專利名稱：射干異黃酮類化合物及其在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然藥物化學(xué)及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及從鳶尾科射干屬植物射干Belamcanda chinensis(L.)DC.的干燥根莖中提取分離出的一種射干異黃酮類新化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，以及包括該新化合物在內(nèi)的射干異黃酮類化合物在制備預(yù)防和治療雌激素水平低下、婦女更年期綜合癥的藥物或保健食品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
射干是鳶尾科射干屬植物射干Belamcanda chinensis(L.)DC.的干燥根莖。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，味苦寒，入肝、肺經(jīng)，具有清熱解毒、利咽消痰、散血消腫的功效，主治咽喉腫痛、痰咳氣喘等。為常用中藥材，且資源豐富。研究表明，射干中含有豐富的異黃酮類化合物，是其特征成分之一。已報(bào)道的射干含有的主要成分為野鳶尾苷元，鳶尾黃素，次野鳶尾黃素，鳶尾黃酮新苷元A，白射干素，野鳶尾苷，鳶尾苷等[胡小蘭，徐謚，黃天霞等，射干中化學(xué)成分的分離與鑒定，中藥通報(bào)，1982，7(1)29～30；吉文亮，秦民堅(jiān)，王崢濤，射干的化學(xué)成分研究(I)，中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，32(3)197～199； 余亞綱，汪聰慧，劉岱等，B.Chinensis根莖中親脂性組分的研究，藥學(xué)學(xué)報(bào)，1983，18(12)969～972；Yamaki M，et al.，Planta Med.，1990，56(3)335；HydeyukiIto，Satomi Onoue，et al.，Isoflavonoids from Belamcanda chinensis，Chem.Pharm.Bull，2001，49(9)1229～1231；周立新，林茂，赫蘭峰，射干的化學(xué)成分研究(I)，中草藥，1996，27(1)8～10；秦民堅(jiān)，吉文亮，王崢濤，射干的化學(xué)成分研究(II)，中草藥，2004，35(5)487～489；Won SickWoo，Eun Hee Woo，An Isoflavone Noririsflorentin from Belamcanda chinensis，Phytochemistry，1993，33(4)939～940；周立新等，中國(guó)化學(xué)快報(bào)，1997，8(2)133]。至今未見(jiàn)對(duì)射干總異黃酮及其成分的雌激素樣作用以及在防治婦女更年期綜合癥方面的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于從天然產(chǎn)物中尋找安全有效的用于制備預(yù)防和治療與雌激素水平低下相關(guān)的疾病的天然產(chǎn)物，經(jīng)過(guò)不斷努力，終于從鳶尾科射干屬植物射干Belamcanda chinensis(L.)DC.的干燥根莖中提取分離出的一種射干異黃酮類新化合物，命名為5，3′，5′-三甲氧基-6，7-亞甲二氧基異黃酮-4′-O-β-D-葡萄糖；同時(shí)，本發(fā)明人提取到了足夠量的其它已知的射干異黃酮類化合物，發(fā)現(xiàn)所有的射干異黃酮類化合物具有雌激素樣活性，可在制備預(yù)防和治療雌激素水平低下、婦女更年期綜合癥的藥物或保健食品中得以應(yīng)用，從而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案完成的，具體內(nèi)容包括一種射干異黃酮類新化合物的提取分離，結(jié)構(gòu)鑒定；射干異黃酮類新化合物及其它射干異黃酮類化合物雌激素樣活性的研究及與之相關(guān)的醫(yī)藥用途的研究。
本發(fā)明通過(guò)將射干藥材粉碎后用80％乙醇熱提3次，減壓濃縮乙醇，所得浸膏用水分散后，上大孔樹(shù)脂，依次用水和90％乙醇洗脫，收集90％乙醇洗脫液，減壓濃縮即得射干總異黃酮，從該組分中進(jìn)一步分離得到了一種射干異黃酮類新化合物，命名為5，3′，5′-三甲氧基-6，7-亞甲二氧基異黃酮-4′-O-β-D-葡萄糖，具有化學(xué)結(jié)構(gòu)式(1)所示的化學(xué)結(jié)構(gòu) 其核磁共振氫譜(1H-NMR)(DMSO-d6)δ8.34(1H，s，H-2)，7.02(1H，s，H-8)，6.86(2H，s，H-2′，6′)，6.19(2H，s，-OCH2O-)，4.97(1H，d，J＝6Hz，glc H-1″)，3.91，3.80，3.80(各3H，s，OCH3)，核磁共振碳譜(13C-NMR)(DMSO-d6)δ152.06(C-2)，123.89(C-3)，173.72(C-4)，140.48(C-5)，135.91(C-6)，152.62(C-7)，93.54(C-8)，153.83(C-9)，113.15(C-10)，127.28(C-1′)，107.85(C-2′，6′)，152.20(C-3′，5′)，134.43(C-4′)，102.61(C-1″)，77.15(C-2″)，74.12(C-3″)，69.82(C-4″)，76.50(C-5″)，60.71(C-6″)，102.55(-OCH2O-″)，60.74，56.53，56.54(OCH3)]。
并從該組分中進(jìn)一步分離得到了18個(gè)異黃酮成分，異黃酮類成分(以野鳶尾苷元，鳶尾黃素，次野鳶尾黃素，野鳶尾苷，鳶尾苷五個(gè)主成分計(jì))的含量約為91％。
19個(gè)異黃酮化合物分別為BC-1野鳶尾苷元(irigenin)，BC-2鳶尾黃素(tectorigenin)，BC-3次野鳶尾黃素(irisflorentin)[Yamaki M.，Kato T.，KashiharaM.and Takagi S.，Planta Med，56，335(1990)]，BC-4去甲基次野鳶尾黃素(nonirisflorentin)[Woo W.S.，Woo E.H.，Pytochemistry，33，939-940(1993)]，BC-5鳶尾黃酮新苷元A(iristectorin A)[Xu Y L.，Ma Y.B.，Xiong J.，ActaBotanica Yunnanica，21，125～130(1999)]，BC-6白射干素(dichotomitin)[ZhouL.X.，Lin M.，He L.F.，Chinese Traditional and Herbal Drugs，27，8-10(1996)]，BC-75，6，7，3′-四羥基-4′-甲氧基異黃酮[Ito H.，Onoue S.，Yoshida T.，Chem.Pharm.Bull.，49，1229-1231(2001)]，BC-85，7-二羥基-6，3′，4′，5′-四甲氧基異黃酮[Sethi M.L.，Taneja S.C.，Dhar K.L.，Atal C.K.，Phytochemistry，20，341～342(1981)]，BC-95，7，3′-三羥基-8，4′，5′-三甲氧基異黃酮(isoirigenin)[Atta-ur-Rahman，Nasim S.，Baig I.，Jalil S.，Orhan I.，Sener B.and Choudhary M.，Journal of Ethnopharmacology，86，177～180(2003)]，BC-105，7，4′-三羥基-8-甲氧基異黃酮(psi-tectorigenin) [Subba Raju K.V.，Srimanarayana G.，Phytochemistry，17，1065～1066(1978)]，BC-11尼鳶尾黃素(irisolone)[MoritaN.，Arisawa M.，Kondo Y.，Takenoto T.，Chem.Pharm.Bull，21，600～603(1973)]，BC-125，7，4′-三羥基-6，3′，5′-三甲氧基異黃酮[Sethi M.L.，Taneja S.C.，Dhar K.L.and Atal C.K.，Phytochemistry，22，289(1983)]，BC-13野鳶尾苷(iridin)，BC-14鳶尾苷(tectoridin)，BC-15鳶尾苷元-4′-葡萄糖苷(tectorigenin-4′-glucoside)[ShawlA.S.，Kumar T.，Phytochemistry，31，1399～1401(1992)]，BC-163′-羥基鳶尾苷(3′-hydroxy tectoridin)[Bidasee K.R.，Maxwell A.，Reynolds W.F.，Patel V.andBesch JR.H.R.，The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics，293，1074～1083(2000)]，BC-175，3′，5′-三甲氧基-6，7-亞甲二氧基異黃酮-4′-O-β-D-葡萄糖，該化合物為一新化合物，BC-186″-O-P-羥基苯甲酰野鳶尾苷(6″-O-p-hydroxybenzoyl-iridin)，BC-196″-O-香草酰野鳶尾苷(6″-O-vanilloyl-iridin)[ItoH.，Onoue S.，Yoshida T.，Chem.Pharm.Bull.，49，1229-1231(2001)]。19個(gè)異黃酮化合物的結(jié)構(gòu)通式(2)如下
19個(gè)異黃酮成分的名稱與結(jié)構(gòu)見(jiàn)表1表1 19個(gè)異黃酮成分的名稱與結(jié)構(gòu)

采用雌性去勢(shì)大鼠實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，射干總異黃酮對(duì)去除卵巢大鼠有較好的提高雌激素水平作用。因此，作為新用途，射干總異黃酮可用于制備預(yù)防和治療婦女雌激素水平低下、更年期綜合癥藥物或食品上的應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式下面通過(guò)實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
實(shí)施例1 射干總異黃酮的制備方法射干干燥藥材10Kg，用10倍量95％乙醇熱提取三次，每次提取時(shí)間為100分鐘，過(guò)濾，濾液減壓回收乙醇，加水稀釋至10倍體積后，上處理好的AB-8大孔樹(shù)脂柱，先以水洗脫5個(gè)柱床體積，再以90％乙醇洗脫5個(gè)柱床體積，收集該90％乙醇部分洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮干燥，得射干總異黃酮198g(收率2.5％)。經(jīng)檢測(cè)，該提取物中異黃酮的含量為91％。所得射干總異黃酮再經(jīng)硅膠，凝膠等柱層析分離得以上19個(gè)異黃酮類化合物。通過(guò)波譜分析測(cè)定和與文獻(xiàn)比較，分別確定了它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)。其中新異黃酮---5，3′，5′-三甲氧基-6，7-亞甲二氧基異黃酮-4′-O-β-D-葡萄糖的具體分離純化過(guò)程如下將所得射干總異黃酮100g進(jìn)行硅膠(200～300目)柱層析(柱12cm×120cm)，以氯仿-甲醇溶劑系統(tǒng)(氯仿∶甲醇15∶1→氯仿∶甲醇5∶1)梯度洗脫，收集氯仿∶甲醇10∶1的洗脫流份，回收溶劑得組分T1，約9g。將T1組分再上硅膠800克(200～300目)柱層析(柱4cm×80cm)，以氯仿-乙酸乙酯(1∶1)溶劑洗脫，部分收集，每份100ml，每份進(jìn)行薄層層析(TLC)檢查，流份7～8合并，回收溶劑得組分T2，約860mg。再將T2組分上SephadexLH-20凝膠柱，以氯仿∶甲醇1∶1洗脫純化，得到純化合物BC-17。通過(guò)核磁共振(NMR)和質(zhì)譜(MS)等分析方法確定了BC-17的化學(xué)結(jié)構(gòu)為5，3′，5′-三甲氧基-6，7-亞甲二氧基異黃酮-4′-O-β-D-葡萄糖。經(jīng)化學(xué)文摘(CA)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，該化合物為一新化合物。
實(shí)施例2 射干總異黃酮對(duì)大鼠雌激素水平影響的實(shí)驗(yàn)2.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康难芯可涓煽偖慄S酮灌胃給藥對(duì)雌性去勢(shì)大鼠雌激素的影響，擬以后用于女性更年期綜合癥的治療。
2.2實(shí)驗(yàn)材料
2.2.1射干總異黃酮自制。
2.2.2大豆異黃酮邯鄲市麥浪植物提取有限責(zé)任公司，批號(hào)200404122.2.3注射用青霉素鈉中諾藥業(yè)(石家莊)有限公司，批號(hào)050193212.2.4 0.9％生理鹽水上海華源長(zhǎng)富藥業(yè)(集團(tuán))有限公司，批號(hào)051125032.3給藥劑量溶劑組予生理鹽水，射干總異黃酮分三個(gè)劑量組(300mg/kg、600mg/kg和900mg/kg)，陽(yáng)性對(duì)照用大豆異黃酮1000mg/kg。給藥溶積均為10ml/kg2.4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和劑量設(shè)置大鼠45只，體重180-250克，雌性，購(gòu)自海軍醫(yī)學(xué)研究所(合格證SYXK-(軍)2002-044)，隨機(jī)分為5組，每組9只，即溶劑空白對(duì)照組，射干總異黃酮設(shè)高、中、低三組300mg/kg，600mg/kg，900mg/kg。大豆異黃酮1000mg/kg為陽(yáng)性對(duì)照組，以上藥物使用時(shí)以0.5％CMC-Na配制成混懸液，灌胃給藥，溶積10ml/kg。
2.5實(shí)驗(yàn)方法雌性大鼠以24％水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉，常規(guī)方法打開(kāi)腹腔，切除雙側(cè)卵巢后關(guān)閉腹腔，肌注注射青霉素鈉5萬(wàn)以預(yù)防感染，術(shù)后9天各組按相應(yīng)劑量給藥，連續(xù)5天，每天1次，末次給藥后24小時(shí)處死大鼠，眼眶取血液1500rm/min離心留血清，測(cè)血清中雌二醇水平。
2.6實(shí)驗(yàn)結(jié)果與溶劑空白組比較，射干總異黃酮900mg/kg與大豆異黃酮1000mg/kg組有非常顯著提高雌激素水平作用，射干總異黃酮600mg/kg組有顯著提高雌激素水平作用效果，見(jiàn)下表2。
表2 射干總異黃酮對(duì)去除卵巢模型大鼠雌二醇水平影響

*p＜0.05，**p＜0.012.7結(jié)論射干總異黃酮600mg/kg和900mg/kg對(duì)去除卵巢模型大鼠有明顯提高雌二醇水平，具有雌激素樣作用。
鳶尾科射干屬植物射干Belamcanda chinensis(L.)DC.的干燥根莖中提取分離出的一種射干異黃酮類新化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，以及包括該新化合物在內(nèi)的射干異黃酮類化合物可以在制備預(yù)防和治療雌激素水平低下、婦女更年期綜合癥的藥物或保健食品中得到應(yīng)用。
權(quán)利要求
1.一種新型射干異黃酮類新化合物5，3′，5′-三甲氧基-6，7-亞甲二氧基異黃酮-4′-O-β-D-葡萄糖，其特征在于該化合物具有化學(xué)結(jié)構(gòu)式(1)所示的化學(xué)結(jié)構(gòu)
2.一種包括權(quán)利要求1中所述一個(gè)新的異黃酮化合物5，3′，5′-三甲氧基-6，7-亞甲二氧基異黃酮-4′-β-O-葡萄糖以及還包括18個(gè)異黃酮化合物BC-1野鳶尾苷元(irigenin)，BC-2鳶尾黃素(tectorigenin)，BC-3次野鳶尾黃素(irisflorentin)，BC-4去甲基次野鳶尾黃素(nonirisflorentin)，BC-5鳶尾黃酮新苷元A(iristectorin A)，BC-6白射干素(dichotomitin)，BC-75，6，7，3′-四羥基-4′-甲氧基異黃酮，BC-85，7-二羥基-6，3′，4′，5′-四甲氧基異黃酮，BC-95，7，3′-三羥基-8，4′，5′-三甲氧基異黃酮(isoirigenin)，BC-105，7，4′-三羥基-8-甲氧基異黃酮(psi-tectorigenin)，BC-11尼鳶尾黃素(irisolone)，BC-125，7，4′-三羥基-6，3′，5′-三甲氧基異黃酮，BC-13野鳶尾苷(iridin)，BC-14鳶尾苷(tectoridin)，BC-15鳶尾苷元-4′-葡萄糖苷(tectorigenin-4′-glucoside)，BC-163′-羥基鳶尾苷(3′-hydroxytectoridin)，BC-186″-O-P-羥基苯甲酰野鳶尾苷(6″-O-p-hydroxybenzoyl-iridin)，BC-196″-O-香草酰野鳶尾苷(6″-O-vanilloyl-iridin)在內(nèi)的異黃酮類化合物在制備防治雌激素水平低下、婦女更年期綜合癥藥物或保健食品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及天然藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，公開(kāi)了一種從射干Belamcanda chinensis中提取分離的如式(1)所示的新的異黃酮苷BC－175，3′，5′－三甲氧基－6，7－亞甲二氧基異黃酮－4′－O－β－D－葡萄糖苷；以及包括所述新化合物在內(nèi)的射干異黃酮類化合物在制備防治雌激素水平低下、婦女更年期綜合癥藥物或保健食品中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P15/12GK1986556SQ20061014746
公開(kāi)日2007年6月27日 申請(qǐng)日期2006年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月19日
發(fā)明者陳海生, 金麗, 劉建國(guó), 金永生, 趙衛(wèi)權(quán) 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)