專利名稱：一種具有降血糖作用的藥物組合物、其制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含中藥提取物的藥物，具體地說是一種具有降血糖作用的藥物組合 物、其制備方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
糖尿病(Diabetes Mellitus)是由于胰島素分泌不足和/或胰島素作用受損引 起的一組以高血糖為特征的代謝性疾病。其表現(xiàn)為血液及尿液中葡萄糖濃度升高，蛋白 代謝紊亂。當(dāng)血糖、尿糖過高時(shí)，可出現(xiàn)“三多一少”癥狀，即多飲、多食、多尿和體重減輕， 且伴有疲乏無力。糖尿病主要分為I型糖尿病(type ldiabetes)和II型糖尿病(type 2diabetes)和妊娠期糖尿病(gestational diabetes) 0其中I型糖尿病即胰島β細(xì)胞破 壞而導(dǎo)致的胰島素絕對缺乏，必須依賴胰島素治療維持生命，也稱胰島素依賴型(IDDM)，多 發(fā)生于青少年。II型糖尿病系由于機(jī)體對胰島素不敏感(即胰島素抵抗)并胰島素分泌不 足所致，亦稱非胰島素依賴型(NIDDM)，常伴有明顯的遺傳因素，但遺傳機(jī)制尚未闡明，多見 于30歲以后中、老年人。妊娠期糖尿病(gestational diabetes)是源于細(xì)胞的胰島素抵 抗，不過其胰島素抵抗是由于妊娠期婦女分泌的激素(荷爾蒙)所導(dǎo)致的。妊娠期糖尿病 通常在分娩后自愈。隨著社會經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人類生活方式的轉(zhuǎn)變和飲食結(jié)構(gòu)的改變，全球環(huán)境因素的 變化，糖尿病患者(主要是II型糖尿病)的數(shù)量迅速增加，其發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈逐漸 增高趨勢，尤其在發(fā)展中國家，增加速度快，呈現(xiàn)流行趨勢。糖尿病已成為全世界許多國家 的常見病和多發(fā)病，其死亡率已居腫瘤和心血管疾病之后的第3位。目前，糖尿病的治療主 要分飲食療法、運(yùn)動療法、注射胰島素、口服降糖藥等。常用的口服降血糖西藥主要有磺脲 類藥物、雙胍類藥物、α -糖苷酶抑制劑和胰島素增敏劑等?；请孱愃幬锍Ｓ玫挠懈窳斜倦?(優(yōu)降糖)、格列齊特(達(dá)美康)、格列吡嗪(美吡噠)、格列喹酮(糖適平)和格列美脲。這 類藥物通過刺激胰腺功能來增加胰島素的分泌，從而達(dá)到降血糖的目的，因此，只有在病人 的胰腺仍有功能的情況下服用才有效。雙胍類藥物目前使用最多的是鹽酸二甲雙胍，它可 以增加體內(nèi)葡萄糖的利用率，同時(shí)阻止胃腸道吸收葡萄糖，并提高胰島素的敏感性，但不能 增加胰島素的分泌。此類藥物適用于體形肥胖或正常的II型糖尿病患者。α-糖苷酶抑 制劑是一類新型口服降糖藥，其作用機(jī)制是競爭性地抑制小腸刷狀緣的近腔上皮細(xì)胞內(nèi)的 α -糖苷酶，減緩腸道對碳水化合物的消化吸收來控制餐后血糖的升高，適用于I型和II型 糖尿病，目前已被批準(zhǔn)用于臨床的α-糖苷酶抑制劑主要有三種阿卡波糖(拜唐蘋)、伏 格列波糖(倍欣)和米格列醇(拜恬)，它們都是含氮的生物堿。胰島素增敏劑已用于臨床 的有曲格列酮、羅格列酮等，這些藥物可提高體內(nèi)胰島素的敏感性，使同樣數(shù)量的胰島素發(fā) 揮更大的降糖作用，適用于體形較胖且有胰島素抵抗的糖尿病患者。α-糖苷酶包括胰腺淀粉酶、麥芽糖酶、異麥芽糖酶和蔗糖酶等，在體內(nèi)承擔(dān)將寡 糖、多糖轉(zhuǎn)化為單糖的功能。食物中碳水化合物在胃腸道中消化需經(jīng)幾個(gè)連續(xù)的酶促反應(yīng)。 食物中淀粉首先被位于十二指腸和空腸上部的胰腺淀粉酶水解為分子量較小的麥芽糖、異
4麥芽糖等寡糖，這些寡糖很難被小腸粘膜吸收，必須經(jīng)麥芽糖酶和異麥芽糖酶水解為葡萄 糖等單糖，才能被粘膜表面有效運(yùn)輸而進(jìn)入代謝循環(huán)。食物中蔗糖則被蔗糖酶水解為果糖 和葡萄糖，被吸收進(jìn)入代謝循環(huán)。由于α-糖苷酶抑制劑的活性中心含有氮，可與α-糖苷 酶上碳水化合物的結(jié)合位點(diǎn)相結(jié)合，其親和力遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于酶的正常底物，因此，當(dāng)與食物一起 進(jìn)食后，α-糖苷酶抑制劑可在小腸上皮細(xì)胞刷緣處與高分子量碳水化合物相競爭，占據(jù)結(jié) 合位點(diǎn)，使高分子量碳水化合物的消化吸收受阻，從而減少碳水化合物在小腸上部的吸收。 未被消化的高分子量碳水化合物被運(yùn)送至小腸中下段，導(dǎo)致碳水化合物的消化吸收發(fā)生在 整段小腸中，減緩和延遲了餐后葡萄糖的吸收，從而降低餐后血糖的升高。α -糖苷酶抑制劑的研究始于20世紀(jì)六十年代，興起于七十年代。1965年，人們 首次從玫瑰產(chǎn)色鏈球菌R-468的發(fā)酵培養(yǎng)液中分離出2-羥甲基-3，4，5，6-四羥基吡啶， 命名為Nojirimycin (野尻霉素)。1967年，合成得到2R，3R，4R，5S-2-羥甲基-3，4，5-三 羥基哌啶，命名為1-Deoxynojirimycind-脫氧野尻霉素)，八十年代證實(shí)1_脫氧野尻霉 素對糖苷酶有良好的抑制作用。其后又不斷有新的抑制劑被發(fā)現(xiàn)，大多為生物堿類。各類 α-糖苷酶抑制劑結(jié)構(gòu)上共同的特點(diǎn)是存在擬單糖結(jié)構(gòu)，亦即一個(gè)多羥基的六元環(huán)或五元 環(huán)結(jié)構(gòu)。以六元環(huán)為例，其可為環(huán)己烷、環(huán)己烯、吡喃或吡啶等。若環(huán)中帶有氮原子，則為生 物堿類，這是一類最主要的α-糖苷酶抑制劑，結(jié)構(gòu)上大致可分為七類多羥基哌啶類、四 氫吡咯類、二氫吡咯類、吲哚拉西類、吡咯雙烷類和托烷類。糖尿病人蛋白代謝紊亂，補(bǔ)充合適的氨基酸，特別是必需氨基酸，是有必要的。各 項(xiàng)動物試驗(yàn)和臨床研究均證明氨基酸對糖尿病有預(yù)防和治療作用，可通過多種機(jī)制調(diào)節(jié)血 糖，控制癥狀。體外實(shí)驗(yàn)和動物實(shí)驗(yàn)均證明氨基酸有降血糖的作用，其主要機(jī)理為促進(jìn)胰島 素分泌和胰島β細(xì)胞前體的增殖。研究發(fā)現(xiàn)，高蛋白飲食或補(bǔ)充支鏈氨基酸可以明顯改善 糖尿病大鼠的癥狀，提高血漿胰島素水平及胰島組織胰島素水平；另外，精氨酸、鳥氨酸、賴 氨酸、Y-氨基丁酸、色氨酸、亮氨酸、?；撬岬染哂写俗饔??？诜被徇€可以提高組織 和細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的速率，通過改善胰島細(xì)胞功能從而改善胰島素抵抗。另外，精氨酸還具 有加強(qiáng)抗糖尿病藥物甲磺丁脲的Ca2+內(nèi)流和促胰島素分泌的作用；賴氨酸可以提高胰島素 受體酪氨酸激酶的活性，從而促進(jìn)胰島素的分泌，降低血糖水平；荔枝殼中的甘氨酸衍生物 可以提高機(jī)體及周圍組織對葡萄糖的利用率。研究還發(fā)現(xiàn)，賴氨酸、甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸 和天冬氨酸還有抗糖基化的作用，能降低STZ致糖尿病大鼠的血糖，可以延遲白內(nèi)障的形 成。近年的臨床研究也證明氨基酸對糖尿病的治療作用。Sulovhana等做了一項(xiàng)臨床 試驗(yàn)8位2型糖尿病患者每天口服兩次降糖藥，同時(shí)再服用1克L-賴氨酸鹽酸鹽，為期2 個(gè)月。定期測空腹血糖和單核細(xì)胞中的胰島素受體酪氨酸激酶的活性。另有8位健康者作 為對照組。與正常人的胰島素受體酪氨酸激酶活性(50，775+/-3597dpm/ml)相比，糖尿病 患者的酶活性顯著降低(22074+/-1728dpm/ml)。服用賴氨酸的糖尿病患者中有31%胰島 素受體酪氨酸激酶的活性提高，27%血糖降低。在另一項(xiàng)周期為2個(gè)月的雙盲臨床試驗(yàn)中，入選的77位2型糖尿病患者都給予降 糖藥治療。根據(jù)補(bǔ)充的氨基酸的種類，將患者分成4組:A組賴氨酸，B組必需氨基酸，C 組氨基酸和維生素(脂溶性和水溶性)，D組磷酸鈣。試驗(yàn)結(jié)果表明A、B兩組患者餐后 血糖分別下降了 50mg/dl和77mg/dl，而C組患者餐后血糖沒有下降，D組患者餐后血糖僅下降21mg/dl。其中A組中45%和B組中53%的患者餐后胰島素水平的下降同時(shí)伴有血糖 的下降，其原因在于胰島素敏感性的提高。另外，補(bǔ)充氨基酸還可以抑制蛋白的分解代謝， 促進(jìn)蛋白的合成代謝，進(jìn)而降低血漿中氨基酸的濃度。Piatti等通過12例2型糖尿病患者長期口服L-精氨酸的試驗(yàn)來評價(jià)L-精氨酸 是否可以通過NO/cGMP途徑改善肝臟及外周對胰島素的敏感性。其試驗(yàn)結(jié)果首次證明L-精 氨酸誘導(dǎo)的NO增加可以提高胰島素敏感性。2型糖尿病患者的cGMP水平明顯低于正常人， 試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，L-精氨酸可使患者基礎(chǔ)cGMP水平恢復(fù)正常，前臂血流量顯著增加(36% )，在鉗 夾試驗(yàn)中，葡萄糖移去率增加34%，而同時(shí)，L-精氨酸可以降低收縮壓(14%)和內(nèi)生葡萄 糖(29%)。因此，長期口服L-精氨酸能顯著增加2型糖尿病患者的外周和肝臟胰島素的 敏感性。除了生物堿、氨基酸類外，某些多糖類、黃酮類、環(huán)烷類也具有降血糖活性。中國 專利ZL97112359. 4公開了 “桑枝的醇和/或水浸膏在制備降血糖藥物中的應(yīng)用”，該專利 涉及了從桑枝中制備的多糖，但沒有涉及生物堿類和氨基酸類降血糖作用。中國專利申 請?zhí)?8807147. 9介紹了“用噻唑烷二酮、促胰島素分泌劑和α -葡糖苷酶抑制劑治療糖 尿病”，但該專利申請沒有涉及到如何從中藥中提取和制備α-葡糖苷酶抑制劑，也沒有 涉及氨基酸類降血糖作用，更沒有涉及上述生物堿類物質(zhì)與氨基酸類物質(zhì)聯(lián)合使用。中 國專利ZL01113191.8公開了 “具有α _糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物、其制備方法及 用途”，該專利涉及了從中藥桑白皮、桑葉、桑枝或桑椹制備的總生物堿，但沒有涉及氨基 酸類降血糖作用，更沒有涉及上述生物堿類物質(zhì)與氨基酸類物質(zhì)聯(lián)合使用。中國專利號 ZL200410018677. 4公開了 “具有α -糖苷酶抑制活性的藥物組合物及其用途”，該專利 涉及了從蠶沙或桑枝或桑白皮或桑葉中提取的總生物堿與總黃酮，但沒有涉及氨基酸類 降血糖作用，更沒有涉及上述生物堿類物質(zhì)與氨基酸類物質(zhì)聯(lián)合使用。中國專利申請?zhí)?200510028709. 3公開了“一種具有降血糖作用的中藥提取物及其制備方法”，該專利涉及了 由?？浦参锷Ｈ~、桑枝、桑白皮任一或其組合中分離得到多糖類、黃酮類和生物堿類組份， 但沒有涉及氨基酸類降血糖作用，更沒有涉及上述生物堿類物質(zhì)與氨基酸類物質(zhì)聯(lián)合使 用。糖尿病，中醫(yī)稱之為“消渴”，即消瘦煩渴之意，主要病變部位在肺、胃、腎，現(xiàn)在中 醫(yī)藥治療糖尿病的機(jī)理，一是通過綜合調(diào)節(jié)作用，補(bǔ)五臟，益精氣，祛瘀血，標(biāo)本同治，使體 內(nèi)的陰陽失調(diào)、氣血紊亂、臟腑功能虛弱恢復(fù)正常；二是中藥有明確的降糖作用。我國具有 豐富的中藥資源和應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)，目前已被證實(shí)有降糖作用的中藥達(dá)70余種。中藥降糖的機(jī)制 可能有以下幾個(gè)方面促進(jìn)胰島β細(xì)胞分泌胰島素，抑制胰高糖素的分泌；提高胰島素受 體結(jié)合力和數(shù)目，改善胰島素受體后效應(yīng)；抑制糖異生，促進(jìn)葡萄糖利用，延緩腸道葡萄糖 的吸收。中國藥材資源豐富，從糖和蛋白質(zhì)的消化、吸收、代謝途徑入手，以現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論解 釋中醫(yī)機(jī)理，開發(fā)安全可靠，有效成分明確，作用靶標(biāo)清晰的天然降糖藥物提供一條新的途 徑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，提供一種由?？浦?物桑白皮、桑枝、桑葉、桑椹任一或其組合中提取分離得到的活性成份總生物堿和總氨基酸組成的藥物組合物，使生物堿類物質(zhì)與氨基酸類物質(zhì)聯(lián)合使用。為此，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案一種具有降血糖作用的藥物組合物，其活性 成份是由?？浦参锷０灼?、桑枝、桑葉、桑椹任一或其組合中提取分離得到的總生物堿和 總氨基酸組成；提取分離得到的提取物的各類活性成份中，總生物堿的質(zhì)量百分含量為 9. 8% 44. 6%，總氨基酸的質(zhì)量百分含量為30. 0% 70. 4%，且兩者的含量之和占提取 物的50%以上。作為對上述技術(shù)方案的進(jìn)一步完善和補(bǔ)充，本發(fā)明采取以下技術(shù)措施上述的藥物組合物，其包括相對于藥物組合物總重量的作為活性成份的2. 7% 19. 0 %的總生物堿、5. 9 % 52. 5 %的總氨基酸及0. 8 % 15 %的崩解劑、0. 5 9 %的抗粘 吸收劑、0. 3 3%的潤滑劑和3 80%的填充劑。上述的藥物組合物，所述的總生物堿為多羥基哌啶型生物堿、多羥基吡咯烷型生 物堿、多羥基莨菪烷型生物堿中的一種或幾種，其中多羥基哌啶型生物堿為必需；所述的多 羥基哌啶型生物堿主要為1-脫氧野尻霉素與其衍生物或/和其藥用鹽的組合物，1-脫氧野 尻霉素為必需，1-脫氧野尻霉素的質(zhì)量百分含量占提取物的5. 0% 24. 9%。1-脫氧野尻霉素的衍生物主要有N-甲基-1-脫氧野尻霉素、Fagomine、 3-epi-Fagomine,2- α -D-半乳糖苷脫氧野尻霉素、6_ α -D-半乳糖苷脫氧野尻霉 素、2- α -D-葡萄糖苷-1-脫氧野尻霉素、3- α -D-葡萄糖苷脫氧野尻霉素、4_ α -D-葡 萄糖苷-1-脫氧野尻霉素、2- β -D-葡萄糖苷-1-脫氧野尻霉素、3- β -D-葡萄糖苷-1-脫 氧野尻霉素、4- β -D-葡萄糖苷-1-脫氧野尻霉素和6- β -D-葡萄糖苷-1-脫氧野尻霉素寸。上述的藥物組合物，所述的總氨基酸為精氨酸、Y-氨基丁酸、天冬氨酸、L-天冬 酰胺、谷氨酸、哌可林酸、谷胱甘肽中的一種或多種，其中精氨酸為必需，精氨酸的質(zhì)量百分 含量占提取物的7. 0% 34. 9%。上述的藥物組合物，各輔料的質(zhì)量百分比優(yōu)選為崩解劑2 10%，填充劑10 60 %，抗粘吸收劑3 7 %，潤滑劑0. 3 1 % ；崩解劑更優(yōu)選為3 8 %，填充劑更優(yōu)選為 20 50%。上述的藥物組合物，崩解劑選用交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、預(yù)膠化淀粉、 低取代羥丙纖維素中的任一種或二種以上的混合物；填充劑選用乳糖、微晶纖維素、淀粉、 硫酸鈣、磷酸氫鈣中的任一種或二種以上的混合物；抗粘吸收劑選用二氧化硅；潤滑劑選 用硬脂酸、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅中的任一種或二種以上的混合物。本發(fā)明的另一目的在于提供上述藥物組合物的制備方法，其步驟如下1)獲得含有活性成份總生物堿和總氨基酸的提取物以?？浦参锷０灼?、桑枝、 桑葉、桑椹任一或其組合為原材料，經(jīng)切制或粉碎處理后，加水或0. 01 0. ImoL/L的酸或 甲醇或乙醇或含水醇類為提取溶劑，在靜態(tài)或動態(tài)下，進(jìn)行浸漬提取或加熱提取或回流提 取；過濾除去藥渣，濾液經(jīng)常壓濃縮或減壓濃縮，加入去離子水，攪勻，靜置；通過離心或過 濾(包括常壓過濾、減壓過濾、微濾、納濾、超濾等)，除去殘?jiān)?，清液加PH值調(diào)節(jié)劑至pH為 2 5 ；溶液再通過離心或過濾，除去殘?jiān)?，清液上陽離子交換樹脂柱，先用去離子水洗盡不 吸附的雜質(zhì)，再用0. 2 1. OmoL/L氨水溶液洗脫，收集生物堿鑒別反應(yīng)和氨基酸鑒別反應(yīng) 呈陽性部分；收集液經(jīng)減壓濃縮除去氨水，濃縮液經(jīng)真空干燥或噴霧干燥或微波干燥或冷凍干燥，即得含總生物堿及總氨基酸的浸膏；2)取浸膏，加入填充劑、崩解劑、抗粘促吸收劑，混合均勻加入乙醇濕法制粒，干燥 整粒，外加潤滑劑，混合，制成片劑(包薄膜衣)或膠囊或分散片。本方法的清液只上陽離子 交換樹脂柱，沒有再上其它離子交換樹脂柱，從而得到了總生物堿及總氨基酸的混合物。而 現(xiàn)有的專利中(ZL01113191.8)，清液先上陽離子交換樹脂柱，后上陰離子交換樹脂柱(其 去除了總氨基酸)，從而只得到了總生物堿。上述的制備方法，提取溶劑為水，用量為被提取原材料重量的5 15倍，提取次數(shù) 為1 3次，提取溫度為60V 100°C。上述的制備方法，提取溶劑為0. 01 0. ImoL/L的鹽酸，用量為被提取原材料重量 的6 15倍，室溫提取1 3次。上述的制備方法，提取溶劑為甲醇或乙醇或含水醇類，用量為被提取原材料重量 的6 12倍，提取次數(shù)為2 3次，提取溫度在60°C以上。上述的制備方法，陽離子交換樹脂采用凝膠型或大孔型苯乙烯系樹脂，凝膠型 苯乙烯系樹脂為 001X1、001X4、001X7、001X8、001X10、001X14、001X16、001X7FC、 001 X 7MB、001UN、HZ002、HZ016、JK006、Amberlite IR120、Dowex 50、Zerolit 225、 Lewatit-100、Diaion SK-I 中的一種；大孔型苯乙烯系樹脂為 D001、D001C、D001H、D001L、 DOO 1MB, D001FC、D001SC、HD-8、HZ-6 中的一種。上述的制備方法，pH值調(diào)節(jié)劑為0. 1 1. OmoL/L鹽酸溶液或硫酸溶液。上述的藥物組合物在制備用于治療糖尿病和其并發(fā)癥的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明主要從α-糖苷酶抑制劑機(jī)理和糖尿病人蛋白代謝紊亂入手，從中藥桑白 皮或桑枝或桑葉或桑椹中篩選出幾種不同結(jié)構(gòu)類型的降血糖活性成份一類為總生物堿， 它能有效抑制寡糖、多糖的水解；另一類是總氨基酸，主要是精氨酸、賴氨酸、甘氨酸、丙氨 酸、谷氨酸和天冬氨酸等，與第一類相比，其降血糖作用較弱，但二者聯(lián)合使用效果顯著，具 有良好的協(xié)同作用，可以有效地抑制和延遲食物中碳水化合物的消化和吸收，降糖效果好 于總生物堿和總氨基酸單獨(dú)使用的效果。本發(fā)明從桑白皮或桑枝或桑葉或桑椹中提取的總生物堿與總氨基酸，以及由這兩 種活性組分利用各種公知的藥物制劑技術(shù)，制成的各種制劑包括片劑、膠囊劑、分散片等， 具有作用機(jī)制清晰，療效確切，可用于治療糖尿病及其并發(fā)癥。下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1稱取桑白皮2. 50kg，切絲，分別加水37. 5L、25L、12. 5L，80°C動態(tài)提取三次，過濾， 棄去藥渣。合并三次濾液，濃縮至一定體積，高速離心，用l.Omol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)藥液的 PH值至4. 0，再高速離心，清液上001 X 7陽離子交換樹脂柱，先用水洗盡不吸附的雜質(zhì)，再 用l.Omol/L氨水溶液洗脫，收集生物堿鑒別反應(yīng)和氨基酸鑒別反應(yīng)呈陽性部分。收集液經(jīng) 減壓濃縮除去氨水；濃縮液經(jīng)真空干燥，制得浸膏26. 40g，其中含總生物堿7. 30g、總氨基 酸10. 60g,詳見表1。取浸膏26. 40g,加入交聯(lián)聚維酮2. 64g，微晶纖維素29. 39g，二氧化硅 2. 64g混合均勻后用濃度為95%的乙醇溶液進(jìn)行制粒，干燥，整粒，外加硬脂酸鎂0. 53g混合，壓片，包薄膜衣。實(shí)施例2稱取桑白皮2. 50kg，粉碎成粗粉，加O.Olmol/L鹽酸溶液室溫動態(tài)提取兩次， 每次25L，過濾，棄去藥渣。合并兩次濾液，濃縮至一定體積，高速離心，離心清液直接上 Amberlite IR120陽離子交換樹脂柱，先用水洗盡不吸附的雜質(zhì)，再用1. Omol/L氨水溶液 洗脫，收集生物堿鑒別反應(yīng)和氨基酸鑒別反應(yīng)呈陽性部分。收集液經(jīng)減壓濃縮除去氨水；濃 縮液經(jīng)冷凍干燥，制得浸膏31. 35g，其中含總生物堿13. 35g、總氨基酸10. 50g,詳見表1。取 浸膏31. 35g，加入交聯(lián)聚維酮10. 95g，微晶纖維素24. 09g, 二氧化硅6. 57g混合均勻后用濃 度為95%的乙醇溶液進(jìn)行制粒，干燥，整粒，外加硬脂酸鎂2. 19g混合，壓制，得分散片。實(shí)施例3稱取桑枝2. 50kg，切片，分別加甲醇25L、20L、15L，加熱回流提取三次，過濾，棄去 藥渣。合并三次濾液，濃縮至干，加入去離子水12. 5L，攪拌使之充分溶解，靜置30min，高速 離心，用0. lmol/L硫酸溶液調(diào)節(jié)離心清液的pH值至5. 0，減壓過濾，濾液上D001陽離子交 換樹脂柱，先用水洗盡不吸附的雜質(zhì)，再用0. 2mol/L氨水溶液洗脫，收集生物堿鑒別反應(yīng) 和氨基酸鑒別反應(yīng)呈陽性部分。收集液經(jīng)減壓濃縮除去氨水；濃縮液經(jīng)真空干燥，制得浸膏 24. 30g，其中含總生物堿5. 05g、總氨基酸7. 25g，詳見表1。取浸膏24. 30g，加入交聯(lián)聚維 酮0.81g，微晶纖維素30. 62g，二氧化硅0.81g混合均勻后用濃度為95%的乙醇溶液進(jìn)行制 粒，干燥，整粒，外加硬脂酸鎂0. 16g混合，裝入膠囊。實(shí)施例4稱取桑葉2. 50kg，加65%乙醇溶液60°C提取兩次，每次30L，過濾，棄去藥渣。合 并兩次濾液，濃縮至無乙醇味，加入去離子水適量，離心，用0. 5mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)離心清 液PH值至5. 0，微濾，濾液上HD-8陽離子交換樹脂柱，先用去離子水洗盡不吸附的雜質(zhì)，再 用0. 2mol/L氨水溶液洗脫，收集生物堿鑒別反應(yīng)和氨基酸鑒別反應(yīng)呈陽性部分。收集液經(jīng) 減壓濃縮除去氨水；濃縮液經(jīng)真空干燥，制得浸膏30. 15g，其中含總生物堿7. 10g、總氨基 酸10. 85g，詳見表1。取浸膏30. 15g，加入交聯(lián)羧甲基纖維素鈉1. 41g，微晶纖維素86. 73g， 淀粉20. 00g，二氧化硅2. Olg混合均勻后用濃度為90%的乙醇溶液進(jìn)行制粒，干燥，整粒， 外加硬脂酸鎂0. 40g混合，壓片，包薄膜衣。實(shí)施例5稱取桑椹2. 50kg，粉碎成粗粉，分別加水25L、12. 5L，60°C提取兩次，過濾，棄去藥 渣。合并兩次濾液，濃縮至一定體積，減壓過濾，濾液用1. Omol/L硫酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3. 0， 再高速離心，清液上Dowex 50陽離子交換樹脂柱，先用去離子水洗盡不吸附的雜質(zhì)，再用 0. 5mol/L氨水溶液洗脫，收集生物堿鑒別反應(yīng)和氨基酸鑒別反應(yīng)呈陽性部分。收集液經(jīng)減 壓濃縮除去氨水；濃縮液經(jīng)冷凍干燥，制得浸膏23. 05g，其中含總生物堿2. 25g、總氨基酸 16. 15g，詳見表1。取浸膏23. 05g，加入預(yù)膠化淀粉1. 00g，低取代羥丙纖維素1. 31g，微晶 纖維素4. 16g，二氧化硅0. 77g混合均勻后用濃度為95%的乙醇溶液進(jìn)行制粒，干燥，整粒， 外加硬脂酸鈣0. 46g混合均勻，裝入膠囊。實(shí)施例6分別稱取桑白皮1. 75kg、桑枝0. 75kg，加水37. 5L 100°C沸騰提取1次，過濾，棄去 藥渣。濾液濃縮至一定體積，減壓過濾，濾液用0. 5mol/L硫酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3. 0，超濾，濾液上HZ-6陽離子交換樹脂柱，先用去離子水洗盡不吸附的雜質(zhì)，再用1. Omol/L氨水溶液 洗脫，收集生物堿鑒別反應(yīng)和氨基酸鑒別反應(yīng)呈陽性部分。收集液經(jīng)減壓濃縮除去氨水；濃 縮液經(jīng)噴霧干燥，制得浸膏25. 45g，其中含總生物堿6. 65g、總氨基酸9. 85g，詳見表1。取 浸膏25. 45g，加入低取代羥丙纖維素1. 70g，微晶纖維素132. 19g，磷酸氫鈣5. 00g，二氧化 硅2. 64g混合均勻后用濃度為95%的乙醇溶液進(jìn)行制粒，干燥，整粒，外加硬脂酸鎂0. 53g 混合，壓片，包薄膜衣。實(shí)施例7分別稱取桑白皮1. 50kg、桑葉1. 00kg，粉碎，加0. 05mol/L鹽酸溶液室溫浸漬提取 3次，每次15L，過濾，棄去藥渣。合并三次濾液，濃縮至12. 5L，板框過濾，濾液直接上D001C 陽離子交換樹脂柱，先用水洗盡不吸附的雜質(zhì)，再用1. Omol/L氨水溶液洗脫，收集生物堿 鑒別反應(yīng)和氨基酸鑒別反應(yīng)呈陽性部分。收集液經(jīng)減壓濃縮除去氨水；濃縮液經(jīng)冷凍干燥， 制得浸膏29. 15g，其中含總生物堿7. 60g、總氨基酸11.35g，詳見表1。取浸膏29. 15g，加入 交聯(lián)羧甲基纖維素鈉0. 39g，微晶纖維素4. 85g，磷酸氫鈣5. 00g，二氧化硅0. 39g混合均勻 后用濃度為90%的乙醇溶液進(jìn)行制粒，干燥，整粒，外加硬脂酸鎂0. 19g混合，壓片，包薄膜 衣。實(shí)施例8分別稱取桑白皮1. 25kg、桑椹1. 25kg，加水70°C提取三次，每次20L，過濾，棄去藥 渣。合并三次濾液，濃縮至一定體積，高速離心，用1. Omol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3. 5，高 速離心，清液上Zerolit225上陽離子交換樹脂柱，先用去離子水洗盡不吸附的雜質(zhì)，再用 0. 5mol/L氨水溶液洗脫，收集生物堿鑒別反應(yīng)和氨基酸鑒別反應(yīng)呈陽性部分。收集液經(jīng)減 壓濃縮除去氨水；濃縮液經(jīng)真空干燥，制得浸膏24. 35g，其中含總生物堿5. 45g、總氨基酸 13. 05g,詳見表1。取浸膏24. 35g，加入交聯(lián)聚維酮5. 67g，微晶纖維素77. 44g，二氧化硅 4. 86g，混合均勻后用濃度為80%的乙醇溶液進(jìn)行制粒，干燥，整粒，外加硬脂酸鎂1. 13g混 合，壓片，包薄膜衣。實(shí)施例9分別稱取桑枝1. 00kg、桑葉1. 50kg，粉碎，加0. lmol/L鹽酸溶液37. 5L室溫動態(tài) 提取1次，過濾，棄去藥渣，濾液濃縮至一定體積，減壓過濾，濾液直接上Lewatit-100陽離 子交換樹脂柱，先用水洗盡不吸附的雜質(zhì)，再用1. 0mol/L氨水溶液洗脫，收集生物堿鑒別 反應(yīng)和氨基酸鑒別反應(yīng)呈陽性部分。收集液經(jīng)減壓濃縮除去氨水；濃縮液經(jīng)冷凍干燥，制得 浸膏27. 30g，其中含總生物堿6. 25g、總氨基酸10. 35g，詳見表1。取浸膏27. 30g,加入交聯(lián) 聚維酮5. 46g，微晶纖維素2. 0g，二氧化硅0. 91g，混合均勻后用濃度為85%的乙醇溶液進(jìn) 行制粒，干燥，整粒，外加硬脂酸鎂0. 73g混合，壓片，包薄膜衣。實(shí)施例10分別稱取桑枝1. 00kg、桑椹1. 50kg，粉碎，加乙醇90°C動態(tài)提取3次，每次25L， 過濾，棄去藥渣。合并三次濾液，濃縮至約10L，加入去離子水適量，靜置12h，高速離心，離 心清液用0. lmol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至5. 0，板框過濾，濾液上Diaion SK-I陽離子交換 樹脂柱，先用水洗盡不吸附的雜質(zhì)，再用0. 5mol/L氨水溶液洗脫，收集生物堿鑒別反應(yīng)和 氨基酸鑒別反應(yīng)呈陽性部分。收集液經(jīng)減壓濃縮除去氨水；濃縮液經(jīng)真空干燥，制得浸膏 24. 85g，其中含總生物堿4. 45g、總氨基酸10. 70g，詳見表1。取浸膏24. 85g，加入交聯(lián)羧甲基纖維素鈉23. 24g，微晶纖維素99. 60g，二氧化硅13. 28g，混合均勻后用濃度為95%的乙 醇溶液進(jìn)行制粒，干燥，整粒，外加硬脂酸鎂5. OOg混合，壓片，包薄膜衣。實(shí)施例11分別稱取桑葉1. 50kg、桑椹1. 00kg，加水85°C提取2次，每次25L，過濾，棄去藥 渣。合并兩次次濾液，濃縮至一定體積，高速離心，離心清液用0. 2mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié) PH值至4.5，高速離心，清液上擬002陽離子交換樹脂柱，先用水洗盡不吸附的雜質(zhì)，再用 0. 5mol/L氨水溶液洗脫，收集生物堿鑒別反應(yīng)和氨基酸鑒別反應(yīng)呈陽性部分。收集液經(jīng)減 壓濃縮除去氨水；濃縮液經(jīng)真空干燥，制得浸膏23. 55g，其中含總生物堿4. 85g、總氨基酸 11. 35g，詳見表1。取浸膏23. 55g，加入交聯(lián)聚維酮5. 50g,微晶纖維素75. 05g, 二氧化硅 4. 71g，混合均勻后用濃度為95%的乙醇溶液進(jìn)行制粒，干燥，整粒，外加硬脂酸鎂1. IOg混 合，壓片，包薄膜衣。實(shí)施例12分別稱取桑白皮1. 00kg、桑枝0. 50kg、桑葉1. 00kg，加水90°C動態(tài)提取2次，每 次30L，過濾，棄去藥渣。合并兩次濾液，濃縮至一定體積，高速離心，離心清液用0. 2mol/ L硫酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4. 0，高速離心，清液上JK006陽離子交換樹脂柱，先用水洗盡不吸 附的雜質(zhì)，再用1. Omol/L氨水溶液洗脫，收集生物堿鑒別反應(yīng)和氨基酸鑒別反應(yīng)呈陽性部 分。收集液經(jīng)減壓濃縮除去氨水；濃縮液經(jīng)噴霧干燥，制得浸膏26. 65g，其中含總生物堿 6. 60g、總氨基酸10. 55g，詳見表1。取浸膏26. 65g，加入交聯(lián)羧甲基纖維素鈉8. 90g，微晶 纖維素129. 94g，二氧化硅8. 90g，混合均勻后用濃度為95%的乙醇溶液進(jìn)行制粒，干燥，整 粒，外加硬脂酸鎂3. 56g混合，壓片，包薄膜衣。實(shí)施例13分別稱取桑白皮1. 00kg、桑枝0. 75kg、桑椹0. 75kg，加水100°C動態(tài)提取3次，每 次25L，過濾，棄去藥渣。合并三次濾液，濃縮至一定體積，高速離心，離心清液用0. 5mol/L 鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH值至2. 0，高速離心，清液上001 X 1陽離子交換樹脂柱，先用水洗盡不吸 附的雜質(zhì)，再用0. 5mol/L氨水溶液洗脫，收集生物堿鑒別反應(yīng)和氨基酸鑒別反應(yīng)呈陽性部 分。收集液經(jīng)減壓濃縮除去氨水；濃縮液經(jīng)真空干燥，制得浸膏25. 85g，其中含總生物堿 6. 35g、總氨基酸12. 15g，詳見表1。取浸膏25. 85g，加入交聯(lián)聚維酮5. 50g,乳糖45. OOg,微 晶纖維素25. 00g，硫酸鈣10. OOg 二氧化硅4. 71g混合均勻后用濃度為95%的乙醇溶液進(jìn) 行制粒，干燥，整粒，外加硬脂酸1. 50g混合，制成膠囊。實(shí)施例14分別稱取桑白皮1. 00kg、桑葉1. 00kg、桑椹0. 50kg，加水80°C動態(tài)提取3次，每次 30L，過濾，棄去藥渣。合并三次濾液，濃縮至一定體積，減壓過濾，濾液用1. Omol/L鹽酸溶 液調(diào)節(jié)PH值至3.0，減壓過濾，濾液上001X 7FC陽離子交換樹脂柱，先用水洗盡不吸附的雜 質(zhì)，再用1. Omol/L氨水溶液洗脫，收集生物堿鑒別反應(yīng)和氨基酸鑒別反應(yīng)呈陽性部分。收 集液經(jīng)減壓濃縮除去氨水；濃縮液經(jīng)真空干燥，制成浸膏27. 75g，其中含總生物堿6. 55g、 總氨基酸12. 55g，詳見表1。取浸膏27. 75g，加入交聯(lián)羧甲基纖維素鈉6. 90g，低取代羥丙 纖維素2. 00g,乳糖45. 00g,淀粉15. 00g,磷酸氫鈣5. 00g, 二氧化硅8. 90g,混合均勻后用濃 度為無水乙醇進(jìn)行制粒，干燥，整粒，外加硬脂酸鎂2. OOg混合，壓片，包薄膜衣。實(shí)施例15
分別稱取桑枝0. 50kg、桑葉1. 00kg、桑椹1. 00kg，加水90°C動態(tài)提取3次，每次 25L，過濾，棄去藥渣。合并三次濾液，濃縮至一定體積，板框過濾，濾液用0. 2mol/L鹽酸溶 液調(diào)節(jié)PH值至4. 5，板框過濾，濾液上OOlX 16陽離子交換樹脂柱，先用水洗盡不吸附的雜 質(zhì)，再用0. 5mol/L氨水溶液洗脫，收集生物堿鑒別反應(yīng)和氨基酸鑒別反應(yīng)呈陽性部分。收 集液經(jīng)減壓濃縮除去氨水；濃縮液經(jīng)真空干燥，制得浸膏26. 35g，其中含總生物堿6. 80g、 總氨基酸11. 55g，詳見表1。取浸膏26. 35g，加入交聯(lián)聚維酮3. 50g，微晶纖維素25. OOgjt 酸鈣5. OOg, 二氧化硅3. 50g,混合均勻后用濃度為95%乙醇溶液進(jìn)行制粒，干燥，整粒，外 加硬脂酸鋅2. 55g混合，壓片，包薄膜衣。實(shí)施例16分別稱取桑白皮0. 75kg、桑枝0. 50kg、桑葉0. 75kg、桑椹0. 50kg，加水80°C動態(tài)提 取3次，每次25L，過濾，棄去藥渣。合并三次濾液，濃縮至一定體積，高速離心，離心清液用 0. 5mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4. 0，高速離心，清液上D001FC陽離子交換樹脂柱，先用水 洗盡不吸附的雜質(zhì)，再用l.Omol/L氨水溶液洗脫，收集生物堿鑒別反應(yīng)和氨基酸鑒別反應(yīng) 呈陽性部分。收集液經(jīng)減壓濃縮除去氨水；濃縮液經(jīng)真空干燥，制得浸膏25. 15g，其中含總 生物堿6. 45g、總氨基酸12. 30g,詳見表1。取浸膏25. 15g，加入交聯(lián)羧甲基纖維素鈉3. OOg, 微晶纖維素20. 00g，預(yù)膠化淀粉9. 50g混合均勻后用濃度為90%的乙醇溶液進(jìn)行制粒，干 燥，整粒，外加二氧化硅0. 39g、硬脂酸鎂0. 19g混合，壓片，包薄膜衣。表1 實(shí)施例1 16制得的浸膏中總生物堿、1-脫氧野尻霉素、總氨基酸、精氨酸 量 實(shí)施例17根據(jù)實(shí)施例3、實(shí)施例4和實(shí)施例5制得的浸膏對酵母來源α _1，4糖苷酶的抑 制試驗(yàn)酵母來源α-1，4糖苷酶(購自Sigma，效價(jià)4. 5U/mg，批號83Η8000)，在酶標(biāo)板中 選四孔以上作空白孔，每孔分別加入0. lmol/L磷酸鹽緩沖液(ρΗ7· 0)80 μ l、20mmol/L對 硝基苯酚葡萄糖酯溶液40μ 1，37°C保溫5分鐘，加入酶稀釋液40μ 1，37°C保溫15分鐘， 加入0.2mol/L Na2C03溶液160μ 1反應(yīng)終止。選四孔以上作抑制劑空白孔，每孔分別加入0. lmol/L磷酸鹽緩沖液(pH7. 0) 80 μ l、20mmol/L對硝基苯酚葡萄糖酯溶液40 μ 1，37°C 保溫5分鐘，加入酶溶液40 μ 1，37°C保溫15分鐘，加入0. 2mol/L Na2C03溶液160 μ 1反 應(yīng)終止。選四孔以上作抑制劑測定孔，每孔分別加入80 μ 1 0. IM ρΗ7.0磷酸緩沖液稀釋 的適當(dāng)濃度的抑制劑溶液(取拜糖蘋、1-脫氧野尻霉素鹽酸鹽、實(shí)施例3、實(shí)施例4和實(shí)施 例5下制得的浸膏，以相應(yīng)緩沖液對倍稀釋成8個(gè)濃度)、20mmol/L對硝基苯酚葡萄糖酯 溶液40μ 1，37°C保溫5分鐘，加入酵母α _1，4糖苷酶溶液40μ 1，37°C保溫15分鐘，加入 0. 2mol/L Na2C03溶液160 μ 1反應(yīng)終止。將酶標(biāo)板置酶標(biāo)儀上測定405nm處的吸光度值， 以空白孔清零。各抑制劑的抑制率=(抑制劑空白孔A405nm的平均值-抑制劑測定孔的 A405nm)/抑制劑空白孔A405nm的平均值，采用Logit法計(jì)算IC50。結(jié)果表明1_脫氧野 尻霉素鹽酸鹽、實(shí)施例3、實(shí)施例4和實(shí)施例5下制得的浸膏均對酵母來源的α -糖苷酶有 較強(qiáng)的抑制作用，強(qiáng)于陽性對照藥拜糖蘋，詳見表2、表3、表4。表2 拜唐蘋對酵母α -糖苷酶的抑制 根據(jù)表2計(jì)算出拜糖蘋對酵母α -糖苷酶的半數(shù)抑制濃度IC50為3. 92mmol/L。表3 1-脫氧野尻霉素鹽酸鹽對酵母α _糖苷酶的抑制 根據(jù)表3計(jì)算出1-脫氧野尻霉素鹽酸鹽對酵母α _糖苷酶的半數(shù)抑制濃度IC50 為 0.13mmol/L0表4 實(shí)施例3-實(shí)施例5所得浸膏對酵母α _糖苷酶的抑制 根據(jù)表4計(jì)算出實(shí)施例3 實(shí)施例5所得浸膏對酵母α _糖苷酶的半數(shù)抑制濃度 IC50 分別為 0. 183365mg/ml、0. 145838mg/ml、0. 223966mg/ml。實(shí)施例18根據(jù)實(shí)施例1、實(shí)施例2制得的浸膏對大鼠來源α -糖苷酶的抑制試驗(yàn)正常SD 大鼠6只，雄性，體重150-250g，空腹24小時(shí)后處死，取出上段小腸(約15-20cm)，用預(yù)冷 至4°C的生理鹽水溶液清洗，再以0. Olmol/L磷酸鹽緩沖液(pH7. 0)洗凈小腸內(nèi)壁，用顯微 鏡載玻片輕柔刮取小腸黏膜。合并大鼠小腸黏膜，加入10倍體積的0. Olmol/L磷酸鹽緩沖 液(pH7. 0)使懸浮，置勻漿機(jī)中快速攪拌30秒，離心(19000rpm，4°C，30分鐘)兩次，合并 上清液，加入20ml正丁醇，攪拌15分鐘，4°C放置，分層。吸取上層水相，過濾，分裝于1. 5ml Appendorf管供試驗(yàn)。以對硝基苯酚法測定其活性，在405nm處測定反應(yīng)中生成的對硝基苯 酚，其形成速率與酶的活性成正比，以不加酶上清液和受試藥物的反應(yīng)體系為空白管調(diào)零， 以以不加受試藥物的反應(yīng)體系管為100%，設(shè)拜糖蘋為陽性對照管，加入實(shí)施例1、實(shí)施例2 所得浸膏，計(jì)算該浸膏對酶的抑制率，詳見表5、表6、表7。試驗(yàn)結(jié)果表明，桑白皮提取物浸膏對大鼠來源的α-糖苷酶有較強(qiáng)的抑制作用，強(qiáng)于陽性對照藥拜糖平，且拜唐蘋和桑白 皮提取物對酶的抑制率與酶濃度無關(guān)，呈可逆抑制。
表5 拜糖蘋對大鼠α -糖苷酶的抑制 根據(jù)表5計(jì)算出拜糖蘋對大鼠α-糖苷酶的半數(shù)抑制濃度IC50分別為 40. 09mmol/L,30. 43mmol/L。表6 實(shí)施例1所得浸膏對大鼠α -糖苷酶的抑制 根據(jù)表6計(jì)算出實(shí)施例1所得浸膏對大鼠α -糖苷酶的半數(shù)抑制濃度IC50分別 為71. 63 μ g/ml 和 65. 17μ g/ml。表7 實(shí)施例2所得浸膏對大鼠α -糖苷酶的抑制 根據(jù)表7計(jì)算出實(shí)施例2所得浸膏對大鼠α _糖苷酶的半數(shù)抑制濃度IC50分別 為68. 56 μ g/ml 和 54. 43 μ g/ml。實(shí)施例19桑白皮提取物(根據(jù)實(shí)施例1制得的浸膏)對正常小鼠糖耐量的影響取體重 24士2g清潔級ICR雄性小鼠72只，隨機(jī)分成6組，即模型對照組(蒸餾水)、100mg/kg、 200mg/kg、400mg/kg的桑白皮提取物組、50mg/kg拜唐蘋組、4g/kg桑枝顆粒組，每組12只。 各組小鼠禁食不禁水6小時(shí)，取血(為Omin)，然后給予受試藥物，即100mg/kg、200mg/kg、 400mg/kg的桑白皮提取物，50mg/kg拜唐蘋和4g/kg桑枝顆粒，模型對照組給同體積的蒸餾水，給藥同時(shí)灌胃淀粉5g/kg，給淀粉后0min、30min、60min、90min、120min眼眶靜脈叢取 血，分離血清，測定各時(shí)血糖值，計(jì)算血糖峰值的相對抑制率。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，正常小鼠在進(jìn)食 淀粉30min后血糖達(dá)峰值，各組小鼠進(jìn)食淀粉后30min時(shí)點(diǎn)的血糖值見表8。試驗(yàn)結(jié)果表 明，給予100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg的桑白皮提取物均能不同程度地抑制由5g/kg淀 粉負(fù)荷所致正常小鼠的血糖升高，其作用效果隨劑量的增大而增強(qiáng)。100mg/kg、200mg/kg、 400mg/kg的桑白皮提取物對正常小鼠給5g/kg淀粉后30min時(shí)血糖峰值的相對抑制率分 別為46. 29%,54. 14%,77. 49%，而50mg/kg拜唐蘋和4. Og/kg桑枝顆粒分別為84. 13%和 45. 76 %。結(jié)果表明，400mg/kg的桑白皮提取物近似50mg/kg拜糖平，100mg/kg的桑白皮提 取物與4. Og/kg桑枝顆粒相當(dāng)。表8 桑白皮提取物對正常小鼠進(jìn)食5g/kg淀粉后30min血糖峰值的影響
注與模型對照組相比-P> 0. 05，+P < 0. 05，*P < 0. 01實(shí)施例20桑白皮提取物(根據(jù)實(shí)施例1制得的浸膏)對糖尿病小鼠糖耐量的影響取體重 30 士 2g清潔級ICR雄性小鼠200只，禁食不禁水12小時(shí)(禁食前更換小鼠籠墊料)，腹腔注 射四氧嘧啶200mg/kg(臨用前在無菌條件下用0. 9% NaCl注射液溶解稀釋至2%濃度，腹 腔注射0. lml/10g)，注射后第7天，禁食不禁水6小時(shí)(禁食前更換小鼠籠墊料)，將小鼠 進(jìn)行稱重標(biāo)記，眼眶靜脈叢取血，測定小鼠的血清葡萄糖值，篩選高血糖糖尿病小鼠66只， 按血糖值和體重隨機(jī)分成6組，即模型對照組(蒸餾水)、100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg的 桑白皮提取物組、50mg/kg拜唐蘋組和4g/kg桑枝顆粒組，每組11只，各組平均血糖值差不 大于1. lmmol/L。各組小鼠禁食不禁水6小時(shí)，取血(為Omin)，然后給予相應(yīng)的受試藥物， 即100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg的桑白皮提取物，50mg/kg拜唐蘋和4g/kg桑枝顆粒，模型 對照組給同體積的蒸餾水，給藥同時(shí)灌胃5g/kg淀粉后0min、30min、60min、90min、120min 眼眶靜脈叢取血，分離血清，測定各時(shí)血糖值，計(jì)算血糖峰值的相對抑制率。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，糖尿 病小鼠在進(jìn)食淀粉后60min，血糖達(dá)峰值，各組小鼠進(jìn)食淀粉后60min時(shí)點(diǎn)的血糖值見表9。 試驗(yàn)結(jié)果表明，給予100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg桑白皮提取物均能不同程度地抑制由 5g/kg淀粉負(fù)荷所致糖尿病小鼠的血糖升高，其作用效果隨劑量的增大而增強(qiáng)。100mg/kg、 200mg/kg、400mg/kg的桑白皮提取物對糖尿病小鼠給予5g/kg淀粉后60min時(shí)血糖峰值的 相對抑制率分別為18. 77%,36. 66%,53. 96%，而50mg/kg拜唐蘋和4g/kg桑枝顆粒分別為 79. 47%和17. 30%。結(jié)果表明，對糖尿病小鼠血糖峰值的相對抑制率，400mg/kg的桑白皮 提取物低于50mg/kg拜唐蘋，但高于4g/kg桑枝顆粒，而100mg/kg的桑白皮提取物與4g/kg 桑枝顆粒相當(dāng)。表9 桑白皮提取物對糖尿病小鼠進(jìn)食5g/kg淀粉后60min血糖峰值的影響 注與模型對照組相比-P> 0. 05，+P < 0. 05，*P < 0. 01實(shí)施例21桑白皮提取物(根據(jù)實(shí)施例1制得的浸膏)對糖尿病小鼠的影響用30士2g的 清潔級ICR雄性小鼠，腹腔注射200mg/kg四氧嘧啶，建立糖尿病小鼠模型，觀察100mg/kg、 200mg/kg、400mg/kg三種劑量的桑白皮提取物對糖尿病小鼠血糖、體重的影響，并與陽性對 照品_同類西藥拜糖平50mg/kg和同類中藥桑枝顆粒4. Og/kg進(jìn)行比較。試驗(yàn)結(jié)果表明，桑 白皮提取物能抑制四氧嘧啶所致糖尿病小鼠的血糖升高，提高糖尿病小鼠體重，降低糖尿 病小鼠腎重與體重比值，并呈一定的量效關(guān)系，400mg/kg的桑白皮提取物組略優(yōu)于50mg/ kg劑量拜糖平，100mg/kg、200mg/kg的桑白皮提取物組優(yōu)于4. Og/kg桑枝顆粒組。
權(quán)利要求
一種具有降血糖作用的藥物組合物，其活性成份是由?？浦参锷０灼ぁ⑸Ｖ?、桑葉、桑椹任一或其組合中提取分離得到的總生物堿和總氨基酸組成；提取分離得到的提取物的各類活性成份中，總生物堿的質(zhì)量百分含量為9.8％～44.6％，總氨基酸的質(zhì)量百分含量為30.0％～70.4％，且兩者的含量之和占提取物的50％以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有降血糖作用的藥物組合物，其包括相對于藥物組合物總 重量的作為活性成分的2. 7% 19. 0%的總生物堿、5. 9% 52. 5%的總氨基酸及0. 8% 15%的崩解劑、0. 5 9%的抗粘吸收劑、0. 3 3%的潤滑劑和3 80%的填充劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有降血糖作用的藥物組合物，其特征在于所述的總生物堿 為多羥基哌啶型生物堿與多羥基吡咯烷型生物堿或/和多羥基莨菪烷型生物堿的組合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有降血糖作用的藥物組合物，其特征在于所述的多羥基哌 啶型生物堿為1-脫氧野尻霉素與其衍生物或/和其藥用鹽的組合物，1-脫氧野尻霉素的質(zhì) 量百分含量占提取物的5. 0% 24. 9%。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有降血糖作用的藥物組合物，其特征在于所述的總氨基酸 為精氨酸、Y-氨基丁酸、天冬氨酸、L-天冬酰胺、谷氨酸、哌可林酸、谷胱甘肽中的一種或 多種，其中精氨酸為必需，精氨酸的質(zhì)量百分含量占提取物的7. 0% 34. 9%。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有降血糖作用的藥物組合物，其特征在于藥物組合物中， 各輔料的質(zhì)量百分比如下崩解劑2 10%，填充劑10 60%，抗粘吸收劑3 7%，潤滑 劑0. 3 1%。
7.根據(jù)權(quán)利要求2-6任一項(xiàng)所述的藥物組合物的制備方法，其步驟如下1)獲得含有活性成份總生物堿和總氨基酸的提取物以?？浦参锷０灼?、桑枝、桑葉、 桑椹任一或其組合為原材料，經(jīng)切制或粉碎處理后，加水或0. 01 0. ImoL/L的酸或甲醇或 乙醇或含水醇類為提取溶劑，在靜態(tài)或動態(tài)下，進(jìn)行浸漬提取或加熱提取或回流提??；過濾 除去藥渣，濾液經(jīng)常壓濃縮或減壓濃縮，加入去離子水，攪勻，靜置；通過離心或過濾，除去 殘?jiān)?，清液加PH值調(diào)節(jié)劑至pH為2 5 ；溶液再通過離心或過濾，除去殘?jiān)?，清液上陽離子 交換樹脂柱，先用去離子水洗盡不吸附的雜質(zhì)，再用0. 2 1. OmoL/L氨水溶液洗脫，收集生 物堿鑒別反應(yīng)和氨基酸鑒別反應(yīng)呈陽性部分；收集液經(jīng)減壓濃縮除去氨水，濃縮液經(jīng)干燥， 即得含總生物堿及總氨基酸的浸膏；2)取浸膏，加入填充劑、崩解劑、抗粘促吸收劑，混合均勻加入乙醇濕法制粒，干燥整 粒，外加潤滑劑，混合，制成片劑或膠囊或分散片。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于提取溶劑為水，用量為 被提取原材料重量的5 15倍，提取次數(shù)為1 3次，提取溫度為60V 100°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于提取溶劑為0.01 0. ImoL/L的鹽酸，用量為被提取原材料重量的6 15倍，室溫提取1 3次。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于提取溶劑為甲醇或乙 醇或含水醇類，用量為被提取原材料重量的6 12倍，提取次數(shù)為2 3次，提取溫度在 60°C以上。
11.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于陽離子交換樹脂采用 凝膠型或大孔型苯乙烯系樹脂。
12.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于pH值調(diào)節(jié)劑為0.1 ` 1. OmoL/L鹽酸溶液或硫酸溶液。
13.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的藥物組合物在制備用于治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物 中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種具有降血糖作用的藥物組合物、其制備方法及其應(yīng)用?，F(xiàn)有的降血糖藥物大多為西藥，有一定的依賴性和副作用。本發(fā)明藥物組合物的活性成份是由?？浦参锷０灼?、桑枝、桑葉、桑椹任一或其組合中提取分離得到的總生物堿和總氨基酸組成；提取分離得到的提取物的各類活性成份中，總生物堿的質(zhì)量百分含量為9.8％～44.6％，總氨基酸的質(zhì)量百分含量為30.0％～70.4％，且兩者的含量之和占提取物的50％以上。本發(fā)明從中藥中提取出活性成份總生物堿和總氨基酸，二者聯(lián)合使用效果顯著，具有良好的協(xié)同作用，降糖效果好于總生物堿和總氨基酸單獨(dú)使用的效果。
文檔編號A61P3/06GK101926853SQ20091009995
公開日2010年12月29日 申請日期2009年6月25日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月25日
發(fā)明者張利鋒, 王光強(qiáng), 胡禮勇 申請人:浙江京新藥業(yè)股份有限公司