專利名稱：一組鹽生肉蓯蓉苯甲醇苷類化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從肉蓯蓉屬植物中分離有效成分，特別是涉及從鹽生肉蓯蓉植物中分離新的苯甲醇苷類化合物。
背景技術(shù)：
鹽生肉蓯蓉C.salsa(C.A.Mey.)G.Beck為列當(dāng)科Orobanchaceae肉蓯蓉屬Cistanche多年生寄生草本植物。中藥肉蓯蓉Herba Cistanches為該屬植物干燥帶鱗葉的肉質(zhì)莖，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，具有補(bǔ)腎陽、益精血、潤腸通便之功效，主治男子陽痿、女子不孕、血枯便秘等癥，有“沙漠人參”之美譽(yù)。在補(bǔ)腎陽方劑中出現(xiàn)的頻率最高。
肉蓯蓉屬植物主要含有苯乙醇苷、環(huán)烯醚萜及其苷類、木脂素及其苷等成分。其中，苯乙醇苷類化合物為肉蓯蓉屬植物的主要成分也是主要的活性成分(Sato，T.Kozima，et al.Yakugaku Zasshi，105(12)1131，1985；何偉等.中國中藥雜志，21(9)564，1996)。本實(shí)驗(yàn)室在研究鹽生肉蓯蓉的苯乙醇苷類化合物的過程中，發(fā)現(xiàn)了一類近似化合物，即苯甲醇苷類化合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是系統(tǒng)研究肉蓯蓉屬植物鹽生肉蓯蓉的化學(xué)成分，尋找活性單體化合物。
發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的利用多種分離手段，包括硅膠柱層析、大孔吸附樹脂、葡聚糖凝較LH-20柱層析和制備型高效液相色譜法等，系統(tǒng)研究上述鹽生肉蓯蓉的化學(xué)成分。從鹽生肉蓯蓉中分離到20個(gè)化合物，其中3個(gè)為新的苯甲醇苷類化合物，分別為鹽生肉蓯蓉苷A、B和C1/C2(Salsaside A，B，C1/C2)。
實(shí)施例由于本發(fā)明的3個(gè)化合物的分離同時(shí)進(jìn)行，因此放入同一個(gè)實(shí)施例闡述。
1、提取分離鹽生肉蓯蓉干燥肉質(zhì)莖8Kg的75％乙醇滲漉液，減壓濃縮至浸膏狀，以適量H2O混懸，依次以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取。將乙酸乙酯萃取物99g經(jīng)硅膠(200-300目)柱色譜分離，依次用氯仿至氯仿-甲醇(1∶2)不同比例的溶液梯度洗脫得9個(gè)餾分，餾分5經(jīng)Sephadex LH-20色譜柱分離，以50％的甲醇水為洗脫劑，得到11個(gè)部分。餾分51-53通過Sephadex LH-20色譜柱分離，以50％的甲醇水為洗脫劑，得到11個(gè)部分。其中，6-7(2.5g)再利用反相硅膠柱(RP-18，100-200目)分離，以10％-50％甲醇梯度洗脫得35個(gè)餾分Fr.(1-35)，合并Fr.26-32(350mg)，以Sephaex LH-20柱色譜分離，20％甲醇作洗脫劑，得到20個(gè)餾分，將餾分5和6合并(70mg)，以HPLC半制備柱分離(C18柱，CH3CN-MeOH-H2O 10∶26∶72，2.0ml/min，330nm和254nm雙波長檢測)得化合物3(8mg)(結(jié)構(gòu)式3)和化合物2(23mg)(結(jié)構(gòu)式2)；餾分13和14合并(55mg)經(jīng)半制備HPLC分離得化合物1(28mg(結(jié)構(gòu)式1))。
2、結(jié)構(gòu)鑒定主要利用光譜，包括紫外、紅外、質(zhì)譜、核磁共振譜(1HNMR、13CNMR、2D-NMR)和FAB-MS、HRSI-MS、HRESI-MS分析(表1-4)，鑒定其結(jié)構(gòu)。
運(yùn)用2D-NMR技術(shù)，尤其是HMQC和HMBC譜，解決了取代基的位置和糖的連接位置，結(jié)合高分辨質(zhì)譜，對它們的全部氫信號進(jìn)行了確切的歸屬。
新苯甲醇苷類化合物1-3的結(jié)構(gòu)化合物1鹽生肉蓯蓉苷A(salsaside A) 化合物2鹽生肉蓯蓉苷B(salsaside B) 化合物3鹽生肉蓯蓉苷C1/C2(salsaside C1/C2)
表1.化合物1-3的理化常數(shù)及主要光譜數(shù)據(jù)化合物1分子式為C28H34O13，淺棕色無定形粉末，5％FeCl3顯藍(lán)灰色，UV365下顯亮藍(lán)色熒光，UVλmaxMeOHnm328，208，F(xiàn)AB-MS(neg.)m/z577(M-H)-；HRESI-MS(m/z)596.2348(M+NH4)+，1HNMR(500MHz，DMSO-d6)和13CNMR(125MHz，DMSO-d6)見表2?；衔?分子式為C28H34O13，淺棕色無定形粉末，5％FeCl3顯藍(lán)灰色，UV365下顯亮藍(lán)色熒光，UVλmaxMeOHnm332，208，1HNMR(500MHz，MeOH-d4)和13CNMR(125MHz，MeOH-d4)見表3?；衔?分子式為C28H34O12，淺棕色無定形粉末，5％FeCl3顯藍(lán)灰色，UV365下顯亮藍(lán)色熒光，UVλmaxMeOHnm315，225，211。HRSI-MS(neg.)m/z561.1958(M-H)-，1HNMR(300MHz，MeOH-d4)和13CNMR(75MHz，MeOH-d4)見表4。
表2. 化合物1的1HNMR和13CNMR的化學(xué)位移值(δ，溶劑為DMS0-d6)序號 碳原子 相應(yīng)的氫原子與碳相關(guān)的氫信號Aglycone1137.7 --- A-3；A-5；A-α2127.8 7.37(1H，br.d，7.5) A-4；A-α3128.1 7.32(1H，br.t，7.5) A-54127.5 7.27(1H，br.t，7.5) A-2；A-65128.1 7.32(1H，br.t，7.5) A-36127.8 7.37(1H，br.d，7.5) A-4；A-αα69.74.59(1H，d，12.0)； A-2；A-6；G-14.77(1H，d，12.0)Ester1125.5 --- E-5；E-β2114.9 7.07(1H，brs)E-6；E-γ3145.6 --- E-54148.4 --- E-2；E-5；E-65115.7 6.76(1H，br.d，8.5) ---6121.4 7.03(1H，d，8.5) E-2；E-γα166.6 --- E-γ；E-β；G-6β113.9 6.34(1H，d，16.0)E-γγ145.3 7.51(1H，d，16.0)E-6；E-2Glc.
1101.7 4.32(1H，d，7.5) A-α；G-2274.13.20(1H，t，9.5) G-3380.83.40(1H，t) G-2；R-1468.63.23(1H，t，9.5) G-3；G-6573.83.48(1H，m) G-6；G-1663.44.40(1H，br.d，11.5) ---4.23(1H，m)Rha.
1100.6 5.04(1H，br.s) G-3270.63.69(1H，br.s) R-1370.63.50(1H，m) R-2；R-4；R-5472.13.18(1H，t，9.5) R-2；R-3；R-5568.13.91(1H，m) R-1；R-4617.81.09(3H，d，6.5) R-4；R-5表3.化合物2的1HNMR和13CNMR的化學(xué)位移值(δ，溶劑為MeOH-d4)Carbon Carbon Correlated Ha(JHz) H correlated withNo.δCδH(JHz)CbAglycone1138.0---- A-3；A-5；A-α2128.27.45(1H，br.d，7.3) A-4；A-6；A-α3128.37.36(1H，br.t，7.3) A-54127.87.31(1H，br.t，7.3) A-2；A-65128.37.36(1H，br.t，7.3) A-36128.27.45(1H，br.d，7.3) A-2；A-4；A-αα71.0 4.71(1H，d，11.8) G-14.98(1H，d，11.8)Ester1126.7--- E-β；E-52114.27.08(1H，d，1.6) E-γ；E-63145.8--- E-2；E-54148.8--- E-2；E-6；E-55115.56.81(1H，d，8.2) E-66122.26.98(1H，dd，8.2；1.6)E-γ；E-2α167.3--E-γ；E-β；G-4β113.76.31(1H，d，15.9) E-γγ147.07.62(1H，d，15.9) E-2；E-6Glc.
1102.24.47(1H，d，7.9) A-α；G-2275.2 3.49(1H，t，8.8) G-3380.7 3.84(1H，t，9.2) R-1；G-4；G-2469.7 4.96(1H，t，9.3) G-3；G-5；G-6575.1 3.59(1H，m) G-6；G-4661.4 3.67(1H，br.d，10.1)；G43.57(1H，m)Rha.
1102.15.21(1H，br.s)G-3271.3 3.94(1H，d，1.7) R-1371.1 3.60(1H，m) R-2；R-4472.8 3.32(1H，t，9.5) R-2；R-3；R-5；R-6
5 69.43.59(1H，m) R-1；R-4；R-66 17.51.11(3H，d，6.0)R-5表4.化合物3的1HNMR和13CNMR的化學(xué)位移值(δ，溶劑為DMSO-d6)序號 碳原子 氫原子Aglycone1 139.0 ---2 129.2 7.42(1H，br.d，7.5)3 129.3 7.36(1H，br.t，7.5)4 128.7 7.29(1H，br.t，7.5)5 129.3 7.36(1H，br.t，7.5)6 129.2 7.42(1H，br.d，7.5)α 71.9 4.62(1H，d，11.5)4.87(1H，d，11.5)Coumaroyl1 127.1130.0 ---2 131.4134.3 7.53(1H，d，9.0) 7.70.(d，9.0)3 116.8115.8 6.80(1H，d，9.0) 6.75(d，9.0)4 161.5160.4 ---5 116.8115.8 6.80(1H，d，9.0) 6.75(d，9.0)6 131.4134.3 7.53(1H，d，9.0) 7.70(d，9.0)α 168.3166.0 ---β 114.7 6.34(1H，d，15.9) 5.70(d，12.5)γ 147.6 7.55(1H，d，15.6) 6.92(d，12.5)Glc.
1 103.2 4.42(1H，d，8.1) 4.40(d，7.5)2 76.2 3.46(1H，t，8.4)3 80.8 3.81(1H，t，9.0)4 70.6 4.75(1H，t，9.5) 4.71(t，9.5)5 76.1 3.49(1H，m)6 62.4 3.41(1H，m)3.28(1H，m)Rha.
1 103.15.02(1H，br.s)2 72.3 3.68(1H，br.s)3 72.0 3.30(1H，dd，9.0，3.0)4 73.8 3.09(1H，t，9.5)5 70.4 3.43(1H，m)6 18.3 0.94(3H，d，6.5) 1.03(d，6.0)
發(fā)明效果本發(fā)明利用多種手段，包括硅膠柱層析、大孔吸附樹脂、葡聚糖凝膠LH-20柱層析和制備型高效液相色譜法等，首次從肉蓯蓉屬植物中分離得到一組與苯乙醇苷類化合物結(jié)構(gòu)類似的新結(jié)構(gòu)類型-鹽生肉蓯蓉苯甲醇苷類化合物，其活性研究發(fā)現(xiàn)，該新結(jié)構(gòu)類型化合物同樣具有抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡功效，為今后深入研究與開發(fā)奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。
權(quán)利要求
1.一種苯甲醇苷類化合物1(鹽生苷A，salsaside A)，如結(jié)構(gòu)式1結(jié)構(gòu)式1
2.一種苯甲醇苷類化合物2(鹽生苷B，salsaside B)，如結(jié)構(gòu)式2結(jié)構(gòu)式2
3.一種苯甲醇苷類化合物3(鹽生苷C1/C2，sal saside C1/C2)，如結(jié)構(gòu)式3結(jié)構(gòu)式全文摘要
本發(fā)明涉及從鹽生肉蓯蓉中提取的一組新苯甲醇苷類化合物,具體地說,本發(fā)明運(yùn)用各種分離手段包括硅膠柱層析、大孔吸附樹脂、葡聚糖凝膠LH－20柱層析和制備型高效液相色譜法等,從肉蓯蓉屬植物鹽生肉蓯蓉中分離到3個(gè)新的化學(xué)成分,經(jīng)初步活性研究表明,這類化合物具有一定的抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡功能,為今后的研究開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
文檔編號C07H15/00GK1379035SQ02117640
公開日2002年11月13日 申請日期2002年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2002年5月10日
發(fā)明者屠鵬飛, 雷麗, 趙明波 申請人:北京大學(xué)藥學(xué)院