的ー種或多種含有T細(xì)胞表位的肽后誘導(dǎo)本發(fā)明的對特定抗原或抗原組的耐受。不希望受理論所束縛，可例如通過特異性過敏原反應(yīng)性T細(xì)胞的無反應(yīng)性和缺失的機制來誘導(dǎo)耐受?；蛘?，可例如通過可向致耐受性或抑制性T細(xì)胞表型(調(diào)控性T細(xì)胞)的發(fā)育方向驅(qū)使T細(xì)胞發(fā)育的細(xì)胞的因子(即細(xì)胞因子)來誘導(dǎo)耐受。在這點上，術(shù)語“在攝入營養(yǎng)配方后能夠驅(qū)使免疫反應(yīng)朝向耐受的含有T細(xì)胞表位的肽”指定有助于淋巴組織形成對特定抗原或抗原組的特異性惰性的肽，其中肽的這種活性是通過與T細(xì)胞表面受體相結(jié)合而獲得的。因此，含有T細(xì)胞表位的肽以允許驅(qū)使免疫反應(yīng)朝向耐受的量存在于營養(yǎng)形成物中。與在沒有預(yù)先的耐受誘導(dǎo)的情況下與抗原接觸后的免疫反應(yīng)相比，優(yōu)選免疫反應(yīng)通過誘導(dǎo)耐受降低至少20%,例如至少50%,例如至少75%,優(yōu)選至少90%，更優(yōu)選至少95%，和最優(yōu)選100%。測定耐受的方法為本領(lǐng)域所知，包括例如本發(fā)明的實施例中所描述的方法。因此，耐受可通過例如測定從T細(xì)胞中釋放的促炎因子(例如白細(xì)胞介素或干擾素)的量或T細(xì)胞的增殖來確定?？赏ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，來鑒定以下肽，其為在攝入營養(yǎng)配方后能夠驅(qū)使免疫反應(yīng)朝向耐受的含有T細(xì)胞表位的肽，所述方法例如在本文下文中描述于本發(fā)明的實施例中。因此，以下肽為在攝入營養(yǎng)配方后能夠驅(qū)使免疫反應(yīng)朝向耐受的含有T細(xì)胞表位的肽其可抑制T細(xì)胞的増殖和/或下調(diào)釋放于PBMC的上清液中的促炎細(xì)胞因子和/或使T輔助細(xì)胞2 (TH2)分化的細(xì)胞因子的釋放。按照本發(fā)明，令人驚奇地發(fā)現(xiàn)可將包含于牛奶水解產(chǎn)物中的含有T細(xì)胞表位的肽和來源于牛奶中存在的蛋白質(zhì)的含有T細(xì)胞表位的肽，用于耐受的誘導(dǎo)。正如根據(jù)以下實施例所顯而易見的，本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)當(dāng)有后續(xù)暴露于奶過敏原時，包含于奶水解產(chǎn)物中的肽和來源于牛奶中存在的蛋白質(zhì)的肽可顯著地降低T細(xì)胞的増殖，推測通過阻斷T細(xì)胞受體和MHCII結(jié)合來進(jìn)行。當(dāng)有后續(xù)暴露于奶過敏原時，包含于奶水解產(chǎn)物中的特定肽或者與牛奶肽的部分序列對應(yīng)的合成肽甚至可阻斷T細(xì)胞的増殖。盡管在本領(lǐng)域中已描述牛奶蛋白質(zhì)中的T細(xì)胞表位(例如,Kondo等,Pediatr. Allergy Immunol. 2008,第19卷，第592-598 頁；Elsayed 等，Mol. Tmmuno 1. 2004,卷 41 (12)，第 1225-34 頁；Ruiter 等，Clin. Exp. Allergy 2006,卷 36 (3)，第 303-10 頁；Ruiter 等，Int. Arch. AllergyImmunol. 2007;卷 143(2)，第 119-26 頁；或 Nakajima-Adachi 等，J. Allergy Clin.Immunol. 1998;卷101 (5)，第660-71頁)，但之前未描述過牛奶衍生肽可誘導(dǎo)耐受。此外，按照本發(fā)明，已發(fā)現(xiàn)包含于牛奶水解產(chǎn)物中的含有T細(xì)胞表位的肽和來源于牛奶中存在的 蛋白質(zhì)的含有T細(xì)胞表位的肽，降低使T輔助細(xì)胞2 (TH2)分化的細(xì)胞因子的水平以及促炎細(xì)胞因子的水平(與由奶蛋白質(zhì)誘導(dǎo)的所述細(xì)胞因子的水平相比)。如免疫學(xué)領(lǐng)域中已知的，促炎細(xì)胞因子對腸屏障完整性有有害作用，并因此涉及過敏性疾病以及炎性疾病的形成。已知在促炎細(xì)胞因子之中特別是IL-4和IFN-Y破壞腸表面襯里的上皮細(xì)胞之間的黏著，因此危及腸屏障完整性。因此，腸隨著暴露于腸壁中的免疫細(xì)胞的過敏原和飲食/微生物抗原增加而變得更可透過。因此，不希望受理論所束縛，認(rèn)為耐受由牛奶衍生肽直接誘導(dǎo)。之前牛奶水解產(chǎn)物和肽僅用于代替牛奶。通過代替牛奶，避免了過敏反應(yīng)和過敏反應(yīng)的形成。本文提供的發(fā)現(xiàn)顯示包含于牛奶水解產(chǎn)物中的含有T細(xì)胞表位的肽和來源于牛奶中存在的蛋白質(zhì)的含有T細(xì)胞表位的肽可另外且意料之外地用于誘導(dǎo)人受試者中的耐受。在一個優(yōu)選實施方案中本發(fā)明涉及上文描述的營養(yǎng)配方，其中對牛奶、包含于牛奶中的蛋白質(zhì)或包含于牛奶中的過敏原誘導(dǎo)耐受。牛奶、包含于牛奶中的蛋白質(zhì)和包含于牛奶中的過敏原例如包含于含有牛奶成分的任何食物。非限制性實例為奶、凝乳、乳脂、奶油、酸奶和包含任何這些的食物。本文所用的術(shù)語“過敏原”描述在特應(yīng)性(過敏性)人受試者中能夠刺激超敏反應(yīng)的抗原。此外，過敏原通常是對機體而言外來的物質(zhì)，并且只在特應(yīng)性人受試者中可引起過敏反應(yīng)。本發(fā)明還涉及用于治療或預(yù)防炎性腸病的營養(yǎng)配方或補充物，其包含含牛奶肽的水解產(chǎn)物和/或所述水解產(chǎn)物的含肽部分和/或一種或多種來源于牛奶中存在的蛋白質(zhì)的肽，其中所述包含于所述水解產(chǎn)物或水解產(chǎn)物部分中的肽包括含有T細(xì)胞表位的肽，或其中所述ー種或多種肽為含有T細(xì)胞表位的肽，并且其中在攝入所述營養(yǎng)配方后所述含有T細(xì)胞表位的肽能夠下調(diào)促炎細(xì)胞因子。本文所用的術(shù)語“炎性腸病”定義胃腸道的炎性病況組。炎性腸病的主要類型是克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎。克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎之間的主要區(qū)別在于炎性變化的位置和性質(zhì)?？肆_恩病可影響胃腸道從ロ到肛門(跳躍性病變)的任何部分，但大部分病例開始于回腸末端。相反，潰瘍性結(jié)腸炎受限于結(jié)腸和直腸。在一個優(yōu)選的實施方案中炎性腸病存在于有奶過敏或有形成奶過敏風(fēng)險的人受試者中。在又一個優(yōu)選實施方案中，炎性腸病選自克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、胃食管反流疾病(GERD)、胃腸炎、結(jié)腸炎和/或食管炎中的一種或多種。GERD是由食管中反常的回流引起的疾病。具體而言，胃食管反流疾病(GERD)、胃腸炎、結(jié)腸炎和/或食管炎常見于有牛奶過敏的人受試者中。關(guān)于本發(fā)明，術(shù)語“促炎細(xì)胞因子”是由免疫系統(tǒng)的細(xì)胞、優(yōu)選地由抗原呈遞細(xì)胞或T細(xì)胞和最優(yōu)選地由T細(xì)胞在人受試者中釋放，并介導(dǎo)和/或增強炎性疾病的細(xì)胞因子。炎性細(xì)胞因子的非限制性實例是IL-12、IL-17、IL-5、IL-4、IFN- y、IL-8、TNF- a、IL-6或IL-1。用于測定由免疫系統(tǒng)的細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子水平的方法為技術(shù)人員所熟知，包括實施例中描述的方法。因此，所述方法包括例如測定培養(yǎng)上清液中的細(xì)胞因子水平。術(shù)語“能夠在攝入營養(yǎng)配方后下調(diào)促炎細(xì)胞因子的含有T細(xì)胞表位的肽”是指在可下調(diào)促炎細(xì)胞因子水平的營養(yǎng)配方中的含有T細(xì)胞表位的肽，所述促炎細(xì)胞因子釋放自 免疫細(xì)胞，優(yōu)選T細(xì)胞或APC，更優(yōu)選T細(xì)胞。此外，將這些有能力的含有T細(xì)胞表位的肽以足以在攝入所述營養(yǎng)配方后下調(diào)促炎細(xì)胞因子的量施用于人受試者。與在與抗原接觸后的特應(yīng)性免疫反應(yīng)中的促炎細(xì)胞因子水平相比，優(yōu)選促炎細(xì)胞因子水平下調(diào)至少20%，例如至少50%，例如至少75%，優(yōu)選至少90%，更優(yōu)選至少95%，和最優(yōu)選100%。在攝入營養(yǎng)配方后能夠下調(diào)促炎細(xì)胞因子的含有T細(xì)胞表位的肽可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法鑒定，所述方法例如在本發(fā)明下文的實施例中描述。因此，測定在暴露于肽后在PBMC的培養(yǎng)上清液中釋放的促炎細(xì)胞因子的水平，鑒定在攝入營養(yǎng)配方后能夠下調(diào)促炎細(xì)胞因子的含有T細(xì)胞表位的肽。如本文所描述的，本發(fā)明意料之外地發(fā)現(xiàn)來源于牛奶的本發(fā)明的含有T細(xì)胞表位的肽能夠下調(diào)炎性細(xì)胞因子，所述細(xì)胞因子在暴露于過敏原或飲食/微生物抗原后或受過敏原或飲食/微生物抗原所刺激而釋放。因此，本發(fā)明的營養(yǎng)配方適合于治療炎性腸病。本發(fā)明ー個優(yōu)選的實施方案涉及本發(fā)明的營養(yǎng)配方，其中一種或多種肽為從含牛奶肽的水解產(chǎn)物中分離的含有T細(xì)胞表位的肽。如上所詳述，含牛奶肽的水解產(chǎn)物包含來源于水解牛奶蛋白質(zhì)的肽。這些肽可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)從含牛奶肽的水解產(chǎn)物中分離。因此，分析純化通常利用三種特性中的至少ー種以分離肽。首先，可將肽根據(jù)其等電點通過使其穿過PH梯度凝膠或離子交換柱而純化。第二，可根據(jù)肽的大小或分子量通過大小排阻層析或通過SDS-PAGE (十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳)分析來分離肽。第三，另ー種肽純化方法可包括膜過濾(例如，超濾)，其產(chǎn)生適于預(yù)期應(yīng)用的肽混合物。經(jīng)常通過用2D-PAGE來純化肽，然后用肽質(zhì)量指紋法來分析肽以建立肽身份。獲自水解產(chǎn)物的經(jīng)分離和鑒定的肽然后可通過應(yīng)用技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方法重組制備，并單獨使用或者與本發(fā)明的含牛奶肽的水解產(chǎn)物結(jié)合使用。本發(fā)明另一個優(yōu)選的實施方案涉及本發(fā)明的營養(yǎng)配方，其中所述ー種或多種肽具有SEQ ID NO :3和/或4的氨基酸序列。如以下實施例所示，當(dāng)用牛奶蛋白質(zhì)重刺激時，SEQ ID NO :3 (圖2，Cas3，a SI-肽
3)和SEQ ID NO :4 (圖2，Cas4，a Sト肽4)的氨基酸序列抑制T細(xì)胞的増殖，從而誘導(dǎo)對牛奶蛋白質(zhì)的耐受:(參考圖4)。
本發(fā)明的又一個優(yōu)選實施方案涉及本發(fā)明的營養(yǎng)配方，其中含牛奶肽的水解產(chǎn)物是廣泛水解的含牛奶肽的水解產(chǎn)物。本發(fā)明更優(yōu)選的實施方案涉及本發(fā)明的營養(yǎng)配方，其中廣泛水解的含牛奶肽的水解產(chǎn)物為Nutramigen 、Nutramigen 基料或廣泛水解的牛酪蛋白水解產(chǎn)物。如本發(fā)明以下實施例所示，當(dāng)用牛奶蛋白質(zhì)重刺激T細(xì)胞時，廣泛水解的含牛奶肽的水解產(chǎn)物能夠抑制T細(xì)胞的増殖。因此誘導(dǎo)了對牛奶蛋白質(zhì)的耐受。因此，VTP 3、VTPll和VTP15 (參考圖I)對誘導(dǎo)耐受最有效，因此是按照本發(fā)明的包含廣泛水解的含牛奶肽的水解產(chǎn)物的營養(yǎng)配方的優(yōu)選實例；VTP3為Nutramigen , VTPll為Nutramigen 基料以及VTP15為用于Nutramigen 中的廣泛水解的牛酪蛋白?？赏ㄟ^Mead JohnsonNutrition, 2400 West Lloyd Expressway Evansville, Indiana 47721-0001，USA 購買VTP3、VTP 11和VTP 15。VTP3、VTP 11和VTP 15包含廣泛水解的牛酪蛋白。圖8提供了包含于VTP3、VTP 11和VTP 15中的酪蛋白衍生肽的概況。VTP15僅由圖8列出的肽組成。 Nutramigen (VTP3)除包含圖8中列出的肽還包含以下成分葡萄糖漿、植物油(棕櫚油精油(palm olein oil)、椰子油、大豆油、高油酸葵花油)、改性玉米淀粉〈2 %,磷酸|丐〈1%,檸檬酸鈣、檸檬酸鉀、氯化鉀、L-胱氨酸、氯化膽堿、L-酪氨酸、肌醇、氧化鎂、L-色氨酸、抗壞血酸、硫酸亞鐵、?；撬?、L-肉堿、DL-a -醋酸維生素E、硫酸鋅、煙酰胺、泛酸鈣、硫酸銅、棕櫚酸視黃酯、硫酸錳、鹽酸硫胺、核黃素、鹽酸吡哆醇、碘化鈉、葉酸、維生素K1、鑰酸鈉、氯化鉻、維生素D3、亞硒酸鈉、生物素、維生素B12。本發(fā)明的又一個優(yōu)選實施方案涉及本發(fā)明的營養(yǎng)配方，其中人受試者是兒童或青少年。按照本領(lǐng)域提供的定義在本文使用術(shù)語“兒童”或術(shù)語“青少年”。因此，術(shù)語“兒童”意指在出生階段和約10歲之間的人受試者，而術(shù)語“青少年”意指在約10歲和青春期(性成熟之前)之間的人受試者。本發(fā)明在又一個優(yōu)選的實施方案中涉及本發(fā)明的營養(yǎng)配方，其中人受試者是成人。按照本領(lǐng)域中提供的定義在本文使用術(shù)語“成人”。因此，該術(shù)語意指青春期之后(性成熟之后)的人受試者。本發(fā)明的又一個優(yōu)選的實施方案涉及本發(fā)明的營養(yǎng)配方，其中人受試者有牛奶過敏。術(shù)語“牛奶過敏”描述食物過敏，即在人受試者中對包含于牛奶中的ー種或多種蛋白質(zhì)的免疫不良反應(yīng)。主要的癥狀是胃腸癥狀、皮膚病學(xué)癥狀和呼吸癥狀。這些可譯成皮疹、蕁麻疹、嘔吐、腹瀉、便秘和不良應(yīng)激。臨床譜延伸至各種病癥過敏反應(yīng)、特應(yīng)性皮炎、喘鳴、嬰兒腹痛、胃食管反流疾病(GERD)、食管炎、結(jié)腸炎、胃腸炎、頭痛/偏頭痛和便秘。在本發(fā)明的營養(yǎng)配方的另ー個優(yōu)選的實施方案中，所述營養(yǎng)配方另外包含碳水化合物、核酸、脂質(zhì)、礦物質(zhì)、合成代謝性營養(yǎng)物、維生素、抗氧化劑、益生菌菌株和抗脂肪肝劑中的ー種或多種。優(yōu)選地加入本發(fā)明營養(yǎng)配方的這些另外化合物以提供本文上述營養(yǎng)配方的營養(yǎng)價值。也可優(yōu)選將它們加入以提供完整的營養(yǎng)、最佳持續(xù)能量和/或合成代謝性營養(yǎng)配方。脂質(zhì)的非限制性實例包括椰子油、大豆油和甘油單酯和甘油ニ酷。例示性碳水化合物為例如葡萄糖、可食用乳糖和水解的玉米淀粉。礦物質(zhì)和維生素的非限制性實例分別為鈣、磷、鉀、鈉、氯化物、鎂、錳、鐵、銅、鋅、硒、碘以及維生素A、E、D、C和復(fù)合維生素B。益生菌菌株包括例如乳酸菌(LAB)和雙歧桿菌?？寡趸瘎┑膶嵗ㄌ烊豢寡趸瘎?，例如抗壞血酸(AA，E300)和生育酚(E306)，以及合成抗氧化劑，例如沒食子酸丙酯(PG，E310)、叔丁基對苯ニ酚(TBHQ)、丁羥基茴香醚(BHA，E320)和丁羥甲苯(BHT，E321)。核酸的非限制性實例是脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。本發(fā)明的又一個優(yōu)選實施方案涉及本發(fā)明的營養(yǎng)配方，其中瞬時誘導(dǎo)耐受。 按照本發(fā)明的術(shù)語耐受的“瞬吋”誘導(dǎo)涉及以下免疫耐受在人受試者中在攝入本發(fā)明的營養(yǎng)配方后誘導(dǎo)所述免疫耐受持續(xù)有限時間段，所述人受試者優(yōu)選為有牛奶過敏或有形成牛奶過敏的風(fēng)險的人受試者。在這點上，短暫的時間段規(guī)定人受試者不會獲得持久耐受。瞬時耐受優(yōu)選涉及誘導(dǎo)持續(xù)至少半天、例如持續(xù)至少一天、例如持續(xù)至少兩天、優(yōu)選持續(xù)至少一星期，更優(yōu)選持續(xù)至少兩星期、甚至更優(yōu)選持續(xù)至少一個月和最優(yōu)選持續(xù)至少3個月的耐受。按照本發(fā)明，誘導(dǎo)瞬時耐受持續(xù)少于6個月。附圖
簡沭 附圖顯示
圖I :命名為VTP1-VTP16的奶試驗樣品的概述，所述樣品獲自不同的供應(yīng)商，并包括完整牛奶蛋白質(zhì)配方、部分水解和廣泛水解的酪蛋白和乳清蛋白質(zhì)以及氨基酸牛奶配方和氨基酸配方。圖2:合成的肽和蛋白質(zhì)。列出了所述肽或蛋白質(zhì)的名稱、其氨基酸序列、長度、pi和分子量(kDa)。圖3 :在増殖測定中分析的個體的人口統(tǒng)計學(xué)表征、臨床表征和血清學(xué)表征。圖4 :用PBMC進(jìn)行增殖測定以測定對奶樣品VTP1-VTP16的T細(xì)胞反應(yīng)性。用奶樣品、牛奶過敏原(raSl-酪蛋白、raS2_酪蛋白、na-酪蛋白)、aSl_酪蛋白衍生肽(a SI-肽I- a SI-肽6)、樺樹花粉過敏原rBet v Ia和草花粉過敏原Phl p 5_肽I刺激來自6名非過敏性個體和來自7名牛奶過敏患者的PBMC。顯示刺激指數(shù)。圖5 :為了分析在PBMC中不同奶樣品(VTP1-VTP16)誘導(dǎo)哪些細(xì)胞因子，在PBMC的上清液中進(jìn)行Iuminex-分析。顯示對已用奶樣品VTP1-VTP16 (1-16)或培養(yǎng)基(17)刺激的來自6名非過敏性個體(NA)和5名牛奶過敏患者(CMA)的PBMC培養(yǎng)物上清液中的細(xì)胞因子水平(y軸pg/ml)的分析。圖6 :進(jìn)行使用非過敏性個體(AB)的耐受實驗以顯示肽可以過敏原特異性方式誘導(dǎo)對T細(xì)胞的免疫耐受(tolerize T_cell)。在非過敏性個體的實驗中亦可顯示耐受，因為將耐受測定為T細(xì)胞反應(yīng)性下降(Ebner等，J. Immunol. 1995，第154卷，第1932-1940頁)。只要非過敏性個體包含過敏原反應(yīng)性T細(xì)胞，即可在T細(xì)胞水平檢測對所述過敏原的耐受。將PBMC分離，并通過MACS分離技術(shù)獲得富含T細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)胞(APC)的級分。將T細(xì)胞級分與大量的肽(a SI-酪蛋白肽I、a SI-酪蛋白肽2、a SI-酪蛋白肽3和對照肽Phl p 5-肽I)或乳清廣泛水解產(chǎn)物(VTP8)或乳清/酪蛋白部分水解產(chǎn)物(VTP6)預(yù)孵育過夜。第二天將T細(xì)胞和APC混合，并用完整的牛奶蛋白樣品(VTP13、VTP14)或用完整的r a SI-酪蛋白刺激。
用相同的個體進(jìn)行兩個實驗。在組圖a和c中顯示每分鐘計數(shù)(cpm ;反映T細(xì)胞増殖)，在組圖b和d中顯示刺激指數(shù)(SI)。圖7 :針對其誘導(dǎo)對T細(xì)胞的免疫耐受的能力評價奶水解產(chǎn)物的使用非過敏性個體(KFI)所進(jìn)行的耐受實驗。將T細(xì)胞級分與大量Nutramigen 基料(VTPll)、酪蛋白廣泛水解產(chǎn)物(VTP15)、完整的牛奶乳清蛋白質(zhì)(VTP14)、Nutramigen (VTP3)、合成肽U SI-酪蛋白肽4和對照肽Phl p 5-Pep I)或緩沖液(UCO)預(yù)孵育過夜。第二天將T細(xì)胞和APC混合，并用奶樣品(VPT14、VTP1)刺激。T細(xì)胞刺激以每分鐘計數(shù)(cpm)給出或給出為刺激指數(shù)(SI)。顯示個體實驗的cpm及其平均值。突出用10 iig VTP14刺激所獲得的數(shù)據(jù)。
圖8 :包含于VTP3、VTP 11和VTP 15 (圖I)的酪蛋白衍生肽的概況。列出了Ionscore、所述肽的氨基酸序列、疏水性評分和苦味評分。實施本發(fā)明的最佳方式 實施例闡明本發(fā)明。實施例I :
實驗過程
生物材料與患者
命名為VTP1-VTP16的奶樣品獲自不同供應(yīng)商，并包括完整的牛奶蛋白質(zhì)、部分水解的、廣泛水解的以及氨基酸配方。通過IgE免疫篩選從制備自牛乳腺的cDNA表達(dá)文庫中分離編碼 a SI-酪蛋白(raSl-cas)的 cDNA (Schulmeister 等，J. Tmmuno 1. 2009)。將重組過敏原表達(dá)于大腸桿菌i^scherichia coif)菌株BL21 Codon Plus (DE3) -RIPL(Stratagene, La Jolla, CA)中作為六聚組氨酸標(biāo)記的蛋白質(zhì)，并通過Ni2+親和層析(QIAGEN, Hilden,德國)純化。重組的Bet via購買自Biomay (Vienna,奧地利)。在本地市場購買含有3. 5%脂肪的經(jīng)巴氏滅菌的牛奶(Nik，奧地利，批號22 550
200),以及從Sigma-Aldrich (Vienna,奧地利)購買天然的牛奶蛋白質(zhì)。通過用純化的r a Sl-cas、r a S2_cas、r P -cas、r k -cas、r a -la、r P _lg,和 rlf(Charles, River, Kissleg，德國)免疫兔三次來獲得兔血清。使用ImmunoCAP系統(tǒng)(Phadia, Uppsala,瑞典)根據(jù)對牛奶提取物的陽性病史、陽性皮膚穿刺反應(yīng)或特異性IgE的測定來選擇牛奶過敏患者。將在消耗奶后沒有任何問題的人招募為對照。他們包括非過敏者以及對除奶之外的過敏原來源有IgE介導(dǎo)的過敏的患者。奶樣品的表征
用SDS-PAGE和考馬斯亮藍(lán)染色(Biorad，Hercules, CA)評估奶樣品VTP1-VTP16的組成。將VTP1-VTP16的I U g等分試樣點樣于硝酸纖維素膜上用于免疫印跡分析(Schleicher 和 Schuell,Dassel,德國)。將硝酸纖維素條帶用 PBST (PBS, 0. 5% v/v Tween20)封閉并在4°C下暴露于I :10、1 :20或I :2000稀釋的奶過敏患者血清、健康個體血清或兔抗血清中過夜。用在PBST中I :15稀釋的1251標(biāo)記的抗人IgE抗體(IBL，漢堡，德國)檢測結(jié)合的人IgE抗體，或用在PBST中I 2000稀釋的125I標(biāo)記的抗兔IgG (Perkin Elmer,美國)檢測結(jié)合的兔IgG，并在_80°C下通過用帶有增感屏的Kodak XOMAT膠卷(Kodak，奧地利)的放射自顯影法顯影。按照制造商說明書以0.1 EU/ml -1.0 EU/ml靈敏度范圍通過鱟變形細(xì)胞溶解物測定(Lonza, Basel,瑞士)定量本研究中使用的奶樣品的內(nèi)毒素水平。大鼠嗜堿性粒細(xì)胞白血病(RBL)測定
對于IgE抗體介導(dǎo)速發(fā)型反應(yīng)的定量,如前述(Schulmeister等,J Immunol. 2009,卷182(11)，第7019-29頁)進(jìn)行huRBL細(xì)胞介體釋放測定。簡而言之，將用人Fe e RI受體轉(zhuǎn)染的RBL細(xì)胞(克隆RBL-703/21)與來自牛奶過敏患者的血清孵育過夜。第二天清洗所述細(xì)胞，加入100 奶組分(濃度0. 3 u g/ml)并在37°C，7% C02，95%濕度下孵育I小吋。將上清液等分試樣與測定溶液(0. I M檸檬酸或檸檬酸鈉，pH 4.5 + 160 u M 4-甲基傘形酮基(umbelliferyl) -N-こ?；?P -D-葡糖酰胺)混合，并在37°C，7% CO2,95%濕度中孵育I小吋。用熒光微量培養(yǎng)板讀數(shù)器測定熒光，因而可計算特異性釋放。減去單獨用緩沖 液獲得的數(shù)值，超過總釋放的5%的值視作陽性。細(xì)胞制備和淋巴組織增生性測定
將來自非過敏性個體和牛奶過敏患者的PBMC用菲可(Ficoll)密度梯度離心(GEHealthcare, Uppsala,瑞典)從肝素化血液中分離。在 96 孔板(Nunclone ;Nalgen NuncInternational, Roskilde，丹麥)中，在補充了 2mM L-谷氨酸胺(GIBCO, Auckland, NZ)、50 UMb-巰基こ醇(GIBCO)和0. I mg/ml慶大霉素(GIBCO)的200 U I無血清UltraCulture 培養(yǎng)基(UltraCulture,Lonza,Verviers,比利時)中以一式三份培養(yǎng)PBMC (2xl05個細(xì)胞/孔)。在有或沒有不同濃度的各種水解樣品的情況下在37°C下在含有5% CO2的潮濕環(huán)境中孵育所述細(xì)胞7天。用不同濃度刺激細(xì)胞，將4U IL-2/孔(Roche，Mannheim，德國)用作陽性對照和將僅培養(yǎng)基用作陰性對照。在孵育6天后，將0.5 mCi 3H-胸苷(GEHealthcare)加入姆個孔達(dá)16 h,然后通過液體閃爍計數(shù)測定摻入的放射性。增埴表示為使用microbeta閃爍計數(shù)器(Wallac ADL,Freiburg,德國)的姆分鐘計數(shù)(c. p. m.,三重測定的平均值)。刺激指數(shù)(SI)計算為抗原c. p.m.和培養(yǎng)基對照c. p.m.的商。上清液中細(xì)胞因子水平的分析
使用基于xMAP Luminex突光珠粒的技術(shù)(Luminex Corp. , Austin, TX)在收集自培養(yǎng)第6天的PBMC培養(yǎng)物的上清液中測量細(xì)胞因子水平(IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IFN- y、TNF- a、GM-CSF, TGF- ^ I、TGF- P 2 和 TGF- ^ 3)。根據(jù)制造商說明書(R&DSystems,Wiesbaden,德國)進(jìn)行所述測定，并在Luminex 100系統(tǒng)(Luminex Corp.)上讀取熒光信號。檢測限對于IL-2是3. 2 pg/ml，對于IL-4是3. 5 pg/ml，對于IL-5是I. 9 pg/ml，對于 IL-6 是 5. 5 pg/ml，對于 IL-10 是 3. I pg/ml，對于 IL-12 是 57 pg/ml，對于 IL-13是 47 pg/ml，對于 IFN-Y 是 2. 9 pg/ml，對于 TNF-a 是 5. 3 pg/ml，對于 GM-CSF 是 3. 3 pg/ml，對于 TGF-P I 是 21 pg/ml，對于 TGF-P 2 是 178 pg/ml，以及對于 TGF-P 3 是 5 pg/ml。耐受誘導(dǎo)實驗
對于耐受誘導(dǎo)實驗，將來自健康供體的PBMC通過菲可密度梯度分離，以及將所述細(xì)胞進(jìn)ー步分成兩部分。用人Pan-T細(xì)胞分離試劑盒(Miltenyi,Bergisch Gladbach,德國)富集T細(xì)胞，而用人⑶3 MicroBeads (Miltenyi, Bergisch Gladbach,德國)通過磁力細(xì)胞分選富集抗原呈遞細(xì)胞。通過FACS分析確定細(xì)胞級分的純度。將包含T細(xì)胞的細(xì)胞級分與不同的肽或僅培養(yǎng)基在37°C和5% CO2和95%濕度下孵育過夜，抗原呈遞細(xì)胞級分在相同的條件下沒有任何抗原的情況下保持過夜。第二天，用DPBS (GIBCO)清洗T細(xì)胞級分三次，以及將T細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)胞級分混合。如上述將所述細(xì)胞(2xl05個細(xì)胞/孔)在96孔板中一式三份培養(yǎng)。用不同濃度的奶樣品、4U IL-2 /孔或僅培養(yǎng)基刺激細(xì)胞。如對淋巴組織增生性測定所描述那樣進(jìn)行分析。實施例2
結(jié)果
健康的非過敏 性個體對牛奶過敏原表現(xiàn)出正常的IgG應(yīng)答但無IgE應(yīng)答。在實驗中比較了在牛奶過敏性個體和健康非過敏性個體中的定量(増殖)和定性(即細(xì)胞因子)應(yīng)答兩者。所述實驗鑒定了水解產(chǎn)物中的小肽，其可阻斷T細(xì)胞受體和MHCII，使得在有對奶過敏原的隨后暴露時有有限増殖或沒有増殖。因此，所述實驗鑒定了片段，使得可誘導(dǎo)對牛奶過敏原的耐受。另ー種方法是將已預(yù)暴露于肽/水解產(chǎn)物的T細(xì)胞混合于T-APC的培養(yǎng)物中，已將所述T-APC預(yù)孵育并用完整蛋白質(zhì)制備物重刺激。這應(yīng)顯示肽抑制/阻抑對完整奶蛋白質(zhì)攻擊的應(yīng)答的能力。迄今為止用16個牛奶樣品以及用a SI酪蛋白衍生肽和對照抗原關(guān)于淋巴組織增生性應(yīng)答測試了 6名非過敏性和7名牛奶過敏性個體。非過敏性個體和牛奶過敏患者誘導(dǎo)了可比的刺激指數(shù)。與其它奶樣品相比，Nutramigen 樣品誘導(dǎo)了較弱的T細(xì)胞増殖。氨基酸配方誘導(dǎo)了最弱的應(yīng)答。將通過SDS-PAGE和質(zhì)譜分析鑒定為完整牛奶蛋白質(zhì)源的VTP13和14，用作耐受實驗的對照，因為它們誘導(dǎo)了強的淋巴組織增生性應(yīng)答。通過luminex分析關(guān)于13種細(xì)胞因子分泌分析來自11名測試個體的培養(yǎng)上清液。這些結(jié)果因以下兩個原因非常引人關(guān)注及驚人首先，細(xì)胞因子水平分析顯示Nutramigen 樣品(VTP3、4、11、12、15)以低量誘導(dǎo)促使Th2分化的細(xì)胞因子(GM-CSF、IL-5和IL-13)以及促炎細(xì)胞因子(IL-6、TNF- a和IFN- y )。相反，已發(fā)現(xiàn)在樣品VTP2、VTP5和VTP14中促炎細(xì)胞因子(例如，IFN- y , TNF- a、IL-6)的強誘導(dǎo)，所述樣品是僅部分水解的蛋白質(zhì)或包含完整的蛋白質(zhì)。具體而言，IFN-Y的誘導(dǎo)似乎成問題，因為存在IFN-Y可損害上皮細(xì)胞的證據(jù)。在用非過敏性個體和用過敏性個體進(jìn)行的實驗中，除了在非過敏性個體中上調(diào)較強的IFN- y夕卜，分泌的細(xì)胞因子的量在相同范圍中。某些牛奶衍生肽(例如，a SI酪蛋白)在PBMC中誘導(dǎo)T細(xì)胞増殖。因為在某些條件(例如，沒有適當(dāng)共刺激下結(jié)合到T細(xì)胞受體，生命嬰兒期早期存在大量的T細(xì)胞反應(yīng)性肽)下任何T細(xì)胞反應(yīng)性肽亦可誘導(dǎo)T細(xì)胞耐受，假定可將a SI酪蛋白衍生T細(xì)胞反應(yīng)性肽用于誘導(dǎo)耐受以鑒定額外的T細(xì)胞反應(yīng)性肽。在這點上，證明了可合成制備的a SI酪蛋白衍生肽的致耐受性活性。將來自反應(yīng)性個體的PBMC分為T細(xì)胞級分和包含APC的T細(xì)胞耗竭的級分(抗CD3偶聯(lián)珠粒)。將T細(xì)胞級分與酪蛋白衍生肽和對照肽(草花粉過敏原Bet vl、Phl p 5衍生肽)預(yù)孵育，清洗，然后與所述肽一起暴露于APC級分。使用該測定，有可能證明這些酪蛋白衍生肽的奶特異性致耐受性活性。在努力探索致耐受肽的過程中成功建立了培養(yǎng)條件。在下一歩中鑒定了ー種a SI酪蛋白衍生候選肽，其在兩個獨立實驗中顯示抑制T細(xì)胞應(yīng)答。a SI酪蛋白衍生肽3當(dāng)加入到分離的T細(xì)胞級分吋，抑制當(dāng)用乳清蛋白濃縮物VTP14或r a SI酪蛋白重刺激時的在混合的T細(xì)胞-APC級分中的増殖。對肽4獲得類似的結(jié)果。此外，研究了酪蛋白水解產(chǎn)物 VTP3 (Nutramigen )、VTPlU VTP14和VTP15對完整牛奶蛋白質(zhì)誘導(dǎo)的增殖的潛在抑制作用，并已發(fā)現(xiàn)尤其與Nutramigen (VTP3)的預(yù)孵育能夠誘導(dǎo)耐受。
權(quán)利要求
1.一種用于在人受試者中誘導(dǎo)耐受的營養(yǎng)配方或補充物，其包含含牛奶肽的水解產(chǎn)物和/或所述水解產(chǎn)物的含肽部分和/或一種或多種來源于牛奶中存在的蛋白質(zhì)的肽，其中所述包含于所述水解產(chǎn)物或水解產(chǎn)物部分中的肽包含含有T細(xì)胞表位的肽，或其中所述一種或多種肽為含有T細(xì)胞表位的肽，以及其中在攝入所述營養(yǎng)配方后，所述含有T細(xì)胞表位的肽能夠驅(qū)使免疫反應(yīng)朝向耐受。
2.權(quán)利要求I的營養(yǎng)配方，其中誘導(dǎo)對牛奶、包含于牛奶中的蛋白質(zhì)或包含于牛奶中的過敏原的耐受。
3.一種用于治療或預(yù)防炎性腸病的營養(yǎng)配方或補充物，其包含含牛奶肽的水解產(chǎn)物和/或所述水解產(chǎn)物的含肽部分和/或一種或多種來源于牛奶中存在的蛋白質(zhì)的肽，其中所述包含于所述水解產(chǎn)物或水解產(chǎn)物部分中的肽包含含有T細(xì)胞表位的肽，或其中所述ー種或多種肽為包含T細(xì)胞表位的肽，以及其中在攝入所述營養(yǎng)配方后，所述含有T細(xì)胞表位的肽能夠下調(diào)促炎細(xì)胞因子。
4.權(quán)利要求1-3中任ー項的營養(yǎng)配方,其中所述ー種或多種肽為分離自含牛奶肽的水解產(chǎn)物的含有T細(xì)胞表位的肽。
5.權(quán)利要求1-3中任ー項的營養(yǎng)配方，其中所述ー種或多種肽具有SEQID NO: 3和/或4的氨基酸序列。
6.權(quán)利要求1-5中任ー項的營養(yǎng)配方，其中所述含牛奶肽的水解產(chǎn)物為廣泛水解的含牛奶肽的水解產(chǎn)物。
7.權(quán)利要求6的營養(yǎng)配方，其中所述廣泛水解的含牛奶肽的水解產(chǎn)物為Nutramigen > Nutramigen 基料或廣泛水解的含有牛酪蛋白的水解產(chǎn)物。
8.權(quán)利要求1-7中任ー項的營養(yǎng)配方，其中所述人受試者為兒童或青少年。
9.權(quán)利要求1-7的營養(yǎng)配方，其中所述人受試者為成人。
10.權(quán)利要求1-9中任ー項的營養(yǎng)配方，其中所述人受試者有牛奶過敏。
11.權(quán)利要求ι- ο中任ー項的營養(yǎng)配方，其中所述營養(yǎng)配方還包含碳水化合物、核酸、脂質(zhì)、礦物質(zhì)、合成代謝性營養(yǎng)物、維生素、抗氧化劑、益生菌菌株和抗脂肪肝劑中的一種或多種。
12.權(quán)利要求1-2和4-11中任ー項的營養(yǎng)配方，其中瞬時誘導(dǎo)耐受。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于在人受試者中誘導(dǎo)耐受的營養(yǎng)配方或補充物，其包含含牛奶肽的水解產(chǎn)物和/或所述水解產(chǎn)物的含肽部分和/或一種或多種來源于牛奶中存在的蛋白質(zhì)的肽，其中所述包含于所述水解產(chǎn)物或水解產(chǎn)物部分中的肽包含含有T細(xì)胞表位的肽，或其中所述一種或多種肽為含有T細(xì)胞表位的肽，以及其中在攝入所述營養(yǎng)配方后，所述含有T細(xì)胞表位的肽能夠驅(qū)使免疫反應(yīng)朝向耐受。
文檔編號A61K38/01GK102665446SQ201080055014
公開日2012年9月12日 申請日期2010年12月3日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月4日
發(fā)明者E.范托爾, H.霍赫瓦爾納, I.斯沃博達(dá), M.富克-特克爾, R.瓦倫塔, U.舒爾梅斯特, U.赫爾斯 申請人:美贊臣營養(yǎng)品公司