專利名稱：不含生物堿和氰苷的西番蓮總黃酮和總皂苷的制備工藝的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種不含生物堿和氰苷的西番蓮藥用總黃酮和總皂苷提取物及它們的提取制 備工藝。
背景技術：
西番蓮(Am^ora Sim.)的莖葉提取物用作治療藥物已有幾百年的歷史。在南美洲，西番蓮用作鎮(zhèn)靜劑、利尿劑、驅蟲劑、止瀉劑、興奮劑、滋補藥，也用于治療高血壓、 絕經(jīng)綜合癥和嬰兒急腹痛。在印度那加蘭邦，西番蓮的鮮葉用少量水煮沸，提取液飲用可治 療痢疾和高血壓。目前市場上的西番蓮提取物主要用于抗焦慮、鎮(zhèn)靜、治療失眠、止痛等用 途。西番蓮莖葉的主要化學組成包括大量的黃酮尤其是黃酮碳苷、P—卡波林類生物堿、三萜 皂苷、a—羥基氰苷等，其中黃酮類成分、生物堿和皂苷可能是其抗焦慮、鎮(zhèn)靜、改善睡眠、 止痛等藥理作用的主要活性成分(Behavioural effects of戶a孤y7om /mw"ato L. and its Indol Alkaloid and Flavonoid Derivatives and Maltol in the Mouse, J ￡Wmo/ /^nwaco/.， 1997 Jun; 57(1): 11-20;尸oswy/ora ac"m'a Hooker extracts and fractions induce catalepsy in mice, J 五^wo/ /KW7Wflco/" 2005; 100(3): 306-309)。P—卡波林類生物堿一直被認為是西番蓮提取物抗焦慮、鎮(zhèn)靜等藥理作用的部分活性成 分，但長期或過量服用此類生物堿都會對心血管系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生副反應，如室性心 律不齊、抑制平滑肌蠕動等。而且異體基因代謝發(fā)生變異(如細胞色素P450 2D6)的人群對 生物堿過敏。所以，為了用藥安全，西番蓮提取物必須去掉其中的生物堿，但保留了總黃酮 部分和總皂苷部分，即西番蓮提取物抗焦慮、鎮(zhèn)靜等藥理作用的主要活性成分，所以其抗 焦慮、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痙、改善睡眠和止痛的療效無顯著減弱。盡管西番蓮莖葉中的a—羥基氰苷具有止咳的作用，但卻因能釋放HCN而導致中毒。所以， 作為抗焦慮、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痙、改善睡眠和止痛的藥物，西番蓮提取物應去除a—羥基氰苷。以前的西番蓮屬植物提取物的制備工藝僅用一種濃度的醇水溶液或水作提取劑，如用較 高濃度的醇水溶液提取，葉綠素含量較高，產(chǎn)品的水溶性差；如用較低濃度醇水溶液或水提 取，總黃酮的提取率又較低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種不含生物堿和氰苷的西番蓮總黃酮和總皂苷的制備工藝，依次 用梯度濃度的醇水溶液進行提取、沉淀法去除提取的葉綠素和生物堿、分離總黃酮和總皂苷， 制備得到不含P—卡波林堿和a—羥基氰苷的西番蓮總黃酮和西番蓮總皂苷，得到色澤好、水 溶性好的藥用粉末狀提取物。本發(fā)明的目的通過以下技術方案實現(xiàn)一種不含生物堿和氰苷的西番蓮總黃酮和總皂苷的制備工藝，以西番蓮莖葉為原料，西番蓮莖葉在低于7(TC的溫度(優(yōu)選方案常溫 65'C)下干燥至含水量10 35% (優(yōu)選方案15 30%)，粉碎至5 10目，用濃度70%以上(優(yōu)選方案70 95%)的低級醇(優(yōu)選甲醇、乙醇、 丙醇或它們的混合物)水溶液潤濕，使充分吸脹，然后進行滲漉或攪拌提取。初始提取溶劑選用60 70%的低級醇水溶液，依次用濃度漸低的低級醇水溶液和堿水進 行提取，提取溫度為50 70'C，醇濃度低于30%的提取溶劑和水用堿(優(yōu)選NaOH、 KOH、 Ca(OH)2或它們的混合物)或堿水溶液調pH至ll;堿性條件下提取，可使a—羥基氰苷分解破 壞，釋放出氨。醇濃度高于40%的提取液減壓回收醇至最后醇濃度為15 25%，控制濃縮溫度為45 70 'C，濃縮液堿化至pHll，降溫至0 8'C，保持該溫度靜置過夜，使葉綠素和生物堿沉淀，過 濾去除葉綠素和生物堿，用少量pHll的20X醇水溶液洗滌濾餅，洗滌液并入濾液。除去葉綠素的濃縮液并入醇含量低于40%的提取液，用稀酸(優(yōu)選稀鹽酸、稀硫酸、稀 磷酸)調pH至中性(優(yōu)選pH5 7)，于45 75'C下減壓蒸除全部醇，濃縮液進一步用稀酸調 pH至3， 0 25°C (優(yōu)選5 2(TC)靜置過夜，使總黃酮沉淀，過濾，濾餅用少量水洗滌，真 空干燥，溫度低于70。C (優(yōu)選55 65'C)，得西番蓮總黃酮。總黃酮濾餅洗滌液并入濾液成為去除葉綠素和總黃酮的濃縮提取液，依次通過陽離子交 換樹脂柱和陰離子交換樹脂柱，或通過離子交換樹脂混合床，透過液加入適量吸濕劑(優(yōu)選 糊精、玉米淀粉或它們的混合物)，噴霧干燥，得西番蓮總皂苷。根據(jù)本發(fā)明制備的西番蓮總黃酮含牡荊素和異牡荊素總量為5 70%， P—卡波林生物堿 總量低于lppm;西番蓮總皂苷含三萜皂苷總量為1 20% (以柴胡皂苷元計)，p—卡波林生 物堿總量低于lppm。該產(chǎn)品可直接服用，或配制成復方服用。另外，本發(fā)明還涉及用上述產(chǎn)品配制的復方，單制劑含有上述產(chǎn)品l 3000mg和其他可 用輔料。此外，本發(fā)明還涉及上述產(chǎn)品或復方用于治療神經(jīng)緊張、焦慮、痙攣、失眠、驚厥以及用于止痛。本發(fā)明的優(yōu)點在于工藝流程簡單，提取率高，有機溶劑用量較少，基本不污染環(huán)境； 產(chǎn)品不含生物堿和氰苷，極大地降低了毒副作用而基本保留了抗焦慮、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痙、改善睡 眠、止痛、抗驚厥的藥理作用；產(chǎn)品水溶性好。
具體實施例方式下面結合優(yōu)選實施例對本發(fā)明作進一步描述，但不是對本發(fā)明范圍的限制。 實施例l(1) 將50kg新鮮西番蓮莖葉在60'C鼓風干燥至含水量20X，粉碎成10目，加入80%甲醇 拌勻，使充分吸脹；(2) 裝入100L的不銹鋼夾層滲漉桶中，層層壓緊，在原材料上面放一張濾紙，上面鋪撒 洗凈的河沙；(3) 接通夾層水浴，保持滲漉溫度為55'C，從滲漉桶上部加入70%甲醇，打開滲漉桶下 部閥門，使?jié)B漉液以300ml/min的速度流出；(4) 用150L70X甲醇滲漉結束后，改用150L50X甲醇滲漉，然后依次用100LpHll的30 %甲醇和100LpHll的NaOH水溶液滲漉，保持滲漉液流出速度為300ml/min;(5) 收集70%和50%的甲醇滲漉液，50'C左右減壓回收甲醇至醇濃度20X左右，濃縮液 用2MNaOH水溶液調pH至11，降溫至4"C，保持4"C靜置過夜，使葉綠素和生物堿沉淀；(6) 過濾，用少量pHll的20X甲醇洗漆濾餅，洗滌液并入濾液中，再一起并入30%甲 醇滲漉液和水滲漉液中，用2MHCl調pH至7，于55'C左右減壓蒸除全部醇，至產(chǎn)生大量泡沫；(7) 濃縮滲漉液進一步用2MHCl調pH至3， 20'C靜置過夜，使總黃酮沉淀；(8) 過濾，用少量2(TC純凈水洗滌濾餅，濾餅6(TC真空干燥得西番蓮總黃酮，洗滌液并 入濾液；(9) 濾液依次通過732陽離子交換樹脂柱(自裝，0)50X500mm)和717陰離子交換樹脂 柱(自裝，0)50X500mm)，透過液加入玉米淀粉lkg，混懸液噴霧干燥，進口溫度170。C，出 口溫度8(TC，得西番蓮總皂苷。(10) 得到約lkg西番蓮總黃酮，牡荊素和異牡荊素的總含量為23%，檢測不到P—卡波 林生物堿；得到約3kg西番蓮總皂苷，三萜皂苷總含量為4% (以柴胡皂苷元計)，檢測不到卩 一卡波林生物堿。實施例2(1) 將100kg新鮮西番蓮莖葉在陽光下晾曬干燥至含水量25X，粉碎成5目，加入75%乙 醇拌勻，使充分吸脹；(2) 裝入250L的不銹鋼夾層滲漉桶中，層層壓緊，在原材料上面放一張濾紙，上面鋪撒 洗凈的河沙；G)接通夾層水浴，保持滲漉溫度為6(TC，從滲漉桶上部加入65%乙醇，打開滲漉桶下 部閥門，使?jié)B漉液以500ml/min的速度流出；(4) 用300L60X乙醇滲漉結束后，改用300L40X乙醇滲漉，然后依次用200LpHll的20 %乙醇和200L pHll的KOH水溶液滲漉，保持滲漉液流出速度為500ml/min;(5) 收集60%和40%的乙醇滲漉液，6(TC左右減壓回收乙醇至醇濃度20^左右，濃縮液 用2MK0H水溶液調pH至11，降溫至8'C,保持8"C靜置過夜，使葉綠素和生物堿沉淀；(6) 過濾，用少量pHll的20X乙醇洗滌濾餅，洗滌液并入濾液中，再一起并入20%乙 醇滲漉液和水滲漉液中，用2M H2S04調pH至6，于65'C左右減壓蒸除全部醇，至產(chǎn)生大量泡 沫；(7) 濃縮滲漉液進一步用2MH2S04調pH至3， 15'C靜置過夜，使總黃酮沉淀；(8) 過濾，用少量15'C純凈水洗滌濾餅，濾餅65'C真空干燥得西番蓮總黃酮，洗滌液并 入濾液；(9) 濾液通過離子交換樹脂混合床(YE-101)(自裝，(D100X800mm)，透過液加入糊 精2kg溶解，噴霧干燥，進口溫度17(TC，出口溫度8(TC，得西番蓮總皂苷。(10) 得到約2kg西番蓮總黃酮，牡荊素和異牡荊素的總含量約為29%，檢測不到卩一卡 波林生物堿；得到6kg西番蓮總皂苷，三萜皂苷總含量約為3% (以柴胡皂苷元計)，檢測不到 P—卡波林生物堿。實施例3(1) 將30kg新鮮西番蓮莖葉在6(TC鼓風干燥至含水量15X，粉碎成5目，加入70%正丙 醇拌勻，使充分吸脹；(2) 裝入200L的不銹鋼中藥多功能提取罐中，加入65X正丙醇150L， 65'C攪拌提取1.5 小時，過濾；(3) 濾渣再加入pHll的30X甲醇120L， 65"C攪拌提取1小時，過濾，濾渣再用pHll的 Ca(OH)2水溶液100L， 65'C攪拌提取0.5小時，過濾；(4) 65%的正丙醇提取液于70°〇左右減壓回收甲醇至醇濃度20%左右，濃縮液用飽Ca(OH)2水溶液調pH至11，降溫至8t:，保持8'C靜置過夜，使葉綠素和生物堿沉淀；(5)過濾，用少量pHll的20X正丙醇洗滌濾餅，洗滌液并入濾液中，再一起并入30% 正丙醇提取液和堿水提取液中，用1M H3PCU調pH至7，于7(TC左右減壓蒸除全部醇，至產(chǎn)生 大量泡沫；(7) 濃縮液進一步用lMH3P04調pH至3， 2(TC靜置過夜，使總黃酮沉淀；(8) 過濾，用少量2(TC純凈水洗滌濾餅，濾餅70'C真空干燥得西番蓮總黃酮，洗滌液并 入濾液；(9) 濾液依次通過732陽離子交換樹脂柱(自裝，(D50X500mm)和717陰離子交換樹脂 柱(自裝，050X5OOmm)，透過液加入玉米淀粉lkg，混懸液噴霧干燥，進口溫度17(TC，出 口溫度8(TC，得西番蓮總皂苷。(10) 得到約0.7kg西番蓮總黃酮，牡荊素和異牡荊素的總含量為21%，檢測不到卩一卡 波林生物堿；得到約2kg西番蓮總皂苷，三萜皂苷總含量為5% (以柴胡皂苷元計)，檢測不到 p—卡波林生物堿。
權利要求
1. 一種不含生物堿和氰苷的西番蓮總黃酮和總皂苷的制備工藝，以西番蓮莖葉為原料，其特征在于提取步驟如下(1)干燥粉碎將西番蓮的莖葉在低于70℃溫度下干燥至含水量10～35％，粉碎為粗粉；(2)提取將粗粉用70％以上的低級醇水溶液濕潤，拌勻使其充分吸脹，再依次用不同濃度的醇水溶液和堿水熱滲漉或攪拌提?。?3)提取液濃縮收集醇濃度在40％以上的提取液，減壓回收醇至醇濃度為15～25％；(4)除葉綠素上述濃縮液堿化至pH11，冷凍靜置過夜，濾除沉淀；(5)分離總黃酮濾液并入醇濃度低于40％的滲漉液，用稀酸調pH至中性，減壓蒸除醇，進一步調pH至3，在低于25℃的溫度下靜置過夜，濾取沉淀，溫度低于70℃真空干燥得西番蓮總黃酮；(6)制備總皂苷上一步的濾液用離子交換樹脂法脫鹽，透過液加入吸濕劑，噴霧干燥，得西番蓮總皂苷。
2. 根據(jù)權利要求1所述的制備工藝，其特征在于原料在常溫至65'C條件下干 燥至含水量為15 30%，粉碎為5 10目。
3. 根據(jù)權利要求1所述的制備工藝，其特征在于用于濕潤粗粉的醇水溶液濃 度為75 95%，初始提取溶劑為60 70。％的醇水溶液，依次用濃度漸低的醇 水溶液和堿水提取，提取溫度為50 7(TC，當提取溶劑的醇濃度低于30%時， 用堿或堿水溶液調pH至11 ，堿性條件下提取；所用堿為NaOH、KOH、Ca(OH)2 或它們的混合物。
4. 根據(jù)權利要求1所述的制備工藝，其特征在于所用的低級醇為甲醇、乙醇、 丙醇或它們的混合物。
5. 根據(jù)權利要求1所述的制備工藝，其特征在于僅對醇濃度在40%以上的提 取液減壓回收醇，濃縮溫度為45 70'C。
6. 根據(jù)權利要求1或5所述的制備工藝，其特征在于將醇濃度為15 25%的 濃縮液堿化至pHll，降溫至0 8'C，靜置過夜，過濾去除葉綠素和生物堿， 所用堿為NaOH、 KOH、 Ca(OH)2或它們的混合物。
7. 根據(jù)權利要求1或6所述的制備工藝，其特征在于除去葉綠素的濃縮提取 液并入醇濃度低于40%的提取液，用稀鹽酸、稀硫酸或稀磷酸調pH至5 7， 于45 75匸下減壓蒸除全部醇，濃縮液進一步用稀酸調pH至3， 5 2(TC靜置過夜，沉淀過濾，55 65'C條件下真空干燥得西番蓮總黃酮。
8. 根據(jù)權利要求1所述的制備工藝，其特征在于濾除葉綠素和總黃酮的濃縮 提取液依次采用陽離子交換樹脂柱和陰離子交換樹脂柱脫鹽或采用離子交換 樹脂混合床脫鹽，透過液加入糊精、玉米淀粉或它們的混合物等吸濕劑，噴霧 干燥，得西番蓮總皂苷。
9. 根據(jù)權利要求1、 7、 8所述的制備工藝制得的西番蓮總黃酮含牡荊素及異 牡荊素總量為5 70%、卩_卡波林生物堿總量低于lppm和西番蓮總皂苷以 柴胡皂苷元計含三萜皂苷總量為1 20%、卩_卡波林生物堿總量低于lppm的 藥用粉末狀提取物。
10. 根據(jù)權利要求1或9所述產(chǎn)品的復方藥，西番蓮總黃酮和總皂苷在單制劑 中的含量為1 3000mg。
11. 權利要求9或10所述的提取物產(chǎn)品作為制備治療抗焦慮、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痙、 鎮(zhèn)痛、改善睡眠或^[驚厥藥物的應用。
全文摘要
一種不含生物堿和氰苷的西番蓮總黃酮和總皂苷的制備工藝，步驟如下(1)在低于70℃的溫度下干燥西番蓮莖葉至含水量10～35％，粉碎成粗粉；(2)粗粉用70％以上的低級醇水溶液濕潤膨脹，依次用濃度漸低的低級醇水溶液和堿水進行熱滲漉；(3)醇濃度高于40％的滲漉液減壓回收醇至醇濃度為15～25％，濃縮液堿化至pH11；(4)濾除葉綠素，濾液并入醇濃度低于40％的滲漉液，調pH至5～7，減壓蒸除全部醇，進一步調pH至3；(5)過濾，真空干燥，即為西番蓮總黃酮；(6)濾液用離子交換樹脂法脫鹽，透過液加入吸濕劑，噴霧干燥，即得西番蓮總皂苷，本發(fā)明工藝流程簡單，提取率高，有機溶劑用量小，基本不污染環(huán)境，產(chǎn)品毒副作用小。
文檔編號A61K36/185GK101259151SQ20081005823
公開日2008年9月10日 申請日期2008年3月31日 優(yōu)先權日2008年3月31日
發(fā)明者劉光銓, 莉 李, 君 鄧 申請人:西南大學;江城綠色版納生態(tài)食品有限公司