專利名稱：三七總皂苷脂質(zhì)體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種三七總皂苷脂質(zhì)體及其制備方法。
背景技術(shù)：
調(diào)查顯示心腦血管疾病是影響我國(guó)人口壽命的第二大因素，隨著人們生活水平的提高，工作壓力的增大，心腦血管疾病的患病呈年輕化，患病人數(shù)呈上升的趨勢(shì)。目前，可供選擇的藥物大多為西藥品種，而中藥品種少，且制劑多為傳統(tǒng)劑型或普通劑型。三七是我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥，又名田七，為五加科人參屬的一個(gè)種，學(xué)名為Panax notoginseng(Buck.)F.H.Chen，盛產(chǎn)于我國(guó)云南、廣西。三七的藥理作用為擴(kuò)張冠脈、改善心肌缺血、減少心肌耗氧量、擴(kuò)張血管、抗心率失常等。臨床應(yīng)用其總皂苷(Saponins of Panax Notoginseng，PNS)治療中風(fēng)、腦血栓、冠心病、心絞痛、動(dòng)脈粥樣硬化、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞等。
人參皂苷Rb1、Rg1是三七總皂苷中含量最高的兩個(gè)活性單體，各占總皂苷的30％左右。目前已經(jīng)上市的三七類產(chǎn)品主要有注射液如血塞通和口服片劑如三七總甙片。注射液采用滴注給藥，患者順應(yīng)性差，且副作用也日趨增多，如過敏反應(yīng)等影響了藥物的應(yīng)用?？诜瑒┡R床應(yīng)用療效較低，據(jù)有關(guān)報(bào)道三七總皂苷水溶性極大，在胃腸道黏膜的透過性差，胃的強(qiáng)酸環(huán)境對(duì)藥物有降解作用，而且其中活性單體極易被胃腸道酶和腸道細(xì)菌代謝，因此導(dǎo)致了PNS口服制劑的生物利用度很低，其中人參皂苷Rb1口服絕對(duì)生物利用度僅為4.35％，；人參皂苷Rg1的口服生物利用度為18.40％，且在血中消除很快。因此尋找三七總皂苷新劑型和新的給藥途徑顯得尤為必要。
肺部給藥是一種具發(fā)展?jié)摿Φ慕o藥途徑，臨床已廣泛應(yīng)用于治療呼吸道疾病，其優(yōu)點(diǎn)為表面積大，血流豐富，肺泡壁薄，細(xì)胞內(nèi)外生物代謝酶的活性低，且無肝臟首過效應(yīng)，藥物生物利用度高。
脂質(zhì)體與肺泡具有良好的生物相容性，制備工藝簡(jiǎn)單，藥物包封于脂質(zhì)體中，能降低藥物毒性，增強(qiáng)藥理作用，而且能夠降低藥物的消除速率，延長(zhǎng)藥物作用，增加藥物的體內(nèi)外穩(wěn)定性。同時(shí)，作為膜材的磷脂，本身無毒，對(duì)心腦血管疾病具有積極的預(yù)防作用，可降低血清膽固醇、甘油三酯含量，預(yù)防動(dòng)脈硬化并可清掃血管使其柔軟，能顯著減輕動(dòng)脈粥樣硬化及心肌缺血-再灌注損傷程度，清除動(dòng)脈硬化引發(fā)的心腦血管疾病等多種慢性病變的誘發(fā)因素。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種三七總皂苷脂質(zhì)體。經(jīng)本發(fā)明三七總皂苷脂質(zhì)體肺部非注射給藥，能減少藥物刺激性和毒性，提高藥物的生物利用度，改善患者用藥的順應(yīng)性。
本發(fā)明由三七總皂苷(DFC-SQZD-01，云南文山)和磷脂加親脂性添加劑制備成三七總皂苷脂質(zhì)體。
本發(fā)明的磷脂與三七總皂苷的重量比為0.5∶1-100∶1，磷脂與親脂性添加劑的重量比為1∶1-10∶1。
所述脂質(zhì)體的磷脂，可以是卵磷脂，包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂，雙肉豆蔻磷脂酰膽堿，雙肉豆蔻磷脂酰甘油，二油酰磷脂酰膽堿，二棕櫚酰磷脂酸，二棕櫚酰磷脂酰膽堿，二棕櫚酰磷脂酰甘油和二硬脂酰磷脂酰膽堿。優(yōu)選卵磷脂、二棕櫚酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酰膽堿和二棕櫚酰磷脂酰甘油。
本發(fā)明采用親脂性添加劑選擇性改善脂質(zhì)體的特性。所述添加劑包括，硬脂胺，磷脂酸，生育酚、膽固醇、膽固醇半琥珀酸酯和羊毛酯提取物；優(yōu)選膽固醇。
藥物肺部給藥，肺內(nèi)沉積量是反映藥物能否有效的發(fā)揮藥效的重要指標(biāo)，而進(jìn)入呼吸道的藥物顆粒的大小及形狀是影響肺內(nèi)沉積量的重要因素。本發(fā)明脂質(zhì)體粒徑范圍為1-5μm，顆粒易到達(dá)呼吸道深部作用部位。
本發(fā)明脂質(zhì)體可通過常規(guī)方法包括薄膜法、逆相蒸發(fā)法、熔融法、注入法、冷凍干燥法、表面活性劑法、復(fù)乳法、鈣融合法，優(yōu)選薄膜法、逆相蒸發(fā)法和冷凍干燥法制備。
本發(fā)明的三七總皂苷脂質(zhì)體可制成粉末吸入劑，氣霧劑和噴霧劑等劑型，通過肺部給藥，改善三七總皂苷口服吸收差，生物利用度低的不足，增強(qiáng)三七總皂苷對(duì)心腦血管疾病的療效，提高患者用藥的順應(yīng)性。
本發(fā)明根據(jù)中華人民共和國(guó)藥典2000年版二部，對(duì)三七總皂苷脂質(zhì)體的質(zhì)量進(jìn)行檢查。結(jié)果表明，本發(fā)明的三七總皂苷脂質(zhì)體粒徑大小符合肺部給藥對(duì)制劑粒徑的要求，形態(tài)均一，包封率高，滲漏率低，符合藥典對(duì)脂質(zhì)體制劑的各項(xiàng)要求。


圖1是PNS脂質(zhì)體照片其中a光學(xué)顯微鏡照片，經(jīng)相應(yīng)介質(zhì)稀釋20倍后放大300倍，b電鏡照片，放大84000倍。
圖2是PNS脂質(zhì)體在不同溫度水相介質(zhì)中的累積釋放曲線，其中，n＝5，x±s。
具體實(shí)施例方式通過下列實(shí)施例說明本發(fā)明的具體實(shí)施方式
，但本發(fā)明的保護(hù)范圍，不局限于此。
實(shí)施例1 薄膜法制備三七總皂苷脂質(zhì)體取大豆卵磷脂(上海太偉藥業(yè)有限公司)1.25克，膽固醇(中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司)0.3克用60毫升乙醚溶解于250ml梨形瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)出去乙醚，脂質(zhì)在瓶壁上成一薄膜，加15ml三七總皂苷磷酸鹽緩沖液旋轉(zhuǎn)水化得到三七總皂苷脂質(zhì)體。包封率為81％。
實(shí)施例2 逆相蒸發(fā)法制備三七總皂苷脂質(zhì)體取大豆卵磷脂2克，膽固醇1克用100ml乙醚溶解于250ml梨形瓶中，再加入20ml三七總皂苷磷酸鹽緩沖液，水浴超聲使成為均一的單相體系，減壓蒸發(fā)除去乙醚至凝膠形成，繼續(xù)減壓蒸發(fā)15分鐘，得到三七總皂苷脂質(zhì)體。包封率為60％。
實(shí)施例3 冷凍干燥法制備三七總皂苷脂質(zhì)體取大豆卵磷脂1.25克，膽固醇0.3克用60毫升乙醚溶解于250ml梨形瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)出去乙醚，脂質(zhì)在瓶壁上成一薄膜，加15ml磷酸鹽緩沖液旋轉(zhuǎn)水化得到空白脂質(zhì)體，加適量海藻糖，混勻，在真空中冷凍干燥，隨即用三七總皂苷磷酸鹽緩沖液振搖進(jìn)行分散，得到三七總皂苷脂質(zhì)體。包封率為55％。
實(shí)施例4 注入法制備三七總皂苷脂質(zhì)體取大豆卵磷脂2克，膽固醇2克，用80ml乙醚溶解，三七總皂苷磷酸鹽緩沖液保溫在60℃恒溫振蕩水浴中，，用微量注射器將乙醚脂質(zhì)溶液緩緩注入緩沖溶液中，并通氮?dú)馊コ龤堄嘁颐颜魵?，得到三七總皂苷脂質(zhì)體。包封率為50％。
實(shí)施例5 熔融法制備三七總皂苷脂質(zhì)體取大豆卵磷脂2克，膽固醇1克熔融混勻，將三七總皂苷磷酸鹽緩沖液緩緩加入熔融液中，在組織攪拌機(jī)中高速攪拌，至脂質(zhì)體形成。包封率為48％。
實(shí)施例6將三七總皂苷脂質(zhì)體經(jīng)冷凍干燥，裝入粉末吸入裝置，得到三七總皂苷脂質(zhì)體粉末吸入劑。脂質(zhì)體粉末裝在定量裝置中，經(jīng)患者主動(dòng)吸入。
實(shí)施例7將三七總皂苷脂質(zhì)體與拋射劑一起填入氣霧劑裝置中，得到三七總皂苷脂質(zhì)體氣霧劑。脂質(zhì)體混懸液在拋射劑作用下呈氣霧狀噴出。
實(shí)施例8將三七總皂苷脂質(zhì)體裝入噴霧劑裝置中，得到三七總皂苷脂質(zhì)體噴霧劑。脂質(zhì)體混懸液在壓力作用下直接噴出呈霧狀。
實(shí)施例9 三七總皂苷脂質(zhì)體質(zhì)量檢查1.PNS脂質(zhì)體的粒徑及其形態(tài)粒徑測(cè)定PNS脂質(zhì)體適量經(jīng)磷酸鹽緩沖液稀釋后，用Zeta電位及粒度測(cè)定儀測(cè)定其粒徑大小。
形態(tài)觀察PNS脂質(zhì)體適量置銅網(wǎng)上，經(jīng)磷鎢酸負(fù)染后，于透射電鏡下觀察脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)。并取適量經(jīng)稀釋后，置于光學(xué)顯微鏡下觀察其形態(tài)和分布。
三七總皂苷脂質(zhì)體為大單室脂質(zhì)體(LUV)，圓形或橢圓形，外形圓整光滑，形態(tài)分布均一。平均粒徑為1546.5nm±321.4nm。
2.包封率測(cè)定取三七總皂苷脂質(zhì)體混懸液適量，置低溫高速離心機(jī)中，4℃，20000g×30min離心，取上清液20μl，用磷酸鹽緩沖液稀釋至5ml，搖勻。RP-HPLC法測(cè)定游離的Rbl按下式計(jì)算包封率。
3.脂質(zhì)體體外泄漏分別考察PNS脂質(zhì)體在(25±0.5)℃和(37±0.5)℃恒溫水浴中持續(xù)振蕩5天的體外釋放狀況。將脂質(zhì)體適量置于透析袋內(nèi)，釋放介質(zhì)為磷酸鹽緩沖液，振蕩頻率為80r/min，持續(xù)振蕩5天，分別于1d，2d，3d，4d，5d取透析液1ml，并同時(shí)補(bǔ)充同溫新鮮磷酸鹽緩沖液1ml，RP-HPLC測(cè)定透析液中游離的Rb1。透析完成后，剪破透析袋，收集袋內(nèi)的脂質(zhì)體并用10％Triton X-100破壞，作為時(shí)間無窮大時(shí)的藥物泄漏量。計(jì)算其累積釋放量，評(píng)價(jià)PNS脂質(zhì)體的體外穩(wěn)定性。
體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PNS脂質(zhì)體在25℃和37℃介質(zhì)中藥物釋放緩慢，37℃5天的體外累積釋放量占時(shí)間無窮大時(shí)脂質(zhì)體釋放量的2.04％，25℃5天的體外累積釋放量占時(shí)間無窮大時(shí)脂質(zhì)體釋放量的0.43％。
權(quán)利要求
1.一種三七總皂苷脂質(zhì)體，其特征是含三七總皂苷，磷脂和親脂性添加劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三七總皂苷脂質(zhì)體，其特征是其中磷脂與三七總皂苷的重量比為0.5∶1-100∶1，磷脂與親脂性添加劑的重量比為1∶1-10∶1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三七總皂苷脂質(zhì)體，其特征是所述的脂質(zhì)體的磷脂是卵磷脂，包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂，雙肉豆蔻磷脂酰膽堿，雙肉豆蔻磷脂酰甘油，二油酰磷脂酰膽堿，二棕櫚酰磷脂酸，二棕櫚酰磷脂酰膽堿，二棕櫚酰磷脂酰甘油和二硬脂酰磷脂酰膽堿。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三七總皂苷脂質(zhì)體，其特征是所述的磷脂是卵磷脂，二棕櫚酰磷脂酸，二棕櫚酰磷脂酰膽堿和二棕櫚酰磷脂酰甘油。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三七總皂苷脂質(zhì)體，其特征是所述的親脂性添加劑包括，硬脂胺，磷脂酸，生育酚、膽固醇、膽固醇半琥珀酸酯和羊毛酯提取物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三七總皂苷脂質(zhì)體，其特征是所述的親脂性添加劑是膽固醇。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三七總皂苷脂質(zhì)體，其特征是所述的脂質(zhì)體粒徑范圍為1-5μm。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7所述的任一三七總皂苷脂質(zhì)體，可制成粉末吸入劑，氣霧劑和噴霧劑。
全文摘要
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種三七總皂苷脂質(zhì)體及其制備方法。本發(fā)明由三七總皂苷和磷脂加親脂性添加劑制備成三七總皂苷脂質(zhì)體。可通過常規(guī)方法制成粉末吸入劑，氣霧劑和噴霧劑等劑型，通過肺部非注射給藥，改善三七總皂苷口服吸收差的不足，減少藥物刺激性和毒性，提高藥物的生物利用度，增強(qiáng)三七總皂苷對(duì)心腦血管疾病的療效，改善患者用藥的順應(yīng)性。質(zhì)檢結(jié)果表明，本發(fā)明的三七總皂苷脂質(zhì)體粒徑形態(tài)均一，包封率高，滲漏率低，符合藥典要求。
文檔編號(hào)A61K31/7048GK1543974SQ200310108690
公開日2004年11月10日 申請(qǐng)日期2003年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月19日
發(fā)明者方曉玲, 沈央, 沙先誼 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)