專利名稱：：一種參麥注射液的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥注射液的質(zhì)量控制方法，包括利用特征性成分鑒別中藥注射液中原藥材的方法和該特征性成分的含量測(cè)定方法，具體地說(shuō)是利用龍腦苷鑒別參麥注射液中麥冬的方法和龍腦苷的含量測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
：參麥注射液由紅參、麥冬兩味藥材經(jīng)過(guò)現(xiàn)代工藝提取其有效成分制備而成，紅參甘溫益氣，固脫復(fù)脈，為方中君藥；麥冬甘寒滋陰，生津利脈，為方中臣藥；二藥為伍，相得益彰，共奏益氣固脫，養(yǎng)陰生津，生脈之功用。參麥注射液的功能主治為益氣固脫，養(yǎng)陰生津，生脈，用于治療氣陰兩虛型之休克、冠心病、病毒性心肌炎、慢性肺心病、粒細(xì)胞減少癥。能提高腫瘤病人的免疫機(jī)能，與化療藥物合用時(shí)，有一定的增效作用，并能減少化療藥物所引起的毒副反應(yīng)?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明參麥注射液的有效成分主要為皂苷(約為固含量的7.5%)、黃酮類和糖類化合物，其中皂苷類目前已發(fā)現(xiàn)有以人參皂苷-Re、Rbl、Rb2、Rgl、Rg3等為代表的39種人參皂苷類成分和以麥冬皂苷D為代表的7種麥冬皂苷類成分，黃酮類目前已發(fā)現(xiàn)則主要是麥冬中含有的以甲基麥冬二氫高異黃酮B、213-羥基甲基麥冬二氫高異黃酮A、2a-羥基甲基麥冬二氫高異黃酮A等為代表的8種高異黃酮類成分?，F(xiàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)(修訂)頒布件WS3-B-3428-98-2004，其鑒別項(xiàng)中僅有對(duì)紅參(或紅參和麥冬共有)的有效成分人參皂甙Rbl、Rgl、Re對(duì)照品的鑒別，而且目前對(duì)于參麥注射液的鑒別研究均集中在紅參這一味藥材中，未見(jiàn)有對(duì)麥冬的鑒別研究。文獻(xiàn)顯示，麥冬中含有多種有效成分，主要為皂苷類和黃酮類(長(zhǎng)春中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，麥冬化學(xué)成分及藥理作用的研究現(xiàn)狀)，然而發(fā)明人發(fā)現(xiàn)上述兩類成分均難以被鑒別或不具有特征性，這也是參麥注射液中麥冬鑒別項(xiàng)缺失的原因之一。為了解決麥冬鑒別這個(gè)問(wèn)題，發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，市售的參麥注射液中均含有一種麥冬中的化學(xué)成分——龍腦苷(中國(guó)中藥雜志，麥冬的化學(xué)成分研究)。龍腦苷結(jié)構(gòu)為龍腦苷(莰醇2-0-芹糖基-(1—6)-葡萄糖苷，英文名Bomeol2_0_P-D-apiofuranosyl(1—6)_P-D-glucopyranoside。分子式C21H36010，分子重448，結(jié)構(gòu)式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>龍腦苷結(jié)構(gòu)式龍腦苷在麥冬中含量甚微，發(fā)明人曾在數(shù)百公斤麥冬中僅提取了1.8g的龍腦苷，但是，令人欣喜的是，根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-3428-98-2004制備的參麥注射液中均含有龍腦苷，而紅參中卻沒(méi)有這個(gè)成分，提示可以利用該成分鑒別參麥注射液中的麥冬。
發(fā)明內(nèi)容針對(duì)龍腦苷，發(fā)明人進(jìn)行了初步的藥理學(xué)研究龍腦苷化合物保護(hù)心肌細(xì)胞凋亡的測(cè)試細(xì)胞凋亡(Apoptosis)亦稱程序性細(xì)胞死亡(ProgrammedCellDeath)，它不同于組織壞死或突發(fā)性細(xì)胞死亡，在機(jī)體生命活動(dòng)中調(diào)控著細(xì)胞增殖與更新間的平衡，維持組織器官正常生理功能及細(xì)胞數(shù)量相對(duì)穩(wěn)定(BrJCancer,1972，26，239)。現(xiàn)代的分子生物學(xué)和藥理學(xué)研究表明，心肌細(xì)胞在各種剌激因子的誘導(dǎo)下存在凋亡現(xiàn)象，凋亡的心肌細(xì)胞參與了致病的過(guò)程，是心肌梗死、心力衰竭、心律失常、心肌病及病毒性心肌炎等多種心血管疾病發(fā)生與演變的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)(心臟雜志，2002，14(4)，347)。測(cè)試原理在人心肌細(xì)胞中加入不同濃度的樣品溶液，在缺血/再灌注條件下誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，對(duì)比不加入樣品的空白，評(píng)估樣品對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)方法；將6孔板和載玻片用90%的乙醇消毒，在每個(gè)孔里放置7.5X104原代單層心肌細(xì)胞(1ml)和2mlDMEM(Dulbecco'sModifiedEagleMedium)培養(yǎng)液，生長(zhǎng)1.5天，移除培養(yǎng)液，加2mlI/RMedia(致細(xì)胞缺血的介質(zhì))和樣品溶液(20或50iU，對(duì)應(yīng)50iig/ml或250iig/ml)，60分鐘后移除培養(yǎng)液，再加入正常的2ml培養(yǎng)液(無(wú)色的DMEM)和樣品溶液，30分鐘后移除液體，用lmlPBS洗3次，加lml有機(jī)溶劑(甲醇_丙酮，1:1)固定細(xì)胞，將6孔板放置冰箱-2(TCIO分鐘，取出加lml甲醇使細(xì)胞滲透，再放入冰箱-2(TC10分鐘，取出用lmlPBS洗滌3次，移出載波片，用吸墨紙吸干液體，用膠水將有細(xì)胞的載波片固定在標(biāo)記好的載波片上，加一滴PBS到載波片上防止細(xì)胞干掉，將載波片放置密閉的玻璃容器10分鐘使充分潤(rùn)濕，取出、吸干液體，均勻加200ii1Hoechst染色劑于載玻片，將載玻片放置陰暗處IO分鐘，然后用PBS沖洗掉殘余的染色劑，用吸墨紙吸干，加一滴抗褪色劑，用玻片封裝，放置冰箱于4t:儲(chǔ)存。然后用熒光顯微鏡(激發(fā)光波長(zhǎng)352nm，發(fā)射光波長(zhǎng)461nm)觀察細(xì)胞凋亡情況。0014]實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示，龍腦苷能有效保護(hù)由缺血/再灌注引起的細(xì)胞凋亡。上述發(fā)現(xiàn)表明，龍腦苷不僅可以用于鑒別，還可以作為有效成分對(duì)其進(jìn)行含量含表1、龍腦苷對(duì)缺血/再灌注引起的心肌細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>樣本數(shù)n=6，Ctrl=(空白)對(duì)照；I/R:模型對(duì)照組。根據(jù)上述發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供了一種參麥注射液的質(zhì)量控制方法，包括通過(guò)鑒別龍腦苷鑒別參麥注射液中麥冬的鑒別方法和龍腦苷的含量測(cè)定方法。由于龍腦苷的含量甚微，對(duì)其的鑒別方法和測(cè)定方法甚為困難，在經(jīng)過(guò)無(wú)數(shù)次嘗試后，發(fā)明人終于構(gòu)建了本發(fā)明中的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明的質(zhì)控方法供試液處理簡(jiǎn)單，液相檢測(cè)條件均為目前常用儀器設(shè)備，易于推廣使用，不僅實(shí)現(xiàn)了對(duì)參麥注射液中麥冬的鑒別，還提供了龍腦苷的含量測(cè)定方法，對(duì)全面提高參麥注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)具有顯著意義。具體方法如下l).麥冬的鑒別a供試品溶液的制備取100ml參麥注射液濃縮至30ml，調(diào)節(jié)pH至3.07.0，加入適量破乳劑，乙酸乙酯萃取4次，每次3050ml，合并萃取液，將萃取液蒸干，加12ml甲醇溶解，作為供試品溶液；b對(duì)照品溶液的制備稱取龍腦苷對(duì)照品適量，加甲醇制成對(duì)照品溶液；C液相檢測(cè)條件反相色譜柱，蒸發(fā)光檢測(cè)器，流動(dòng)相為5055%甲醇水溶液或2025%乙腈水溶液；d鑒別取供試品溶液和對(duì)照品溶液各1020iU，注入液相色譜儀進(jìn)行鑒別，供試品溶液的龍腦苷保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液主峰保留時(shí)間一致；2).龍腦苷含量測(cè)定a待測(cè)供試品溶液的制備精密量取本品50毫升，置于125毫升分液漏斗中，加10克乙酸銨，然后加入乙酸乙酯萃取4次，每次加入乙酸乙酯的體積為50毫升，充分搖勻后，依次靜置2，1，1，1小時(shí)，合并乙酸乙酯層萃取液，濃縮至干后，用甲醇溶解至2毫升容量瓶，定容至刻度，供HPLC分析；b對(duì)照品溶液的制備稱取龍腦苷對(duì)照品適量，加甲醇制成對(duì)照品溶液；c液相檢測(cè)條件反相色譜柱，蒸發(fā)光檢測(cè)器，流動(dòng)相為5055%甲醇水溶液或2025%乙腈水溶液；d樣品測(cè)定精密吸取1020iU供試品溶液，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量。在麥冬的鑒別中，供試品的處理時(shí)，可以采用鹽酸、硫酸、醋酸或硝酸調(diào)節(jié)pH值，各種不同濃度的鹽酸、硫酸、醋酸或硝酸溶液均可以使用，但是為了使用方便和PH值變化穩(wěn)定，一般采用10%的鹽酸；破乳劑可使用任何不與溶劑發(fā)生反應(yīng)(一般為中性)的電解質(zhì)均可，比如乙酸銨、硫酸鈉、硫酸鉀、氯化鉀、氯化鈉等。在麥冬的鑒別中，理論上液相檢測(cè)條件中使用任意反相柱均可，常用的為(:8或(:18反相色譜柱。在龍腦苷含量測(cè)定中，理論上液相檢測(cè)條件中使用任意反相柱均可，常用的為(:18反相色譜柱。圖1、龍腦苷標(biāo)準(zhǔn)品和各批次參麥注射液(實(shí)施例1-3)及紅參提取液(實(shí)施例4)的HPLC圖譜對(duì)比圖2、龍腦苷標(biāo)準(zhǔn)品和參麥注射液(實(shí)施例5)的HPLC圖譜對(duì)比圖3、實(shí)施例6中線性關(guān)系考察圖4、實(shí)施例6中專屬性考察的HPLC圖譜圖5、實(shí)施例7中參麥注射液中龍腦苷含量測(cè)定的HPLC圖譜具體實(shí)施方案發(fā)明的具體實(shí)施方案是為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明，不是對(duì)本發(fā)明技術(shù)特征的限制。實(shí)施例1:樣品10支，規(guī)格為每支10ml裝，批號(hào)0801191，生產(chǎn)廠家正大青春寶藥業(yè)有限公司。供試品溶液的制備取100ml參麥注射液濃縮至30ml，用10%鹽酸調(diào)節(jié)pH為5.0，加入lg氯化鈉，乙酸乙酯萃取4次，每次40ml，合并萃取液，將萃取液中蒸干，加1.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液；對(duì)照品溶液的制備稱取龍腦苷l(shuí)mg，加10ml甲醇溶解，作為對(duì)照品溶液；液相檢測(cè)條件C18反相色譜柱，蒸發(fā)光檢測(cè)器，流動(dòng)相為53%甲醇水溶液；鑒別取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20ii1，進(jìn)液相檢測(cè)，供試品溶液的龍腦苷保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液主峰保留時(shí)間一致，^對(duì)照=12.3min，tK#ffl=12.2min。買(mǎi)施例2:樣品1瓶，規(guī)格為每瓶100ml裝，批號(hào)0910199，生產(chǎn)廠家正大青春寶藥業(yè)有限公司。供試品溶液的制備取100ml麥冬提取液濃縮至30ml，用10X鹽酸調(diào)節(jié)pH為4.5，加入lg硫酸鈉，乙酸乙酯萃取4次，每次30ml，合并萃取液，將萃取液蒸干，加1.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液；液相檢測(cè)條件C18反相色譜柱，蒸發(fā)光檢測(cè)器，流動(dòng)相為53%甲醇水溶液；鑒別取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20iU，進(jìn)液相檢測(cè)，供試品溶液的龍腦苷保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液主峰保留時(shí)間一致，^對(duì)昭=12.3min，tK#ffl=12.lmin。實(shí)施例3:樣品10支，規(guī)格為每支10ml裝，批號(hào)0907121，生產(chǎn)廠家正大青春寶藥業(yè)有限公司。供試品溶液的制備取100ml麥冬提取液濃縮至30ml，用10X鹽酸調(diào)節(jié)pH為3.0，加入lg硫酸鉀，正丁醇萃取4次，每次50ml，合并萃取液，將萃取液蒸干，加1.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液；液相檢測(cè)條件C18反相色譜柱，蒸發(fā)光檢測(cè)器，流動(dòng)相為53%甲醇水溶液；鑒別取供試品溶液和對(duì)照品溶液各201，進(jìn)液相檢測(cè)，供試品溶液的龍腦苷保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液主峰保留時(shí)間一致，tK5(W=12.3min，tK#ffl=12.lmin。實(shí)施例4:樣品紅參提取液，根據(jù)參麥注射液的提取工藝提取。供試品溶液的制備取100ml紅參提取液濃縮至30ml，用10X鹽酸調(diào)節(jié)pH為5.0，加入lg氯化鈉，乙酸乙酯萃取4次，每次40ml，合并萃取液，將萃取液中蒸干，加1.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液；液相檢測(cè)條件C18反相色譜柱，蒸發(fā)光檢測(cè)器，流動(dòng)相為53%甲醇水溶液；鑒別取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20i！1，進(jìn)液相檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)供試品溶液在對(duì)照品溶液主峰保留時(shí)間處沒(méi)有色譜峰出現(xiàn)，說(shuō)明按照參麥注射液的提取工藝，紅參中沒(méi)有龍腦苷，不干擾麥冬的鑒別。實(shí)施例5:樣品2瓶，規(guī)格為每瓶50ml裝，批號(hào)0910197，生產(chǎn)廠家正大青春寶藥業(yè)有限公司。供試品溶液的制備取100ml麥冬提取液濃縮至30ml，用10X鹽酸調(diào)節(jié)pH為5.0，加入lg氯化鈉，乙酸乙酯萃取4次，每次30ml，合并萃取液，將萃取液蒸干，加2ml甲醇溶解，作為供試品溶液；對(duì)照品溶液制備稱取龍腦苷l(shuí)mg，加10ml甲醇溶解，作為對(duì)照品溶液；液相檢測(cè)條件C8反相色譜柱，蒸發(fā)光檢測(cè)器，流動(dòng)相為25%乙腈水溶液；鑒別取供試品溶液和對(duì)照品溶液各10i！1，進(jìn)液相檢測(cè)，供試品溶液的龍腦苷保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液主峰保留時(shí)間一致，^對(duì)照=16.6min，tK#ffl=16.6min。實(shí)施例6:儀器與試藥儀器Waterse2695高效液相色譜儀和Waters2424ELSD檢測(cè)器，Empower2工作站。溶劑HPLC分析用乙腈為Merck試劑公司產(chǎn)品，水為樂(lè)百氏純凈水；萃取用乙酸乙酯為分析純，國(guó)藥集團(tuán)有限公司產(chǎn)品。對(duì)照品龍腦苷為發(fā)明人分離制備所得，純度為98.08%。參麥注射液由正大青春寶藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)為0910161,0910172，0910181，0910192，0910201，0910212，0910221，0910232，0910241，0910251，0910261，0910271，0910281，0910291，0910301。待測(cè)供試品溶液的制備精密量取本品50毫升，置于125毫升分液漏斗中，加107克乙酸銨，然后加入乙酸乙酯萃取4次，每次加入乙酸乙酯的體積為50毫升，充分搖勻后，依次靜置2，1，1，1小時(shí)，合并乙酸乙酯層萃取液，濃縮至干后，用甲醇溶解至2毫升容量瓶，定容至刻度，供HPLC分析?？瞻兹芤旱闹苽涑ゲ患訁Ⅺ溩⑸湟和?，其它完全按照供試樣品的制備方法制備得空白溶液。對(duì)照溶液的制備稱取龍腦苷l(shuí)mg，加10ml甲醇溶解，作為對(duì)照品溶液；缺紅參陰性對(duì)照樣溶液的制備除去不加紅參藥材，完全按照本品生產(chǎn)工藝和本品供試品溶液的制備方法制備得到缺紅參陰性對(duì)照溶液。缺麥冬陰性對(duì)照樣溶液的制備除去不加麥冬藥材，完全按照本品生產(chǎn)工藝和本品供試品溶液的制備方法制備得到缺麥冬陰性對(duì)照溶液。色譜條件色譜柱AlltimaC18柱(250X4.6mm，5m);流動(dòng)相乙腈水=22:78;流速lml/min;進(jìn)樣量20iU;柱溫35°C;ELSD檢測(cè)(參數(shù)設(shè)定漂移管溫度6(TC，加熱動(dòng)力級(jí)別60^，增益150，氮?dú)鈮毫?5Psi，時(shí)間常數(shù)正常)。線性關(guān)系考察對(duì)照品溶液的配制精密稱取龍腦苷對(duì)照品11.882mg置100ml容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，搖勻，即得。分別精密量取對(duì)照品溶液2.00、2.50、4.50、5.00、6.00、7.50ml置10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得。加上對(duì)照品溶液直接取樣，共得7個(gè)濃度對(duì)照品溶液。在上述色譜條件下分別精密吸取20iU以上對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，以峰面積的對(duì)數(shù)(logA)為縱坐標(biāo)Y，以進(jìn)樣量的對(duì)數(shù)(logW)為橫坐標(biāo)X進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見(jiàn)附圖3。得線性方程為:Y=1.387789X+6.02466，r=0.9997。線性范圍將標(biāo)準(zhǔn)曲線最低點(diǎn)和最高點(diǎn)的對(duì)照品溶液(分別相當(dāng)于40%和200%濃度)，各進(jìn)樣6次，每次20ia，所得龍腦苷的峰面積見(jiàn)表2，RSD分別為1.8%，1.8%，因此龍腦苷進(jìn)樣量的線性范圍為0.466155-2.33077iig。表2.線性范圍考察列表<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>精密度考察重復(fù)性試驗(yàn)取同一批次本品(批號(hào)0910261)6份，按照供試品溶液制備方法制得6份供試品溶液，分別精密吸取20iU以上供試品溶液，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量(Pg/ml)，測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表3，RSD(n=6)為3.7%，表明該方法重復(fù)性良好。表3重復(fù)性測(cè)試含量(Pg/ml)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>中間精密度試驗(yàn)由兩名分析人員于不同日期分別取同一批次本品(批號(hào)0910261)各6份，按照供試品溶液制備方法共制得12份供試品溶液，于不同日期按照測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量g/ml)，測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表4，RSD(n=12)為3.1%，表明該方法中間精密度良好。表4中間精密度實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)列表(Pg/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批次本品(批號(hào)0910221)按照要求制得的供試品溶液分別在0、1.5、3、4.5、6、7.5、9、10.5、12h精密吸取20注入液相色譜儀測(cè)定，計(jì)算含量(Pg/ml)，測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表5，RSD(n=9)為1.6%，表明供試液至少在12h內(nèi)穩(wěn)定。[OO93]表5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)列表(Pg/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>平均值28.256iig/ml;RSD=1.6%回收率試驗(yàn)精密量取已測(cè)含量(以其重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的平均值計(jì)，114.584g)的參麥注射液(批號(hào)0910261)6份，每份50.00毫升，每份精密加入對(duì)照品溶液2.00ml(精密稱定2.810毫克龍腦苷標(biāo)樣，置于50毫升容量瓶中，加5毫升甲醇溶解后，加乙酸乙酯定容至刻度即得，濃度為55.121g/ml)，然后按照供試品溶液的制備方法(第一次加乙酸乙酯為48ml，于后萃取步驟相同)，加甲醇定容成5ml，制備成加樣回收率供試液，分別精密吸取20iU以上供試品溶液，依法測(cè)定，測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表6，加樣平均回收率(n=6)為76.0%，RSD為4.8%，說(shuō)明該方法具有一定準(zhǔn)確度。表6加樣回收率實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)列表<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>耐用性(考察柱溫的影響)取同一批次供試品溶液(批號(hào)09251)通過(guò)改變柱溫為3(TC和4(TC時(shí)，依法測(cè)定，分別進(jìn)樣2次，每次分別精密吸取20iU，測(cè)定龍腦苷的峰面積，計(jì)算含量g/ml)，測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表7，RSD(n=6)分別為3.6%。表明測(cè)定柱溫設(shè)定在304(TC結(jié)果都是準(zhǔn)確的。表7.耐用性考察柱溫對(duì)含量(Pg/ml)測(cè)定的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>專屬性考察將空白樣品溶液(空白樣)，龍腦苷對(duì)照品溶液(標(biāo)準(zhǔn)樣)，缺紅參陰性對(duì)照樣溶液(缺紅參樣)，缺麥冬陰性對(duì)照樣溶液(缺麥冬樣)，待測(cè)供試品溶液(批次0910232)(待測(cè)樣)，以及待測(cè)供試品溶液加龍腦苷對(duì)照品溶液混合液(待測(cè)和龍腦苷混合樣)分別進(jìn)樣分析，分析結(jié)果見(jiàn)附圖4，空白溶液和缺麥冬陰性對(duì)照樣溶液在龍腦苷出峰位置無(wú)干擾峰，缺紅參陰性對(duì)照樣溶液，待測(cè)供試品溶液中龍腦苷出峰保留時(shí)間與龍腦苷標(biāo)樣出峰時(shí)間一致，且待測(cè)供試品溶液和龍腦苷標(biāo)樣混合液在龍腦苷出峰位置表現(xiàn)為單一峰并且峰高比供試品溶液中龍腦苷的峰增高，說(shuō)明待測(cè)供試品溶液中龍腦苷出峰位置為龍腦苷，該峰來(lái)自原材料麥冬藥材中，不是來(lái)自紅參藥材，且無(wú)其它干擾峰。樣品測(cè)定取不同批次的本品按照供試品制備方法制得的供試品溶液，依法測(cè)定，外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表8和圖5。表8.參麥注射液中龍腦苷的含量(n=2)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>根據(jù)15批樣品的測(cè)定結(jié)果，將限度定位"本品含龍腦武量不得少于1.OPg/ml"。權(quán)利要求一種參麥注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于利用龍腦苷對(duì)參麥注射液中的麥冬的鑒別和龍腦苷含量測(cè)定方法，包括以下方法1).麥冬的鑒別a供試品溶液的制備取100ml參麥注射液濃縮至30ml，調(diào)節(jié)pH至3.0～7.0，加入適量破乳劑，乙酸乙酯萃取4次，每次30～50ml，合并萃取液，將萃取液蒸干，加1～2ml甲醇溶解，作為供試品溶液；b對(duì)照品溶液的制備稱取龍腦苷對(duì)照品適量，加甲醇制成對(duì)照品溶液；c液相檢測(cè)條件反相色譜柱，蒸發(fā)光檢測(cè)器，流動(dòng)相為50～55％甲醇水溶液或20～25％乙腈水溶液；d鑒別取供試品溶液和對(duì)照品溶液各10～20μl，注入液相色譜儀進(jìn)行鑒別，供試品溶液的龍腦苷保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液主峰保留時(shí)間一致；2).龍腦苷含量測(cè)定a待測(cè)供試品溶液的制備精密量取本品50毫升，置于125毫升分液漏斗中，加10克乙酸銨，然后加入乙酸乙酯萃取4次，每次加入乙酸乙酯的體積為50毫升，充分搖勻后，依次靜置2，1，1，1小時(shí)，合并乙酸乙酯層萃取液，濃縮至干后，用甲醇溶解至2毫升容量瓶，定容至刻度，供HPLC分析；b對(duì)照品溶液的制備稱取龍腦苷對(duì)照品適量，加甲醇制成對(duì)照品溶液；c液相檢測(cè)條件反相色譜柱，蒸發(fā)光檢測(cè)器，流動(dòng)相為50～55％甲醇水溶液或20～25％乙腈水溶液；d樣品測(cè)定精密吸取10～20μl供試品溶液，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量。2.權(quán)利要求l所述的參麥注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于l)麥冬的鑒別步驟a中用鹽酸、硫酸、醋酸或硝酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3.07.0。3.權(quán)利要求1所述的參麥注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于1)麥冬的鑒別步驟c中反相色譜柱為C8反相色譜柱或C18反相色譜柱。4.權(quán)利要求1所述的參麥注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于1)麥冬的鑒別步驟a中破乳劑為乙酸銨、硫酸鈉、硫酸鉀、氯化鉀或氯化鈉中的一種。5.權(quán)利要求1所述的參麥注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于1)麥冬的鑒別步驟a中萃取液乙酸乙酯用正丁醇代替。6.權(quán)利要求1所述的參麥注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于2)龍腦苷含量測(cè)定步驟C中的色譜條件為色譜柱《18柱；流動(dòng)相22%乙腈水溶液；流速lml/min;進(jìn)樣量20iU;柱溫:35。C;蒸發(fā)光檢測(cè)。全文摘要本發(fā)明涉及參麥注射液的質(zhì)量控制方法，包括利用特征性成分龍腦苷鑒別參麥注射液中麥冬的方法和龍腦苷的含量測(cè)定方法。鑒別和含量測(cè)定均包括以下步驟制備供試品溶液和對(duì)照品溶液，采用反相色譜柱，蒸發(fā)光檢測(cè)器，流動(dòng)相為甲醇或乙腈水溶液的液相條件進(jìn)行檢測(cè)，液相圖譜顯示供試品溶液的龍腦苷保留時(shí)間與對(duì)照品一致，含量測(cè)定時(shí)采用外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算。本發(fā)明的鑒別和含量測(cè)定方法供試液處理簡(jiǎn)單，檢測(cè)條件均為常用儀器設(shè)備，易于推廣。完善了參麥注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)有麥冬成分的檢測(cè)和含量測(cè)定的缺陷，對(duì)全面提高參麥注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)具有顯著意義。文檔編號(hào)A61P31/12GK101745024SQ20091015568公開(kāi)日2010年6月23日申請(qǐng)日期2009年12月31日優(yōu)先權(quán)日2009年12月31日發(fā)明者凌益平,劉武,孫媛媛,張曉麗,朱大元,潘迎鋒,譚俊杰,譚昌恒,駱雅琴申請(qǐng)人:正大青春寶藥業(yè)有限公司