專利名稱：馬藺子甲素及其衍生物、類似物在制備化療增敏劑中的用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種馬藺子甲素及其衍生物、類似物的制藥用途，具體涉及馬藺子甲素、馬藺子乙素在制備化療增敏劑中的用途。
背景技術：
馬藺子素膠囊的主要成分為馬藺子甲素以及約10％的馬藺子乙素。在臨床上，其主要被用作腫瘤放療增敏劑，多用于食管癌和鼻咽癌的放射治療中(樊瑞太，李國文等，河南腫瘤學雜志，1998，11(6)446-447；賈中耀，張秀芝等，中國腫瘤臨床，1999，26(8)639-640)。也有文獻報道，馬藺子素本身具有抑制腫瘤細胞生長并引起其凋亡的作用，如馬藺子甲素對體外培養(yǎng)的鼻咽癌CNE-2、SUNE-1和Fadu細胞具有殺傷作用，且可誘導Fadu細胞出現(xiàn)凋亡征象。我們在研究中也發(fā)現(xiàn)，馬藺子素對體外培養(yǎng)的食管癌、胃腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌和黑色素瘤細胞同樣具有殺傷作用。
化療是“化學藥物治療”的簡稱。目前化療的概念一般被理解為“腫瘤的化療”，即使用抗腫瘤化學藥物，采用某些措施和方案治療腫瘤的方法。然而，常見的化療藥物如長春新堿、順鉑、甲氨喋呤、環(huán)磷酰胺等可產(chǎn)生注射局部疼痛、靜脈栓塞、骨髓抑制、胃腸道反應、外周神經(jīng)病變等毒副作用；此外，由于化療藥物的毒性，化療病人有時還會出現(xiàn)感染，出血等并發(fā)癥。
為減少化療藥物的毒副作用、提高療效、減少腫瘤復發(fā)和避免抗藥性的產(chǎn)生，選擇不同的化療增敏劑聯(lián)合使用，已成為腫瘤化療的重要手段之一。例如，臨床上將順鉑與5-Fu、博來霉素或表鬼臼毒素等聯(lián)合使用治療食管癌。
腫瘤化療增敏劑是一類能提高腫瘤細胞對化療藥物的敏感性，減少化療藥物用量進而減低其毒性的藥物。在中國專利申請CN 1362061A中，李德華等人公開了馬藺子甲素與環(huán)磷酰胺(CTX)聯(lián)合使用能顯著增強環(huán)磷酰胺對白血病、腦瘤、肺癌、宮頸癌細胞的殺傷作用。
協(xié)同作用(Synergistic Effect)是指兩個藥物聯(lián)合使用時所產(chǎn)生的療效大于相同劑量時兩藥單獨使用時的療效。根據(jù)中效原理(Joseph R.Bertino，Ting-ChaoChou，ChemotherapySynergism and Antagonism，Encyclopedia of Cancer，1996，Academic Press，Inc.)，兩藥聯(lián)合使用時的作用效果可通過聯(lián)合指數(shù)CI(Combination Index)進行判斷CI=D1(Dx)1+D2(Dx)2+α×D1×D2(Dx)1×(Dx)2]]>其中，D1，D2分別為馬藺子甲素和乙素單獨使用時，細胞增殖抑制率達到x％時的藥物濃度；(Dx)1，(Dx)2為達到相同細胞增殖抑制率時混和物中馬藺子甲素和乙素的濃度。
對相互獨立的兩種藥物α＝0；而互不獨立的藥物α＝1當CI＜1時，為協(xié)同作用；CI＝1時，為相加作用；CI＞1時，為拮抗作用馬藺子素與其他化療藥物聯(lián)合使用產(chǎn)生對其他腫瘤細胞的協(xié)同殺傷作用未見文獻報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在尋找并開發(fā)馬藺子甲素及其衍生物、類似物的新醫(yī)藥用途。
本發(fā)明涉及下列通式(I)所示的馬藺子甲素及其衍生物、類似物，特別是馬藺子甲素、馬藺子乙素及其可藥用鹽、前藥在制備對腫瘤化療藥物具有增敏減毒作用的藥物中的用途 其中，R1＝H2n+1或CnH2n-1，n＝2～20，它可為直鏈或支鏈；當R1＝CnH2n-1時，它可為環(huán)狀飽和基團或含有雙鍵的基團，其中雙鍵可位于直鏈或支鏈中的任何可能位置，雙鍵構(gòu)型可為順式或反式；R2為羥基或氫。
其中，當R1代表 (馬藺子甲素)，且所述腫瘤為白血病、腦瘤、肺癌或?qū)m頸癌時，所述化療藥物不是環(huán)磷酰胺。
本發(fā)明還涉及一種治療腫瘤的藥盒，它包括選自通式(I)化合物中的一種化合物；至少一種化療藥物；以及用藥說明。
本發(fā)明的化合物的可藥用鹽包括各種無機或有機酸鹽如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、延胡索酸鹽、扁桃酸鹽和草酸鹽；各種無機或有機堿鹽如氫氧化鈉、三羥甲基氨基甲烷(TPIS，tromethane)和N-甲基-葡萄糖胺。
本發(fā)明的化合物的前藥包括含有該化合物的羧酸酯(可按本領域的常規(guī)方法用C1-4的醇濃縮制得)、含有該化合物的羥基酯(可按本領域的常規(guī)方法用C1-4的羧酸，C3-6的二羧酸或其酸酐，如馬來酸酐，富馬酸酐等濃縮制得)、含有該化合物的烯胺(可按本領域的常規(guī)方法用C1-4的醛或酮濃縮制得)或含有該化合物的縮醛或者縮酮(可按本領域的常規(guī)方法用氯甲基甲醚或氯甲基乙醚濃縮制得)等(Albert S.Kearney Advanced Drug Reviews.19(1996)229-234).。
本發(fā)明人經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，馬藺子甲素、馬藺子乙素和多種化療藥物聯(lián)合用藥可明顯提高腫瘤細胞對化療藥物的敏感性，減少化療藥物的用量，減低其毒性。
本發(fā)明的馬藺子甲素(Irisquinone A，6-甲氧基-2-Δ10’-順十七烯-1，4苯醌)和馬藺子乙素(Irisquinone B，6-甲氧基-2-十七烷基-1，4-苯醌)的化學結(jié)構(gòu)式、分子式分別為 Irisquinone A，C24H38O3 Irisquinone B，C24H40O3本發(fā)明的馬藺子甲素、馬藺子乙素可以單獨使用或以藥物組合物的形式使用。藥物組合物包括作為活性成份的馬藺子甲素、馬藺子乙素及藥用載體。
所述可藥用載體為各種常用的藥物輔料如填充劑(無水乳糖、淀粉、乳糖珠粒、葡萄糖)、粘合劑(微晶纖維素)、崩解劑(交聯(lián)羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)PVP)、潤滑劑(硬酯酸鎂)以及吸收促進劑、吸附載體、香味劑、甜味劑、稀釋劑、賦形劑、潤濕劑等。
所述藥物組合物可按本領域常規(guī)方法制備并可以通過腸道或非腸道或局部途徑給藥?？诜苿┌ㄆ瑒?、顆粒劑、膠囊、懸浮液、溶液等，非腸道給藥制劑包括注射液。局部給藥制劑包括如霜劑、軟膏劑、貼劑、噴霧劑等。
所述藥物的給藥途徑可以為口服、舌下、經(jīng)皮、經(jīng)肌肉或皮下、皮膚粘膜、尿道、陰道、靜脈等。
本發(fā)明的馬藺子甲素和/或其藥物組合物可用于多種腫瘤細胞的化療增敏，這些腫瘤包括但不限于食管癌、肺癌、胃腺癌、結(jié)腸腺癌、前列腺癌、乳腺癌、肝癌、黑色素瘤和宮頸癌。所述化療藥物包括但不限于抗代謝藥、轉(zhuǎn)錄抑制藥物、有絲分裂抑制藥物和干擾DNA復制藥物。
抗代謝藥是一類模擬正常代謝物質(zhì)，如葉酸、嘌呤堿、嘧啶堿等的化學結(jié)構(gòu)所合成的類似物，可對相關代謝物質(zhì)產(chǎn)生特異性的拮抗作用，從而干擾核酸、尤其是DNA的生物合成，抑制腫瘤細胞的分裂增殖。抗代謝藥為細胞周期特異性藥物，主要作用于S期。此類藥物包括但不限于5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil)、甲氨喋呤(methotrexate)等。
轉(zhuǎn)錄抑制藥物能嵌入DNA堿基對之間，與DNA形成復合體，影響RNA多聚酶的功能，阻斷RNA特別是mRNA的合成，進而影響蛋白質(zhì)合成，抑制腫瘤細胞的生長。屬細胞周期非特異性藥物。此類藥物包括但不限于阿霉素(doxorubicin，adriamycin，ADM)、放線菌素(dactinomycin，DACT)、柔紅霉素(daunorubicin，DNR)、普卡霉素(plicamycin；光輝霉素，mithramycin)等。
有絲分裂抑制藥物可與細胞紡錘絲微管蛋白結(jié)合，使其變性，從而影響微管裝配和紡錘絲的形成。是作用于M期的藥物。此類藥物包括但不限于長春新堿(vincristine，VCR)、表鬼臼素(podophyllotoxin)、紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇(docetaxel)等。
干擾DNA復制藥物可直接破壞DNA的結(jié)構(gòu)或抑制DNA拓撲異構(gòu)酶(DNAtopoisomerase)的活性從而抑制DNA的復制，屬細胞周期非特異性藥物。此類藥物包括但不限于抗生素{如絲裂霉素(mitomycin C，MMC)、博來霉素(bleomycin，BLM)}、拓撲特肯(Topotecan)、依立替康(Irinotecan)、順鉑(cisplatin)等。本發(fā)明優(yōu)選順鉑。
用本發(fā)明的馬藺子甲素和/或其藥物組合物進行化療增敏的方法是給予需要化療增敏減毒的哺乳動物患者化療藥物和增敏減毒有效量的馬藺子甲素或含馬藺子甲素的藥物組合物，當所述腫瘤為白血病、腦瘤、肺癌或?qū)m頸癌時，所述化療藥物不是環(huán)磷酰胺。其中所述哺乳動物腫瘤患者包括人類和非人類。
本發(fā)明的馬藺子甲素和/或其藥物組合物的用量可根據(jù)給藥途徑，患者的年齡和體重，所治療腫瘤的類型及嚴重程度的不同而不同，其日劑量可以是0.001～100mg/kg，可一次或多次給藥。
本發(fā)明的馬藺子甲素和/或其藥物組合物還可與化療藥物一起組成一種治療腫瘤的藥盒，它包括選自通式(I)化合物中的一種化合物；至少一種化療藥物；以及用藥說明。優(yōu)選的方案為，當所述化合物為馬藺子甲素時，所述腫瘤選自食管癌、胃腺癌、前列腺癌或肺腺癌，所述化療藥物為順鉑；當所述化合物為馬藺子乙素時，所述腫瘤選自食管癌、胃腺癌、前列腺癌或肺腺癌，所述化療藥物為順鉑。


圖1 馬藺子甲素(IQA)與順鉑聯(lián)合抑制前列腺癌(DU145)細胞增殖。
圖2 馬藺子甲素(IQA)與順鉑聯(lián)合抑制胃腺癌(BGC-823)細胞增殖具體實施方式
以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。但并不意味著本發(fā)明僅限于此。
實施例1在細胞水平上利用MTT法檢測馬藺子甲素與順鉑聯(lián)合使用時對腫瘤細胞的殺傷作用。
實驗材料人腫瘤細胞株及其培養(yǎng)食管癌(Eca-109)、胃腺癌(BGC-823)、肺腺癌(SPC-A-1)、前列腺癌(DU145)細胞均購自中科院生化細胞研究所。細胞于含10％胎牛血清(Gibco)的RPMI-1640(Gibco)培養(yǎng)基中，在37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)。
藥物馬藺子甲素(IQ A)由山東新華制藥廠提供；注射用順鉑凍干粉，齊魯制藥廠生產(chǎn)，溶解于PBS，配制為2mg/ml溶液。
其他試劑MTT及DMSO均為Sigma公司產(chǎn)品。
實驗方法以MTT法測定兩種藥物單獨使用及聯(lián)合使用時對腫瘤細胞的殺傷毒性。
實驗步驟如下1.細胞經(jīng)胰酶消化并洗滌后懸浮于含10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，經(jīng)胎盤藍染色排除法計活細胞數(shù)，并調(diào)節(jié)細胞懸浮液密度至1×105細胞/ml。
2.在平底96孔板中，每孔加入100微升細胞，每孔中細胞總數(shù)為1×104。于37℃，5％CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。
3.每孔加入10微升以細胞生長培養(yǎng)基稀釋的樣品，使單獨反應時馬藺子甲素和順鉑的反應終濃度分別為100，30，10，3，1，和0.3ug/ml；在聯(lián)合用藥組，將相同濃度的馬藺子甲素和順鉑各5微升混和后加入，此時兩種藥物以1∶1比例共同作用于細胞。將相應量的DMSO加入不加藥的細胞中作為對照，不加藥物及DMSO的含細胞孔作為背景。每點作三個平行測試。
4.將加藥細胞在37℃，5％CO2細胞培養(yǎng)箱中保溫48小時。
5.每孔中加入10μl 5mg/ml MTT溶液，繼續(xù)在培養(yǎng)箱中保溫3～4小時。
6.將細胞板于1000rpm離心15分鐘，真空吸去培養(yǎng)液，加入150μl PBS洗滌后離心并小心地吸去溶液。
7.每孔加入150μl DMSO，置于搖床上以150rpm搖動15分鐘，使生成的甲簪晶體充分溶解。測定492nm光吸收值。
8.根據(jù)光吸收值計算馬藺子甲素處理后細胞相對存活率。計算公式如下 藥物對腫瘤細胞生長的抑制率(E％)＝100-細胞相對存活率實驗結(jié)果當?shù)锐R藺子甲素與順鉑以1∶1(w/w)比例聯(lián)合使用，測定對食管癌、肺腺癌和前列腺癌等腫瘤細胞的增殖抑制作用(或殺傷)時，聯(lián)合指數(shù)小于1，如表1所示，故兩者之間為聯(lián)合協(xié)同作用。
表1.馬藺子甲素與順鉑聯(lián)合用于對腫瘤細胞的增殖抑制(或殺傷)的聯(lián)合指數(shù)

權利要求
1.下述通式(I)的化合物或其可藥用鹽、前藥在制備對腫瘤化療藥物具有增敏減毒作用的藥物中的用途 其中，R1＝CnH2n+1或CnH2n-1，n＝2～20，它可為直鏈或支鏈；當R1＝CnH2n-1時，它可為環(huán)狀飽和基團或含有雙鍵的基團，其中雙鍵可位于直鏈或支鏈上的任何可能位置，雙鍵構(gòu)型可為順式或反式；R2為羥基或氫；其特征在于，當R1代表 R2代表氫，且所述腫瘤為白血病、腦瘤、肺癌或?qū)m頸癌時，所述化療藥物不是環(huán)磷酰胺。
2.權利要求1的用途，其中當R1代表 R2代表氫時，所述化合物為馬藺子甲素，所述腫瘤選自食管癌、胃腺癌、前列腺癌或肺腺癌。
3.權利要求2的用途，其中所述化療藥物選自5-氟尿嘧啶、紫杉醇、多烯紫杉醇、順鉑、甲氨喋呤、阿霉素、長春新堿、絲裂霉素、博來霉素、表鬼臼素、依立替康或拓撲特肯。
4.權利要求3的用途，其中所述化療藥物為順鉑。
5.權利要求1的用途，其中所述化療藥物選自抗代謝藥、轉(zhuǎn)錄抑制藥物、有絲分裂抑制藥物或干擾DNA復制藥物。
6.權利要求5的用途，其中所述化療藥物選自5-氟尿嘧啶、紫杉醇、多烯紫杉醇、順鉑、甲氨喋呤、阿霉素、長春新堿、絲裂霉素、博來霉素、表鬼臼素、依立替康或拓撲特肯。
7.權利要求6的用途，其中所述化療藥物為順鉑。
8.權利要求1的用途，其特征在于，當R1代表 R2代表氫時，所述化合物為馬藺子甲素，它可與化療藥物、放療藥物聯(lián)合使用。
9.權利要求1的用途，其中當R1代表(CH2)16CH3，R2代表氫時，所述化合物為馬藺子乙素，所述腫瘤選自食管癌、胃腺癌、前列腺癌或肺腺癌。
10.一種治療腫瘤的藥盒，它包括選自通式(I)化合物中的一種化合物；至少一種化療藥物；以及用藥說明。
11.權利要求10的藥盒，其中當所述化合物為馬藺子甲素時，所述腫瘤選自食管癌、胃腺癌、前列腺癌或肺腺癌；所述化療藥物為順鉑。
12.權利要求10的藥盒，其中當所述化合物為馬藺子乙素時，所述腫瘤選自食管癌、胃腺癌、前列腺癌或肺腺癌；所述化療藥物為順鉑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種馬藺子甲素及其衍生物、類似物的制藥用途，具體涉及馬藺子甲素、馬藺子乙素在制備化療增敏劑中的用途。本發(fā)明開發(fā)了馬藺子甲素、馬藺子乙素新的醫(yī)藥用途。
文檔編號A61K31/122GK1711994SQ20041004969
公開日2005年12月28日 申請日期2004年6月23日 優(yōu)先權日2004年6月23日
發(fā)明者嚴孝強, 崔玉敏, 張維漢, 左劍 申請人:和記黃埔醫(yī)藥企業(yè)有限公司