專利名稱：：槐果堿在制備治療由柯薩奇a病毒所引起疾病的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及槐果堿或其可藥用鹽的應(yīng)用，特別是一種槐果堿在制備治療由柯薩奇A病毒所引起心肌炎或腦膜炎的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：近年來病毒性心肌炎明顯增多，主要由腸道病毒引起。腸道病毒主要為地區(qū)性或散點(diǎn)流行，家庭接觸方法傳染為主。腸道病毒對(duì)易感人群是高度的傳染性，兒童是最敏感的人群，在包括咽部在內(nèi)的消化道上皮細(xì)胞和淋巴組織內(nèi)繁殖。在缺乏免疫力的兒童或成人中，病毒進(jìn)一步擴(kuò)散到血液循環(huán)，引起病毒血癥。此時(shí)病人出現(xiàn)發(fā)熱，這時(shí)病毒一方面進(jìn)入全身網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞和淋巴組織繼續(xù)繁殖，也可侵入敏感的器官或組織如脊髓、腦、腦膜、心肌和皮膚等引起特殊的臨床表現(xiàn)。許多病毒可引起心肌炎，有認(rèn)為有24種以上腸道病毒(如柯薩奇病毒(Coxsackicvirus)、?？刹《?EchoVIRUS)、脊髓灰質(zhì)炎病毒(由于灰髓炎病毒的疫苗，未見有發(fā)病)?？滤_奇病毒分為二組，柯薩奇B病毒，有CVB卜6型其中CVB卜5均可致病，尤其是CVB2—4型為病毒性心肌炎的主要病因。但柯薩奇A病毒引起病毒性心肌炎者亦為數(shù)不少?？滤_奇A病毒(CVB^st，其中CVB4、7、9、kk23易致病，尤其是7型、9型，容易引起心肌炎、肺炎及腦膜炎。?？刹《疽酁槟c道病毒同樣可引起病毒心肌炎。且目前為止尚未有效抗C0XB、COXA及Echo病毒的藥物。為尋找對(duì)抗C0XB、COXA及Echo病毒的有效藥物，我們通過實(shí)驗(yàn)從眾多的中藥中僅篩選出一味苦參?？鄥⒅械挠行С煞只惫麎A-Sophocarpine它低毒而有明顯對(duì)抗C0XB、C0Xa及Echo病毒的作用?？鄥⑹俏覈?guó)歷史悠久的傳統(tǒng)藥物之一，始創(chuàng)于我國(guó)最早的醫(yī)藥文獻(xiàn)《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有清熱燥濕、祛風(fēng)殺蟲的功效。主治心腹痞滿脹氣、癥瘕積聚、黃疸等。我國(guó)藥典1997年版及部分地方藥品標(biāo)準(zhǔn)已將《苦參草流浸片》收載主治菌痢及腸炎《中草藥(中冊(cè))》，1976年8月第一版(494495)。晚近的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，苦參生物堿對(duì)中樞神經(jīng)有抑制、鎮(zhèn)痛及降濕作用，能提高機(jī)體免疫力，并有抗癌作用?？鄥⑻崛∥锷飰A能治療乙肝，改善臨床癥狀及肝功能，使部分患者HBeAg轉(zhuǎn)陰的效果。有文獻(xiàn)記載苦參生物堿具有平喘及抗心律失常的作用?？鄥⒅械挠行С煞只惫麎A(Sophocarpine)它低毒而有明顯對(duì)抗C0XB、COXA及埃可病毒的作用。關(guān)于槐果堿對(duì)抗C0XB病毒及其藥物制備已公布在本人的一項(xiàng)己授權(quán)專利99119850.6中。此外，本申請(qǐng)的發(fā)明人也發(fā)現(xiàn)了槐果堿對(duì)抗冠狀病毒(SARSvirus)相關(guān)技術(shù)內(nèi)容在另一項(xiàng)已授權(quán)專利03151269.0中。本申請(qǐng)的發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)槐果堿能對(duì)抗?？刹《?Echovirus)腺病毒(Adeco-virus)以及流感乙型病毒(influenzavirusB)，它既能對(duì)抗RNA病毒，又能對(duì)抗DNA病毒，因此它是一種廣譜抗病毒藥物，相關(guān)技術(shù)內(nèi)容在本申請(qǐng)人的另一項(xiàng)專利申請(qǐng)200410089431.6有所揭示(已公開)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種槐果堿在制備治療由柯薩奇A病毒所引起疾病的藥物中的應(yīng)用，所述的這種槐果堿或其可藥用鹽要解決現(xiàn)有技術(shù)中沒有有效的藥物治療柯薩奇A病毒所引起心肌炎或腦膜炎的技術(shù)問題。本發(fā)明提供了槐果堿或其可藥用鹽在制備治療由柯薩奇A病毒所引起的心肌炎或腦膜炎的藥物中的應(yīng)用，其中，所述的槐果堿的結(jié)構(gòu)式為(I)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(1)。進(jìn)一步的，所述的槐果堿的可藥用鹽為槐果堿的溴酸鹽、或者槐果堿的鹽酸鹽或者槐果堿的氟酸鹽。進(jìn)一步的，所述的槐果堿或其可藥用鹽的藥物的劑型為所述的藥物劑型為醫(yī)學(xué)上認(rèn)可的任何一種劑型。進(jìn)一步的，所述的槐果堿或其可藥用鹽的藥物劑型為粉劑、或者注射液、或者膠囊、或者片劑、或者口服液。本發(fā)明的槐果堿的制備方法包括如下步驟(1)將苦豆子粉碎，加入5%~10%的氫氧化氨濕潤(rùn)，經(jīng)氯仿回流加熱提取，加入7%~15%硫酸萃取，獲得總生物堿。(2)總生物堿通過甲苯萃取，然后加入5%10%的鹽酸提取槐果堿。(3)調(diào)節(jié)PH510，抽濾，再以丙酮重結(jié)晶，獲得槐果堿精品(4)將槐果堿精品溶解于注射水中，過濾，含量測(cè)定，調(diào)節(jié)PH44.5。(5)通過0.65微孔濾膜灌裝封口。經(jīng)流通蒸汽IO(TC滅菌30分鐘即可制得針劑。本發(fā)明所述的槐果堿能有效阻止柯薩奇A病毒的生物合成(包括蛋白質(zhì)合成)并進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮抗病毒作用。由于病毒性心肌炎發(fā)生后在心肌活檢中不易分離出任何病毒，特異性抗原亦難發(fā)現(xiàn)，以往病毒性心肌炎病因主要依賴血清學(xué)檢査，如特異性中和抗體及IgM。但由于抗體可隨時(shí)間推移而降低、消失。因而急性期后血清學(xué)檢測(cè)的敏感性及特異性降低，近年來由于采用了原位雜交及聚合酶鏈反應(yīng)(PolymersaeChainReaction-PCR)等檢測(cè)心內(nèi)膜心肌活檢及尸體中的病毒基因，發(fā)現(xiàn)COXA病毒并不少見，而肯定了COXA病毒亦為病毒性心肌炎的病原之一。COXA組病毒(coxsaickiA-virus)分24型，其中7型、9型易引起病毒性心肌炎、心包炎及病毒性腦膜炎等病變。是嬰幼兒病毒性心肌炎和腦5炎的重要病因。CVA23型可致成人暴發(fā)性心肌炎(有時(shí)與流感病毒雙重感染)，引起陣發(fā)性房性心動(dòng)過速、房樸、房顫、頻發(fā)室性早博、房室傳導(dǎo)阻滯等嚴(yán)重心律失常甚或猝死，急性心力衰竭及收縮心功能不全。COXA組病毒可以引起腦膜炎(一般稱無菌性腦膜炎)起病為中等度發(fā)熱，有時(shí)類似感冒癥狀，常伴有頭痛、惡心、嘔吐，偶而有肌肉酸痛，重者出現(xiàn)頸背強(qiáng)直，腦脊液細(xì)胞數(shù)增加及蛋白質(zhì)增高。如在夏季有時(shí)與流行性乙型腦炎病例不易鑒別。用PCR法可在腦脊液中查到COXA病毒基因，或分離病毒。上海在1964年曾從無菌性腦膜炎的腦脊液中分離到COXA9，1960-1970年隨訪期也從無菌性腦膜炎的腦脊液中分離到COXA9、COXB4病毒等。為此，我們對(duì)槐果堿對(duì)抗COXA病毒的作用進(jìn)一步作了研究。觀察了槐果堿在Hela細(xì)胞上抗COXA9的作用，觀察了結(jié)晶紫活性細(xì)胞染色法測(cè)定不同濃度的槐果堿對(duì)感染COXA9的Hela細(xì)胞存活率的保護(hù)作用，還觀察了四甲基偶氮唑鹽(MTT)法測(cè)定槐果堿對(duì)感染COXA9病毒的Hela細(xì)胞能量代謝的保護(hù)作用。都發(fā)現(xiàn)槐果堿有明顯對(duì)抗COXA9病毒的作用以及對(duì)感染細(xì)胞的保護(hù)作用。通過COXA9病毒感染的Balb/c小鼠的病毒血癥模型、心肌炎模型及腦炎模型，觀察槐果堿在體內(nèi)對(duì)COXA9病毒的對(duì)抗作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)它對(duì)COXA9病毒的增殖抑制作用達(dá)99%，并能明顯減輕心肌炎及腦的組織病理的變化，有明顯的治療作用。本發(fā)明和己有的技術(shù)相比，其效果是積極和明顯的。本發(fā)明的槐果堿或其可藥用鹽能有效阻止柯薩奇A病毒的生物合成，并進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮抗病毒作用，可提高治療愈率，減少死亡率。而且沒有明顯的細(xì)胞毒性作用，槐果堿藥源豐富，且制備簡(jiǎn)便，成本低廉，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。圖1是COXA9病毒所致Balb/c小鼠病毒性心肌炎的照片，可見心外6膜大片心肌及心肌層炎癥病變。圖2顯示了槐果堿治療組(10mg/kg)心外膜炎癥明顯減輕，心肌層少量炎性灶。圖3顯示了槐果堿治療組(20mg/kg)心外膜心肌及心肌層未見明顯炎癥。圖4是COXA9病毒所致Balb/c小鼠的腦室膜炎的照片。圖5顯示了槐果堿治療組(10mg/kg)腦室膜炎病變減輕。圖6顯示了槐果堿治療組(20mg/kg)未見腦室膜炎。具體實(shí)施方式-實(shí)施例1槐果堿的制備方法包括如下步驟(1)將苦豆子粉碎，加入5%~10%的氫氧化氨濕潤(rùn)，經(jīng)氯仿回流加熱提取，加入7%~15%硫酸萃取，獲得總生物堿。(2)總生物堿通過甲苯萃取，然后加入5%~10%的鹽酸提取槐果堿。(3)調(diào)節(jié)PH510，抽濾，再以丙酮重結(jié)晶，獲得槐果堿精品(4)將槐果堿精品溶解于注射水中，過濾，含量測(cè)定，調(diào)節(jié)PH44.5。(5)通過0.65微孔濾膜灌裝封口。經(jīng)流通蒸汽IO(TC滅菌30分鐘即可制得針劑。實(shí)施例2槐果堿體外抗COXA9病毒的試驗(yàn)毒種制備COXA9病毒株，由中國(guó)科學(xué)院昆明醫(yī)學(xué)生物研究所趙樹棟提供。取培養(yǎng)第四天已長(zhǎng)成單層的Hela細(xì)胞，用無小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基洗二次，每瓶細(xì)胞接種0.3mll(^TCIDCOXAg病毒37'C吸附1小時(shí)，傾去上清液，加入10ml無小牛血清RPIM-1640培養(yǎng)基，37°5%(302孵育培養(yǎng)，待細(xì)胞完全病變后，取出細(xì)胞并反復(fù)凍融6次，。收集作為新的接種物進(jìn)行傳代。如此連續(xù)傳代45次后，將最后一次凍融物收集置-3(TC儲(chǔ)存?zhèn)溆?。微量?xì)胞培養(yǎng)法測(cè)定病毒滴度將病毒凍融液用無小牛血清RPIM-1640培養(yǎng)基作連續(xù)10倍稀釋。從10—^1(r共8個(gè)稀釋度，在40孔微量測(cè)定板上，每個(gè)稀釋度作4個(gè)復(fù)孔，每孔滴入量為25ul，然后每孔再補(bǔ)充25ul無小牛血清RPIM-1640培養(yǎng)基，最后加入濃度為3X105/ml的Hela細(xì)胞懸液，每孔50ul(培養(yǎng)基中小牛血清為4%)同時(shí)作正常細(xì)胞對(duì)照，將板置37°C，含5%C02孵育箱培養(yǎng)，第四天判讀結(jié)果。以病毒最高稀釋度出現(xiàn)50%以上細(xì)胞病變?yōu)榈味冉K點(diǎn)。微量細(xì)胞培養(yǎng)法測(cè)定COXA9病毒滴度<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>按Reed-Muench公式計(jì)算，病毒滴度為l(T65TCID5Q(Tissuecultureinfectionsdose)。實(shí)施例3槐果堿對(duì)Hela細(xì)胞的毒性試驗(yàn)槐果堿為100mg/ml(上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院提供禾豐制藥廠制作)以無小牛血清RPIM-1640培養(yǎng)液稀釋至1%的藥液濃度(10000yg/ml為母液，無菌低溫保存。將濃度為1%槐果堿注射液用無小牛血清RPIM-1640培養(yǎng)液稀釋成不同濃度(從l:2起連續(xù)倍比稀釋至1:1024)分別加孔，每個(gè)稀釋度為4個(gè)復(fù)孔(并設(shè)正常對(duì)照)培養(yǎng)4天，每日觀察細(xì)胞毒性，計(jì)算半數(shù)中毒劑量(TD5。)和最大無毒劑量(TD。)?；惫麎A對(duì)Hela細(xì)胞的毒性槐果堿稀釋度1:21:41:81:161:321:641:1281"2561:512l:腿細(xì)胞病變+注當(dāng)槐果堿稀釋至1:8以下時(shí)，即濃度在312ug/ml以下時(shí)，對(duì)Hela細(xì)胞無毒性。TD50為624ug/ml，TD0為312ug/ml。實(shí)施例4槐果堿注射液在Hela細(xì)胞上對(duì)抗COXA9病毒的作用(一)微量法測(cè)定槐果堿在Hela細(xì)胞上抗COXA9病毒試驗(yàn)槐果堿在Hela細(xì)胞上抗COXA9病毒的作用(COXA9病毒濃度為100TCIDso)槐果堿稀釋度1:81:161:321:641:1281:2561:5121:1024細(xì)胞病變_一一±+注當(dāng)劑量1;8即312Ug/ml以下的槐果堿注射液時(shí)均有明顯的抗COXA9病毒的作用，直至l:512(即5"g/ml)時(shí)仍有抗COXA9病毒的作用。實(shí)施例5槐果堿對(duì)COXA9病毒感染Hela細(xì)胞的的能量及存活率的保護(hù)作用測(cè)定MTT微量檢測(cè)法(四甲基偶氮唑鹽)測(cè)定槐果堿對(duì)COXA9病毒對(duì)感染Hela細(xì)胞能量代謝的保護(hù)作用。結(jié)晶紫染色法(crystalviolet):測(cè)定槐果堿對(duì)COXA9病毒對(duì)感染Hela細(xì)胞存活率的保護(hù)作用。測(cè)定槐果堿對(duì)感染COXA9病毒的Hela細(xì)胞的能量代謝和存活率的保護(hù)作用，要求對(duì)COXA9病毒的濃度進(jìn)行模索。取培養(yǎng)第4天的Hela細(xì)胞制成懸液，棄培養(yǎng)液，用無小牛血清RPIM-1640培養(yǎng)液冼兩次，以感染復(fù)數(shù)為5的COXA9病毒懸液37。C吸咐2次棄病毒液，再以無小牛血清RPIM-1640培養(yǎng)液冼兩次，然后分別加入槐果堿100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.563u1/ml的小牛血清RPIM-1640培養(yǎng)液200ul，設(shè)藥物對(duì)照組(槐果堿200ul/ml)、病毒對(duì)照組、細(xì)胞對(duì)照組，37°5%0)2孵育15小時(shí)。9COXA9病毒濃度的模索<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注不同病毒感染復(fù)數(shù)下測(cè)定值的變化，二種不同方法結(jié)果如表。結(jié)果表明，隨病毒濃度的升高，MTT法測(cè)得的細(xì)胞代謝率越低，兩者呈負(fù)相關(guān)(產(chǎn)-0.805),結(jié)晶紫染色法測(cè)得細(xì)胞存活率亦越低，兩者亦呈直線負(fù)相關(guān)(r=-0.883)。根據(jù)以上模索的結(jié)果，選定COXA9病毒感染復(fù)數(shù)為5時(shí)(MOI=5)測(cè)槐果堿注射液對(duì)COXA9病毒感染的Hela細(xì)胞保護(hù)作用為確當(dāng)?；惫麎A對(duì)COXA9病毒感染的Hek細(xì)胞的保護(hù)作用<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>上表所示當(dāng)COXA9病毒感染復(fù)數(shù)為5時(shí)，槐果堿在1.563-100ug/ml之間均對(duì)Hda細(xì)胞有保護(hù)作用。能量合成代謝、細(xì)胞存活數(shù)均隨藥物濃度的升高而增加，呈正相關(guān)，r分別為0.913和0.985。(1)藥物對(duì)照組與病毒對(duì)照組相比有非常明顯差異P<0.001。(2)細(xì)胞對(duì)照組與病毒對(duì)照組相比有明顯差異P〈0.001。(3)藥物對(duì)照組與細(xì)胞對(duì)照組無明顯差異PX).05。說明槐果堿對(duì)COXA9病毒感染的Hda細(xì)胞的能量合成代謝與細(xì)胞的存活率有充分保護(hù)作用。實(shí)施例6槐果堿對(duì)COXA9病毒動(dòng)物模型體內(nèi)的抗病毒作用病毒增殖抑制試驗(yàn)測(cè)定槐果堿在體內(nèi)對(duì)COXA9病毒的抑制作用。COXA9病毒感染Hda細(xì)胞后，病毒在細(xì)胞內(nèi)繁殖，由于細(xì)胞用瓊脂糖復(fù)蓋，病毒只能經(jīng)細(xì)胞-細(xì)胞途經(jīng)傳播。于是出現(xiàn)局部區(qū)域性的細(xì)胞破壞、裂解，細(xì)胞死亡后經(jīng)固定染色，破壞區(qū)呈現(xiàn)空斑。每一個(gè)空斑由一個(gè)病毒感染單位形成，故空斑試驗(yàn)可準(zhǔn)確測(cè)定病毒滴度。空斑減少實(shí)驗(yàn)可準(zhǔn)確反映槐果堿抑制COXA9病毒的增殖程度。本實(shí)驗(yàn)采用病毒增殖抑制法(即空斑減少試驗(yàn))觀察槐果堿在體內(nèi)對(duì)COXA9病毒的抑制作用。實(shí)施例7體內(nèi)抗COXA9病毒的作用通過細(xì)胞培養(yǎng)法用病毒增殖抑制法(空斑形成法)測(cè)定槐果堿對(duì)COXA9病毒增殖的抑制作用。一.COXA9病毒血癥動(dòng)物模型的的制作槐果堿注射液上海禾豐制藥廠提供，規(guī)格200mg/2ml，批號(hào)030827。COXA9病毒來源昆明醫(yī)學(xué)生物研究所，趙樹棟提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Balb/c小鼠，3~4周齡，由上海中英合資西普爾必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。COXA9病毒血癥動(dòng)物模型的制作取Balb/c小鼠20只。A組COXA9病毒感染模型10只B組槐果堿注射液治療組10只二組各在腹腔內(nèi)接種0.1mll00TCID5。COXA9病毒。A組接種后2小時(shí)始由尾靜脈注射無菌生理鹽水O.lml二/日，B組于病毒接種后2小時(shí)始用槐果堿注射液10mg/kg/日，分二次/日尾靜脈注射。二組均在接種后第三天在無菌條件下摘除小鼠眼球取血，放入無菌試管中，靜置待血清析出，每組10只小鼠各取0.1ml血清等量混合，加入青鏈霉素，濃度為2000u/ml，置4'C冰箱2小時(shí)以滅菌?；惫麎A在Balb/c模型小鼠病毒血癥時(shí)用病毒抑制增殖法(空斑形成法)測(cè)定標(biāo)本稀釋度(COXA9病毒血癥時(shí)的血清)空斑數(shù)10—210310—510—6lO-7細(xì)胞對(duì)照治療組融合1682812000COXA9病毒組融合融合4561242400上表所示槐果堿對(duì)COXA9病毒的增殖抑制作用為90.4%~94%。二，COXA9病毒性心肌炎及腦炎體內(nèi)模型的制作。Balb/c雄性小鼠，34周齡50只，由上海中英合資西普爾必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。腹腔內(nèi)注射COXA9病毒1000TCID5()0.1ml，造成心肌炎及腦膜炎模型。實(shí)驗(yàn)分三組正常對(duì)照組(N=10)、病毒對(duì)照組(N=10)、COXA9病毒感染+藥物組(N=30)，10mg、20mg、30mg各10只，分別以0.1%、0.2%和0.3%槐果堿0.01ml+生理鹽水O.lml，每天分二次作尾靜脈注射。感染后第8天將存活小鼠無菌眼眶取血(測(cè)中和抗體)，然后拉頸致死取心臟及腦子做二方面實(shí)驗(yàn)。(一)中和抗體的檢測(cè)；用細(xì)胞病變法在Hela細(xì)胞上測(cè)三個(gè)不同劑量槐果堿(10mg、20mg、30mg)測(cè)COXA9病毒的中和抗體。用Hela細(xì)胞測(cè)COXA9病毒的中和抗體(第8天血小清)血清稀釋度1:21:41:81:161:321:641:1281:2561:512細(xì)胞對(duì)照病毒對(duì)照10mg++++-+20mg.±+++-+30mg+++-+COXA9病毒中和抗檢測(cè)結(jié)果10mg第8天是1:64陽性，20mg是1:128陽性，30mg是1:128陽性，與所用槐果堿劑量有關(guān)(血清中出現(xiàn)中和抗體，說明病理模型的制作是成功的)。(二)用TCID5。實(shí)驗(yàn)測(cè)不同劑量槐果堿(10mg、20mg、30mg)在Hela細(xì)胞上對(duì)COXA9病毒感染心肌細(xì)胞勻漿中的TCID5。。觀察槐果堿對(duì)COXA9病毒的抑制作用。用Hela細(xì)胞測(cè)COXA9病毒感染心肌細(xì)胞勻漿中的TCID:Hda細(xì)胞病變孔數(shù)/總細(xì)胞孔數(shù)標(biāo)本稀釋度(心肌)槐果堿治療組mg/kg10"410力10mg4/42/41/40/40/40/40/420mg4/42/41/40/40/40/40/430mg4/42/40/40/40/40/40/4COXA9病毒4/44/44/44/42/40/40/4正常對(duì)照組0/40/40/40/40/40/40/4槐果堿對(duì)COXA9病毒性心肌炎勻漿中病毒滴度為10'3，病毒對(duì)照組心勻漿中病毒滴度為10'5。治療組TCID5Q比對(duì)照組高2個(gè)稀釋度，提示槐果堿有對(duì)抗COXA9病毒的作用。槐果堿在Hda細(xì)胞培養(yǎng)上對(duì)COXA9病毒的抑制率為99%。(三)COXA9病毒感染的Balb/c小鼠第8天模型，心臟及腦子的病理切片。心臟及腦組織的標(biāo)本用10%的福爾馬林固定，石臘包埋，連續(xù)切片10張，HE染色，觀察心臟組織及腦組織白細(xì)胞浸潤(rùn)、細(xì)胞壞死及變性等病理變化，對(duì)比COXA9病毒感染組以及槐果堿治療組的結(jié)果。(1)COXA9病毒感染Balb/c小鼠心肌細(xì)胞槐果堿治療組與感染組的病理變化(附照片一、二、三)。結(jié)果心臟切片COXA9病毒所致Balb/c小鼠病毒性心肌炎見心外膜大片心肌及心肌層炎癥病變(如圖1所示)?；惫麎A10mg/kg治療組心外膜心肌炎癥明顯減輕，心肌層僅見少量炎性細(xì)胞(如圖2所示)?；惫麎A20mg^cg治療組心外膜心肌及心肌層未見炎癥(如圖3所示)。(2)COXA9病毒Balb/c小鼠腦組織槐果堿治療組與感染組病理變化(見圖4、5、6)。腦組織切片，COXA9病毒所致Balb/c小鼠病毒性腦膜炎，病毒組示明顯腦室膜炎(如圖4所示)?；惫麎A10mg/kg治療組示腦室膜炎病變減輕(如圖5所示)?；惫麎A20mg/kg治療組未見腦室膜炎(如圖6所示)。由此可見槐果堿對(duì)COXA9病毒具有明顯的抗病毒作用，用以治療COXA9病毒動(dòng)物模型的心肌炎和腦膜炎是有效的。1權(quán)利要求1.槐果堿或其可藥用鹽在制備治療由柯薩奇A病毒所引起疾病的藥物中的應(yīng)用，其中，所述的疾病是心肌炎或腦膜炎，所述的槐果堿的結(jié)構(gòu)式為(I)2.如權(quán)利要求1所述的槐果堿或其可藥用鹽在制備治療由柯薩奇A病毒所引起疾病的藥物中的應(yīng)用，其中，所述的槐果堿的可藥用鹽為槐果堿的溴酸鹽、或者槐果堿的鹽酸鹽、或者槐果堿的氟酸3.如權(quán)利要求1所述的槐果堿或其可藥用鹽在制備治療由柯薩奇A病毒所引起疾病的藥物中的應(yīng)用，其中，所述的藥物劑型為醫(yī)學(xué)上認(rèn)可的任意劑型。4.如權(quán)利要求3所述的槐果堿或其可藥用鹽在制備治療由柯薩奇A病毒所引起疾病的藥物中的應(yīng)用，其中，所述的藥物劑型為粉劑、或者注射液、或者膠囊、或者片劑、或者口服液。全文摘要本發(fā)明公開了槐果堿或其可藥用鹽在制備治療由柯薩奇A病毒(CoxsaickieVirusA)所致心肌炎或腦膜炎的藥物中的應(yīng)用。槐果堿或其可藥用鹽能有效阻止柯薩奇A病毒的生物合成，并進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮抗病毒作用，可提高治愈率，減少死亡率。而且沒有明顯的細(xì)胞毒性作用，槐果堿藥源豐富，且制備簡(jiǎn)便，成本低廉，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。文檔編號(hào)A61K31/4375GK101480391SQ20081003251公開日2009年7月15日申請(qǐng)日期2008年1月10日優(yōu)先權(quán)日2008年1月10日發(fā)明者陳曙霞申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院