專利名稱：用于治療逆轉(zhuǎn)錄病毒疾病的抗凝血酶Ⅲ藥物組合物的制作方法
背景逆轉(zhuǎn)錄病毒疾病人逆轉(zhuǎn)錄病毒-人免疫缺陷病毒(HIV)導(dǎo)致了一種不治之癥-獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)，其中人體免疫系統(tǒng)受損使得受害者易受機(jī)會(huì)性感染的攻擊，如肺炎和某些癌癥，如卡波西肉瘤(KarposisSarcoma)。AIDS是一個(gè)全球性的健康難題。聯(lián)合國(guó)關(guān)于HIV/AIDS的聯(lián)合項(xiàng)目(UNAIDS)估計(jì)目前全世界有超過3400萬人攜帶HIV或患AIDS。其中約2810萬被感染的人居住在貧困的撒哈拉以南(Sub-Saharan)的非洲。在美國(guó)每250個(gè)人中就有一個(gè)感染HIV或患AIDS。自從該疾病開始流行，在世界范圍內(nèi)AIDS已殺死了近1900萬人，包括估計(jì)約425,000個(gè)美國(guó)人。AIDS已取代瘧疾和結(jié)核病成為世界上在成人中最易致死的傳染病，在世界范圍內(nèi)是排名第四的導(dǎo)致死亡的原因。
人們?nèi)匀粺o法治愈AIDS。但是，有多種抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物可用于阻止HIV復(fù)制及對(duì)人體免疫系統(tǒng)的破壞。其中這樣一類藥物是逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，其攻擊被稱為逆轉(zhuǎn)錄酶的HIV酶。另外一類藥物是蛋白酶抑制劑，其抑制HIV酶蛋白酶。這些蛋白酶抑制劑在1995年第一次被提出，現(xiàn)在其已廣泛用于治療HIV感染，其可單獨(dú)使用或與其它抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物聯(lián)合使用。目前，在美國(guó)，在估計(jì)的350,000名接受對(duì)HIV感染的治療的患者中，約215,000人接受了至少一種來自蛋白酶抑制劑類的藥物的治療。
高活性的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物治療(HAART)被廣泛用于抗-HIV療法，其需要包含三種藥物的含蛋白酶抑制劑的治療方案，其能完全抑制病毒復(fù)制(Stephenson，JAMA，277614-6(1997))。但是，人們低估了體內(nèi)潛伏HIV的存留。現(xiàn)在意識(shí)到，在約幾萬至幾百萬個(gè)長(zhǎng)壽的靜息的“記憶”T淋巴細(xì)胞(CD4)中存在著HIV病毒庫(kù)，其中HIV基因組整合到細(xì)胞自身DNA中(Stephenson，JAMA，279641-2(1998))。潛伏感染的細(xì)胞庫(kù)可能是在原發(fā)感染時(shí)建立的。
上述聯(lián)合治療通常僅有部分療效，尚不清楚病毒抑制需要到何程度才能獲得持久的病毒學(xué)、免疫學(xué)和臨床效果(Decks，JAMA，286224-6(2001))。抗HIV藥物具有高毒性并能導(dǎo)致嚴(yán)重的副作用，包括心臟損害、腎衰竭和骨質(zhì)疏松癥。長(zhǎng)期使用蛋白酶抑制劑已與體內(nèi)脂肪異常堆積所伴隨的外周萎縮聯(lián)系起來。與蛋白酶抑制劑相關(guān)的其它代謝失調(diào)表現(xiàn)包括增加的甘油三酯和膽固醇水平、胰腺炎、動(dòng)脈粥樣硬化和胰島素抵抗(Carr等，Lancet，3511881-3(1998))。目前，抗HIV療法的有效性還受限于治療方案的復(fù)雜性、藥丸負(fù)擔(dān)(pi1lburden)和藥物-藥物相互作用?？鼓孓D(zhuǎn)錄病毒的毒性作用的依從性使得終生聯(lián)合治療難以進(jìn)行，許多患者也無法忍受長(zhǎng)期HAART治療。由于難以持續(xù)聯(lián)合治療方案，并且其已導(dǎo)致藥物抗性HIV株系的出現(xiàn)，因此急需其它抗病毒療法。其它藥物可通過顯著降低日常“藥丸負(fù)擔(dān)”并簡(jiǎn)化與使用現(xiàn)有的蛋白酶抑制劑相關(guān)的復(fù)雜飲食方案來提高依從性。
HIV病毒進(jìn)入感染者體內(nèi)并主要在白細(xì)胞中存活和復(fù)制。因此HIV感染的標(biāo)志是免疫系統(tǒng)中稱為T-輔助細(xì)胞或CD4細(xì)胞的細(xì)胞減少。HIV進(jìn)入細(xì)胞的分子機(jī)制涉及病毒被膜糖蛋白(env)和兩個(gè)靶細(xì)胞蛋白-CD4和趨化因子受體之間的特異性相互作用。HIV的細(xì)胞嗜性(tropism)取決于env對(duì)特定趨化因子受體的特異性(Steinberger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.97805-10(2000))。T-細(xì)胞系-嗜性(T-嗜性)病毒(X4病毒)需要趨化因子受體CXR4以進(jìn)入細(xì)胞。巨噬細(xì)胞(M)-嗜性病毒(R5病毒)利用CCR5進(jìn)入細(xì)胞(Berger等，Nature，391240(1998))。T-嗜性與AIDS的多方面相關(guān)，包括AIDS癡呆，且對(duì)于在體內(nèi)傳播病毒及作為體內(nèi)病毒庫(kù)發(fā)揮作用可能是重要的。
此外，約40％具有HIV的患者同時(shí)感染了丙型肝炎病毒(HCV)。當(dāng)攜有一種肝炎病毒的患者之后又感染另一種不同類型的肝炎病毒時(shí)，還會(huì)發(fā)生超級(jí)感染。在上述情況下，臨床癥狀和疾病病程通常較發(fā)生單獨(dú)病毒感染的情況更為復(fù)雜和嚴(yán)重。此外，肝損傷是抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)所產(chǎn)生的一個(gè)主要問題，且其已顯示發(fā)生于所有類型的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療中。之前的研究已表明，HCV或HBV感染可增加HAART-相關(guān)的肝中毒的可能性。因此，需要提供一種更安全的對(duì)HIV、HAV、HBV和HCV感染治療的方法。
每年約有200,000個(gè)美國(guó)人和在世界范圍內(nèi)約1000萬人感染甲型肝炎。在世界范圍內(nèi)乙型肝炎是排名第九的致死原因，全世界有超過3億的慢性HBV攜帶者。其感染了15-20％的亞洲人。在美國(guó)其僅感染0.1％或120萬人。乙型肝炎通過人體液傳播，如血液、精液、陰道分泌液、乳汁、眼淚、唾液和開放傷口。其傳播途徑包括母嬰、性接觸期間、深吻和通過使用不當(dāng)注射技術(shù)。HBV較HIV傳染性強(qiáng)100倍。
越來越關(guān)注的焦點(diǎn)是業(yè)已慢性感染乙型肝炎或丙型肝炎的人如果又感染了甲型肝炎，就會(huì)面臨著更高的死亡危險(xiǎn)。感染一種類型的肝炎病毒不會(huì)提供對(duì)其它類型肝炎病毒感染的免疫力。
HBV可通過疫苗預(yù)防。然而，目前有超過二十億的人在他們生命中某時(shí)已感染HBV，約3.5億人成為該病毒的慢性感染攜帶者。HBV是一種最常見的人病原體，也是全世界最普遍的慢性病毒感染。估計(jì)每年有140,000個(gè)美國(guó)人感染乙型肝炎。約1,000,000到1,250,000個(gè)美國(guó)人慢性感染乙型肝炎病毒且被認(rèn)為是乙型肝炎病毒攜帶者。HBV攜帶者面臨著肝硬化和原發(fā)肝癌所導(dǎo)致的嚴(yán)重疾病及死亡的高風(fēng)險(xiǎn)，肝硬化和原發(fā)肝癌每年殺死超過一百萬的攜帶者。此外，這些攜帶者組成受感染人群體，將感染持續(xù)地代代相傳。攜帶者具有傳染性，即使他/她沒有體征或癥狀也可傳播乙型肝炎。
此外，截至2000年9月，估計(jì)有500萬的美國(guó)人(某些估計(jì)高達(dá)1500萬)感染了丙型肝炎；在美國(guó)每年產(chǎn)生高達(dá)230,000名新的丙型肝炎患者。每年約有8,000到10,000個(gè)美國(guó)人死于HCV，在接下來的十年或二十年中死亡總數(shù)預(yù)計(jì)將達(dá)到三倍。全世界估計(jì)有超過2億人慢性感染了丙型肝炎，這些大量感染的人群構(gòu)成令人恐懼的潛在新傳染源。HCV感染是發(fā)達(dá)國(guó)家最常見的慢性病毒性肝炎類型。已感染HCV的人可再次感染不同亞型的HCV。在接下來的10-20年后，隨著目前無癥狀的患者由相對(duì)輕微的疾病癥狀發(fā)展到最終階段的肝病，慢性乙型和丙型肝炎將成為衛(wèi)生保健系統(tǒng)主要的負(fù)擔(dān)。
另一種單鏈RNA病毒是冠狀病毒，是冠狀病毒(Coronavirirdae)科中的一個(gè)屬。這些巨大的、被膜的、正鏈RNA病毒(27-31kb)是人和家養(yǎng)動(dòng)物普遍存在的病原體。冠狀病毒具有所有RNA病毒中最大的基因組，其復(fù)制通過獨(dú)特的復(fù)制機(jī)制來進(jìn)行，這會(huì)導(dǎo)致高頻率的重組。新發(fā)現(xiàn)的導(dǎo)致嚴(yán)重急性呼吸綜合征(SARS)的病毒是這個(gè)家族的一員。它出現(xiàn)在2002年11月，至2003年4月時(shí)，在22個(gè)國(guó)家中有3,293人傳染得病，另有數(shù)百人死亡。
很清楚人們需要新的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒劑。
抗凝血酶III(AntithrombinIII，ATIII)絲氨酸蛋白酶抑制劑(serpins)構(gòu)成了一個(gè)發(fā)現(xiàn)于真核生物(包括人類)中的結(jié)構(gòu)相關(guān)蛋白質(zhì)超家族(Wright，BIOASSAY，18453-64(1996)；Skinner等，J.Mol.Biol.2839-14(1998)；Huntington等，J.Mol.Biol.293449-55(1999))。包括在該類中的有ATIII、蛋白C-抑制劑、激活蛋白C、纖溶酶原激活物抑制劑和α1-抗胰蛋白酶。
ATIII是存在于血漿中的糖蛋白，在凝血中具有明確的作用。特別的是，ATIII是凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)的有效抑制劑，其表觀分子量在54kDa至65kDa之間(Rosenberg和Damus，J.Biol.Chem.2486490-505(1973)，Nordenman等，Eur.J.Biochem.，78195-204(1977)；Kurachi等，Biochemistry 15373-7(1976))，其中大約10％是由四個(gè)葡糖胺基的碳水化合物鏈所貢獻(xiàn)的(Kurachi等，Biochemistry15373-7(1976)；Petersen等，The Physiological Inhibitors ofCoagulation and Fibrinolysis(Collen等，編)Elsevier，Amsterdam，p.48(1979))。盡管命名ATIII暗示其僅作用于凝血酶(thrombin)，但其實(shí)際上至少在某種程度上起到抑制所有凝結(jié)酶的作用。其主要抑制的酶是因子Xa、因子Ixa及凝血酶(因子IIa)。其也抑制因子XIIa、因子Xia及因子VIIa和組織因子的復(fù)合物，但不抑制因子VIIa和激活蛋白C的復(fù)合物。ATIII還抑制胰蛋白酶、纖溶酶和激肽釋放酶(Charlotte和Church，Seminars in Hematology 283-9(1995))。其通過多種的相互作用限制了凝血，這使之成為主要的天然抗凝血蛋白之一。
ATIII就其自身而言是一種相對(duì)低效的抑制劑。但是，ATIII可通過簡(jiǎn)單的模板機(jī)制激活，或通過由肝素結(jié)合所引發(fā)的變構(gòu)的構(gòu)象變化激活(Skinner等，J.Mol.Biol.2839-14(1998)；Huntington等，J.Mol.Biol.，293449-55(1999)；Belar等，J.Mol.Biol.Chem.，2758733-41(2000))。當(dāng)ATIII與肝素結(jié)合時(shí)，導(dǎo)致抑制的反應(yīng)發(fā)生的速度大大加快。這種相互作用是基于肝素的抗凝血治療的基礎(chǔ)。
美國(guó)公開的專利申請(qǐng)20020127698，標(biāo)題為“用于治療HIV感染的絲氨酸蛋白酶抑制劑藥物及其使用方法”(Serpin Drugs forTreatment of HIV Infection and Method of Use Thereof)，描述了使用絲氨酸蛋白酶抑制劑來抑制HIV傳染性的方法，例如用抗凝血酶III(ATIII)。該專利申請(qǐng)教導(dǎo)了以松弛的(R)、應(yīng)激的(S)、修飾的(M)或預(yù)存在(prelatent)形式使用ATIII。修飾的ATIII被描述為已用彈性蛋白酶、其它蛋白酶、化學(xué)處理或酶消化處理過的。
國(guó)際專利申請(qǐng)WO 00/52034，標(biāo)題為“用于治療病毒感染的絲氨酸蛋白酶活性抑制劑、方法及組合物”(Inhibitors of SerineProtease Activity，Method and Compositions for Treatment forViral Infection)以及U.S.5,532,215也一般性地教導(dǎo)了包括ATIII在內(nèi)的絲氨酸蛋白酶抑制劑作為抗-HIV試劑的用途。
國(guó)際專利申請(qǐng)WO 02/22150，標(biāo)題為“包含激活的抗凝血酶III的藥物”(Medicament Containing Activated Antithrombin III)，教導(dǎo)了通過氧化作用、用尿素和鹽酸胍處理、蛋白水解消化、加熱到60℃、降低pH到4.0或添加具有序列SEAAAS(SEQ ID NO22)的ATIII肽，可體外制備激活的ATIII(也稱為“免疫防御激活的ATIII”或“IDAAT”)。IDAAT被報(bào)道是一種ATIII聚合物，可用于抗HIV、諸如惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum)和卡氏肺囊蟲(Pneumocystis carinii)的寄生蟲以及諸如金黃色釀膿葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的細(xì)菌。
盡管ATIII和其它絲氨酸蛋白酶抑制劑已被暗示具有抗-HIV活性，但是本文中公開的研究結(jié)果表明純血漿來源的或重組的ATIII在降低HIV病毒載量方面是沒有活性的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明基于下述令人驚奇的發(fā)現(xiàn)已被處理的具有更高分子量的ATIII能有效地降低感染細(xì)胞中的HIV病毒載量?；谠摪l(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供了下述藥物組合物，所述藥物組合物包含藥學(xué)上可接受的載體和治療逆轉(zhuǎn)錄病毒感染有效量的高分子量抗凝血酶III(ATIII)。
優(yōu)選的高分子量ATIII分子量超過60kD，優(yōu)選地范圍為約60千道爾頓(kD)至約550kD之間。特別優(yōu)選的高分子量ATIIIs業(yè)已經(jīng)過熱處理和/或結(jié)合有寡糖。優(yōu)選的寡糖包括單糖、多糖、肝素(低或高分子量的和未經(jīng)分離的)、果膠和氨基糖苷。在其它優(yōu)選的實(shí)施方式中，寡糖自身是用小分子衍生過的，所述小分子例如生物素。特別優(yōu)選的高分子量ATIII藥物制劑可被制備為控釋劑型。
另一方面，本發(fā)明提供了治療感染和/或炎癥的方法，所述方法基于給予本發(fā)明的藥物組合物。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，感染是由細(xì)菌或病毒所引起的。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒。特別優(yōu)選的逆轉(zhuǎn)錄病毒選自由HIV、HAV、HBV、HCV、CMV和SARS所構(gòu)成的組。
因?yàn)楦叻肿恿緼TIII看上去通過與現(xiàn)有抗病毒療法截然不同的機(jī)制工作，因此高分子量ATIII的藥物組合物可與其它抗病毒藥物聯(lián)合給藥。優(yōu)選的抗病毒藥物包括逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，包括雞尾酒，例如高活性抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物治療(HAART)方案(齊多夫定(zidovudine)、扎西他濱(zalcitabine)、去羥肌苷(didanosine)、司他夫定(stavudine)、拉米夫定(lamivudine)、阿巴卡韋(abacavir)、替諾福韋(tenofovir)、奈韋拉平(nevirapine)、依法韋侖(efavirenz)、地拉夫定(delavirdine))，和蛋白酶抑制劑(沙奎那韋(saquinavir)、利托那韋(ritonavir)、印地那韋(indinavir)、那非那韋(velfinavir)、安潑那韋(amprenavir)、洛匹那韋(lopinavir))、阿糖腺苷、阿糖腺苷5′-單磷酸、阿昔洛維(acyclovir)、更昔洛韋(ganciclovir)、泛昔洛韋(famciclovir)、拉米夫定、克來夫定(clevudine)、afedovir dipivoxil、恩替卡韋(entecavir)、IFN-α-2b、IFN-α-2a、成淋巴細(xì)胞樣的IFN、保守(consensus)-IFN、IFN-β、IFN-y、聚乙二醇化IFN-α-2a、皮質(zhì)激素或胸腺素a1、IL-2、IL-12、利巴韋林(ribavirin)、環(huán)孢菌素或粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞菌落刺激因子。
還在另一方面，本發(fā)明提供了通過給予受試者本發(fā)明的高分子量ATIII以治療患者疾病的方法，其中所述疾病是由凝血酶激活所導(dǎo)致或促成的。由凝血酶激活所導(dǎo)致或促成的疾病包括敗血病、外傷、急性呼吸窘迫綜合征、血栓、中風(fēng)、血管再狹窄、經(jīng)皮穿刺冠狀動(dòng)脈成形術(shù)中血管再閉塞和再狹窄、與外科手術(shù)相關(guān)的血栓、局部缺血/再灌注損傷、癌癥或手術(shù)患者中凝血異常、抗凝血酶III缺乏、靜脈和動(dòng)脈血栓形成、彌散性血管內(nèi)凝血、微血管病性溶血性凝血以及靜脈閉塞性病(VOD)。
本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)可通過如下詳述和權(quán)利要求所體現(xiàn)。
附圖簡(jiǎn)述

圖1(a)-(c)顯示了人抗凝血酶III(hATIII)的核苷酸和氨基酸序列(SEQ.ID.NOs.1和2)。
圖2是抗凝血酶III的示意圖，其展示了與肝素相互作用及凝血酶抑制相關(guān)的殘基的示例性位點(diǎn)(Pratt等，Seminars in Hematology.283-9(1991))。
圖3是顯示了肝素結(jié)合位點(diǎn)的ATIII晶體結(jié)構(gòu)示意圖(Skinner等，J.Mol.Biol.266601-609(1997))。
圖4(a)-(d)是顯示多種超級(jí)ATIIIs對(duì)HIV-1抑制作用的系列圖，其是通過HIV-1 p24酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定的。(a)1型是經(jīng)過@60℃處理24小時(shí)得到的；(b)2型是對(duì)1型用低分子量肝素進(jìn)行修飾得到的；(c)3型是低分子量肝素修飾過的ATIII；(d)4型是對(duì)3型經(jīng)過@60℃處理24小時(shí)得到的。
圖5(a)是顯示對(duì)HIV-1抑制作用的圖，使用Genzyme TransgenicCorporation Biotherapeutics(GTCB)制備的經(jīng)修飾的重組ATIII，通過HIV-1 p24 ELISA對(duì)其進(jìn)行測(cè)定。
圖5(b)顯示了對(duì)HIV-1的抑制作用，通過HIV-1 ELISA對(duì)其進(jìn)行測(cè)定，所述HIV-1 ELISA是用于Calbiochem、Sigma、Roche、3型和GTCB制備的ATIII的。
圖6(a-g)是對(duì)經(jīng)過不同處理的GTCB-ATIII進(jìn)行的高效液相色譜(HPLC)的色譜圖，通過紫外(UV)或折射率(RI)檢測(cè)進(jìn)行檢測(cè)。(a)GTC-ATIII(UV分析)；(b)GTC-ATIII(RI分析)；(c)肝素處理的GTC-ATIII(UV分析)；(d)肝素處理的GTC-ATIII(RI分析)；(e)肝素+熱處理過的GTC-ATIII(UV分析)；(f)肝素+熱處理過的GTC-ATIII(RI分析)；(g)肝素+熱處理過的GTC-ATIII(UV+RI分析)。
發(fā)明詳述1.概要本發(fā)明至少部分基于下述驚人發(fā)現(xiàn)已經(jīng)過增加其分子量的處理的抗凝血酶III(ATIII)(高分子量ATIII)能有效降低HIV感染的細(xì)胞中的病毒載量。盡管高分子量ATIII作用機(jī)制尚不完全清楚，但是據(jù)認(rèn)為其可作為融合抑制劑和/或胞內(nèi)抑制劑或在某種程度上與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)。
2.高分子量ATIIIATIII本發(fā)明提供了包含高分子量ATIII的藥物組合物及其在治療病毒疾病中的用途。ATIII可獲得自，例如，血漿Cohn氏分級(jí)所得到的級(jí)分IV-1或IV，或上清液I或II+III(Lebing WR等，Vox Sang.67117-24(1994)，Hoffman DL，Am.J.Med.8723S-26S(1989)，Wickerhauser M.等，Vox Sang 36281-93(1979))。也可通過商業(yè)渠道購(gòu)得ATIII(Aventis，Genzyme Transgenic CorporationBiotherapeutics，Baxter Healthcare，Calbiochem，Bayer和Sigma)。
或者，也可制備重組ATIII，例如，使用E.coli、細(xì)胞培養(yǎng)(EP-339919)、遺傳工程(EP-90505)、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(Larrik和Thomas，Curr.Opin.Biotechnol.1241111-8(2001)，Edmunds等，Blood 124561-71(1998)，U.S.Pat.Nos.6,441,145和5,843,705)等來制備。
表1提供了來源于多種生物的ATIII的核苷酸和氨基酸序列，包括核苷酸序列變異體(variant)，即，通過一個(gè)或多個(gè)核苷酸取代、添加或缺失而有所不同的序列，例如等位變體。來源于哺乳動(dòng)物物種的ATIII及其變異體可用于制備本發(fā)明的高分子量ATIIIs。
表1本文所述的抗凝血酶III的SEQ ID NOs

本領(lǐng)域技術(shù)人員將知道由于天然的等位變異，給定物種的個(gè)體之間可存在編碼特定蛋白質(zhì)的核酸的一個(gè)或多個(gè)核苷酸(至多占核苷酸的約3-5％)的改變。任一及所有的上述核苷酸改變及所編碼的多肽都可以用于制備本發(fā)明的超級(jí)ATIIIs。舉例來說，可合理地預(yù)計(jì)到，例如，分別用異亮氨酸或纈氨酸取代亮氨酸、谷氨酸取代天冬氨酸、絲氨酸取代蘇氨酸、或用結(jié)構(gòu)相關(guān)的氨基酸對(duì)氨基酸進(jìn)行類似的取代(即保守突變)，不會(huì)對(duì)所產(chǎn)生分子的生物活性造成大的影響。保守取代是發(fā)生在側(cè)鏈相關(guān)的氨基酸家族中的那些取代。遺傳編碼的氨基酸可分為四個(gè)家族(1)酸性＝天冬氨酸、谷氨酸；(2)堿性＝賴氨酸、精氨酸、組氨酸；(3)非極性＝丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸；和(4)不帶電荷、極性＝甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸。苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸有時(shí)可一起被歸類為芳香類氨基酸。以類似方式，可將氨基酸的所有成員分為(1)酸性＝天冬氨酸、谷氨酸；(2)堿性＝賴氨酸、精氨酸、組氨酸；(3)脂肪族＝甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸，其中可選地，絲氨酸和蘇氨酸可被單獨(dú)歸類為脂肪族-羥基類；(4)芳香族＝苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸；(5)酰胺化合物＝天冬酰胺、谷氨酰胺；和(6)含硫氨基酸＝半胱氨酸和甲硫氨酸。(參見，例如，Biochemistry，第2版.，L.Stryer編，W.H.Freeman and Co.，1981)。
本發(fā)明還涉及制備一組目標(biāo)ATIII的組合突變體、截短突變體的方法，本發(fā)明還特別適用于鑒定具有抑制病毒感染的功能的潛在變體序列(例如，同源物)的方法。篩選上述組合文庫(kù)的目的是用于制備，例如，具有選擇性能力(potency)的ATIII同源物。在該方法的一種代表性實(shí)施方式中，比對(duì)ATIII同源物群的氨基酸序列，優(yōu)選地，以提升可能的最高同源性。這樣的變體群體可包括，例如，來自一種或多種物種的同源物，或來自相同物種但由于突變而不同的同源物。對(duì)被比對(duì)的序列每個(gè)位置上出現(xiàn)的氨基酸加以選擇，以產(chǎn)生組合序列的簡(jiǎn)并組。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，組合文庫(kù)是通過編碼多肽文庫(kù)的基因的簡(jiǎn)并文庫(kù)而產(chǎn)生的，其中每個(gè)多肽包括可能的ATIII序列的至少一部分。例如，可通過酶將合成寡核苷酸的混合物連接到基因序列上，以使可能的ATIII核苷酸序列的簡(jiǎn)并組可表達(dá)為單獨(dú)的多肽，或者，表達(dá)為一組更大的融合蛋白(例如，對(duì)于噬菌體展示而言)。有許多方法可用于從簡(jiǎn)并寡核苷酸序列來制備可能的同源物的文庫(kù)?？稍谧詣?dòng)DNA合成儀上進(jìn)行簡(jiǎn)并基因序列的化學(xué)合成，然后將所合成的基因連接到合適的基因上以用于表達(dá)。基因簡(jiǎn)并組的目的是提供在一種混合物中，所有編碼可能的ATIII序列的目標(biāo)組的序列。簡(jiǎn)并寡核苷酸的合成為本領(lǐng)域眾所公知(參見例如，Narang，SA(1983)Tetrahedron 393；Itakura等，(1981)Recombinant DNA，Proc.3rd Cleveland Sympos.Macromolecules，編輯.AG Walton，AmsterdamElsevier第273-289頁；Itakura等，(1984)Annu.Rev.Biochem.53323；Itakura等，(1984)Science 1981056；Ike等，(1983)Nucleic Acid Res.11477)。上述技術(shù)業(yè)已用于其它蛋白的定向進(jìn)化(參見，例如，Scott等，(1990)Science 249386-390；Roberts等，(1992)PNAS USA 892429-2433；Devlin等，(1990)Science 249404-406；Cwirla等，(1990)PNAS USA 876378-6382；和美國(guó)專利號(hào)5,223,409、5,198,346及5,096,815)。
或者，其它類型的誘變也可用于創(chuàng)建組合文庫(kù)。例如，可從文庫(kù)中產(chǎn)生并分離出ATIII同源物，這可以通過篩選來進(jìn)行，其中可以使用例如，丙氨酸掃描誘變等(Ruf等，(1994)Biochemistry 331565-1572；Wang等，(1994)J.Biol.Chem.2693095-3099；Balint等，(1993)Gene 137109-118；Grodberg等，(1993)Eur.J.Biochem.218597-601；Nagashima等，(1993)J，Biol.Chem.2682888-2892；Lowman等，(1991)Biochemistry 3010832-10838；和Cunningham等，(1989)Science 2441081-1085)；通過接頭掃描誘變(Gustin等，(1993)Virology 193653-660；Brown等，(1992)Mol.CellBiol.122644-2652；McKnight等，(1982)Science 232316)；通過飽和誘變(Meyers等，(1986)Science232613)；PCR誘變(Leung等，(1989)Method Cell Mol Biol 111-19)或隨機(jī)誘變，包括化學(xué)誘變等(Miller等，(1992)A Short Course in Bacterial Genetics，CSHL Press，Cold Spring Harbor，NY；和Greener等，(1994)Strategies in Mol Biol 732-34)。特別是在組合的情況下，接頭掃描誘變是用于鑒定ATIIIs的截短(生物活性)形式的具吸引力的方法。
ATIII裂解產(chǎn)生模擬物(mimetics)，例如能模擬經(jīng)修飾的ATIII抗病毒活性的肽或非肽試劑，其也可用于產(chǎn)生本發(fā)明的超級(jí)ATIIIs。舉例來說，可確定目標(biāo)ATIII中與抗病毒活性相關(guān)的關(guān)鍵殘基，并將其用于產(chǎn)生能抑制病毒感染的ATIII衍生的肽模擬物。例如，通過使用掃描誘變以定位目標(biāo)ATIII中與病毒抑制作用相關(guān)的氨基酸殘基，可制備出模擬那些與病毒抑制作用相關(guān)的殘基的肽模擬化合物。例如，可使用苯并二氮(例如，參見Freidinger等，in PeptidesChemistry and Biology，G.R.Marshall編.，ESCOM PublisherLeiden，Netherlands，1988)、氮雜(azepine)(例如，參見Huffman等，in PeptidesChemistry and Biology，G.R.Marshall編.，ESCOM PublisherLeiden，Netherlands，1988)、取代的γ內(nèi)酰胺環(huán)(Garvey等，in PeptidesChemistry and Biology，G.R.Marshall編.，ESCOM PublisherLeiden，Netherlands，1988)、酮-亞甲基假肽(keto-methylene pseudopeptides)(Ewenson等，(1986)J.Med.Chem.29295；和Ewenson等，in PeptidesStructure and Function(Proceedings of the 9th AmericanPeptide Symposium)Pierce Chemical Co.Rockland，IL，1985)、b-轉(zhuǎn)角(b-turn)二肽核(Nagai等，(1985)Tetrahedron Lett26647；和Sato等，(1986)J Chem Soc Perkin Trans 11231)以及b-氨基醇(Gordon等，(1985)Biochem Biophys Res Commun126419；和Dann等，(1986)Biochem Biophys Res Commun 13771)來產(chǎn)生上述殘基的非水解肽類似物。
通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的多種方法，ATIII可被基本上純化。基本上純的蛋白可通過如下已知用于蛋白質(zhì)純化的方法而獲得，其中免疫學(xué)、層析法、酶學(xué)或其它的分析方法被用于監(jiān)測(cè)該方法每一階段的純化。蛋白純化方法為本領(lǐng)域所公知，其被描述于，例如Deutscher等，Guide to Protein Purification，Harcourt Brace Jovanovich，San Diego(1990)中。也可通過描述于例如美國(guó)專利號(hào)3,842,061和4,340,589中的方法對(duì)ATIII進(jìn)行純化。
本文使用的術(shù)語“基本上純化的”指是ATIII已與天然狀態(tài)下伴隨其的成分分離。優(yōu)選地，在樣品中ATIII占總物質(zhì)的至少約80％，更優(yōu)選地至少約90％和最優(yōu)選地至少約99％(按體積、濕或干重，或摩爾百分?jǐn)?shù)或摩爾分?jǐn)?shù)計(jì))?？赏ㄟ^任何適當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)純度進(jìn)行測(cè)定，例如，可通過柱層析、凝膠電泳或HPLC分析對(duì)多肽進(jìn)行測(cè)定。
高分子量ATIII如本文所示，已用可使分子量增加的方法處理過的給予患者的ATIII可降低被病毒感染的細(xì)胞中的病毒載量。較之天然ATIII，特別優(yōu)選的高分子量ATIII分子能降低至少1.5log的病毒量，更優(yōu)選地，降低至少2、3、4或5log。
優(yōu)選的高分子量ATIII分子或分子組合的分子量范圍為約60kD至約550kD之間(天然ATIII為58kD)。特別優(yōu)選的高分子量ATIIIs的分子量范圍為至少約60-70、70-80、80-90、90-100、100-110、110-120、130-140、140-150、150-160、160-170、170-180、180-190、190-200、200-210、210-220、220-230、230-240、240-250、250-260、260-270、270-280、280-290、290-300、300-310、310-320、320-330、330-340、340-350、350-360、360-370、370-380、380-390、390-400、400-410、410-420、420-430、430-440、440-450、450-460、460-470、470-480、480-490、490-500、500-510、510-520、520-530、530-540或540-550。
例如，如實(shí)施例1所示，可通過熱處理及與諸如肝素的寡糖結(jié)合來制備高分子量ATIII。熱處理可包括在60℃或更高溫度加熱至少約30分鐘，更優(yōu)選地為幾小時(shí)。對(duì)經(jīng)過熱處理的ATIII的制備被描述于Larsson等，J Biol.Chem.27611996-12002(2001)中。
本文使用的“寡糖(oligosugar)”指單糖、二糖、和多糖(包括戊-、庚-和己-糖)、糖醇和氨基糖。單糖的例子包括葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖和肌醇。二糖的例子包括蔗糖、乳糖、麥芽糖、果膠。糖醇的例子包括甘露醇、山梨醇和木糖醇。氨基糖的例子包括葡糖胺、半乳糖胺、N-乙酰-D-葡糖胺、N-乙酰半乳糖胺，它們可作為構(gòu)建材料，以形成更復(fù)雜的寡糖，例如氨基糖甙類和肝素。優(yōu)選的寡糖為肝素(低分子量(2-4kDa)和高分子量的(至少12kDa)，果膠、五糖和氨基糖甙類。優(yōu)選地寡糖具有對(duì)ATIII的親合性。例如，已知肝素能與ATIII在某些位點(diǎn)相互作用，包括ATIII的氨基酸His-1、Ile-7、Arg 24、Pro-41、Asn-45、Arg-47、Trp-49、His-65、Lys-107、Ser-112、Lys-114、Phe-121、Phe-122、Lys-125、Arg-129、Asn-135、Lys-136、Glu 414(Pratt等，Seminarsin Hematology.283-9(1991)，Skinner等，J.Mol.Biol.266601-609(1997)，Jairajpuri等，J.Biol.Chem.M212319200(2003))?？赏ㄟ^額外的小分子，諸如生物素、抗生物素蛋白或鏈霉抗生物素蛋白，來對(duì)本文使用的寡糖進(jìn)行衍生化。
通過在37-60℃下于緩沖液中溫育1-72小時(shí)可將寡糖連接到熱處理的ATIII分子上，所述緩沖液例如0.02M磷酸鈉，0.05M NaCl，pH 7.4。同樣地，ATIII與諸如肝素的寡糖的連接可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的標(biāo)準(zhǔn)有機(jī)化學(xué)合成方法進(jìn)行(參見例如，March J.AdvancedOrganic Chemistry，John Wiley & Sons，Inc.(1992))。如實(shí)施例所示，可通過對(duì)ATIII進(jìn)行熱修飾然后添加寡糖，或首先用寡糖處理ATIII然后進(jìn)行熱修飾來制備高分子量ATIII。
也可通過將ATIII分子和至少一個(gè)其它ATIII分子結(jié)合，以產(chǎn)生諸如二聚體或三聚體的多聚物，來制備高分子量ATIII。此外，可將ATIII的功能片段與其它功能片段或全長(zhǎng)分子結(jié)合以產(chǎn)生高分子量ATIII。
可基于與硫酸化分子的結(jié)合來制備其它高分子量ATIII(Gunnarsson，GT和UR Desai，Bioorg Me Chem Lett 13(4)679-893(2003))。
可對(duì)高分子量ATIII進(jìn)行加工，以延長(zhǎng)其體內(nèi)半衰期。例如，高分子量ATIII可與額外的大分子量分子連接，例如容許更長(zhǎng)血液循環(huán)及更慢釋放的蛋白或聚合物。優(yōu)選地，所述控釋劑型包含可生物降解的酰胺(amid)或聚合產(chǎn)物。
控釋劑型(for mulations)可包括植入物和微囊包埋遞藥系統(tǒng)(分別參見WO 94/23697和美國(guó)專利號(hào)5,102,872)。高分子量ATIII可被包埋入聚合物或與聚合物結(jié)合，并植入患者體內(nèi)以助于緩釋?？墒褂蒙锟山到獾摹⑸锵嗳莸木酆衔?，例如乙烯醋酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、多正酯類及聚乳酸。制備上述劑型的方法對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。這些技術(shù)的例子如美國(guó)專利號(hào)5,110,596、5,034,229和5,057,318所示，在此通過引用將其相應(yīng)內(nèi)容包括進(jìn)本文。
其它控釋劑型可包括透皮遞藥系統(tǒng)。這些系統(tǒng)的例子可包括微密封系統(tǒng)，其為一種分區(qū)控制的遞藥系統(tǒng)，其中包含一容器，該容器含有經(jīng)修飾的ATIII的飽和混懸液，其是溶于均一分散于硅酮高彈體基質(zhì)中的水混溶溶劑中的。第二種系統(tǒng)是基質(zhì)擴(kuò)散控制系統(tǒng)。第三種及最廣泛使用的透皮遞藥系統(tǒng)是膜滲透控制系統(tǒng)。最近才獲得的第四種系統(tǒng)是梯度-電荷系統(tǒng)。此外，先進(jìn)的透皮載體包括諸如電離子透入系統(tǒng)和超聲透入(sonophoretic)系統(tǒng)，熱固性凝膠，和藥物前體(prodrugs)(見Ranade VV.(1991)J.Clin Phannacol 31(5)401-418)。在這些系統(tǒng)中，吸收促進(jìn)劑可用于增強(qiáng)經(jīng)修飾的ATIII通過皮膚的滲透。
可對(duì)所述吸收促進(jìn)劑進(jìn)行選擇，具體而言，其可選自丙二醇、己二醇、丙二醇二壬酸酯、甘油基單乙醚、二甘醇、單酸甘油酯、乙氧基甘油酯單油酸(具有8-10個(gè)環(huán)氧乙烷單元)、氮酮(azone)(1-月桂基氮雜環(huán)庚烷-2-酮)、2-(n-壬基)-1，3-二氧戊烷、十四(烷)酸異丙酯、辛基十四酸酯、十二烷基-十四酸酯、十四醇、十二烷基醇、月桂酸、乳酸月桂酯、雙縮松油醇、1-薄荷醇、d-檸檬油精、β-環(huán)糊精及其衍生物，或表面活性劑，例如聚山梨醇酯、山梨坦酯(sobitanester)、蔗糖酯、脂肪酸、膽酸鹽，或親脂和/或親水和/或兩性產(chǎn)物，例如聚-甘油酯、N-甲基吡咯烷酮、聚糖基化甘油酯和乳酸十六烷基酯。優(yōu)選地，吸收促進(jìn)劑占組合物重量的5-25％。吸收促進(jìn)劑被進(jìn)一步描述于美國(guó)專利號(hào)6,538,039中。
活性分析通過多種商業(yè)渠道購(gòu)得的分析方法，可對(duì)本文所述的高分子量ATIII的抗病毒活性進(jìn)行測(cè)定。例如，可使用AllianceHIV-1 p24酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)來測(cè)定減少HIV病毒載量的能力，例如，如實(shí)施例2所示。在其它實(shí)施方式中，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以通過檢測(cè)病毒DNA的存在和/或相對(duì)量來測(cè)定修飾的ATIII抑制HIV的活性，其中，使用了例如RT-PCR(Amplicor HCV-1 Monitor；Roche DiagnosticSystems)、基于核酸序列的擴(kuò)增(HIV-1 RNA QT；Organon Teknika)、核酸雜交和分支DNA信號(hào)擴(kuò)增(Quantiplex HIV-1 RNA；BayerNucleic Acid Diagnostics)、DNA雜交和比色檢測(cè)(Digene assayDigene Diagnostics)、多重轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴(kuò)增系統(tǒng)(Gen-Probe)以及基于核酸和序列的擴(kuò)增分析(Nuclisens)。
可通過，例如，使用通過商業(yè)渠道可獲得的用于檢測(cè)甲型肝炎病毒特異性的IgM類抗體的放射性免疫測(cè)定(RIA)或ELISA測(cè)定、分子雜交和PCR檢測(cè)技術(shù)，對(duì)經(jīng)修飾的ATIII對(duì)甲型肝炎的抑制作用進(jìn)行鑒定?？赏ㄟ^，例如，液相雜交測(cè)試(Genostics Aassay；AbbottLaboratories，Chicago，IL)、分支DNA分析(Bayer，Emeryyille，CA)和PCR分析(Cobas Amplicor HBV Monitor或Cobas-AM)對(duì)其對(duì)乙型肝炎的抑制作用進(jìn)行測(cè)定?？墒褂锰禺愑诒透窝撞《镜腅LISA測(cè)定法、通過標(biāo)準(zhǔn)化RT-PCR分析的RNA檢測(cè)(Amplicor HCV 2.0；Roche Molecular Systems)和分支DNA分析(Quantiplex HCV RNA 2.0；Chiron Diagnostic Laboratories)(Clinical Virology，2ndEd.，by Richman，Whitley，Hayden(American Society forMicrobiology Press2002 Chapters 30，32，46，52)對(duì)其對(duì)丙型肝炎的抑制作用進(jìn)行測(cè)定?？墒褂每赏ㄟ^商業(yè)渠道獲得的PCR測(cè)定對(duì)其對(duì)冠狀病毒(例如SARS)的抑制作用進(jìn)行測(cè)定。
3.藥物組合物及治療用途基于本文所示的生物活性，可將包含有效量的高分子量ATIII的藥物制劑給予受試者(包括人和動(dòng)物，例如牛、馬、狗、貓等等)以治療該受試者的感染和/或炎癥。優(yōu)選地，所述感染是基于細(xì)菌或病毒的。特別優(yōu)選的病毒感染是逆轉(zhuǎn)錄病毒感染，例如，由選自由HIV、HAV、HBV、HCV和SARS所構(gòu)成的組的病毒所引起的感染。
除了用作為抗感染/抗炎癥試劑，本發(fā)明的藥物組合物也可用于抑制需要此類抑制的患者的凝血酶活化。患者中凝血酶活化相關(guān)疾病包括敗血病、外傷、急性呼吸窘迫綜合征、血栓、中風(fēng)和血管再狹窄。所述藥物組合物也可用于治療處于凝血酶相關(guān)病理疾病風(fēng)險(xiǎn)中的患者，所述疾病例如經(jīng)皮穿刺冠狀動(dòng)脈成形術(shù)中的血管再閉塞和再狹窄、與外科手術(shù)相關(guān)的血栓癥、局部缺血/再灌注損傷和癌癥或手術(shù)患者中的凝血異常。該藥物組合物也可進(jìn)一步用作為抗凝固劑，以治療例如，導(dǎo)致增強(qiáng)靜脈和動(dòng)脈血栓形成風(fēng)險(xiǎn)的先天性抗凝血酶III缺乏、或?qū)е聫浡匝軆?nèi)凝血的獲得性抗凝血酶III缺乏、由于內(nèi)皮損傷導(dǎo)致的微血管病溶血性貧血(即溶血性尿毒綜合征)和靜脈閉塞性病(VOD)。
可用傳統(tǒng)方法來配制高分子量ATIII的藥物組合物，其中使用一種或多種生理學(xué)上可接受的載體或賦形劑。因此，可對(duì)高分子量ATIII進(jìn)行配制，使其用于通過，例如，注射、吸入或吹入(經(jīng)過口或鼻)或口服、頰、腸道外或直腸給藥。
對(duì)上述療法而言，本發(fā)明的化合物可被配制為多種給藥負(fù)載(loads)，包括全身和局部或定位給藥。技術(shù)和制劑通?？稍赗emmington’s Pharmaceutical Sciences，Meade Publishing Co.，Easton，PA中找到。對(duì)于全身給藥而言，優(yōu)選注射，包括肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)和皮下注射。對(duì)于注射而言，本發(fā)明的化合物可被配制于液體溶液中，優(yōu)選被配制于生理學(xué)相容的緩沖液中，諸如Hank氏溶液或Ringer氏溶液。此外，所述化合物可被配制為固體形式，在使用前才予以重新溶解或懸浮。凍干形式也包括在內(nèi)。
對(duì)于吸入給藥而言，將根據(jù)本發(fā)明使用的化合物以來自于加壓包裝物或噴霧器中的氣溶膠噴霧形式便利地給藥，所述包裝物或噴霧器使用了合適的推進(jìn)劑，例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合適的氣體。在使用加壓氣溶膠情況下，單位劑量可通過提供閥以遞送定量的量來確定。用于吸入劑或吹入劑的諸如明膠的膠囊和藥筒(cartridge)可被配制為包含所述化合物和合適的粉末基質(zhì)(例如乳糖或淀粉)的粉末狀混合物。
高分子量ATIII可被配制為用于通過注射進(jìn)行腸胃外給藥的形式，例如，通過彈丸注射或連續(xù)輸注。注射的制劑可以以單位劑型提供，例如，以安瓿或多劑量容器形式并添加有防腐劑。所述制劑也可使用下述形式，例如油性或水性載體中的混懸液、溶液或乳狀液，且可含有配劑，諸如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。或者，活性成分可以粉末形式存在，在使用前與合適的載體混合，所述載體例如是無菌無致熱原的水。
高分子量ATIII也可被配制為諸如栓劑或保留灌腸劑的直腸給藥組合物，例如，含有諸如可可黃油或其它甘油酯的常規(guī)栓劑基質(zhì)。
除了前述制劑外，所述化合物也可被配制為緩釋(depot)制劑。上述長(zhǎng)期作用的制劑可通過植入(例如皮下或肌內(nèi)植入)或通過肌內(nèi)注射給予。因此，例如，可將所述化合物與合適的聚合或疏水材料(例如在可接受的油中作為乳狀液)或離子交換樹脂一起配制，或作為微溶衍生物配制，如微溶鹽。其它合適的遞藥系統(tǒng)包括微球，其使得，在相當(dāng)長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)藥物可能以局部非入侵性的方式被遞送。全身給藥也可通過經(jīng)粘膜的或經(jīng)皮的方式。對(duì)于經(jīng)粘膜或經(jīng)皮給藥而言，適于透過障礙的滲透劑可用于配方中。上述滲透劑為本領(lǐng)域所公知，其包括，例如，用于經(jīng)粘膜給藥的膽酸鹽和梭鏈孢(fusidic)酸衍生物。此外，可使用去垢劑以助于滲透。經(jīng)粘膜給藥可通過鼻噴霧或使用栓劑來進(jìn)行。
優(yōu)選地，將高分子量ATIII和藥理學(xué)上可接受的添加劑的混合物制備為凍干產(chǎn)物，在使用時(shí)溶解。上述制劑可被制備為含有約1-100單位/毫升的高分子量ATIII的溶液，這是通過將其在注射用蒸餾水或無菌純凈水中溶解制得的。更優(yōu)選地，對(duì)其調(diào)節(jié)以獲得生理學(xué)上的等滲鹽濃度和生理學(xué)上所需的pH值(pH 6-8)。
當(dāng)每天給予約100U/kg劑量時(shí)，業(yè)已顯示ATIII具有很好的耐受性(Warren等，JAMA 2861869-78(2001))，且已證實(shí)其具有為18.6小時(shí)的總排出半衰期(Ilias等，Intensive Care Medicine 267104-7115(2000))。盡管適合的劑量取決于癥狀、體重、性別、動(dòng)物物種等等，但是對(duì)于成人而言，ATIII的劑量通常為1-1,000單位/千克體重/天，優(yōu)選為10-500單位/千克體重/天，每天給予一次或多次劑量。在靜脈內(nèi)給藥時(shí)，例如，所述劑量?jī)?yōu)選為10-100單位/千克體重/天。
此外，如本領(lǐng)域技術(shù)人員所能理解的本發(fā)明的任何試劑、化合物、藥物等的劑量應(yīng)隨著患者癥狀、年齡和體重，所要治療或預(yù)防的疾病的特性和嚴(yán)重程度，給藥途徑及添加劑類型的變化而改變。任一所述制劑可以任何合適的劑量給予，例如，以單次劑量或分次劑量。本發(fā)明化合物可單獨(dú)使用，或與本發(fā)明的任何其它化合物一起使用，或與認(rèn)為有用于尋求治療的特定失調(diào)、疾病或病況的任何化合物組合使用，基于本說明書及其教導(dǎo)，其劑量可為本領(lǐng)域技術(shù)人員通過已知技術(shù)所輕易確定。此外，本發(fā)明提供了不止一種的上述化合物和其它治療劑的混合物。
可在給定患者中產(chǎn)生最有效治療的給藥的精確時(shí)間和任何特定化合物的量則取決于特定化合物的活性、藥物代謝動(dòng)力學(xué)和生物利用度、患者的生理情況(包括年齡、性別、疾病類型和階段、大體的身體健康狀況、所給劑量的響應(yīng)率和藥物類型)、給藥途徑等等。本文提供的指導(dǎo)方案可用于優(yōu)化療法，例如，確定給藥的最佳時(shí)間和/或給藥量，其僅需要由監(jiān)測(cè)患者和調(diào)節(jié)劑量和/或時(shí)間組成的常規(guī)試驗(yàn)即可。
在治療患者時(shí)，可通過在24小時(shí)周期內(nèi)的預(yù)定時(shí)間處對(duì)一個(gè)或多個(gè)相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)量來監(jiān)測(cè)患者的健康狀況?？筛鶕?jù)上述監(jiān)測(cè)所得到的結(jié)果，對(duì)治療方法進(jìn)行優(yōu)化，包括補(bǔ)充給藥、量、給藥時(shí)間及制劑?；颊呖梢员欢ㄆ谠俅卧u(píng)估以確定改善程度，這可通過測(cè)定相同的參數(shù)來進(jìn)行，第一次這樣的再評(píng)估通常在治療開始后的第四周末尾進(jìn)行，隨后的再評(píng)估在治療期間每4-8周進(jìn)行一次，之后每3個(gè)月進(jìn)行一次。治療可持續(xù)幾個(gè)月或甚至幾年，對(duì)人而言治療的時(shí)間通常最短為1個(gè)月?；谶@些再評(píng)估結(jié)果，可調(diào)節(jié)所給予的藥物量及可能地，調(diào)節(jié)給藥時(shí)間。
治療開始可使用更小的劑量，其小于化合物的最佳劑量。此后，劑量可逐漸少量增加直至獲得最佳治療效果。
本發(fā)明的高分子量ATIII還可被配制與其它抗病毒藥物組合使用。例如，高分子量ATIII可與下述物質(zhì)配制到一起逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，包括雞尾酒，例如高活性抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)方案(齊多夫定、扎西他濱、去羥肌苷、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韋、替諾福韋、奈韋拉平、依法韋侖、地拉夫定)和蛋白酶抑制劑(沙奎那韋、利托那韋、印地那韋、那非那韋、安潑那韋、洛匹那韋)、阿糖腺苷、阿糖腺苷5′-單磷酸鹽、阿昔洛維、更昔洛韋、泛昔洛韋、拉米夫定、克來夫定、afedovir dipivoxil、恩替卡韋、IFN-α-2b、IFN-α-2a、成淋巴細(xì)胞樣的IFN、保守-IFN、IFN-β、IFN-γ、聚乙二醇化IFN-α-2a、皮質(zhì)激素、或胸腺素a1、IL-2、IL-12、利巴韋林、環(huán)孢菌素或粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞菌落刺激因子。
組合使用本發(fā)明的藥物化合物和其它抗病毒藥物可減少對(duì)于任一單獨(dú)成分的所需劑量，這是因?yàn)椴煌煞值钠鹦Ш托Ч某掷m(xù)可互補(bǔ)。在上述組合治療中，不同的活性劑可一起或單獨(dú)遞送，可同時(shí)或在一天內(nèi)的不同時(shí)間遞送。
例證就現(xiàn)在對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的一般描述而言，通過參考下列實(shí)施例能更容易地理解本發(fā)明，下述實(shí)施例僅作為對(duì)本發(fā)明某些方面和實(shí)施方式進(jìn)行解釋的目的被包括進(jìn)本文，而并非意欲對(duì)本發(fā)明加以限制。
實(shí)施例1高分子量ATIII的制備下列實(shí)施例描述了用于制備某些高分子量ATIII的方法。
1.經(jīng)熱處理的ATIII的制備(1型)將10mg的ATIII溶解(或稀釋)于2ml pH 7.4的10mM Tris/HCl、0.5M檸檬酸鈉中，在60℃下溫育24小時(shí)，期間十分溫和地?cái)嚢?。使用膜尺?5kDa的透析膜將溫育所得到的溶液對(duì)pH 7.4的0.02M磷酸鈉、0.05M NaCl透析。透析的蛋白被用于抑制作用試驗(yàn)或與肝素一起溫育(參見如下)以制備高分子量2型。
2.經(jīng)熱處理的ATIII的寡糖激活(2型)將ATIII(1型)與低分子量(MW)肝素(Sigma)以1∶1(w/w)混合，在37℃下于0.02M磷酸鈉、0.05M NaCl的pH 7.4的溶液中溫育24-48小時(shí)。然后將溶液對(duì)0.02M磷酸鈉、0.05M NaCl的pH 7.4的溶液透析。透析的蛋白被用于下述抑制作用試驗(yàn)，以測(cè)定抗病毒活性。
3.ATIII的寡糖激活(3型)將ATIII與低分子量肝素(Sigma)以1∶1(w/w)混合，在37℃下于0.02M磷酸鈉、0.05M NaCl的pH 7.4的溶液中溫育24-48小時(shí)。然后將溶液對(duì)0.02M磷酸鈉、0.05M NaCl的pH 7.4的溶液透析。透析的蛋白被用于下述抑制作用試驗(yàn)，以測(cè)定抗病毒活性。
4.對(duì)經(jīng)寡糖激活的ATIII進(jìn)行熱處理(4型)將3型對(duì)pH 7.4的10mM Tris/HCl、0.5M檸檬酸鈉透析并于60℃下溫育24小時(shí)，期間十分溫和地?cái)嚢?。然后使?0-50kD或更大分子量的膜將溫育所得到的溶液對(duì)0.02M磷酸鈉、0.05M NaCl的pH 7.4的溶液透析。透析出的蛋白用于下述抑制作用試驗(yàn)，以測(cè)定抗病毒活性。
實(shí)施例2對(duì)HIV-1抑制活性的評(píng)估將X4HTLV-IIIB(在下文中稱為X4 HIV；Chang等，NATURE，363466-9(1993))，一種HIV的原型T-嗜性株(美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，Monassass，VA，USA；ATCC號(hào)CRL-8543)，用于評(píng)估野生型和高分子量ATIII對(duì)T-嗜性T-tropic HIV感染的抑制效果。將給定的懸浮液體積(例如，0.1ml)中能感染細(xì)胞微量培養(yǎng)板孔或試管中的50％的病毒量稱為組織培養(yǎng)物感染劑量50(Tissue CultureInfectious Dose)[TCID50]。TCID50被用作為蝕斑測(cè)定病毒效價(jià)(其所得出的數(shù)值為PFUs或蝕斑形成單位)的替代。用MOI為每毫升1×10-2TCID50的X4 HIV來急性感染表達(dá)人白細(xì)胞抗原蛋白(HLA)B6、Bw62、和Cw3的人T類淋巴母細(xì)胞(H9細(xì)胞)。將感染的H9細(xì)胞以5×105細(xì)胞/毫升重新懸浮在R20細(xì)胞培養(yǎng)基中。在24孔微量滴定板的每個(gè)孔中滴入兩毫升上述懸浮液。然后，在多種類型的野生型和高分子量ATIII存在或不存在的條件下，培育這些細(xì)胞達(dá)12天。每三天(第3、6、9和12天)，從測(cè)試孔中取1ml細(xì)胞上清液，用等體積的R20細(xì)胞培養(yǎng)基替換。對(duì)照孔同樣地進(jìn)行取樣，但加入的培養(yǎng)基中含未經(jīng)處理的ATIII。
在第0、3、6、9和12天時(shí)分別測(cè)定所獲得的每個(gè)樣品中HIV病毒核心蛋白p24(gag)的濃度(AllianceHIV-1 p24 ELISA試劑盒，NENLife Science，Boston MA，USA)。
顯示于圖4和5中的結(jié)果表明，多種類型的高分子量ATIII都具有最有效的HIV-1抑制活性，而來源于GTC Biotherapeutics和Aventis的未經(jīng)修飾的ATIII則顯示出幾乎不具有抗病毒活性。
實(shí)施例3對(duì)高分子量ATIII進(jìn)行HPLC分析HPLC系統(tǒng)Varian ProStar 210泵，Milton Roy光譜監(jiān)測(cè)儀3000UV檢測(cè)器，BioRad 1755折射率監(jiān)測(cè)器。
柱子TSK-凝膠G2000-SWxl(30mm×ill 7.8mm，5～)洗脫液0.05M磷酸鹽pH 7.0，0.9％NaCl，1ml/min檢測(cè)通道A-RI檢測(cè)器通道B-UV檢測(cè)器(280nm)MW校正BioRad蛋白標(biāo)準(zhǔn)。
蛋白質(zhì) 分子量(MW)* 保留時(shí)間(RT)甲狀腺球蛋白 (669,000)5.708IgG(160,000)6.521卵清蛋白 (44,300) 7.521肌紅蛋白 (17,600) 9.228維生素B12 (1,355) 11.385樣品描述 相對(duì)MW* UV RT(主峰(％))#1-ATIII對(duì)照 68,100 7.098(90)#2-ATIII，經(jīng)熱處 74,500 7.016(51)；6.431(32)；理的 9.431(16)#3-ATIII，熱處理 74,500 7.008+6.616(80)；后與肝素溫育 9.485(13)，5.8(7)#4-ATIII，肝素溫 67,600 7.105(93)；5.760(7)育#5-ATIII肝素溫育 68,600 7.090+5.800(100)后熱處理#6-蛋白校正標(biāo)準(zhǔn)(見上)*)相對(duì)分子量(MW)是基于從BioRad蛋白標(biāo)準(zhǔn)所獲得的校正曲線計(jì)算得到的。
概要本發(fā)明結(jié)果表明ATIII修飾程度按下述排列#3＞#2＞#5＞#4增加，這與含有聚合物級(jí)分(RT＞7.8)的蛋白中肝素的累積和主要蛋白級(jí)分(RT～7.0-7.1，UV280nm)的RT增加相關(guān)。與起始ATIII相比，ATIII結(jié)合物中主要級(jí)分分子量(MW)的相對(duì)改變?nèi)缟媳硭鶊?bào)道。(糖基化ATIII的MW為～54,000Da，非糖基化ATIII的MW(α和β亞型)分別為47,800Da和46,800Da)。
所有的ATIII修飾物被發(fā)現(xiàn)含有大量高分子量蛋白聚集物，其存在于TSK G2000柱的排除體積中，但可在對(duì)高分子量聚合物而言具有更好分辨率的柱上對(duì)其進(jìn)行分析。
除非另有指定，本發(fā)明的實(shí)施可使用病毒學(xué)、蛋白質(zhì)化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞培養(yǎng)、分子生物學(xué)、微生物學(xué)和重組DNA的常規(guī)技術(shù)，這都在本領(lǐng)域常規(guī)知識(shí)的范圍內(nèi)。上述技術(shù)在文獻(xiàn)中得到充分說明。參見，例如，Clinical Virology，2ndEd.，by Richman，Whitley，Hayden(American Society for Microbiology Press2002)，Molecular Cloning A Laboratory Manual，2nd Ed.，ed.by Sambrook，F(xiàn)ritsch and Maniatis(Cold Spring Harbor Laboratory Press1989)；DNA Cloning，Volumes I and II(D.N.Glover ed.，1985)；Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait ed.，1984)；Mullis et al.U.S.Patent No4,683,195；Nucleic Acid Hybridization(B.D.Hames & S.J.Higgins eds.1984)；Transcription And Translation(B.D.Hames & S.J.Higgins eds.1984)；Culture Of AnimalCells(R.I.Freshney，Alan R.Liss，Inc.，1987)；Immobilized Cells And Enzymes(IRL Press，1986)；B.Perbal，A Practical Guide To Molecular Cloning(1984)；the treatise，Methods InEnzymology(Academic Press，Inc.，N.Y.)；Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells(J.H，Miller and M.P.Calos eds.，1987，Cold Spring Harbor Laboratory)；and Methods InEnzymology，Vols.154 and 155(Wu et al.eds.)本文提及的所有出版物和專利其全文在此通過引用的方式并入本文，如同每一單獨(dú)出版物或?qū)＠囟ㄇ覇为?dú)地通過引用被并入本文一樣。如有沖突，以包括本文中任何定義的本申請(qǐng)文件為準(zhǔn)。
等價(jià)物盡管已討論了本發(fā)明的具體實(shí)施方式
，但是上述說明書是作為例證的，而非進(jìn)行限制。基于該說明書及下列權(quán)利要求的論述，本發(fā)明的許多變化對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。本發(fā)明的全部保護(hù)范圍由所提及的權(quán)利要求以及其等價(jià)物的全部保護(hù)范圍、說明書和上述變化所確定。
序列表<110>ELMALEH，DAVID R.
GEIBEN LYNN，RALF<120>用于治療逆轉(zhuǎn)錄病毒疾病的抗凝血酶III藥物組合物<130>ACA-003.01<140>10/436,872<141>2003-05-13<160>22<170>PatentIn version 3.2<210>1<211>1599<212>DNA<213>智人<220>
<221>CDS<222>(121)..(1512)<220>
<221>信號(hào)肽<222>(121)..(216)<220>
<221>成熟肽<222>(217)..(1512)<400>1caccagcatc atctcctcca attcatccag ctactctgcc catgaagata atagttttca 60ggcggattgc ctcagatcac actatctcca cttgcccagc cctgtggaag attagcggcc 120atg tat tcc aat gtg ata gga act gta acc tct gga aaa agg aag gtt 168Met Tyr Ser Asn Val IIe Gly Thr Val Thr Ser Gly Lys Arg Lys Val-30 -25 -20tat ctt ttg tcc ttg ctg ctc att ggc ttc tgg gac tgc gtg acc tgt 216Tyr Leu Leu Ser Leu Leu Leu Ile Gly Phe Trp Asp Cys Val Thr Cys-15 -10 -5 -1cac ggg agc cct gtg gac atc tgc aca gcc aag ccg cgg gac att ccc 264His Gly Ser Pro Val Asp Ile Cys Thr Ala Lys Pro Arg Asp Ile Pro1 5 10 15atg aat ccc atg tgc att tac cgc tcc ccg gag aag aag gca act gag 312Met Asn Pro Met Cys Ile Tyr Arg Ser Pro Glu Lys Lys Ala Thr Glu20 25 30gat gag ggc tca gaa cag aag atc ccg gag gcc acc aac cgg cgt gtc 360Asp Glu Gly Ser Glu Gln Lys Ile Pro Glu Ala Thr Asn Arg Arg Val35 40 45
tgg gaa ctg tcc aag gcc aat tcc cgc ttt gct acc act ttc tat cag 408Trp Glu Leu Ser Lys Ala Asn Ser Arg phe Ala Thr Thr Phe Tyr Gln50 55 60cac ctg gca gat tcc aag aat gac aat gat aac att ttc ctg tca ccc 456His Leu Ala Asp Ser Lys Asn Asp Asn Asp Asn Ile Phe Leu Ser Pro65 70 75 80ctg agt atc tcc acg gct ttt gct atg acc aag ctg ggt gcc tgt aat 504Leu Ser Ile Ser Thr Ala Phe Ala Met Thr Lys Leu Gly Ala Cys Asn85 90 95gac acc ctc cag caa ctg atg gag gta ttt aag ttt gac acc ata tct 552Asp Thr Leu Gln Gln Leu Met Glu Val Phe Lys Phe Asp Thr Ile Ser100 105110gag aaa aca tct gat cag atc cac ttc ttc ttt gcc aaa ctg aac tgc 600Glu Lys Thr Ser Asp Gln Ile His Phe Phe Phe Ala Lys Leu Asn Cys115 120 125cga ctc tat cga aaa gcc aac aaa tcc tcc aag tta gta tca gcc aat 648Arg Leu Tyr Arg Lys Ala Asn Lys Ser Ser Lys Leu Val Ser Ala Asn130 135 140cgc ctt ttt gga gac aaa tcc ctt acc ttc aat gag acc tac cag gac 696Arg Leu Phe Gly Asp Lys Ser Leu Thr Phe Asn Glu Thr Tyr Gln Asp145 150 155 160atc agt gag ttg gta tat gga gcc aag ctc cag ccc ctg gac ttc aag 744Ile Ser Glu Leu Val Tyr Gly Ala Lys Leu Gln Pro Leu Asp Phe Lys165 170 175gaa aat gca gag caa tcc aga gcg gcc atc aac aaa tgg gtg tcc aat 792Glu Asn Ala Glu Gln Ser Arg Ala Ala Ile Asn Lys Trp Val Ser Asn180 185 190aag acc gaa ggc cga atc acc gat gtc att ccc tcg gaa gcc atc aat 840Lys Thr Glu Gly Arg Ile Thr Asp Val Ile Pro Ser Glu Ala Ile Asn195 200 205gag ctc act gtt ctg gtg ctg gtt aac acc att tac ttc aag ggc ctg 888Glu Leu Thr Val Leu Val Leu Val Asn Thr Ile Tyr Phe Lys Gly Leu210 215 220tgg aag tca aag ttc agc cct gag aac aca agg aag gaa ctg ttc tac 936Trp Lys Ser Lys Phe Ser Pro Glu Asn Thr Arg Lys Glu Leu Phe Tyr225 230 235 240aag gct gat gga gag tcg tgt tca gca tct atg atg tac cag gaa ggc 984Lys Ala Asp Gly Glu Ser Cys Ser Ala Ser Met Met Tyr Gln Glu Gly245 250 255aag ttc cgt tat cgg cgc gtg gct gaa ggc acc cag gtg ctt gag ttg 1032Lys Phe Arg Tyr Arg Arg Val Ala Glu Gly Thr Gln Val Leu Glu Leu260 265 270
ccc ttc aaa ggt gat gac atc acc atg gtc ctc atc ttg ccc aag cct 1080Pro Phe Lys Gly Asp Asp Ile Thr Met Val Leu Ile Leu Pro Lys Pro275 280 285gag aag agc ctg gcc aag gtg gag aag gaa ctc acc cca gag gtg ctg 1128Glu Lys Ser Leu Ala Lys Val Glu Lys Glu Leu Thr Pro Glu Val Leu290 295 300cag gag tgg ctg gat gaa ttg gag gag atg atg ctg gtg gtt cac atg 1176Gln Glu Trp Leu Asp Glu Leu Glu Glu Met Met Leu Val Val His Met305 310 315 320ccc cgc ttc cgc att gag gac ggc ttc agt ttg aag gag cag ctg caa 1224Pro Arg Phe Arg Ile Glu Asp Gly Phe Ser Leu Lys Glu Gln Leu Gln325 330 335gac atg ggc ctt gtc gat ctg ttc agc cct gaa aag tcc aaa ctc cca 1272Asp Met Gly Leu Val Asp Leu Phe Ser Pro Glu Lys Ser Lys Leu Pro340 345 350ggt att gtt gca gaa ggc cga gat gac ctc tat gtc tca gat gca ttc 1320Gly Ile Val Ala Glu Gly Arg Asp Asp Leu Tyr Val Ser Asp Ala Phe355 360 365cat aag gca ttt ctt gag gta aat gaa gaa ggc agt gaa gca gct gca 1368His Lys Ala Phe Leu Glu Val Asn Glu Glu Gly Ser Glu Ala Ala Ala370 375 380agt acc gct gtt gtg att gct ggc cgt tcg cta aac ccc aac agg gtg 1416Ser Thr Ala Val Val Ile Ala Gly Arg Ser Leu Asn Pro Asn Arg Val385 390 395 400act ttc aag gcc aac agg ccc ttc ctg gtt ttt ata aga gaa gtt cct 1464Thr Phe Lys Ala Asn Arg Pro Phe Leu Val Phe Ile Arg Glu Val Pro405 410 415ctg aac act att atc ttc atg ggc aga gta gcc aac cct tgt gtt aag 1512Leu Asn Thr Ile Ile Phe Met Gly Arg Val Ala Asn Pro Cys Val Lys420 425 430taaaatgttc ttattctttg cacctcttcc tatttttggt ttgtgaacag aagtaaaaat1572aaatacaaac tacttccatc tcacatt1599<210>2<211>464<212>PRT<213>智人<400>2Met Tyr Ser Asn Val Ile Gly Thr Val Thr Ser Gly Lys Arg Lys Val-30 -25 -20Tyr Leu Leu Ser Leu Leu Leu Ile Gly Phe Trp Asp Cys Val Thr Cys-15 -10 -5 -1
His Gly Ser Pro Val Asp Ile Cys Thr Ala Lys Pro Arg Asp Ile Pro1 5 10 15Met Asn Pro Met Cys Ile Tyr Arg Ser Pro Glu Lys Lys Ala Thr Glu20 25 30Asp Glu Gly Ser Glu Gln Lys Ile Pro Glu Ala Thr Asn Arg Arg Val35 40 45Trp Glu Leu Ser Lys Ala Asn Ser Arg Phe Ala Thr Thr Phe Tyr Gln50 55 60His Leu Ala Asp Ser Lys Asn Asp Asn Asp Asn Ile Phe Leu Ser Pro65 70 75 80Leu Ser Ile Ser Thr Ala Phe Ala Met Thr Lys Leu Gly Ala Cys Asn85 90 95Asp Thr Leu Gln Gln Leu Met Glu Val Phe Lys Phe Asp Thr Ile Ser100 105 110Glu Lys Thr Ser Asp Gln Ile His Phe Phe Phe Ala Lys Leu Asn Cys115 120 125Arg Leu Tyr Arg Lys Ala Asn Lys Ser Ser Lys Leu Val Ser Ala Asn130 135 140Arg Leu Phe Gly Asp Lys Ser Leu Thr Phe Asn Glu Thr Tyr Gln Asp145150 155 160Ile Ser Glu Leu Val Tyr Gly Ala Lys Leu Gln Pro Leu Asp Phe Lys165 170 175Glu Asn Ala Glu Gln Ser Arg Ala Ala Ile Asn Lys Trp Val Ser Asn180 185 190Lys Thr Glu Gly Arg Ile Thr Asp Val Ile Pro Ser Glu Ala Ile Asn195 200 205Glu Leu Thr Val Leu Val Leu Val Asn Thr Ile Tyr Phe Lys Gly Leu210 215 220
Trp Lys Ser Lys Phe Ser Pro Glu Asn Thr Arg Lys Glu Leu Phe Tyr225 230 235 240Lys Ala Asp Gly Glu Ser Cys Ser Ala Ser Met Met Tyr Gln Glu Gly245 250 255Lys Phe Arg Tyr Arg Arg Val Ala Glu Gly Thr Gln Val Leu Glu Leu260 265 270Pro Phe Lys Gly Asp Asp Ile Thr Met Val Leu Ile Leu Pro Lys Pro275 280 285Glu Lys Ser Leu Ala Lys Val Glu Lys Glu Leu Thr Pro Glu Val Leu290 295 300Gln Glu Trp Leu Asp Glu Leu Glu Glu Met Met Leu Val Val His Met305 310 315 320Pro Arg Phe Arg Ile Glu Asp Gly Phe Ser Leu Lys Glu Gln Leu Gln325 330 335Asp Met Gly Leu Val Asp Leu Phe Ser Pro Glu Lys Ser Lys Leu Pro340 345 350Gly Ile Val Ala Glu Gly Arg Asp Asp Leu Tyr Val Ser Asp Ala Phe355 360 365His Lys Ala phe Leu Glu Val Asn Glu Glu Gly Ser Glu Ala Ala Ala370 375 380Ser Thr Ala Val Val Ile Ala Gly Arg Ser Leu Asn Pro Asn Arg Val385 390 395 400Thr Phe Lys Ala Asn Arg Pro Phe Leu Val Phe Ile Arg Glu Val Pro405 410 415Leu Asn Thr Ile Ile Phe Met Gly Arg Val Ala Asn Pro Cys Val Lys420 425 430<210>3<211>1467<212>DNA<213>智人
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Val Thr Phe Lys Ala Asn Arg Pro Phe Leu Val Leu Ile Arg Glu Val405 410 415Ala Leu Asn Thr Ile Ile Phe Met Gly Arg Val Ala Asn Pro Cys420 425 430<210>15<211>1260<212>DNA<213>褐家鼠(Rattus norvegicus)<400>15atgtgcattt accgctcccc tgcgaagaag gccacggagg aggatgtcct agagcagaag 60gttccggaag ccaccaaccg gcgggtctgg gaactgtcca aggccaattc tcgatttgcc 120actaacttct atcagcacct ggcagactcc aagaacgaca acgacaacat tttcctgtca 180cccttgagca tctccacggc gtttgctatg accaagctgg gtgcttgtaa taacaccctc 240aagcagctga tggaggtttt taaatttgat accatctccg agaagacatc cgaccagatc 300cacttcttct ttgccaaact gaactgccga ctctatcgaa aagccaacaa gtcctctaac 360ttggtgtcag ccaaccgcct ttttggagac aaatccctta ccttcaatga gagctatcaa 420gacgttagtg agattgtcta tggagccaag cttcagcccc tggacttcaa ggagaatccg 480gagcaatcca gagtgaccat caacaactgg gtagctaata agactgaagg ccgcatcaaa 540gacgagaatc cggagcaatc cagagtgacc atcaacaact gggtagctaa taagactgaa 600ggccgcatca aagacgtcat cccccaagga gccattgatg agctcactgc cctggtgctg 660gttaacacca tttacttcaa gggcctgtgg aagtcaaagt tcagccctga gaacacaagg 720aaggaaccat tccacaaagt tgatgggcag tcatgcctgg tgcccatgat gtaccaggaa 780ggcaaattca aatacaggcg tgtgggagag ggtacccagg tgctagagat gcccttcaag 840ggggacgaca tcaccatggt gctcatcctg cccaagcctg agaagagcct ggctaaggtg 900gagcaggaac tcaccccgga gctgctgcag gagtggctgg atgagctgtc ggaggtcatg 960cttgtggtcc acgtgccccg cttccgcatc gaggacagct tcagtctgaa ggagcagctg 1020caagacatgg gccttgttga tctcttcagc cctgagaagt cccaactccc agcgtttctt 1080gaggtaaatg aggaaggcag tgaagcagca gcgagtactt ctgtcgtgat tactggccgg 1140tcactgaacc ccagtagggt gaccttcaag gccaacaggc ccttcctggt tcttataagg 1200gaagtcgcac tgaacactat tatattcatg gggagagtgt ctaatccttg tgtgaactaa 1260
<210>16<211>419<212>PRT<213>褐家鼠(Rattus norvegicus)<400>16Met Cys Ile Tyr Arg Ser Pro Ala Lys Lys Ala Thr Glu Glu Asp Val1 5 10 15Leu Glu Gln Lys Val Pro Glu Ala Thr Asn Arg Arg Val Trp Glu Leu20 25 30Ser Lys Ala Asn Ser Arg Phe Ala Thr Asn Phe Tyr Gln His Leu Ala35 40 45Asp Ser Lys Asn Asp Asn Asp Asn Ile Phe Leu Ser Pro Leu Ser Ile50 55 60Ser Thr Ala Phe Ala Met Thr Lys Leu Gly Ala Cys Asn Asn Thr Leu65 70 75 80Lys Gln Leu Met Glu Val Phe Lys Phe Asp Thr Ile Ser Glu Lys Thr85 90 95Ser Asp Gln Ile His Phe Phe Phe Ala Lys Leu Asn Cys Arg Leu Tyr100 105 110Arg Lys Ala Asn Lys Ser Ser Asn Leu Val Ser Ala Asn Arg Leu Phe115 120 125Gly Asp Lys Ser Leu Thr Phe Asn Glu Ser Tyr Gln Asp Val Ser Glu130 135 140Ile Val Tyr Gly Ala Lys Leu Gln Pro Leu Asp Phe Lys Glu Asn Pro145 150 155 160Glu Gln Ser Arg Val Thr Ile Asn Asn Trp Val Ala Asn Lys Thr Glu165 170 175Gly Arg Ile Lys Asp Glu Asn Pro Glu Gln Ser Arg Val Thr Ile Asn180 185 190Asn Trp Val Ala Asn Lys Thr Glu Gly Arg Ile Lys Asp Val Ile Pro195 200 205
Gln Gly Ala Ile Asp Glu Leu Thr Ala Leu Val Leu Val Asn Thr Ile210 215 220Tyr Phe Lys Gly Leu Trp Lys Ser Lys Phe Ser Pro Glu Asn Thr Arg225 230 235 240Lys Glu Pro Phe His Lys Val Asp Gly Gln Ser Cys Leu Val Pro Met245 250 255Met Tyr Gln Glu Gly Lys Phe Lys Tyr Arg Arg Val Gly Glu Gly Thr260 265 270Gln Val Leu Glu Met Pro Phe Lys Gly Asp Asp Ile Thr Met Val Leu275 280 285Ile Leu Pro Lys Pro Glu Lys Ser Leu Ala Lys Val Glu Gln Glu Leu290 295 300Thr Pro Glu Leu Leu Gln Glu Trp Leu Asp Glu Leu Ser Glu Val Met305 310 315 320Leu Val Val His Val Pro Arg Phe Arg Ile Glu Asp Ser Phe Ser Leu325 330 335Lys Glu Gln Leu Gln Asp Met Gly Leu Val Asp Leu Phe Ser Pro Glu340 345 350Lys Ser Gln Leu Pro Ala Phe Leu Glu Val Asn Glu Glu Gly Ser Glu355 360 365Ala Ala Ala Ser Thr Ser Val Val Ile Thr Gly Arg Ser Leu Asn Pro370 375 380Ser Arg Val Thr Phe Lys Ala Asn Arg Pro Phe Leu Val Leu Ile Arg385 390 395 400Glu Val Ala Leu Asn Thr Ile Ile Phe Met Gly Arg Val Ser Asn Pro405 410 415Cys Val Asn<210>17<211>1272
<212>DNA<213>原雞(Gallus gallus)<400>17cgggacatcc cagtgaaccc catctgcatc taccgcaacc ctgagaagaa gccccaggaa 60aggcgaggtg ctggagccgg ggaagggcag gatcccggag ttcacaaacc cccggtctgg 120gagctgtcca gggccaactc gcgtttcgcc gtcgtcttct acaagcacct ggccgactcc 180aaggacaatg aggagaacat cttcctgtcg cccctcagca tttccacagc ctttgccatg 240accaagctcg gggcgtgtgg tgacaccctg cagcagctca tggaggtctt ccagtttgac 300actatttcag agaagacatc tgaccaggtc cacttcttct tcgccaagct caactgccgt 360ctttacaaga aagccaacaa gtcatcagag ctaatatcag caaaccgtct ctttggagag 420aaatccttgg tcttcaatga gacttaccag aacattagtg aaatagttta tggagccaaa 480ctctggccgt tgaacttcaa agagaagcca gagctttcca ggaagatcat aaacgagtgg 540gtagccaata agacggagag gcgcattaca gaagtgatcc cagaaaaagg tatcgatgat 600ctcactgtct tggtcctggt caacaccatt tattttaagg ggcactggaa gtcgcagttc 660ccagctccaa acacgagact ggatttattt cacaaagcca acggtgagac ctgcaatgtc 720cccatcatgt accaggagtc caggttcccg tacgcgttca tccaggagga caaagtccag 780gtgctggagc tgccttacaa aggggacgac atcaccatgg tgctggtcct gcccaaagct 840ggcacaccgt tggtggaggt ggagcgagac ctgacgtcgg acaagctgca agactggatc 900gactctatga tggaggtctc ccttactgtc tccttccccc gcttccgtgt cgaggacagc 960ttcagtgtca aggagaagct gagaaaaatg gggctggaag atctcttcag tccagaaaat 1020gccaagctgc caggtatagt tgcaggggac cgcacagacc tgtatgtatc tgaggctttc 1080cacaaagcct tccttgaggt gaatgaagaa ggcagtgagg cgtcagcagc aacagctgtt 1140gttatctctg gccgttcctt ccccatgaac agaattatct ttgaagccaa caggcccttc 1200ttgctcttca tccgggaagc caccctcaac accattatat tcatgggcag aatatctgat 1260ccttgctctt aa 1272<210>18<211>423<212>PRT<213>原雞(Gallus gallus)<400>18Arg Asp Ile Pro Val Asn Pro Ile Cys Ile Tyr Arg Asn Pro Glu Lys1 5 10 15
Lys Pro Gln Glu Arg Arg Gly Ala Gly Ala Gly Glu Gly Gln Asp Pro20 25 30Gly Val His Lys Pro Pro Val Trp Glu Leu Ser Arg Ala Asn Ser Arg35 40 45Phe Ala Val Val Phe Tyr Lys His Leu Ala Asp Ser Lys Asp Asn Glu50 55 60Glu Asn Ile Phe Leu Ser Pro Leu Ser Ile Ser Thr Ala Phe Ala Met65 70 75 80Thr Lys Leu Gly Ala Cys Gly Asp Thr Leu Gln Gln Leu Met Glu Val85 90 95Phe Gln Phe Asp Thr Ile Ser Glu Lys Thr Ser Asp Gln Val His Phe100 105 110Phe Phe Ala Lys Leu Asn Cys Arg Leu Tyr Lys Lys Ala Asn Lys Ser115 120 125Ser Glu Leu Ile Ser Ala Asn Arg Leu Phe Gly Glu Lys Ser Leu Val130 135 140Phe Asn Glu Thr Tyr Gln Asn Ile Ser Glu Ile Val Tyr Gly Ala Lys145 150 155 160Leu Trp Pro Leu Asn Phe Lys Glu Lys Pro Glu Leu Ser Arg Lys Ile165 170 175Ile Asn Glu Trp Val Ala Asn Lys Thr Glu Arg Arg Ile Thr Glu Val180 185 190Ile Pro Glu Lys Gly Ile Asp Asp Leu Thr Val Leu Val Leu Val Asn195 200 205Thr Ile Tyr Phe Lys Gly His Trp Lys Ser Gln Phe Pro Ala Pro Asn210 215 220Thr Arg Leu Asp Leu Phe His Lys Ala Asn Gly Glu Thr Cys Asn Val225 230 235 240
Pro Ile Met Tyr Gln Glu Ser Arg Phe Pro Tyr Ala Phe Ile Gln Glu245 250 255Asp Lys val Gln Val Leu Glu Leu Pro Tyr Lys Gly Asp Asp Ile Thr260 265 270Met Val Leu Val Leu Pro Lys Ala Gly Thr Pro Leu Val GLu Val Glu275 280 285Arg Asp Leu Thr Ser Asp Lys Leu Gln Asp Trp Ile Asp Ser Met Met290 295 300Glu Val Ser Leu Thr Val Ser Phe Pro Arg Phe Arg Val Glu Asp Ser305 310 315 320Phe Ser Val Lys Glu Lys Leu Arg Lys Met Gly Leu Glu Asp Leu Phe325 330 335Ser Pro Glu Asn Ala Lys Leu Pro Gly Ile Val Ala Gly Asp Arg Thr340 345 350Asp Leu Tyr Val Ser Glu Ala Phe His Lys Ala Phe Leu Glu Val Asn355 360 365Glu Glu Gly Ser Glu Ala Ser Ala Ala Thr Ala Val Val Ile Ser Gly370 375 380Arg Ser Phe Pro Met Asn Arg Ile Ile Phe Glu Ala Asn Arg Pro Phe385 390 395 400Leu Leu Phe Ile Arg Glu Ala Thr Leu Asn Thr Ile Ile Phe Met Gly405 410 415Arg Ile Ser Asp Pro Cys Ser420<210>19<211>1371<212>DNA<213>非洲爪蛙(Xenopus laevis)<400>19atgtatctgc tttcattgtt gcttctcagc ctcttgggct cagcatacct ccagccacag 60catgctgaca tatgcctggc aaaacctaaa gatatacctc tgactcccat gtgtgtctac 120
cggaaacctc tggaggtggt tgaaaccgag gaaaaggaga aagaacctac aacgcaagaa 180cagaaggttc ctgagtccac taaccctcgt gtatatgagc tctcccaggc caatgctaaa 240tttgcaattg ctttctataa aaatctcgct gactccaagc gtgacaaaga aaatatcttt 300atgtcacccc tgagcatctc tcaagccttt acaatggcaa aactgggtgc ctgcaataac 360acactgaagc aacttatgga ggtattccac tttgacacag tttcagagcg ggcttctgat 420caaatacact acttctttgc aaagctcaac tgccgcctgt tcagaaaagc aaacaagtca 480tccgaactgg tatctgtcaa tcgccttttt ggtgagaagt ctctgacctt taatgaaacc 540tatcaagata tcagtgagat agtgtatggg gctaaattgt ggcccttaaa ctttagggat 600aagcctgaac tatcccgtga aataattaat aattgggtat ccaataaaac agagaagcga 660ataactgatg tgatccctaa ggacgccatc actcctgaca cagtattggt gctgataaat 720gccatctact tcaagggact ttggaaatcc aagtttaatt cagaaaatac gaaaatggac 780caattccacc cagctaaaaa ttccaactgc ttgactgcaa ccatgtatca agagggtaca 840ttccgttatg gttcctttaa agatgatgga gttcaggtcc ttgagctgcc ttataaaggt 900gatgacatta caatggtgct ggtgctacct tcgcaagaga ctccgctaac aacagtggag 960cagaacctga cactggaaaa gcttgggaat tggctccaga agtctcgaga attacagtta 1020tctgtttatc tccctcgatt ccgggtggaa gattccttca gtgttaagga gaaattacag 1080gaaatgggat tggtagacct gtttgatcca aactcagcaa agcttccagg aatcattgca 1140ggaggaagga cagacttgta tgtgtccgat gctttccata aggcattttt agaggtcaac 1200gaggagggta gtgaggcagc cgcatccact gccgtgattt tgacaggacg ttctttgaac 1260ctgaaccgga tcatattcag agccaatagg cccttcctgg tctttatccg agaagttgct 1320ataaatgcta ttttgttcat ggggagagta gctaacccct gcactgaata g 1371<210>20<211>456<212>PRT<213>非洲爪蛙(Xenopus laevis)<400>20Met Tyr Leu Leu Ser Leu Leu Leu Leu Ser Leu Leu Gly Ser Ala Tyr1 5 10 15Leu Gln Pro Gln His Ala Asp Ile Cys Leu Ala Lys Pro Lys Asp Ile20 25 30
Pro Leu Thr Pro Met Cys Val Tyr Arg Lys Pro Leu Glu Val Val Glu35 40 45Thr Glu Glu Lys Glu Lys Glu Pro Thr Thr Gln Glu Gln Lys Val Pro50 55 60Glu Ser Thr Asn Pro Arg Val Tyr Glu Leu Ser Gln Ala Asn Ala Lys65 70 75 80Phe Ala Ile Ala Phe Tyr Lys Asn Leu Ala Asp Ser Lys Arg Asp Lys85 90 95Glu Asn Ile Phe Met Ser Pro Leu Ser Ile Ser Gln Ala Phe Thr Met100 105 110Ala Lys Leu Gly Ala Cys Asn Asn Thr Leu Lys Gln Leu Met Glu Val115 120 125Phe His Phe Asp Thr Val Ser Glu Arg Ala Ser Asp Gln Ile His Tyr130 135 140Phe Phe Ala Lys Leu Asn Cys Arg Leu Phe Arg Lys Ala Asn Lys Ser145 150 155 160Ser Glu Leu Val Ser Val Asn Arg Leu Phe Gly Glu Lys Ser Leu Thr165 170 175Phe Asn Glu Thr Tyr Gln Asp Ile Ser Glu Ile Val Tyr Gly Ala Lys180 185 190Leu Trp Pro Leu Asn Phe Arg Asp Lys Pro Glu Leu Ser Arg Glu Ile195 200 205Ile Asn ASn Trp Val Ser Asn Lys Thr Glu Lys Arg Ile Thr Asp Val210 215 220Ile Pro Lys Asp Ala Ile Thr Pro Asp Thr Val Leu Val Leu Ile Asn225 230 235 240Ala Ile Tyr Phe Lys Gly Leu Trp Lys Ser Lys Phe Asn Ser Glu Asn245 250 255Thr Lys Met Asp Gln Phe His Pro Ala Lys Asn Ser Asn Cys Leu Thr260 265 270
Ala Thr Met Tyr Gln Glu Gly Thr Phe Arg Tyr Gly Ser Phe Lys Asp275 280 285Asp Gly Val Gln Val Leu Glu Leu Pro Tyr Lys Gly Asp Asp Ile Thr290 295 300Met Val Leu val Leu Pro Ser Gln Glu Thr Pro Leu Thr Thr Val Glu305 310 315 320Gln Asn Leu Thr Leu Glu Lys Leu Gly Asn Trp Leu Gln Lys Ser Arg325 330 335Glu Leu Gln Leu Ser Val Tyr Leu Pro Arg Phe Arg Val Glu Asp Ser340 345 350Phe Ser Val Lys Glu Lys Leu Gln Glu Met Gly Leu Val Asp Leu Phe355 360 365Asp Pro Asn Ser Ala Lys Leu Pro Gly Ile Ile Ala Gly Gly Arg Thr370 375 380Asp Leu Tyr Val Ser Asp Ala Phe His Lys Ala Phe Leu Glu Val Asn385 390 395 400Glu Glu Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ser Thr Ala Val Ile Leu Thr Gly405 410 415Arg Ser Leu Asn Leu Asn Arg Ile Ile Phe Arg Ala Asn Arg Pro Phe420 425 430Leu Val Phe Ile Arg Glu Val Ala Ile Asn Ala Ile Leu Phe Met Gly435 440 445Arg Val Ala Asn Pro Cys Thr Glu450 455<210>21<211>433<212>PRT<213>牛(Bos Taurus)<400>21His Arg Ser Pro Val Glu Asp Val Cys Thr Ala Lys Pro Arg Asp Ile15 10 15
Pro Val Asn Pro Met Cys Ile Tyr Arg Ser Ser Glu Lys Lys Ala Thr20 25 30Glu Gly Gln Gly Ser Glu Gln Lys Ile Pro Gly Ala Thr Asn Arg Arg35 40 45Val Trp Glu Leu Ser Lys Ala Asn Ser His Phe Ala Thr Ala Phe Tyr50 55 60Gln His Leu Ala Asp Ser Lys Asn Asn Asn Asp Asn Ile Phe Leu Ser65 70 75 80Pro Leu Ser Ile Ser Thr Ala Phe Ala Met Thr Lys Leu Gly Ala Cys85 90 95Asn Asn Thr Leu Thr Gln Leu Met Glu Val Phe Lys Phe Asp Thr Ile100 105 110Ser Glu Lys Thr Ser Asp Gln Ile His Phe Phe Phe Ala Lys Leu Asn115 120 125Cys Arg Leu Tyr Arg Lys Ala Asn Lys Ser Ser Glu Leu Val Ser Ala130 135 140Asn Arg Leu Phe Gly Asp Lys Ser Ile Thr Phe Asn Glu Thr Tyr Gln145 150 155 160Asp Ile Ser Glu Val Val Tyr Gly Ala Lys Leu Gln Pro Leu Asp Phe165 170 175Lys Gly Asn Ala Glu Gln Ser Arg Leu Thr Ile Asn Gln Trp Ile Ser180 185 190Asn Lys Thr Glu Gly Arg Ile Thr Asp Val Ile Pro Pro Gln Ala Ile195 200 205Asn Glu Phe Thr Val Leu Val Leu Val Asn Thr Ile Tyr Phe Lys Gly210 215 220Leu Trp Lys Ser Lys Phe Ser Pro Glu Asn Thr Arg Lys Glu Leu Phe225 230 235 240
Tyr Lys Ala Asp Gly Glu Ser Cys Ser Val Leu Met Met Tyr Gln Glu245 250 255Ser Lys Phe Arg Tyr Arg Arg Val Ala Glu Ser Thr Gln Val Leu Glu260 265 270Leu Pro Phe Lys Gly Asp Asp Ile Thr Met Val Leu Ile Leu Pro Lys275 280 285Leu Glu Lys Thr Leu Ala Lys Val Glu Gln Glu Leu Thr Pro Asp Met290 295 300Leu Gln Glu Trp Leu Agp Glu Leu Thr Glu Thr Leu Leu Val Val His305 310 315 320Met Pro Arg Phe Arg Ile Glu Asp Ser Phe Ser Val Lys Glu Gln Leu325 330 335Gln Asp Met Gly Leu Glu Asp Leu Phe Ser Pro Glu Lys Ser Arg Leu340 345 350Pro Gly Ile Val Ala Glu Gly Arg Ser Asp Leu Tyr Val Ser Asp Ala355 360 365Phe His Lys Ala Phe Leu Glu Val Asn Glu Glu Gly Ser Glu Ala Ala370 375 380Ala Ser Thr Val Ile Ser Ile Ala Gly Arg Ser Leu Asn Ser Asp Arg385 390 395 400Val Thr Phe Lys Ala Asn Arg Pro Phe Leu Val Leu Ile Arg Glu Val405 410 415Ala Leu Asn Thr Ile Ile Phe Met Gly Arg Val Ala Asn Pro Cys Val420 425 430Asp<210>22<211>6<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>對(duì)人工序列的描述起闡述作用的肽<400>22Ser Glu Ala Ala Ala Ser1 權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，包含藥學(xué)上可接受的載體和有效量的抗凝血酶III(ATIII)，其中ATIII分子量范圍在60-550kD之間，并具有降低病毒感染細(xì)胞中的載量的能力。
2.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述ATIII已經(jīng)過熱處理和寡糖修飾。
3.權(quán)利要求2的藥物組合物，其中所述熱處理于至少60℃或更高溫度持續(xù)至少30分鐘。
4.權(quán)利要求2的藥物組合物，其中所述寡糖是單糖。
5.權(quán)利要求2的藥物組合物，其中所述寡糖是多糖。
6.權(quán)利要求2的藥物組合物，其中所述寡糖是低分子量肝素。
7.權(quán)利要求2的藥物組合物，其中所述寡糖是高分子量肝素。
8.權(quán)利要求2的藥物組合物，其中所述寡糖是果膠。
9.權(quán)利要求2的藥物組合物，其中所述寡糖是氨基糖苷。
10.權(quán)利要求2的藥物組合物，其中所述寡糖用生物素進(jìn)行了衍生化。
11.權(quán)利要求1的藥物組合物，其是ATIII多聚體。
12.權(quán)利要求1的藥物組合物，其被硫酸化的分子所修飾。
13.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述逆轉(zhuǎn)錄病毒感染是甲型肝炎病毒(HAV)感染。
14.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述逆轉(zhuǎn)錄病毒感染是乙型肝炎病毒(HBV)感染。
15.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述逆轉(zhuǎn)錄病毒感染是丙型肝炎病毒(HCV)感染。
16.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述逆轉(zhuǎn)錄病毒感染是人類免疫缺陷病毒(HIV)感染。
17.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述逆轉(zhuǎn)錄病毒感染是冠狀病毒感染。
18.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述高分子量ATIII是二聚體。
19.權(quán)利要求1的藥物組合物，其是控釋制劑。
20.權(quán)利要求19的藥物組合物，其中所述控釋制劑包括生物可降解的聚合物。
21.一種治療受試者HIV感染的方法，包括如下步驟給予所述受試者治療有效量的權(quán)利要求1的藥物組合物。
22.權(quán)利要求19的方法，其中所述藥物組合物在10-250毫克/單位劑量的范圍內(nèi)。
23.權(quán)利要求22的方法，其中所述藥物組合物每天給予患者16到17次。
24.權(quán)利要求21的方法，其中所述給藥每周一次。
25.權(quán)利要求22的方法，其中所述給藥每周至少兩次。
26.權(quán)利要求21的方法，其中權(quán)利要求1的藥物組合物與另一種抗病毒藥物組合使用。
27.權(quán)利要求26的方法，其中其它抗病毒藥物是高活性抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物治療(HAATR)劑。
28.一種治療受試者甲型肝炎病毒感染的方法，包括如下步驟給予甲型肝炎病毒感染的受試者治療有效量的權(quán)利要求1的藥物組合物。
29.權(quán)利要求28的方法，其中權(quán)利要求1的藥物組合物與抗病毒藥物組合使用。
30.一種治療受試者乙型肝炎病毒感染的方法，包括如下步驟給予乙型肝炎病毒感染的受試者治療有效量的權(quán)利要求1的藥物組合物。
31.權(quán)利要求30的方法，其中權(quán)利要求1的藥物組合物與抗病毒藥物組合使用。
32.權(quán)利要求31的方法，其中權(quán)利要求1的藥物組合物與干擾素或干擾素衍生的藥物組合使用。
33.一種治療受試者丙型肝炎病毒感染的方法，包括如下步驟給予丙型肝炎病毒感染的受試者治療有效量的權(quán)利要求1的藥物組合物。
34.權(quán)利要求33的方法，其中權(quán)利要求1的藥物組合物與抗病毒藥物組合使用。
35.權(quán)利要求33的方法，其中權(quán)利要求1的藥物組合物與干擾素或干擾素衍生的藥物組合使用。
36.一種治療受試者HIV-1感染的方法，包括如下步驟給予所述受試者治療有效量的權(quán)利要求16的藥物組合物。
37.權(quán)利要求36的方法，其中權(quán)利要求16的藥物組合物與抗病毒藥物組合使用。
38.權(quán)利要求37的方法，其中所述抗病毒藥物是高活性抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物治療(HAATR)劑。
39.一種治療受試者甲型肝炎病毒感染的方法，包括如下步驟給予所述受試治療有效量的權(quán)利要求16的藥物組合物。
40.權(quán)利要求39的方法，其中權(quán)利要求16的藥物組合物與抗病毒藥物組合使用。
41.一種治療受試者乙型肝炎病毒感染的方法，包括如下步驟給予所述受試治療有效量的權(quán)利要求16的藥物組合物。
42.權(quán)利要求41的方法，其中權(quán)利要求16的藥物組合物與抗病毒藥物組合使用。
43.權(quán)利要求42的方法，其中所述抗病毒藥物是干擾素或干擾素衍生的藥物。
44.一種治療受試者丙型肝炎病毒感染的方法，包括如下步驟給予丙型肝炎病毒感染的受試者治療有效量的權(quán)利要求16的藥物組合物。
45.權(quán)利要求44的方法，其中權(quán)利要求16的藥物組合物與抗病毒藥物組合使用。
46.權(quán)利要求45的方法，其中所述抗病毒藥物是干擾素或干擾素衍生的藥物。
47.一種試劑盒，包含一個(gè)或多個(gè)容器及權(quán)利要求1的藥物組合物。
48.一種試劑盒，包含一個(gè)或多個(gè)容器及權(quán)利要求16的藥物組合物。
49.一種藥物組合物，包含藥學(xué)上可接受的載體和分子量范圍在60-550kD之間的ATIII，其中ATIII的量為治療患有由凝血酶活化所導(dǎo)致或促成的疾病或病況的受試者有效的量。
50.權(quán)利要求49的藥物組合物，其中所述疾病或病況選自敗血病、外傷、急性呼吸窘迫綜合征、血栓、中風(fēng)、血管再狹窄、經(jīng)皮穿刺冠狀動(dòng)脈成形術(shù)中血管再閉塞和再狹窄；與外科手術(shù)相關(guān)的血栓癥、局部缺血/再灌注損傷；和癌癥或手術(shù)患者中異常凝血、抗凝血酶III缺乏、靜脈或動(dòng)脈血栓形成、彌散性血管內(nèi)凝血、微血管病溶血性貧血和靜脈閉塞性病(VOD)。
51.一種治療受試者由凝血酶活化所導(dǎo)致或促成的疾病或病況的方法，包括給予所述受試者權(quán)利要求49的藥物組合物。
全文摘要
公開了含有高分子量ATIII的藥物組合物，及其在治療感染性疾病、炎癥和凝血酶活化介導(dǎo)的疾病或病況中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P31/12GK1889972SQ200480020028
公開日2007年1月3日 申請(qǐng)日期2004年5月12日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月13日
發(fā)明者R·G·林, D·R·埃爾馬勒 申請(qǐng)人:綜合醫(yī)院公司, 加速度生物藥品公司