專利名稱：環(huán)維黃楊星d晶體，其一甲醇結(jié)晶體，其制備和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及環(huán)維黃楊星D晶體，其一甲醇結(jié)晶體，其制備方法及其在醫(yī)藥中的用途。本發(fā)明進一步涉及兩種晶體的生長方法。
背景技術(shù)：
環(huán)維黃楊星D(Cyclovirobuxinum D)(又名黃楊寧、黃楊堿等)，是治療心血管疾病的藥物或作為新藥開發(fā)的前體可廣泛用于醫(yī)療領(lǐng)域。環(huán)維黃楊星D(分子式為C26H46N2O)可從黃楊科植物小葉黃楊Buxus microphylla Sieb.etZucc.var.sinica Rehd.et Wils.及其同屬植物中提取精制得到。該產(chǎn)品作為中藥材被《中國藥典》(2000年版一部)收載。
環(huán)維黃楊星D是以中國小葉黃楊的木質(zhì)部分為原料提取的一種藥物有效成分。中國黃楊又名瓜子黃楊，有千年矮、白日紅、萬年青之稱，主產(chǎn)于長江以南。明朝李時珍《本草綱目》記載具有行氣活血、祛濕通絡(luò)的作用；《夕陽雜俎》《分類草藥性》《四川中藥志》《湖南中藥志》《浙江杭州中藥志》等經(jīng)典及地方志都有黃楊治療疾患的應(yīng)用。1969年空軍蕪湖機場衛(wèi)生隊的醫(yī)務(wù)人員發(fā)掘了安微四褐山地區(qū)流傳的治療心病的郭氏驗方“心病秘方”，該方中有六味藥黃楊、青木香、紫丹參、細(xì)辛、射干、川穹，黃楊為該方中的君藥。在以后的幾年中，該衛(wèi)生隊的醫(yī)務(wù)人員將這六味藥制成片劑，用于冠心病、風(fēng)心病的治療，取得了明顯的醫(yī)療效果。1974-1980年由南京軍區(qū)空軍后勤部衛(wèi)生處、江蘇省植物研究所等科研單位對“心病秘方”中的君藥黃楊木進行了研究，自此拉開了對小葉黃楊中的有效成分環(huán)維黃楊星D的研究序幕。經(jīng)過二十多年的研究和大量的臨床應(yīng)用，環(huán)維黃楊星D作為中藥材被收載于2000年藥典一部，以環(huán)維黃楊星D為主要原料的黃楊寧片作為中成藥也被收載于2000年藥典一部中，之后黃楊寧片又被收錄到國家社保品種的乙種，自此奠定了環(huán)維黃楊星D在我國醫(yī)藥中的地位。根據(jù)我們的初步調(diào)研估計，目前在中國大陸境內(nèi)，每年消耗環(huán)維黃楊星D約200kg左右，按照0.5mg/片的劑量估算相應(yīng)的片劑約為4億片，對應(yīng)產(chǎn)值約為人民幣1億元左右。如果按照每日劑量為3-6mg，120天為一個療程，則每年使用環(huán)維黃楊星D治療冠心病的患者在27.8-55.6萬人/次。由于環(huán)維黃楊星D顯著的療效和長期使用的安全性，目前，在中國藥品制劑的研究領(lǐng)域?qū)Νh(huán)維黃楊星D的新制劑的研究如火如荼，新的制劑的研究范圍有滴丸劑、分散片、舌下片、水分散體制劑、注射劑等，如果這些新型制劑研究獲得國家藥品監(jiān)督管理部門的注冊許可，環(huán)維黃楊星D的臨床使用量將會大增。
近期對環(huán)維黃楊星D的新的藥物制劑的研究過程中，一些研究人員以及國家藥品注冊審查人員對完全符合《中國藥典》(2000年版一部)收載的環(huán)維黃楊星D質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的環(huán)維黃楊星D的純度提出了質(zhì)疑?！吨袊幍洹窐?biāo)準(zhǔn)中涉及環(huán)維黃楊星D的純度的指標(biāo)主要有以下幾點的描述和要求(1)性狀為無色針狀結(jié)晶；(2)熔點為219-222℃；(3)其他生物堿在硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-二乙胺(5∶4∶0.4)為展開劑，以稀碘化鉍鉀為顯色劑，點樣量為10μg，除主斑點外，不得有其他斑點；(4)含量采用非水滴定法，含量不少于99.0％。我們檢索到1996年出版的“河南省藥品標(biāo)準(zhǔn)匯編”中收載的黃楊寧質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(環(huán)維黃楊星D早期的名稱之一是黃楊寧)，該標(biāo)準(zhǔn)涉及到純度的內(nèi)容有(1)性狀白色結(jié)晶性粉末；(2)熔點為217-222℃；(3)其他生物堿在硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-二乙胺(5∶4∶1)為展開劑，以稀碘化鉍鉀為顯色劑，點樣量為10μg，除主斑點外，不得有其他斑點。(4)含量采用非水滴定法，含量應(yīng)不得少于97.0％。(河南省藥品標(biāo)準(zhǔn)匯編1996參考文獻7)。這個標(biāo)準(zhǔn)與前述的中國藥典的標(biāo)準(zhǔn)比較，在形狀、熔點以及含量純度要求方面存在不同。
關(guān)于環(huán)維黃楊星D(Cyclovirobuxinum D)純度的最早的描述是“Cyclovirobuxinum D，C26H46ON2，熔點221-224℃，比旋光[α]D CHCl3+63o(C＝1，氯仿)”(K.S.Brow et al.Tetahedron Letters，2895(1964)參考文獻1)。其后主要是我國研究人員的報道，例如王立中等的研究“以氯仿-丙酮重結(jié)晶數(shù)次即得鱗片狀結(jié)晶，熔點214-216℃，比旋光[α]32D+40°(C＝1，氯仿)”(王立中等，小葉環(huán)常綠黃楊堿-D的分離與鑒定，中成藥研究，1979年第4期，24-26頁參考文獻2)；例如梁秉文等的研究“以氯仿-甲醇(1∶99)重結(jié)晶，得白色針狀結(jié)晶，熔點217.5-219.5℃(未校正)”(梁秉文等，藥學(xué)通報，1981年第16卷第4期，3-4頁，參考文獻3)；例如馮芳等的研究在上述《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)中的色譜系統(tǒng)下，將點樣量增加25倍來檢測響應(yīng)的雜質(zhì)，檢測限度以環(huán)維黃楊星D計為2.5μg(馮芳等，黃楊寧質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)改進研究，中國新藥雜志，2001年第5期，341-342，參考文獻4)；例如徐新軍等的研究采用柱前熒光衍生化RP-HPLC測定環(huán)維黃楊星D的含量，檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)“環(huán)維黃楊星D非水滴定法含量均在98％以上，而HPLC含量只有87％左右”(徐新軍等，柱前熒光衍生化RP-HPLC測定環(huán)維黃楊星D的含量，藥學(xué)通報，2002年第5期，359-361頁，參考文獻5)。另外，徐新軍采用液-質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS)對采用重結(jié)晶法和用柱層析法制備的環(huán)維黃楊星D進行了檢測后認(rèn)為“重結(jié)晶難于提高環(huán)維黃楊星D的含量，而柱色譜法則為降低有關(guān)物質(zhì)，提高環(huán)維黃楊星D含量的有效方法”[徐新軍等，HPLC/MS法與柱前衍生化HPLC/UV法測定環(huán)維黃楊星D有關(guān)物質(zhì)比較，中國藥科大學(xué)學(xué)報，2002，33(5)408-411參考文獻6]。
有關(guān)的專利如CN 92107315.1，“環(huán)維黃楊星的分離提取工藝及其片劑”，其中敘述“在苯(或環(huán)己烷)內(nèi)得到環(huán)維黃楊星D(cyclovirobuxinc D)結(jié)晶，熔點為217-222℃”。還有CN 03113000.3的“環(huán)維黃楊星D的純化方法以及它的制劑”描述了用硅膠柱純化環(huán)維黃楊星D的方法，雖然該專利說純化后的環(huán)維黃楊星D為“高純度”，但是既沒有描述用何種方法來證明這種“高純度”環(huán)維黃楊星D所達到的純度狀況，也沒有描述這種“高純度”環(huán)維黃楊星D的具體特征和形狀。因此，這種“高純度”的品質(zhì)受到質(zhì)疑。另外，CN 02117899.2的“環(huán)維黃楊星D制備及分散體制劑”中公開使用多種分離柱制備環(huán)維黃楊星D純品的方法，“并經(jīng)高效液相色譜測定，含量在99.99％以上”。還有許多環(huán)維黃楊星D藥物制劑研究的其他專利文件如CN 03112999.4，03117405.1，03120710.3和02100455.2等，雖然都提到了黃楊寧“單體”、“純品”的概念，但都沒有描述這些“單體”和“純品”的具體的特征和形狀，以及證明這些“單體”和“純品”的分析檢測方法。因此，這種純品的純度僅僅是相對的純度。在其他文獻中，所報導(dǎo)的環(huán)維黃楊星D(黃楊寧)晶體一般都是針狀結(jié)晶，但是其三維尺寸沒有一個超過毫米級，最多在一維尺寸超過毫米級。涉及這類產(chǎn)品的外國專利文獻也有不少，如JP56077300，GB934802，SU1786807，SU677409和RU2004548等，其三維尺寸同樣不超過毫米級。
結(jié)合上述參考文獻分析可見在環(huán)維黃楊星D的結(jié)晶形狀、熔點方面有明顯的不同，并且比旋度也有所不同。根據(jù)專業(yè)性常識判斷對于分子式雖然相同但是其結(jié)晶形狀和熔點不同的物質(zhì)，其物質(zhì)的純度以及其他理化特性很可能不同。因此，我們對完全符合《中國藥典》(2000年版一部)收載的環(huán)維黃楊星D質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的環(huán)維黃楊星D的純度提出了質(zhì)疑，因為環(huán)維黃楊星D的純度直接影響藥物制劑的內(nèi)在質(zhì)量，進而還會對環(huán)維黃楊星D的生物活性和臨床用藥安全產(chǎn)生影響。因此，研究并制備具有確定特性的環(huán)維黃楊星D高純度產(chǎn)品是當(dāng)前在環(huán)維黃楊星D的藥物研究領(lǐng)域中需要解決的重要問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明一個目的是提供一種環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體，其化學(xué)式為C27H50N2O2，屬于單斜晶系，空間群P2(1)，晶胞尺寸約為a＝7.2538(15)A、b＝7.8851(16)A、c＝23.069(5)A、α＝γ＝90°、β＝94.30°。由于是我們最新發(fā)明的晶體，故我們稱之為環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體或黃楊寧一甲醇結(jié)晶體。
本發(fā)明另一個目的是提供一種高純度環(huán)維黃楊星D晶體，其三維尺寸至少在毫米級以上，經(jīng)單晶晶體檢測其R indices(all data)參數(shù)項下的R1值小于0.129。所述高純度，除可用上述晶體尺寸和晶體檢測的R指數(shù)的表征外，還可使用晶體的粉末X衍射檢測或薄層色譜(TLC)檢測的有關(guān)數(shù)據(jù)來表征。例如，本發(fā)明高純度黃楊寧晶體，其晶體粉末的X射線衍射檢測的第二最大衍射峰(2θ衍射角為16.32±2％)的相對強度小于49.42％、第三最大衍射峰(2θ衍射角為15.41±2％)的相對強度小于33.17％。在薄層色譜檢測時，對其采用的TLC色譜系統(tǒng)為薄層板采用硅膠G薄層板；展開劑采用氯仿∶己烷∶甲醇∶氨水＝2.5∶4∶1∶0.1；顯色劑采用稀碘化鉍鉀試液；點樣量為100～250μg。檢測的薄層板上的主斑點與不可去除雜質(zhì)斑點(不可去除雜質(zhì)斑點的解釋見下面有關(guān)內(nèi)容)之間沒有雜質(zhì)斑點出現(xiàn)，并且雜質(zhì)斑點的個數(shù)應(yīng)小于3，如要求高純度產(chǎn)品(例如達到對照品級的純度99.5％以上)，則雜質(zhì)斑點的個數(shù)為1。
本發(fā)明又一個目的是提供一種環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的制備方法，包括將市售黃楊寧溶于有機溶劑，以重結(jié)晶方式溶液生長，其中溶劑包括至少80wt％的甲醇。
本發(fā)明再一個目的是提供一種環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的用途，用于制備兩種高純度的，但是三維空間尺寸大小不同的環(huán)維黃楊星D晶體的制備方法，包括首先以重結(jié)晶方式溶液生長環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體，然后將其作為原料進行溶液生長環(huán)維黃楊星D晶體。
本發(fā)明還有一個目的是提供一種環(huán)維黃楊星D晶體的用途，用于制備醫(yī)藥，特別是治療心血管系統(tǒng)的藥物。
黃楊寧的質(zhì)量取決于它的純度，而高純度黃楊寧特別不易得到。
非常有意義的是，在研究中我們出乎意料地發(fā)現(xiàn)，采用適當(dāng)?shù)娜苊胶臀锪吓c溶劑比以及合適的結(jié)晶溫度，就能生長一種新晶體，即環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體。以該晶體為原料，通過簡單的重結(jié)晶式的溶液生長方法就能制備一種高純度大尺寸的環(huán)維黃楊星D晶體。
本發(fā)明所制備的環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的形狀有多種，一般優(yōu)選矩形(也可以描述為扁塊狀、板塊狀)，在采用薄層色譜(TLC)檢測時其中的雜質(zhì)斑點大幅度下降。一次重結(jié)晶溶液生長得到的矩形形態(tài)的結(jié)晶體中，環(huán)維黃楊星D之外的其他成分雜質(zhì)，一般由原來的7～8％左右即可純化將雜質(zhì)降到1％左右或1.5％以下，經(jīng)過二次重結(jié)晶溶液生長得到的矩形狀形態(tài)的結(jié)晶體，可以純化將雜質(zhì)降到0.5％左右，甚至更高。雜質(zhì)定量檢測的方法采用下文所述薄層色譜(TLC)系統(tǒng)1進行自身對照法檢測。
更為有趣的是即便是采用相同的溶媒，如果物料與溶媒的比例關(guān)系不同或結(jié)晶的溫度條件不同，所得到的結(jié)晶體的形狀也不同。但是，仍然以尺寸體積較大的矩形狀結(jié)晶體的純度最好。這是因為在溶液生長晶體領(lǐng)域，雜質(zhì)越多，晶體尺寸越難以長大；晶體尺寸本身就是衡量晶體生長質(zhì)量和技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)之一。反過來，控制晶體生長條件，使晶體逐漸長大，就能夠得到高純度環(huán)維黃楊星D晶體。為此，我們經(jīng)過大量試驗，從而實現(xiàn)本發(fā)明。
純化環(huán)維黃楊星D的現(xiàn)有技術(shù)目前可查詢的有兩種方法，早期的是簡單多次重結(jié)晶的方法，這種方法目前制備的純度很低，雜質(zhì)成分至少為5種，總雜質(zhì)含量在7～8％左右，無法滿足作為單體藥物制備藥品的一般純度(一般純度應(yīng)達到98.5％以上)要求。較新的是采用柱層析分離的方法(見專利CN03113000.3)，這種方法的生產(chǎn)成本高，難以得到穩(wěn)定的工藝，很難實現(xiàn)工業(yè)化規(guī)模的生產(chǎn)。同時我們對使用這種工藝制備的目前國內(nèi)純度最高的環(huán)維黃楊星對照品(由國家生物制品藥品鑒定所頒發(fā))進行檢測，其純度也不能滿足對照品的純度要求(對照品的純度要求達到99.5％以上，現(xiàn)行對照品至少含3種成分的雜質(zhì)，純度低)。
本發(fā)明人通過長期研究試驗出乎意料地發(fā)現(xiàn)一種環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體，該結(jié)晶體很容易純化，并且該結(jié)晶體很容易失去結(jié)晶甲醇而變成黃楊寧。因此提出一種通過黃楊寧一甲醇制備黃楊寧的方法。反之，不管采用何種方法進行重結(jié)晶，如果沒有得到環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體，無論所得任何形狀的環(huán)維黃楊星D晶體，如矩形塊狀，針狀，以及其他如鱗狀或無定形狀等，不但晶體尺寸小而且無法得到純度為98.5％以上(雜質(zhì)為1.5％以下)的原料藥產(chǎn)品和純度為99.5％以上的對照品(在使用單體作為原料的藥品生產(chǎn)中合乎要求的對照品與合乎要求的原料藥純度同等重要)。這個結(jié)果相同于徐新軍等人在上述參考文獻6所中得出的結(jié)論“重結(jié)晶難于提高環(huán)維黃楊星D含量，而柱色譜則為降低有關(guān)物質(zhì)，提高環(huán)維黃楊星D含量的有效方法”。我們克服這種技術(shù)偏見，利用重結(jié)晶溶液生長方法得到一種新晶體，即環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體，再通過變換溶劑生長得到高純度大尺寸環(huán)維黃楊星D晶體。
本發(fā)明采用重結(jié)晶方法生長環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體，其要點主要有溶劑因素、飽和溶解度因素、溫度因素和晶體生長速度。該方法包括重結(jié)晶黃楊寧，其中溶劑包括至少80wt％的甲醇，冷卻速度0.2-15℃/hr。
溶劑首選純甲醇作為溶劑，當(dāng)然，也可以在甲醇溶液中加入其他溶劑，例如水、乙醇、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、環(huán)己烷等。但是，通過分析本發(fā)明新晶體的晶胞結(jié)構(gòu)認(rèn)為，形成本環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的關(guān)鍵是甲醇分子在兩個環(huán)維黃楊星D分子的N2之間形成一種類似氫鍵的弱鍵。如果在甲醇溶劑中含有其他溶劑的分子，可能由于空間結(jié)構(gòu)位置的限制其他溶劑分子不能與環(huán)維黃楊星D分子中的N2形成分子間作用力而無法形成類似于環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體這樣生長體積較大的晶胞。所以，其他溶劑加入甲醇溶液對本發(fā)明結(jié)晶體的生成，從理論上講應(yīng)該沒有積極的意義。但如果出于其他考慮，例如降低甲醇溶液的飽和度等因素，加入其他溶劑未嘗不可，也許會有利于環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的生長。我們的實驗證明，當(dāng)在甲醇溶液加入其他溶劑時，如果甲醇的比例不是過低時，例如不小于80wt％，則并不影響環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的生成和生長。
本發(fā)明制備環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的方法中，對溶質(zhì)與溶劑的比例沒有嚴(yán)格限制；一般為1∶15-26之間，換算成百分濃度為3％-7％(w/w或w/v)，優(yōu)選1∶22左右，換算成百分濃度為4.5％(w/w或w/v)左右。
同樣對回流的溫度和時間也沒有嚴(yán)格限制，回流溫度一般采用溶媒沸點溫度-高于沸點10℃，優(yōu)選高于沸點5℃左右?；亓鲿r間為5-30分鐘，優(yōu)選10-20分鐘，更優(yōu)選15分鐘。取決于選擇的溶劑，溶劑/溶質(zhì)等因素。
回流時或回流后可選地進行過濾，以便進一步去除雜質(zhì)；之后進行晶體生長。控制晶體生長的關(guān)鍵因素是控制溶液的冷卻速度，按照溶液生長晶體基本原理的要求，本領(lǐng)域技術(shù)人員通過常規(guī)優(yōu)選試驗很容易得到最佳生長條件。其中可加或不加籽晶，本發(fā)明優(yōu)選加入籽晶。冷卻速度一般在0.2-15℃/hr之間，優(yōu)選0.5-10更優(yōu)選1-5℃/hr。冷卻速度過高，結(jié)晶速度快，就會在溶液中很快析出結(jié)晶。但是，這些結(jié)晶物往往形成針狀、或小鱗片狀、或無定形粉末狀結(jié)晶體，其中就會攙雜較多的其他成分的雜質(zhì)，并且它們的晶胞結(jié)構(gòu)也與環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的不同。本發(fā)明優(yōu)選得到矩形塊狀結(jié)晶體，因為它尺寸大，純度高，是一種從來沒有過的新的環(huán)維黃楊星D結(jié)晶體。當(dāng)然，在生長過程中，冷卻速度并非一成不變。析出籽晶前后冷卻速度最好不大，隨著籽晶生長而加大冷卻速度，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。如果地域和氣候環(huán)境合適，甚至通過自然冷卻同樣能夠得到本發(fā)明的結(jié)晶體。然而冷卻速度過低時，經(jīng)濟上不合算，不利于節(jié)能。
在發(fā)明環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的基礎(chǔ)上，本發(fā)明提供一種高純度、大尺寸的環(huán)維黃楊星D晶體的制備方法，其中包括先制備環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體，再用其作為原料于有機溶劑中進行溶液生長制備環(huán)維黃楊星D晶體。其中溶劑包括諸如乙醇、甲醇、氯仿、丙酮、環(huán)己烷或其混和物等。由于環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體本身就是高純度，所以容易得到高純度大尺寸的環(huán)維黃楊星D晶體。這種高純度環(huán)維黃楊星D的晶胞結(jié)構(gòu)與采用現(xiàn)有技術(shù)制備的體積很小的環(huán)維黃楊星D結(jié)晶體的晶胞結(jié)構(gòu)相同，但是，解決了現(xiàn)有技術(shù)產(chǎn)品純度無法提高的困難。與生長環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體時的工藝條件類似，但溶劑優(yōu)選乙醇，控制冷卻速度也是關(guān)鍵，同樣按照溶液生長晶體基本理論，通過常規(guī)優(yōu)選試驗即可得到最佳生長參數(shù)，無需贅述。
另外，還可以使用本發(fā)明結(jié)晶體以及使用甲醇、乙醇等可以將其溶解的有機溶劑作為溶劑，但是投料比例(或稱過飽和濃度)和結(jié)晶溫度與上述條件相差較大時，也可以得到結(jié)晶體尺寸與現(xiàn)有技術(shù)相當(dāng)?shù)尼槧罨蝼[片狀環(huán)維黃楊星D晶體，這樣得到環(huán)維黃楊星D晶體的三維空間尺寸雖然較小，但是，其純度也相當(dāng)于本發(fā)明環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的純度；與現(xiàn)有技術(shù)低純度的環(huán)維黃楊星D晶體(雜質(zhì)含量超過1.5％，一般在7～8％左右)相比，具有較大的差異，其重要差異特點就是在制備過程中必須經(jīng)過生成本發(fā)明環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的過程，其產(chǎn)品特征是單晶X-衍射測定的Rindices(all data)參數(shù)項下的R1值小于1.29，較佳的在0.09左右，以及采用本說明書所描述的TLC系統(tǒng)1進行檢測(自身對照法)除主斑點之外雜質(zhì)斑點不超過三個，且檢測到的雜質(zhì)小于1.5％，尤其是在主成分斑點與不可去除的雜質(zhì)成分斑點(定義見下或見附圖1的說明)之間不出現(xiàn)雜質(zhì)成分的斑點。
采用X射線檢測有機晶體的單晶時，Rindices(all data)參數(shù)項下的R1值十分重要。該R1值表示了測定結(jié)果與真實情況的符合程度，與純度和完整性密切相關(guān)。在測量的晶胞參數(shù)相當(dāng)時，該R1值完全取決于物質(zhì)的純度。本發(fā)明高純度環(huán)維黃楊星D晶體與現(xiàn)行的《中國藥典》(2000年一部)收載的環(huán)維黃楊星D標(biāo)準(zhǔn)描述的針狀晶體和前期文獻描述的鱗片狀結(jié)晶體是不同的，區(qū)別在于R1值代表的純度，這個純度還可以通過本說明書所描寫的薄層層析(TLC)系統(tǒng)進行檢測來驗證。
對于由植物中提取的具有活性成分的單體物質(zhì)而言，單體的純度級別對于該活性物質(zhì)作為藥品使用有決定性的意義。一般情況下，單體的純度應(yīng)該達到98％以上，最好達到98.5％以上，因此，當(dāng)單體的純度低于98％以下時，一般不再將其稱之為單體，一般也不再將其作為單體藥物使用。因此，將黃楊寧的雜質(zhì)控制在1％左右或1.5％以下對所制備的黃楊寧藥品的質(zhì)量而言，不言而喻，可帶來顯著的進步，具有非常重要的意義。
我們對市售的環(huán)維黃楊星D的小針狀(或描述為小棒狀)結(jié)晶體以及由此制備出來的本發(fā)明黃楊寧一甲醇環(huán)維黃楊星D結(jié)晶體和通過黃楊寧一甲醇環(huán)維黃楊星D結(jié)晶體制備的高純度環(huán)維黃楊星D晶體進行了對比分析，結(jié)果如下1、外觀和外觀尺寸，如下表1所示表1結(jié)晶體的外觀描述

2、用本說明書下述的TLC系統(tǒng)1對上述表1中的三種結(jié)晶體以及由中國生物制品藥品鑒定所購買的環(huán)維黃楊星D對照品(批號888-200001，此對照品是被目前國內(nèi)公認(rèn)的最純的環(huán)維黃楊星D物質(zhì))進行雜質(zhì)檢測分析，結(jié)果如附圖和下表2所示。
附圖1的說明附圖1所描述的是采用本說明書下述的TLC系統(tǒng)1所進行的分析的薄板結(jié)果圖。圖中A為樣品點樣點，B為展開溶劑的前沿，1、2、3、4、5、6為各成分在薄板上顯示的斑點。其中斑點4為環(huán)維黃楊星D的主成分斑點，其他為雜質(zhì)成分的斑點。表示各成分斑點位置的參數(shù)是各斑點的Rf值。由于在薄層分析中分析條件的微小改變都會造成斑點的Rf值的變動，所以1～6各斑點的Rf值的范圍依次為0.30～0.58、0.35～0.60、0.4～0.63、0.44～0.70、0.55～0.79、0.58～0.82，甚至在這個范圍的基礎(chǔ)上還會擴大一些，但是，各成分的斑點排列順序不會改變。
表2根據(jù)附圖對各結(jié)晶體以及對照品TLC檢測的文字描述(點樣量100～250μg)

對表2補充說明在制備環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體時獲得高純度的產(chǎn)品一般需要二次重結(jié)晶，此時的雜質(zhì)一般低于0.5％以下。但是，在制藥實踐中，作為單體原料藥品一般主成分含量在98％或98.5％以上就可滿足純度的要求，所以，可采用一次重結(jié)晶的產(chǎn)品。此時，產(chǎn)品除4位的主成分斑點外在2、3、6位有雜質(zhì)斑點，其中2位的雜質(zhì)斑點極其微不易觀察，總雜質(zhì)量在1％左右。在通過環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體制備高純度環(huán)維黃楊星D晶體時，高純度環(huán)維黃楊星D晶體的純度與所使用的環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的純度相當(dāng)，僅在6位的雜質(zhì)略增加0.2％左右，并不增加新的雜質(zhì)斑點。這一現(xiàn)象說明一個問題，就是在環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體轉(zhuǎn)化為黃楊寧針狀(或棱狀)晶體的過程中，環(huán)維黃楊星D分子被少量的轉(zhuǎn)化為(或稱降解)6位的雜質(zhì)成分。經(jīng)下面描述的質(zhì)譜測定分析，6位的雜質(zhì)成分的分子量在385左右，比主成分的分子量減少一個甲基的分子量，說明在轉(zhuǎn)化的過程中，主成分的分子丟掉了一個甲基。這個分析對環(huán)維黃楊星D的純化過程中6位的雜質(zhì)來源和難以去除的現(xiàn)象提供了實驗依據(jù)。
上述TLC檢測對目前國內(nèi)公認(rèn)的最純的環(huán)維黃楊星D與本專利所描述的高純度環(huán)維黃楊星D晶體的區(qū)別提供了實驗依據(jù)，兩者之間不僅僅是外形體積尺寸的差異，更為主要的差異是TLC檢測證明的所含的雜質(zhì)成分的差異，對照品在5位上比高純度黃楊寧多了一個雜質(zhì)斑點(或多了一個雜質(zhì)成分)，這一差異也證明了本發(fā)明比現(xiàn)有技術(shù)所具有的先進性。
通過本發(fā)明的研究，我們認(rèn)為TLC分離檢測到的現(xiàn)有技術(shù)生產(chǎn)的環(huán)維黃楊星D中在的1、2、3、5、6位雜質(zhì)成分應(yīng)該是與主成分理化性質(zhì)極為接近的其他生物堿成分，其中1、2、3、5位的成分為吸附雜質(zhì)，6位的成分為吸附和/或降解雜質(zhì)，因為在成品中6位的雜質(zhì)是主要雜質(zhì)，而對提取過程的母液的TLC分析，6位的雜質(zhì)非常少，明顯的不是主要雜質(zhì)成分。
我們將附圖1中的4位成分斑點定義為主成分斑點，將6位成分斑點定義為不可去除雜質(zhì)成分斑點，其他位置的斑點定義為可去除雜質(zhì)斑點。
需要進一步明確的是在采用TLC系統(tǒng)1的檢測時，環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體和高純度黃楊寧環(huán)維黃楊星D晶體在5位上(或在主成分斑點與不可去除雜質(zhì)斑點之間)不出現(xiàn)雜質(zhì)斑點。
3、對市售環(huán)維黃楊星D和由市售產(chǎn)品制備的環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體以及由環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體制備的高純度環(huán)維黃楊星D晶體進行單晶分析的結(jié)果見下表3表3三種晶體的晶胞參數(shù)和對于p21標(biāo)示碼的結(jié)構(gòu)精細(xì)度(Crystal data and structure refinement for p21)


單晶測定結(jié)果的分析和結(jié)論由上述單晶測定參數(shù)我們首先可以看出，現(xiàn)有技術(shù)黃楊寧針狀結(jié)晶體與本發(fā)明的環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體雖然同屬單斜晶系，但是，它們的晶胞參數(shù)不同。兩種晶體進行比較可看出環(huán)維黃楊星D在重結(jié)晶的溶液生長過程中，與甲醇分子構(gòu)成了一種新的化合物，這種新的化合物的分子量是434.69，比環(huán)維黃楊星D的分子量正好多了一個甲醇的分子量，與之相對應(yīng)的還有化學(xué)式，為C27H50N2O2。
附圖2、3、4、5顯示了現(xiàn)有技術(shù)針狀結(jié)晶體與本發(fā)明環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的空間構(gòu)形。由圖2和3可見，針狀結(jié)晶體在形成晶胞時，是通過環(huán)維黃楊星D分子中N1與另一個環(huán)維黃楊星D分子中的O1上的H，依靠分子間作用力(氫健)結(jié)合形成晶胞。由圖4和5可見環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體除了與上述針狀結(jié)晶體在N1和O1上的H具有相同的結(jié)構(gòu)外，在環(huán)維黃楊星D分子的N2上分別與兩個甲醇分子進行分子間結(jié)合，其中N2與一個甲醇分子羥基的氫分子形成分子間作用力結(jié)合成健，N2上的H與另一個甲醇的羥基上的氧形成分子間作用力結(jié)合成健，并由此兩個環(huán)維黃楊星D分子與兩個甲醇分子共同形成晶胞。由于這種空間結(jié)構(gòu)，就決定了現(xiàn)有技術(shù)結(jié)晶體與本發(fā)明結(jié)晶體在晶體參數(shù)上的不同。這種一甲醇結(jié)晶體從來沒有文獻報道過，更沒有相應(yīng)的晶體測定參數(shù)問世。所以，本發(fā)明環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體是環(huán)維黃楊星D類的一種新的結(jié)晶體。
由上述單晶測定參數(shù)我們還可以看出，現(xiàn)有技術(shù)黃楊寧針狀結(jié)晶體與通過環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體制備的高純度環(huán)維黃楊星D晶體在晶胞結(jié)構(gòu)參數(shù)上(例如化學(xué)式、分子量、晶胞尺寸等)是基本一致的，說明這兩種晶體是一種晶體。但是，在描述晶體測定的精細(xì)度的參數(shù)上(例如Reflections collected/unique、2θ＝25.00的完整度、Data/restraints/paramrters、Final R indices[I＞2sigma(I)]、R指數(shù)(所有數(shù)據(jù))、絕對結(jié)構(gòu)參數(shù))環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體與高純度環(huán)維黃楊星D晶體的參數(shù)是基本一致的，說明這兩種晶體的純度是一致的。為簡化暫選擇R指數(shù)參數(shù)的R1作為晶體純度的表征。并且取市售小針狀環(huán)維黃楊星D晶體與高純度環(huán)維黃楊星D晶體R1值之差的中間0.129作為兩種晶體結(jié)構(gòu)相同但是純度不相同的區(qū)別參數(shù)值。實際上，還可以選擇例如具有差異較大的絕對結(jié)構(gòu)參數(shù)作為晶體純度的表征。
4、晶體粉末X-射線測定本次測定使用日本理學(xué)D/Max-3型X射線衍射儀，使用波長為1.5418，銅鈀。下表4、5、6所示的是相對峰高大于10％以上的或最大的前6～9個衍射峰的參數(shù)，具體衍射圖可見附圖6、7、8、9、10。
表4不同干燥情況的環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的X-射線衍射測量結(jié)果

由上面不同干燥情況的產(chǎn)品粉末X射線衍射測定結(jié)果可見，當(dāng)干燥溫度升高以后，衍射峰發(fā)生了一定的變化。但是，如果將干燥溫度繼續(xù)升高(120℃以下)，衍射峰的變化停止。這說明樣品中的微量溶劑和結(jié)晶體中的甲醇分子對產(chǎn)品的粉末X衍射有較大的影響。由于甲醇的沸點較低，所以，未干燥的環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的衍射圖的特征不穩(wěn)定。因此，本發(fā)明采用經(jīng)105℃干燥的環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體產(chǎn)品的衍射圖的特征作為環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的衍射圖的特征。但是，需要特別強調(diào)的是經(jīng)過105℃干燥的環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體遭到了破壞，結(jié)晶體中的甲醇分子在高溫下逃逸出結(jié)晶體。
表5售針狀環(huán)維黃楊星D晶體(同一批次，105℃干燥)的兩次X-射線衍射測量結(jié)果


表6高純度環(huán)維黃楊星D晶體(同一批次，105℃干燥)的兩次X-射線衍射測量結(jié)果

表5、6說明為了防止殘留溶劑的干擾，要求被測樣品在測定前在105℃干燥條件下干燥二小時后測定。根據(jù)表5、6檢測的結(jié)果和誤差分析，我們?nèi)煞N晶體的粉末X射線衍射圖的第二最大、第三最大衍射峰的衍射角(取小數(shù)點2位，衍射角偏差±2％以內(nèi))和衍射峰相對強度這二組參數(shù)的中間差值(取小數(shù)點2位)作為各自衍射圖的特征，具體數(shù)據(jù)見表下7所述。
表7市售針狀環(huán)維黃楊星D晶體與高純度環(huán)維黃楊星D晶體粉末X射線衍射的區(qū)別

附圖6、7、8、9、10說明圖6為未干燥環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體衍射圖；圖7為60℃干燥環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體衍射圖；圖8為105℃干燥環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體衍射圖；圖9為市售針狀環(huán)維黃楊星D晶體衍射圖；圖10為高純度環(huán)維黃楊星D晶體衍射圖。
5、其它測定我們還對這三種結(jié)晶體的熔點、溶解度、比旋度、核磁(1H NMR)、質(zhì)譜測定(直接進樣)、紅外等項目進行了對比測定，不同結(jié)晶體之間在這些檢測方面突出的特征不明顯，例如比旋度、核磁(1H NMR)、質(zhì)譜測定(直接進樣)、紅外相互之間都具有環(huán)維黃楊星D的基本結(jié)構(gòu)和基本特征，但是，在純度(即雜質(zhì))的檢測上有明顯的不同，例如熔點對于環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體和高純度環(huán)維黃楊星D晶體較市售小針狀晶體而言，熔距略小，熔點略偏高在223.6-224.9℃左右。售小針狀晶體的核磁(1H NMR)檢測在δ＝2.470，2.282，4.580，4.810處有明顯的雜質(zhì)峰，而其它兩種的雜質(zhì)峰明顯偏小或沒有。售小針狀晶體的質(zhì)譜測定(直接進樣)圖中m/z峰有386.8，403.0，414.9；其中m/z403.0為環(huán)維黃楊星D的m+1質(zhì)譜峰，m/z386.8，414.9為其他成分m+1質(zhì)譜峰，其中m/z386.8可能是環(huán)維黃楊星D分子中N1上的甲基(C20)失去后的產(chǎn)物。m/z414.9很可能是環(huán)維黃楊星D分子中N1上的H被甲基取代的產(chǎn)物(C27H48N2O)，而其它兩種晶體的質(zhì)譜圖相對比較純。在紅外圖譜中，三種晶體基本骨架特征峰是一致的。溶解度檢測也沒有顯著的差異。
上述這些檢測說明三種晶體雖然環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體在晶體形成時多了一分子的甲醇，但是，由于甲醇與環(huán)維黃楊星D的分子依靠分子間作用力相結(jié)合，當(dāng)晶體被破壞以后，晶體仍然保持了環(huán)維黃楊星D分子所具備的基本特性。
通過上述的分析可見，我們研究并制備的黃楊寧(環(huán)維黃楊星D)一甲醇結(jié)晶體在本質(zhì)上與現(xiàn)有技術(shù)環(huán)維黃楊星D晶體不是同一物質(zhì)，是一種新的結(jié)晶體；這種環(huán)維黃楊星D的結(jié)晶體在以前的文獻中從來沒有報道過，是本專利發(fā)明人的新發(fā)明。由于這種新結(jié)晶體的出現(xiàn)，為環(huán)維黃楊星D的純化提供了簡捷方便的技術(shù)路線，使采用重結(jié)晶方法純化環(huán)維黃楊星D得到了實現(xiàn)。并且，由于這種進入結(jié)晶體中的甲醇很容易去掉。隨著甲醇的去除，這種新的結(jié)晶體在空間結(jié)構(gòu)上就回復(fù)到現(xiàn)有技術(shù)環(huán)維黃楊星D晶體的分子空間結(jié)構(gòu)。所以，這種新型的一甲醇環(huán)維黃楊星D結(jié)晶體，它與現(xiàn)在市售的小針狀環(huán)維黃楊星D結(jié)晶體相比，雖然晶體結(jié)構(gòu)不同，但是晶體破壞以后其分子結(jié)構(gòu)一樣，但純度變高。以環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體為原料仍然采用重結(jié)晶方法但變換結(jié)晶條件可將環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體還原為與現(xiàn)有技術(shù)制備的市售環(huán)維黃楊星D晶體的晶體結(jié)構(gòu)一樣的環(huán)維黃楊星D晶體，但是，這種新的環(huán)維黃楊星D晶體的純度得到了顯著的提高。由于通過本發(fā)明使環(huán)維黃楊星D的純度得到了顯著的提高，不僅可以直接的提高現(xiàn)用藥品的質(zhì)量，還可以預(yù)見由于黃楊寧單體的純度得到了顯著的提高使其藥理活性將會更好，也就具有更大的醫(yī)療價值。并且由于黃楊寧單體的純度得到了提高，為在以黃楊寧為前體藥物的新藥開發(fā)研究中奠定更為科學(xué)的基礎(chǔ)。
在制備環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的過程中，采用薄層色譜(TLC)進行純度檢測是必須的。然而，有效的、高靈敏度的TLC色譜系統(tǒng)是需要經(jīng)過發(fā)明創(chuàng)造性的研究才能獲得。本發(fā)明所使用的兩種TLC色譜系統(tǒng)正是在本專利發(fā)明人的艱苦研究下獲得的，它是制備環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的過程中必須使用的手段。因此，本專利下面所描述的兩種TLC色譜系統(tǒng)屬于本發(fā)明系列的技術(shù)范疇。
TLC色譜系統(tǒng)1薄層板硅膠G薄層板；展開劑∶氯仿∶己烷∶甲醇∶氨水＝2.5∶4∶1∶0.1；顯色劑稀碘化鉍鉀試液；點樣量100～250μg；檢測靈敏度0.1μg左右。根據(jù)環(huán)境不同，上述展開劑可以進行調(diào)整氯仿∶己烷∶甲醇∶氨水＝2～3∶2～4∶1∶0.06～0.15。其中己烷可以用正己烷替代。
TLC色譜系統(tǒng)2薄層板硅膠G薄層板；展開劑氯仿∶甲醇∶丙酮∶乙酸乙酯∶氨水＝6.5∶1。6∶2∶1.5∶0.5；顯色劑稀碘化鉍鉀試液；點樣量100～250μg；檢測靈敏度0.1μg左右。根據(jù)環(huán)境不同，上述展開劑可以進行調(diào)整氯仿∶甲醇∶丙酮∶乙酸乙酯∶氨水＝5～7∶1.6∶2∶1.5∶0.4～0.6。
本發(fā)明環(huán)維黃楊星D晶體可廣泛用于醫(yī)藥。特別是治療心血管疾病的藥物。例如，經(jīng)過粉碎的本發(fā)明環(huán)維黃楊星D晶體(粉碎的粒徑要盡可能的小，優(yōu)選1-5μm左右。若微粒尺寸更小，因為存在電荷效應(yīng)可能會影響藥物的體內(nèi)吸收)，然后可以制成片劑、膠囊劑、舌下片、口含片、快速口崩片、分散片、滴丸劑、干混懸劑等單方藥物制劑。由于本品味道較苦，因此，在制備口服制劑時可以采用藥劑學(xué)常規(guī)的掩蓋苦味的方法對本品掩蓋苦味，使所制備的口服制劑味更適合口服。通常的掩蓋苦味的方法例如甜味劑、酸味劑、香味劑等掩蓋苦味；使用包合劑對本品進行包合，例如使用環(huán)糊精包合掩蓋其苦味等。
此外，在單方制劑的基礎(chǔ)上，可使用本發(fā)明產(chǎn)品與冰片、燈盞花素、葛根素、銀杏黃酮、槲皮素、蘆丁等其他心血管藥物組成復(fù)方藥物制劑，能更好地用于心血管疾病的治療。
本發(fā)明產(chǎn)品還可與無機酸和有機酸形成可溶性的環(huán)維黃楊星D，這種可溶性的的環(huán)維黃楊星D也同樣具有較高的純度，可直接作成諸如注射劑的劑型。這種可溶性的環(huán)維黃楊星D可以使用包合材料進行包合掩蓋其苦味后，作成口服液、口含片、舌下片。上述這些制劑的制備可以在通過本發(fā)明獲得純度達到98.5％的高純度環(huán)維黃楊星D后，本領(lǐng)域的專業(yè)人員采用藥學(xué)領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)完成上述制造并非難事。
由于本發(fā)明產(chǎn)品的高純度特性，使它在以此為前體藥物進一步制備新的藥物上具有特別美好的前景。例如將本發(fā)明產(chǎn)品作為藥物前體，采用一定的化學(xué)合成方法對本品進行結(jié)構(gòu)修飾，尤其是對N1和N2上的甲基，對C2上的羥基，以及對C18、C19、C21、C22、C23、C24、C25進行化學(xué)結(jié)構(gòu)的修飾，意味著誕生新的心血管治療藥物，其潛能巨大。完全可以預(yù)料，使用本發(fā)明產(chǎn)品制備的新藥物制劑，對進一步提高環(huán)維黃楊星D的臨床治療作用可以達到意想不到的好效果。而在完成高純度的一甲醇環(huán)維黃楊星D結(jié)晶體的基礎(chǔ)上，采用藥學(xué)領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)完成上述制造同樣并非難事。
對于上述藥物制劑和藥物結(jié)構(gòu)修飾或改造的技術(shù)，雖然在本發(fā)明之前，就有多人使用針狀或其他所謂高純度的環(huán)維黃楊星D單體進行了上述研究；但是，與本發(fā)明所述的一甲醇環(huán)維黃楊星結(jié)晶體進行的上述研究是不可比擬的，因為一甲醇環(huán)維黃楊星D結(jié)晶體是一種從未報道過的新晶體。


圖1TLC系統(tǒng)1分析的各成分斑點位置示意2現(xiàn)在市售的小針狀環(huán)維黃楊星D晶體的分子結(jié)構(gòu)3市售的小針狀環(huán)維黃楊星D晶體的單層晶體結(jié)構(gòu)4是本發(fā)明環(huán)維黃楊星D一甲醇晶體的分子結(jié)構(gòu)5環(huán)維黃楊星D一甲醇晶體的單層晶體結(jié)構(gòu)6為未干燥環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體衍射7為60℃干燥環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體衍射8為105℃干燥環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體衍射9為市售針狀環(huán)維黃楊星D晶體衍射10為高純度環(huán)維黃楊星D晶體衍射圖。
由于高純度環(huán)維黃楊星D晶體的結(jié)構(gòu)圖與小針狀環(huán)維黃楊星D晶體的完全一樣，所以本說明書未再附高純度環(huán)維黃楊星D晶體的分子結(jié)構(gòu)和單層晶體結(jié)構(gòu)圖。
具體實施例方式
現(xiàn)在結(jié)合實施例或?qū)嵤┓桨高M一步詳述本發(fā)明，顯然，實施例或方案僅供說明絕非限制。
實施方案1(環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的制備1)取市售環(huán)維黃楊星D原料1份，加純甲醇22份((w/w或w/v)，于80℃水浴上加熱回流15分鐘，趁熱抽濾。將60℃濾液以0.5℃/hr冷卻速度冷卻到45℃，如有必要可加少量晶種，然后以4℃/hr速度降溫到15～25℃之間，逐漸生長成為矩形塊狀，必要時也可以將溫度降到4～8℃的冷藏室溫度進行晶體生長。抽濾，得環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的一次重結(jié)晶的產(chǎn)品，收率約40％左右，母液可用作另一個一次重結(jié)晶的溶液，用該溶液進行另一次的重結(jié)晶的收率可達80％以上。
對一次重結(jié)晶的產(chǎn)品采用本專利前面所述的TLC系統(tǒng)1、2進行TLC自身對照法檢測，如果TLC檢測的雜質(zhì)斑點超過1.5％，則需要另外選取純甲醇溶液依法進行二次重結(jié)晶純化，直到TLC檢測的雜質(zhì)低于1.5％以下即可(一般情況下由市售純度在92％左右的環(huán)維黃楊星D原料經(jīng)過一次重結(jié)晶即可將純度提高到98.5％以上)。如果要求更高純度的環(huán)維黃楊星D，例如制備環(huán)維黃楊星D的對照品可以將TLC檢測雜質(zhì)的量控制標(biāo)準(zhǔn)控制到0.5％以下甚至更低。因此，必要時可以依法進行多次重結(jié)晶純化，一般情況下二次重結(jié)晶的產(chǎn)品其純度可達到99.5％以上。另外，原則上對產(chǎn)品采用TLC系統(tǒng)1檢測時應(yīng)注意控制產(chǎn)品在附圖1的5位上不出現(xiàn)雜質(zhì)斑點。
對于市售雜質(zhì)在7～8％％左右的環(huán)維黃楊星D用純甲醇進行一次重結(jié)晶后，母液可以重復(fù)使用7次左右，重復(fù)使用過多不能保障一次重結(jié)晶產(chǎn)品的TLC檢測雜質(zhì)在1.5％以下。不能使用的母液，可對甲醇回收后析出溶液中的環(huán)維黃楊星D，可重復(fù)上述工序進行一次或多次重結(jié)晶生長，使其成為符合要求的產(chǎn)品。
同理，二次重結(jié)晶的母液可以使用到3次。二次重結(jié)晶的母液不能作為二次重結(jié)晶的溶液時，可作為一次重結(jié)晶的母液使用。
對于上述重結(jié)晶的產(chǎn)品，可以使用對環(huán)維黃楊星D溶解度小的溶劑洗滌，例如水或丙酮。然而，用水洗滌后，容易在結(jié)晶體中保留結(jié)晶水。因此，洗滌后的產(chǎn)品應(yīng)該在105℃的條件下烘干。經(jīng)過105℃的條件下烘干的產(chǎn)品其中的甲醇在受到高溫以后逃逸出晶體，破壞了晶體的晶胞結(jié)構(gòu)以及外觀的透明形狀，但并不改造環(huán)維黃楊星D的分子結(jié)構(gòu)，所以對產(chǎn)品的品質(zhì)和主要物理特性并不影響。
實施方案2(環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的制備2)選擇純甲醇∶乙醇＝99～85∶1～15的混合溶劑作為重結(jié)晶純化的溶劑，冷卻速度為室溫自然放置到20℃左右或冷卻速度為0.2～8℃/hr，其他條件同實施方案1。
實施方案3(環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的制備3)選擇純甲醇∶乙酸乙酯＝99～85∶1～15的混合溶劑作為重結(jié)晶純化的溶劑， 冷卻速度為室溫自然放置到20℃左右或冷卻速度為0.2～8℃/hr，，其他條件同實施方案1。
實施方案4(環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的制備4)選擇純甲醇∶丙酮＝99～85∶1～15的混合溶劑作為重結(jié)晶純化的溶劑， 冷卻速度為室溫自然放置到20℃左右或冷卻速度為0.2～8℃/hr，其他條件同實施方案1。
實施方案5(環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的制備5)
選擇純甲醇∶氯仿＝99～95∶1～5的混合溶劑作為重結(jié)晶純化的溶劑，冷卻速度為室溫自然放置到20℃左右或冷卻速度為0.2～8℃/hr，其他條件同上述實施方案1。
實施方案6(大體積高純度環(huán)維黃楊星D結(jié)晶體的制備1)取環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體，加18倍的無水乙醇(w/w或w/v)，加熱80～90℃回流至環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體溶解，冷卻速度為室溫自然放置到20℃左右或冷卻速度為0.2～8℃/hr，直到生長出三維體積的尺寸在1mm的棱狀透明結(jié)晶體(放置時間在12小時左右)，過濾，80℃～105℃干燥即得。母液第一次收率為40％左右，母液二次使用收率為96％左右。產(chǎn)品純度的檢測常規(guī)采用TLC系統(tǒng)1、2進行。在采用TLC系統(tǒng)1進行檢測時，應(yīng)注意控制產(chǎn)品在附圖1的5位上不出現(xiàn)雜質(zhì)斑點。產(chǎn)品的純度確定是采用TLC自身對照法進行，純度要求原料藥98.5％以上，對照品99.5％以上。另外，應(yīng)盡量采用粉末X射線衍射進行檢測，要求產(chǎn)品的檢測結(jié)果符合第二最大衍射峰(2θ衍射角為16.32±2％)的相對強度小于49.42％(一般在30％左右)、第三最大衍射峰(2θ衍射角為15.41±2％)的相對強度小于33.17％(一般在15％左右)的要求，檢測時注意應(yīng)事先在105℃干燥2小時.對于產(chǎn)品的單晶檢測，應(yīng)該在不高于40℃的條件下干燥2～4小時，然后進行單晶檢測，產(chǎn)品的R1參數(shù)應(yīng)小于0.129，一般在0.09左右。粉末和單晶X射線檢測雖然是對晶體的結(jié)構(gòu)進行檢測，但是，在這里是區(qū)別與之晶體結(jié)構(gòu)相同的低純度(純度小于95％)環(huán)維黃楊星D原料的有效方法。
實施方案7(大體積高純度環(huán)維黃楊星D結(jié)晶體的制備2)選擇純乙醇∶氯仿＝99～95∶1～5的混合溶劑作為重結(jié)晶純化的溶劑，冷卻速度為室溫自然放置到20左右℃或冷卻速度為0.2～8℃/hr，其他條件同上述實施方案6。
實施方案8(小體積高純度環(huán)維黃楊星D結(jié)晶體的制備1)取環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體，加22倍的甲醇(w/w或w/v)，于80℃水浴上加熱回流15分鐘，于室溫下放置至溫度降為50℃以下后，置溫度為4℃～8℃冷藏室內(nèi)放置12小時左右，得無定形粉末狀或小鱗片狀晶體，晶體三維體積的尺寸在1mm以下，絕大部分小于0.3mm，過濾，80℃～105℃干燥即得。母液第一次收率為40％左右，母液二次使用收率為80％以上。產(chǎn)品純度的檢測常規(guī)采用TLC系統(tǒng)1、2進行。在采用TLC系統(tǒng)1進行檢測時，應(yīng)注意控制產(chǎn)品在附圖1的5位上不出現(xiàn)雜質(zhì)斑點。產(chǎn)品的純度確定是采用TLC自身對照法進行，純度要求原料藥98.5％以上，對照品99.5％以上。
實施方案9(小體積高純度環(huán)維黃楊星D結(jié)晶體的制備2)選擇純甲醇醇∶丙酮＝99～95∶1～5的混合溶劑作為重結(jié)晶純化的溶劑，其他條件同實施方案8。
藥物制劑舉例下面的實施例為使用上述三種高純度環(huán)維黃楊星D在藥物制劑中的應(yīng)用。為書寫藥物制劑處方的方便，將環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體用符號A表示；大尺寸高純度環(huán)維黃楊星D用符號B表示；小尺寸高純度環(huán)維黃楊星D用符號C表示。
實施例1分散片的制備處方A或B或C 0.5g淀粉 5g蔗糖 5g羧甲基淀粉鈉 7g低取代羥丙基纖維素 15g硬脂酸鎂0.15g檸檬矯味劑 適量甜蜜素 適量乙醇(50％) 適量制備工藝1、將上述各原輔料分別過80目篩。
2、將A或B或C、淀粉、低取代羥丙基纖維素與羧甲基淀粉素鈉混勻，用50％乙醇制軟材，過14目篩網(wǎng)制粒。
3、于50℃左右干燥，整粒。
4、加入剩余的羧甲基淀粉素鈉、甜蜜素、檸檬矯味劑、硬脂酸鎂混合后，壓片，即得。
實施例2舌下片的制備處方A或B或C 0.5g聚維酮1.5g乳糖 10g蔗糖 10g低取代羥丙基纖維素 5g薄荷油 適量甜蜜素適量硬脂酸鎂 0.1g制備工藝1、將A或B或C與聚維酮溶于適量丙酮中，作為粘合劑。
2、將乳糖、蔗糖、低取代羥丙基纖維素混勻，制粒。
3、于50℃左右干燥，整粒，加入薄荷油，密閉。
4、加入甜蜜素和硬脂酸鎂，混勻后，壓片，即得。
實施例3微囊的制備1處方A或B或C 0.5g藻酸鈉 0.2g氯化鈣溶液 5％(W/V)水 50ml制備工藝1、將藻酸鈉溶解在水中，將A或B或C分散其中。
2、將上述懸浮液滴加到氯化鈣溶液中，不停攪拌。
3、濾出微囊，干燥，即得。
實施例4微囊的制備2處方A或B或C 0.5g阿拉伯膠粉 0.25g3％阿拉伯膠液17ml3％明膠液40m137％甲醛 1ml5％氫氧化鈉溶液 適量10％醋酸 適量淀粉 適量制備工藝1、取阿拉伯膠粉與A或B或C加水研勻，用3％的阿拉伯膠液稀釋成乳劑。
2、另取3％明膠液，使兩液保持在45℃，混合，并用10％醋酸調(diào)PH為4.1-4.3。
3、加40℃水150ml稀釋，攪拌，至溫度達30℃以下時，冰浴中凍凝，加入37％甲醛，攪20分鐘，使固化。
4、用5％氫氧化鈉溶液調(diào)PH為7.0-7.5，攪拌30分鐘。
5、加入10％淀粉液4ml于10℃攪拌30分鐘，分離，洗滌，盡量除去水，加入6％干淀粉，制粒，干燥，即得。
實施例5滴丸的制備處方A或B或C 0.5g聚乙二醇4000或6000 25.5g制備工藝1、將聚乙二醇加熱熔融后，將A或B或C均勻的分散入其中。
2、將上述溶液置滴丸機上滴制出滴丸。
實施例6β-環(huán)糊精包合物的制備處方A或B或C 0.5gβ-環(huán)糊精 8g丙酮 50ml水 250ml制備工藝1、取A或B或C，加丙酮50ml，微溫使溶解，保溫。
2、滴入250ml的β-環(huán)糊精飽和水溶液中，攪拌30分鐘，停止加熱，繼續(xù)攪拌5小時，得白色混懸物，靜置12小時，過濾。
3、所得固體于40℃干燥，即得。
實施例7β-環(huán)糊精包合物的制備處方A或B或C的可溶性鹽 0.5gβ-環(huán)糊精 2.5g水 適量工藝取A或B或C的可溶性鹽和β-環(huán)糊精，加適量水于60℃恒溫電動攪拌使β-環(huán)糊精達飽和，繼續(xù)攪拌30分鐘后倒入蒸發(fā)皿中，于90℃水浴蒸干，干燥器中干燥，研細(xì)，即得。
實施例8口含片的制備處方A或B或C的包合物 5g蔗糖 3g淀粉 0.5g甜蜜素 3.4mg羧甲基淀粉鈉 0.6g檸檬油 0.05m1硬脂酸鎂 26mg枸櫞酸 7.5mg水 適量制備工藝1、取舉例7中所得的A或B或C包合物、淀粉、枸櫞酸、蔗糖和羧甲基淀粉鈉按處方量混合均勻，加水制軟材，過14目篩制粒。
2、濕粒于50℃干燥，整粒，加入檸檬油和硬脂酸鎂混勻，密閉30分鐘后壓片，即得。
實施例9顆粒劑的制備處方A或B或C 0.5g淀粉 5gβ-環(huán)糊精 8g乳糖 5g蔗糖 5g糖精鈉5mg檸檬酸1.5g2％羧甲基纖維素鈉膠漿 適量檸檬香精 適量制備工藝1、取A或B或C和β-環(huán)糊精，加少量水研磨成糊狀，50℃干燥備用。
2、將淀粉、檸檬酸、蔗糖、糖精鈉和乳糖與上述包合物混勻，用2％羧甲基纖維素鈉膠漿適量制軟材，過30-40目制粒，50℃干燥。
3、在烘干的顆粒上噴灑檸檬香精，密閉30分鐘，即得。
實施例10口崩片的制備處方上述實施例中A或B或C的包合物5g微晶纖維素 40g低取代羥丙基纖維素 10g蔗糖 5g糖精鈉 5mg制備工藝將上述原輔料過80目篩，混勻，直接壓片，即得。
實施例11口溶片的制備處方A或B或C0.5g羥乙基纖維素 3.5g黃原膠 7g蔗糖 40g甘露醇 30g
制備工藝1、將A或B或C混懸于羥乙基纖維素中，制成溶液1。
2、將黃蓍膠、蔗糖和甘露醇混合溶解于水中，制成溶液2。
3、將溶液1和溶液2混勻，放入模具中低溫凍結(jié)干燥，即得。
實施例12A或B或C的可溶性鹽酸鹽或其它可溶性酸鹽的制備制備工藝稱取A或B或C1g，放于50ml的燒杯中，加入雙蒸餾水10ml，充分?jǐn)嚢瑁瑢糜陔姞t上，微微加熱并控制在60℃左右，由于A或B或C難溶于水，而懸浮在水中成為渾懸狀。在攪拌下慢慢地滴加10％HCl水溶液，此時應(yīng)注意水溶液PH的變化。隨著鹽酸的加入，懸浮在水中的A或B或C逐步地與鹽酸進行酸堿中和反應(yīng)，成為鹽酸環(huán)維黃楊星D，所生成的鹽可溶于水，所以懸浮的固體逐漸地減少直到最后全部消失成為澄明的水溶液，在酸堿作用過程，水溶液的PH也相應(yīng)發(fā)生變化，從PH≥9逐漸地降低，當(dāng)水溶液成為澄明時，其PH值為5～6，為了使成鹽作用充分完成，將水溶液繼續(xù)加熱至微沸并持續(xù)10分鐘，整個成鹽作用即告完成。從電爐上取下燒杯，于室溫靜置，放置過夜，即有結(jié)晶析出。切莫攪拌或移動，以利于晶體的形成。過濾，收集結(jié)晶性固體，置于紅外燈下(60℃左右)烘干——鹽酸環(huán)維黃楊星D。
上述可溶性鹽的制備所選用的酸還可選自硫酸、磷酸、冰醋酸等無機酸和有機酸，本專業(yè)技術(shù)人員使用基本的藥學(xué)知識在參考本實施例的基礎(chǔ)上即可完成相關(guān)的A或B或C可溶性鹽的制備，此處不再贅述。
實施例13A或B或C的注射液的制備制備工藝(1)調(diào)PH直接配置注射液取1g A或B或C，加入注射用水適量，攪拌使成懸浮液，滴加鹽酸溶液(10％)至懸浮液成為透明溶液為止。過濾，濾液中加入9g氯化鈉，攪拌均勻，用PH調(diào)節(jié)劑調(diào)PH到4.0～6.0。用注射用水定容至1000ml，用針級炭吸附脫色后濾過，再用0.45um微孔濾膜濾過，灌封，在115℃流通蒸汽滅菌30分鐘。
(2)采用使用A或B或C可溶性鹽進行配置注射液取A或B或C的鹽酸鹽(或A或B或C的其它可溶性鹽)，加注射用水(按其藥理活性)配制成適當(dāng)?shù)臐舛?，過濾，灌封，滅菌，燈檢，質(zhì)檢，制成注射液。
實施例14速效膜的制備處方A或B或C 0.5g聚維酮 0.6g聚乙烯酮0.5g
羧甲基纖維素鈉 0.3g吐溫-80 200ml甘油 50ml山梨醇 42g蔗糖 0.5g制備工藝1、聚乙烯酮加水充分溶脹，攪勻后加入羧甲基纖維素鈉、山梨醇、甘油和蔗糖攪勻。
2、另取環(huán)維黃楊星D一甲醇晶體、聚維酮及吐溫-80溶于適量氯仿∶乙醇(9∶1)混合液中。
3、水浴揮盡氯仿、乙醇，涂膜，70℃干燥，剝落藥膜，即得。
上面已詳述本發(fā)明，顯然，本領(lǐng)域技術(shù)人員在熟知本發(fā)明后可作許多改進和變化而并不背離本發(fā)明精神范圍。
權(quán)利要求
1.一種環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體，其化學(xué)式為C27H50N2O2，屬于單斜晶系，空間群P2(1)，晶胞尺寸約為a＝7.2538(15)A、b＝7.8851(16)A、c＝23.069(5)A、α＝γ＝90°、β＝94.30°，其(經(jīng)105℃干燥)粉末X射線衍射(1.5418，銅鈀)在2θ衍射角為15.317±2％、13.034±2％、14.526±2％、20.930±2％、16.280±2％有衍射峰，峰強度按照上述順序依次排列減小，其采用TLC色譜系統(tǒng)(薄層板硅膠G薄層板；展開劑氯仿∶己烷∶甲醇∶氨水＝2.5∶4∶1∶0.1；顯色劑稀碘化鉍鉀試液；點樣量100～250μg)檢測的薄層板上的主斑點與不可去除雜質(zhì)斑點之間沒有雜質(zhì)斑點出現(xiàn)，一般產(chǎn)品的雜質(zhì)斑點的個數(shù)應(yīng)小于3，對照品級別的產(chǎn)品的雜質(zhì)斑點的個數(shù)為1。
2.一種權(quán)利要求1結(jié)晶體的制備方法，包括將市售環(huán)維黃楊星D溶于有機溶劑，以重結(jié)晶方式進行溶液生長，其中溶劑包括至少80wt％的甲醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其特征在于溶液生長前進行熱過濾，生長時的冷卻速度為0.2-15℃/hr。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其特征在于所述溶劑是甲醇。
5.一種權(quán)利要求1環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的用途，用于制造藥物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的用途，用于制備治療心血管系統(tǒng)的藥物。
7.一種權(quán)利要求1環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的用途，將其作為前體物質(zhì)制備其它藥物。
8.一種權(quán)利要求1環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體的用途，用于制備高純度黃楊寧或其晶體。
9.一種高純度環(huán)維黃楊星D結(jié)晶體，其三維尺寸至少在毫米級，其單晶晶體檢測R指數(shù)(R indices)參數(shù)的R1值小于0.129。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的結(jié)晶體，其粉末的X射線衍射檢測的第二最大衍射峰(2θ衍射角為16.32±2％)的相對強度小于49.42％、第三最大衍射峰(2θ衍射角為15.41±2％)的相對強度小于33.17％。
11.根據(jù)權(quán)利要求9的結(jié)晶體，對其采用TLC色譜系統(tǒng)(薄層板硅膠G薄層板；展開劑氯仿∶己烷∶甲醇∶氨水＝2.5∶4∶1∶0.1；顯色劑稀碘化鉍鉀試液；點樣量100～250μg；)檢測的薄層板上的主斑點與不可去除雜質(zhì)斑點之間沒有雜質(zhì)斑點出現(xiàn)，并且雜質(zhì)斑點的個數(shù)應(yīng)小于3。
12.一種權(quán)利要求9高純度環(huán)維黃楊星D結(jié)晶體的制備方法，包括首先以權(quán)利要求2的方法生長環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體，然后將其作為原料進行溶液生長黃楊寧晶體，使用可以將環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體溶解的乙醇、甲醇、氯仿、丙酮、環(huán)己烷或其混和物的有機溶劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其特征在于制備過程中采用TLC色譜系統(tǒng)檢測(薄層板硅膠G薄層板；展開劑氯仿∶己烷∶甲醇∶氨水＝2.5∶4∶1∶0.1；顯色劑稀碘化鉍鉀試液；點樣量100～250μg；)。
14.一種權(quán)利要求9高純度環(huán)維黃楊星D結(jié)晶體的用途，用于制造藥物。
15.根據(jù)權(quán)利要求14高純度環(huán)維黃楊星D結(jié)晶體的用途，用于制備治療心血管系統(tǒng)的藥物。
16.一種權(quán)利要求9高純度環(huán)維黃楊星D結(jié)晶體的用途，將其作為前體物質(zhì)制備其它藥物。
17.一種外形三維尺寸不同于(或小于)權(quán)利要求9的高純度環(huán)維黃楊星D結(jié)晶體的制備方法，包括首先以權(quán)利要求2的方法生長環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體，然后將其作為原料進行溶液生長黃楊寧晶體，其中使用可以將其溶解的有機溶劑。其產(chǎn)品特征是單晶X-衍射測定的R indices(all data)參數(shù)項下的R1值小于1.29，以及采用TLC色譜系統(tǒng)(薄層板硅膠G薄層板；展開劑氯仿∶己烷∶甲醇∶氨水＝2.5∶4∶1∶0.1；顯色劑稀碘化鉍鉀試液；點樣量100～250μg；)檢測的薄層板上的主斑點與不可去除雜質(zhì)斑點之間沒有雜質(zhì)斑點出現(xiàn)，并且雜質(zhì)斑點的個數(shù)應(yīng)小于3。
18.一種權(quán)利要求17高純度環(huán)維黃楊星D結(jié)晶體的醫(yī)療用途，其中優(yōu)選用于制備治療心血管系統(tǒng)的藥物。
19.根據(jù)權(quán)利要求5-7，14-16，18的任一用途，其中所述制備藥物的劑型包括片劑、膠囊劑、舌下片、口含片、快速口崩片、分散片、滴丸劑、干混懸劑固體口服藥物制劑以及口服液體制劑和注射劑。
全文摘要
本發(fā)明公開一種環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體，其化學(xué)式為C
文檔編號A61P9/00GK1594355SQ20041004948
公開日2005年3月16日 申請日期2004年6月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月18日
發(fā)明者王孟昉, 李思思, 何娟, 楊勇, 高藝歌 申請人:高華, 王孟昉