專利名稱：毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷的制備及其食藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物、天然食品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種以毛泡桐(原變種)桐木為原 料制備總乙醇苷的方法及其在食品和藥物中的用途。
背景技術(shù)：
活性氧(Reactive Oxygen Species, ROS)是當(dāng)今研究的熱點(diǎn)之一。活性氧是細(xì)胞正常代 謝活動(dòng)產(chǎn)物，它能提高吞噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的殺菌能力，可調(diào)節(jié)機(jī)體代謝，并參與免疫活 動(dòng)。在正常情況下，活性氧的產(chǎn)生和消除處于一個(gè)平衡狀態(tài)。當(dāng)平衡被打破，過(guò)量的活性氧 會(huì)引起細(xì)胞內(nèi)的DNA、蛋白質(zhì)等大分子受到損害，導(dǎo)致細(xì)胞和組織損傷，造成病理狀態(tài)，而 引發(fā)心腦血管疾病、癌癥、艾滋病、糖尿病、白內(nèi)障、早老性癡呆、震撼麻痹癥等疾病或加 重這些疾病的病情，并導(dǎo)致人體迅速衰老(Hosoya T., " a/.， Phytochemistry, 2008， 69: 827 832)。由于內(nèi)源性抗氧化劑和自由基清除的位限性，抗氧化作用只能發(fā)生在抗氧化劑存在部 位的周圍；而脂溶性促發(fā)劑誘導(dǎo)的自由基大都作用在細(xì)胞膜上，作為水溶性氧化劑的效用就 受到了一定限制，因此，除非加入外源性抗氧化劑，使己生成的自由基淬滅，才能終止自由 基鏈反應(yīng)。隨著社會(huì)的發(fā)展，天然食品、藥品、化妝品、功能性食品添加劑產(chǎn)業(yè)也蓬勃發(fā)展 起來(lái)，對(duì)抗氧化劑的需求越來(lái)越旺盛，傳統(tǒng)合成的抗氧化劑如二丁基羥基甲苯(BHT)、 丁基 羥基茴香醚.(BHA)等雖然抗氧化能力比較強(qiáng)，但長(zhǎng)期使用有潛在的毒性，有的甚至?xí)a(chǎn)生 致畸、致癌作用，因此愈來(lái)愈受到人們的排斥(Sharififar F.， W "/., Food Chemistry, 2009, 112: 885 888)。因而尋找天然、高效、低毒的植物源抗氧化劑成了一種必然趨勢(shì)，又因其在植物 體中的分布廣、抗氧化活性強(qiáng)而備受關(guān)注。
毛泡桐(原變禾中)(尸aw/oww/fl /owewto Steud. var. 為玄參禾斗(Scrophulariaceae)
泡桐屬(Pcm/ovm!'aSieb.etZucc)闊葉樹種，在民間傳統(tǒng)藥物中其桐皮、桐葉、桐木、桐花被 廣泛用以祛痰、止咳、平喘、生發(fā)等，近年來(lái)被用以治療上呼吸道感染、支氣管肺炎、急性 扁桃體炎、細(xì)菌性痢疾、急性腸炎、急性結(jié)膜炎、胰下腺炎等(Si C丄.，"W.,Holzforschung, 2008， 62(2): 197 200)。所以，毛泡桐(原變種)是一種開(kāi)發(fā)潛力巨大的寶貴藥用資源，但到目前 為止，對(duì)毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷的研究尚屬空白。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種從毛泡桐(原變種)桐木中提取總乙醇苷的方法。 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷在制備抗氧化食品和藥物中 的應(yīng)用。
本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下
本發(fā)明提出的毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷的制備方法，包括如下三個(gè)步驟 第一步，以干燥、粉碎的毛泡桐(原變種)桐木為原料，按質(zhì)量比為1: 1~1: 30加入體積百分濃度為20% 100%的丙酮水溶液，以索氏提取，或常溫或加熱浸提，或微波或超聲 波輔助提取1 5次，每次10min 96h，過(guò)濾，濾液減壓濃縮、冷凍干燥后得粗提物；
第二步，加入粗提物質(zhì)量1 10倍的水，攪拌，加入粗提物質(zhì)量1 10倍的正己烷萃取 1 10次，分離，向正己烷萃取剩余相加入粗提物質(zhì)量1 10倍的氯仿萃取1 10次，分離， 得到氯仿萃取相和氯仿萃取剩余相；
第三步，將氯仿萃取剩余相減壓濃縮除去氯仿后，冷凍干燥得毛泡桐(原變種)桐木總 乙醇苷粉末。
用本發(fā)明制備的毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷的含量為40% 60%，其測(cè)定參照文獻(xiàn) (王麗楠等，西北藥學(xué)雜志，2008， 23(2)， 67 69)。經(jīng)后續(xù)硅膠柱及Sephadex LH-20柱分 離純化和MS、 'H及UC-NMR等現(xiàn)代波譜技術(shù)對(duì)化合物的結(jié)構(gòu)解析、化合物理化性質(zhì)等的檢 湖J，本發(fā)明所制備的毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷中含有大量的毛蕊花苷(verbascoside)、 異毛蔬花苷(isoverbascoside)、 campneoside II及isocampneoside II等乙醇苷類l七合物。
用本發(fā)明制備的毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷顏色淺、純度高，制備方法具有生產(chǎn)成 本低、工藝簡(jiǎn)單規(guī)范的特點(diǎn)。
毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷在制備抗抗氧化食品和藥物中的應(yīng)用。
以消除DPPH自由基法檢測(cè)毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷的抗氧化活性，結(jié)果顯示毛 泡桐(原變種)桐木總乙醇苷與對(duì)照組(維生素C和BHT)消除半數(shù)DPPH自由基濃度IC5c 值相近，表明毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷具有顯著抗氧化活性，可應(yīng)用于抗氧化食品和 藥物制備。


圖l為毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷的制備流程圖。
具體實(shí)施例方式
參考下列實(shí)施例將更容易、更全面地理解本發(fā)明，給出實(shí)施例是為了闡明本發(fā)明，而不 是以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷的制備
第一步，以5kg干燥、粉碎后的毛泡桐(原變種)桐木為原料，加入體積比為70%的丙 酮水溶液20升，以索氏提取法提取4次，每次48h，過(guò)濾，濾液減壓濃縮、冷凍干燥得粗提 取物；
第二步，加入粗提物質(zhì)量2倍的水，攪拌，加入粗提取物質(zhì)量3倍的正己垸萃取，萃取 4次，分離，向正己烷萃取剩余相中加入粗提取物質(zhì)量3倍的氯仿萃取，萃取4次，分離， 得到氯仿萃取相和氯仿萃取剩余相；
第三步，將氯仿萃取剩余相減壓濃縮除去氯仿后，冷凍干燥得毛泡桐(原變種)桐木總 乙醇苷粉末。實(shí)施例2毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷的制備
第一步，以3kg干燥、粉碎后的毛泡桐(原變種)桐木為原料，加入體積比為80%的丙 酮水溶液15升，于室溫浸提3次，每次72h，過(guò)濾，濾液減壓濃縮、冷凍干燥得粗提取物；
第二步，加入粗提物質(zhì)量3倍的水，攪拌，加入粗提取物質(zhì)量4倍的正己烷萃取，萃取 5次，分離，向正己烷萃取剩余相中加入粗提取物質(zhì)量4倍的氯仿萃取，萃取5次，分離， 得到氯仿萃取相和氯仿萃取剩余相；
第三步，將氯仿萃取剩余相減壓濃縮除去氯仿后，冷凍干燥得毛泡桐(原變種)桐木總 乙醇苷粉末。
實(shí)施例3毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷的制備
第一步，以1.5kg干燥、粉碎后的毛泡桐(原變種)桐木為原料，加入體積比為75%的 丙酮水溶液5升，超聲波輔助提取4次，每次30min，過(guò)濾，濾液減壓濃縮、冷凍干燥得粗 提取物
第二步，加入粗提物質(zhì)量2.5倍的水，攪拌，加入粗提取物質(zhì)量3倍的正己垸萃取，萃 取3次，分離，向正己垸萃取剩余相中加入粗提取物質(zhì)量3倍的氯仿萃取，萃取4次，分離， 得到氯仿萃取相和氯仿萃取剩余相；
第三步，將氯仿萃取剩余相減壓濃縮除去氯仿后，冷凍干燥得毛泡桐(原變種)桐木總 乙醇苷粉末。
實(shí)施例4毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷的抗氧化能力
毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷的抗氧化活性采用消除DPPH自由基試驗(yàn)，方法參考文 獻(xiàn)(Yoshida T" " a/., Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 1989， 37: 1919 1921)，具體步驟 如下
第一步，以無(wú)水甲醇將毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷及對(duì)照組(維生素C和BHT)各 分5個(gè)梯度濃度配制成濃度為2~40pg/ml的溶液各4tnl。試驗(yàn)前以無(wú)水甲醇配制濃度為 1.5xlO-4M的DPPH溶液；
第二步，將取配制好的DPPH溶液各lml加入上述不同濃度梯度的毛泡桐(原變種)桐 木總乙醇苷及參照組溶液中，搖勻，于室溫靜置反應(yīng)30min后，在波長(zhǎng)517nm下測(cè)定各供試 溶液的透光度；
第三步，上述各組試驗(yàn)重復(fù)3次求平均值，利用回歸方程計(jì)算毛泡桐(原變種)桐木總 乙醇苷及對(duì)照組的DPPH自由基半數(shù)消除濃度(IC50)。
經(jīng)上述步驟和計(jì)算，毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷、對(duì)照組維生素C和BHT消除半 數(shù)DPPH自由基濃度(IC50)分為15Mg/ml， 12ng/ml和14pg/ml，結(jié)果表明毛泡桐(原變種) 桐木總乙醇苷具有優(yōu)秀的消除DPPH自由基能力，可用于制備抗氧化食品及藥物。
權(quán)利要求
1.一種毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷的制備方法，其特征按順序包括如下三個(gè)步驟第一步，以干燥、粉碎的毛泡桐(原變種)桐木為原料，按質(zhì)量比為1∶1～1∶30加入體積百分濃度為20％～100％的丙酮水溶液，以索氏提取，或常溫或加熱浸提，或微波或超聲波輔助提取1～5次，每次10min～96h，過(guò)濾，濾液減壓濃縮、冷凍干燥后得粗提物；第二步，加入粗提物質(zhì)量1～10倍的水，攪拌，加入粗提物質(zhì)量1～10倍的正己烷萃取1～10次，分離，向正己烷萃取剩余相加入粗提物質(zhì)量1～10倍的氯仿萃取1～10次，分離，得到氯仿萃取相和氯仿萃取剩余相；第三步，將氯仿萃取剩余相減壓濃縮除去氯仿后，冷凍干燥得毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷粉末。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述提取用溶液為丙酮水溶液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征是所述提取用丙酮水溶液的體積百分濃度為1% 100%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述提取的方法包括索氏提取，或常溫或加熱浸提， 或微波或超聲波輔助提取。
5. 根據(jù)權(quán)利要求l所述方法制備的毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷在制備抗氧化食品及抗氧 化藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于天然藥物、天然食品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種以毛泡桐(原變種)桐木為原料制備總乙醇苷的方法及其在食品和藥物中的用途。它以毛泡桐(原變種)桐木為原料，經(jīng)提取、萃取、分離而得到毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷，其純度為40％～60％。本發(fā)明所制備的毛泡桐(原變種)桐木總乙醇苷對(duì)DPPH自由基具有顯著消除作用，可用于制備抗氧化食品及抗氧化藥物。
文檔編號(hào)A61K36/80GK101618114SQ200910070039
公開(kāi)日2010年1月6日 申請(qǐng)日期2009年8月4日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月4日
發(fā)明者忠 劉, 劉鵬濤, 司傳領(lǐng), 惠嵐峰, 朱振元 申請(qǐng)人:天津科技大學(xué)