一種四制香附飲片的質(zhì)量控制方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種四制香附飲片的質(zhì)量控制方法，本發(fā)明建立四制香附HPLC指紋圖譜，以活性成分α-香附酮為基準(zhǔn)峰，計(jì)算基準(zhǔn)峰中α-香附酮的含量，其它主要活性成分的指紋峰以α-香附酮為參照，計(jì)算每個活性成分指紋峰以α-香附酮計(jì)的相對含量。本發(fā)明的方法具有可操作性，僅需用一個已知的對照品α-香附酮成分含量即可控制其他未知主要有效成分的相對含量，達(dá)到控制四制香附飲片質(zhì)量的一種科學(xué)方法。該方法簡單，易于推廣，減少了對照品的使用量，解決了市場單體物質(zhì)對照品不足且昂貴的問題，使四制香附飲片質(zhì)量穩(wěn)定，藥效作用增強(qiáng)，有助于推動中藥產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展。
【專利說明】一種四制香附飲片的質(zhì)量控制方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥質(zhì)量控制【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種四制香附飲片的質(zhì)量控制方 法。

【背景技術(shù)】
[0002] 香附為莎草科植物莎草Cyperus rotundus L.的干燥根莖。始載于《名醫(yī)別錄》， 具有疏肝理氣、調(diào)經(jīng)止痛的功效，為婦科調(diào)經(jīng)止痛的要藥，素有"氣病之總司，女科之主帥" 之美稱，臨床用于治療痛經(jīng)、月經(jīng)失調(diào)、功能性子宮出血等多種婦科疾病。由于香附炮制前 后藥理作用及化學(xué)成分發(fā)生較大變化，因此臨床多以炮制品入藥。
[0003] 中藥炮制是一門古老的制藥技術(shù)，現(xiàn)有許多傳統(tǒng)炮制工藝仍主要以經(jīng)驗(yàn)繼承為 主，缺乏現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)手段的深入研究，導(dǎo)致飲片質(zhì)量難以控制，無法與大生產(chǎn)及現(xiàn)代中醫(yī) 藥的發(fā)展相適應(yīng)。為了統(tǒng)一炮制技術(shù)與現(xiàn)代中藥炮制發(fā)展的步伐，本發(fā)明將現(xiàn)代工藝技術(shù) 與傳統(tǒng)方法有機(jī)融合，傳統(tǒng)炮制理論與現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵相輔相成，可為傳統(tǒng)流派工藝的現(xiàn)代 傳承和發(fā)展奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
[0004] 香附的炮制目的主要是減少苦味及香燥之氣，提高療效，改變或增強(qiáng)藥物作用的 部位和趨向。隨著中藥炮制的發(fā)展，由于南北用藥習(xí)慣的不同，古代眾多的香附炮制方法或 失傳或進(jìn)一步發(fā)展，導(dǎo)致了現(xiàn)今香附炮制"各地各法，一藥數(shù)法"的局面，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道沿用 的炮制方法有醋制、酒制、四制香附、七制香附、蜜制、制炭、姜制、鹽制等20余種之多。在江 西、福建、臺灣等周邊地區(qū)，習(xí)用四制法炮制香附，炮制工藝獨(dú)具特色，在藥界享有很高的聲 譽(yù)，但炮制技術(shù)仍主要以經(jīng)驗(yàn)繼承為主，缺乏現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)手段的質(zhì)量控制方法，無法做到 "質(zhì)量穩(wěn)定、工藝規(guī)范、飲片可控"，這在很大程度上限制了其獨(dú)特炮制技術(shù)的傳承與推廣應(yīng) 用。
[0005] 為此，采用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)手段與方法對四制香附飲片進(jìn)行質(zhì)量控制，實(shí)現(xiàn)四制香 附的規(guī)?；a(chǎn)，推動中藥產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展，這是傳承與發(fā)展中藥傳統(tǒng)炮制工藝的需要，也是 保證中藥炮制飲片做到"質(zhì)量穩(wěn)定、工藝規(guī)范、飲片可控"的關(guān)鍵所在。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種四制香附飲片的質(zhì)量控制方法。通過采用多種化 學(xué)模式識別技術(shù)，結(jié)合藥理效應(yīng)研究，探明譜-效關(guān)系并分離出效應(yīng)成分，獲得多個單體 化合物，通過藥理試驗(yàn)確認(rèn)主要活性效應(yīng)成分物質(zhì)有5種，其保留時間分別為：16. lmin、 18. 5min、24. 9min、29. 5min和30. 5min，并以已確認(rèn)的5個主要活性成分為飲片質(zhì)量控制指 標(biāo)，制定四制香附飲片質(zhì)量控制方法，規(guī)范炮制關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)，利于工業(yè)化生產(chǎn)質(zhì)量控制， 確保臨床用藥的有效性。本發(fā)明旨在宏揚(yáng)傳統(tǒng)炮制技術(shù)，推進(jìn)四制香附的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化及 工業(yè)化生產(chǎn)的進(jìn)程，促進(jìn)其大規(guī)模地推廣應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0008] 本發(fā)明的四制香附飲片的質(zhì)量控制方法如下：
[0009] (1)高效液相色譜法測定條件：
[0010] 色譜柱：Diamonsil C18 ;檢測波長：220-280nm ;流速：0· 5-1. 5mL/min ;進(jìn)樣量： 20 μ L ;柱溫：室溫；流動相：甲醇和重蒸餾水；洗脫程序：梯度洗脫；
[0011] ⑵對照品溶液的制備：
[0012] 精密量取α-香附酮對照品〇.〇5mL，置于10mL容量瓶中，用95%乙醇稀釋至刻 度，搖勻，即得濃度為5ug/mL對照品溶液；
[0013] (3)標(biāo)準(zhǔn)方程的建立：
[0014] 精密吸取對照品溶液配制成系列濃度，注入液相色譜儀，按步驟（1)的色 譜條件分析，測定峰面積，以對照品量為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)得標(biāo)準(zhǔn)方程y = 136.75x+3. 5384,R = 0.9996 ；
[0015] (4)供試品溶液的制備：
[0016] 取四制香附粗粉4g，加入95%乙醇32mL，加熱回流提取3次，每次2h，合并濾液定 容至100mL，得四制香附藥材液，用0. 45 μ m的微孔濾膜過濾，得供試品溶液；
[0017] (5)HPLC指紋圖譜的建立：
[0018] 對供試品進(jìn)行色譜分析，按步驟（1)的色譜條件分析，得到5種主要有效成分，建 立HPLC指紋圖譜，以α -香附酮為基準(zhǔn)峰作為參照峰，對已探明的主要有效成分指紋峰進(jìn) 行相對含量測定，根據(jù)計(jì)算公式：指紋峰相對含量=(指紋峰峰面積/基準(zhǔn)峰峰面積）X基 準(zhǔn)峰含量，獲得主要有效成分指紋峰相對含量，建立5種效應(yīng)成分的定量方法。該方法的方 法學(xué)考察試驗(yàn)結(jié)果均表明：5個效應(yīng)成分指紋峰的保留時間和峰面積RSD均小于5%，表明 儀器精密度、檢測方法的重現(xiàn)性、樣品溶液在24小時內(nèi)的穩(wěn)定性等均良好。
[0019] 步驟（1)中，色譜柱：Diamonsil C18 的規(guī)格為 250X4. 6mm，5ul。
[0020] 步驟⑴中，優(yōu)選檢測波長：12〇nm ;流速：1. OmL/min。
[0021] 步驟⑴中，流動相：甲醇㈧和重蒸餾水⑶梯度洗脫的體積比為：〇_l〇min， 30% -70% A 和 70% -30% B ;10-45min，70% -100% A 和 30% -0% B。
[0022] 步驟（1)中，梯度洗脫的方法如下表所示：
[0023]

【權(quán)利要求】
1. 一種四制香附飲片的質(zhì)量控制方法，其特征在于：所述方法如下： (1) 高效液相色譜法測定條件： 色譜柱：Diamonsil C18 ;檢測波長：220-280nm ;流速：0· 5-1. 5mL/min ;進(jìn)樣量： 20 μ L ;柱溫：室溫；流動相：甲醇和重蒸餾水；梯度洗脫； (2) 對照品溶液的制備： 精密量取〇-香附酮對照品0.051^，置于101^容量瓶中，用95%乙醇稀釋至刻度，搖 勻，即得濃度為5ug/mL對照品溶液； (3) 標(biāo)準(zhǔn)方程的建立： 精密吸取對照品溶液配制成系列濃度，注入液相色譜儀，按步驟（1)的色譜條件分析， 測定峰面積，以對照品量為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)得標(biāo)準(zhǔn)方程y = 136. 75x+3. 5384, R =0. 9996 ； (4) 供試品溶液的制備： 取四制香附粗粉4g，加入95%乙醇32mL，加熱回流提取3次，每次2h，合并濾液定容至 100mL，得四制香附藥材液，用0. 45 μ m的微孔濾膜過濾，得供試品溶液； (5) HPLC指紋圖譜的建立： 對供試品進(jìn)行色譜分析，按步驟（1)的色譜條件分析，得到5種主要有效成分，建立 HPLC指紋圖譜，以α -香附酮為基準(zhǔn)峰作為參照峰，對已探明的主要有效成分指紋峰進(jìn)行 相對含量測定，根據(jù)計(jì)算公式：指紋峰相對含量=(指紋峰峰面積/基準(zhǔn)峰峰面積）X基準(zhǔn) 峰含量，獲得主要有效成分指紋峰相對含量，建立5種效應(yīng)成分的定量方法。
2. 如權(quán)利要求1所述的四制香附飲片的質(zhì)量控制方法，其特征在于：步驟⑴中，色譜 柱：Diamonsil C18 的規(guī)格為 250X4.6mm，5ul。
3. 如權(quán)利要求1所述的四制香附飲片的質(zhì)量控制方法，其特征在于：步驟（1)中，檢測 波長：250nm ;流速：1. OmL/min。
4. 如權(quán)利要求1所述的四制香附飲片的質(zhì)量控制方法，其特征在于：步驟（1)中，流動 相：甲醇㈧和重蒸餾水⑶梯度洗脫的體積比為：〇-l〇min，30% -70% A和70% -30% B ; 10-45min，70% -100% A 和 30% -0% B。
5. 如權(quán)利要求1所述的四制香附飲片的質(zhì)量控制方法，其特征在于：步驟（1)中，梯度 洗脫的方法如下表所示：
〇
6. 如權(quán)利要求1所述的四制香附飲片的質(zhì)量控制方法，其特征在于：步驟（5)中，5種 主要有效成分保留時間分別為：16. lmin、18. 5min、24. 9min、29. 5min和30. 5min。
【文檔編號】G01N30/88GK104155399SQ201410416072
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年8月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月22日
【發(fā)明者】郭慧玲, 胡律江, 趙曉娟, 胡志方, 李淑雯 申請人:江西中醫(yī)藥大學(xué)