專利名稱：一種三七總皂苷的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種三七總皂苷的制備方法。
背景技術(shù)：
三七是我國(guó)的常用中藥，其中所含的三七總皂苷是其主要有效部位，三七總皂苷均具有擴(kuò)張血管、抑制血小板聚集的作用，同時(shí)還具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗衰老、增強(qiáng)免疫功能的作用。三七的藥用部位有莖基(蘆頭、剪口)、主根、支根(筋條)，三七葉中也含有大量的三七皂苷，各藥用部位所含的三七總皂苷含量有差異。為了獲得高純度的三七總皂苷，研究人員付出了不懈的努力。申請(qǐng)?zhí)?2158727.2的專利文獻(xiàn)公開了一種三七葉皂苷的提取方法，采用水提液過強(qiáng)極性ADS-3型吸附樹脂柱得到，其中三七葉總皂苷含量大于或等于90％；申請(qǐng)?zhí)枮?2144840.X的專利文獻(xiàn)公開了三七葉中總皂苷提取物的制備方法，采用水提后的堿液過大孔吸附樹脂柱和ZTC型大孔脫色樹脂，得到的三七葉總皂苷含量達(dá)85％以上；申請(qǐng)?zhí)?1108591.6的專利文獻(xiàn)公開了三七總苷的制備方法，三七采用70％乙醇提取，濃縮液過大孔吸附樹脂柱，70％-90％乙醇洗脫液過離子交換樹脂脫色柱，得到三七總苷的純度達(dá)到95％以上；申請(qǐng)?zhí)?3105774.4的專利文獻(xiàn)公開了三七總苷藥物及其制備方法，三七采用50％以上乙醇浸提，回收乙醇后的水液過大孔吸附樹脂柱，70％-95％乙醇洗脫液用氧化鋁吸附脫色，再用3％-5％活性炭脫色，正丁醇萃取，丙酮干燥和真空干燥，得到的皂苷純度可達(dá)88％以上。以上的制備方法有以下的不足對(duì)于純度和產(chǎn)率這一對(duì)矛盾解決的不好，純度提高的同時(shí)產(chǎn)率下降，產(chǎn)率提高的同時(shí)純度又下降，兩者不能很好的兼顧；大孔吸附樹脂或聚酰胺或正丁醇萃取作為純化的關(guān)鍵步驟，由于受到方法本身的限制，提取物要達(dá)到高純度很困難；所以以大孔吸附樹脂或聚酰胺或正丁醇萃取為關(guān)鍵步驟的工藝來對(duì)三七提取物進(jìn)行純化是不可取的；三七藥材各部位含有類似的皂苷，只是含量和單體皂苷的比例不同而已。在已有的制備方法中，沒有一種方法可以用來提取三七藥材不同部位中的總皂苷使其達(dá)到很高的相近的純度，必須采用不同的制備工藝。不同的制備方法在工業(yè)生產(chǎn)中對(duì)于設(shè)備的要求就不同，因而會(huì)增加生產(chǎn)的成本；溫度對(duì)三七中的有效成分有影響[劉環(huán)香，等。溫度對(duì)三七有效成分的影響。中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，1995，15(11)513]，以上方法在提取中沒有考慮到皂苷類成分在長(zhǎng)時(shí)間受熱過程中，容易分解而含量降低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的研究人員經(jīng)過多次試驗(yàn)，在已有的制備方法的基礎(chǔ)上，利用現(xiàn)在的先進(jìn)的科學(xué)技術(shù)方法探索出一條從三七藥材中制備三七總皂苷的方法。本方法對(duì)于原料中三七總皂苷含量的要求非常小，無論是三七的莖基、主根、支根或葉，藥材中總皂苷含量高低，經(jīng)過本發(fā)明的制備方法后，得到的三七總皂苷的純度都可以達(dá)到98％以上。且本發(fā)明完全可以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化、工業(yè)化，為三七總皂苷的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展提供基礎(chǔ)。
本發(fā)明的目的是公開一種三七總皂苷的提取方法。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。
一、制備方法(1)原料。藥材為三七莖基或主根或支根或葉；(2)提取。將上述藥材粉碎，過20-60目篩，加6-10倍量的水，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時(shí)間為20-50分鐘，振蕩頻率為20-80kHz，提取2-4次，合并提取液，以12000-20000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液收集備用；(3)富集。將離心液采用下述a)或b)方法之一對(duì)有效部位進(jìn)行富集；
a)將上述離心液過已處理好的非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱，先用5-10倍柱體積的水洗脫，再換用4-8倍柱體積的75％-95％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，50℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到粉末；b)將上述離心液濃縮為溶液∶藥材為1∶1，用0.5-3倍的用水飽和正丁醇萃取3-8次，合并正丁醇液，50℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到粉末；(4)純化。將上述粉末用20-40倍量的50％乙醇溶解，用色譜柱微粒直徑為5-15μm的八烷基硅烷鍵合硅膠或十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的制備型高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離，用20％-60％乙醇溶液洗脫，收集富含三七皂苷成分的洗脫液，50℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到三七總皂苷有效部位。
超聲振蕩儀產(chǎn)生的超聲波能產(chǎn)生強(qiáng)烈振動(dòng)，高速度，強(qiáng)烈的空化效應(yīng)，攪拌作用，加速藥材中的有效成分溶解，可以提高有效成分的提出率。超聲振蕩所需設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、提取時(shí)間短、提取率高、節(jié)能、節(jié)約藥材、無需加熱，使三七藥材中的皂苷類成分在提取完全的同時(shí)保持穩(wěn)定。
旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮可以在低溫下快速、高效率的對(duì)提取液進(jìn)行濃縮，使得其中的三七皂苷類有效成分免受長(zhǎng)時(shí)間的加熱而破壞。
利用大孔吸附樹脂或正丁醇萃取的方法對(duì)三七皂苷類有效部位進(jìn)行富集，去除提取物中的鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)、淀粉和糖等雜質(zhì)。這些方法運(yùn)用已很成熟，對(duì)于皂苷類成分的除雜效果很好。
用制備型反相高效液相色譜系統(tǒng)對(duì)富集后的三七總皂苷進(jìn)行純化，利用色譜柱高效的分離能力，使得皂苷類有效成分與其它成分達(dá)到徹底的分離，收集只含皂苷類成分的部分，處理后即可得到純度很高的三七總皂苷有效部位。制備型高效液相色譜系統(tǒng)已實(shí)現(xiàn)了工業(yè)化和自動(dòng)化，而且在產(chǎn)品純度高的同時(shí)也具有很高的產(chǎn)率，對(duì)于有效成分的損失很小。
二、三七藥材不同部位提取的三七總皂苷純度比較總皂苷含量測(cè)定方法依照申請(qǐng)?zhí)?1108591.6的專利文獻(xiàn)中總皂苷含量測(cè)定方法測(cè)定。三七藥材不同部位提取樣品均由廣東天之嬌藥物開發(fā)有限公司提供。結(jié)果見表1。
表1 三七藥材不同部位提取的三七總皂苷純度比較(N＝3)原料(三七部位) 純度(％)莖基 99.2主根 99.0支根 98.5葉98.7以上含量測(cè)定結(jié)果可以看出，三七藥材中三七總皂苷含量不同的藥用部位為原料按本發(fā)明的制備方法得到的三七總皂苷，其純度均達(dá)到了98.5％以上。說明本發(fā)明的三七總皂苷的制備方法對(duì)于原料藥材的選擇性很低，而且最終得到的產(chǎn)品純度很高。
三、不同制備方法提取的三七總皂苷的比較為了闡明本發(fā)明的制備方法和其它方法比較所具有的優(yōu)勢(shì)，對(duì)本發(fā)明和其它發(fā)明得到的三七總皂苷進(jìn)行了比較。下述編號(hào)為A的產(chǎn)品用申請(qǐng)?zhí)枮?2158727.2的專利文獻(xiàn)中的方法制備；編號(hào)為B的產(chǎn)品用申請(qǐng)?zhí)枮?2158727.2的專利文獻(xiàn)中的方法制備；編號(hào)C的產(chǎn)品用本發(fā)明的制備方法制成。原料為市售的同一批三七主根藥材。三批樣品均由廣東天之嬌藥物開發(fā)有限公司提供。結(jié)果見表2。
表2 不同制備方法提取的三七總皂苷的比較(N＝3)產(chǎn)品 產(chǎn)率(％)純度(％) 色澤
A8.37 91.2白色B9.14 95.3白色C11.3299.2白色由以上數(shù)據(jù)可以看出，本發(fā)明的制備方法無論是三七總皂苷的產(chǎn)率，還是其純度均明顯高于對(duì)比專利文獻(xiàn)中的方法；本發(fā)明的制備方法得到的三七總皂苷的絕對(duì)量和相對(duì)量均較高，說明本發(fā)明的制備方法更加科學(xué)、更加合理、更具有實(shí)用性。
四、制備實(shí)施例以下實(shí)施例旨在進(jìn)一步舉例說明，而不是限制本發(fā)明。在不違背本發(fā)明的精神和原則的前提下，對(duì)發(fā)明個(gè)別技術(shù)步驟進(jìn)行的任何改動(dòng)或改變將落入本發(fā)明權(quán)利要求范圍內(nèi)。
實(shí)施例1將三七莖基(蘆頭、剪口)10kg，粉碎，過60目篩，加10倍量的水，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時(shí)間為50分鐘，振蕩頻率為20kHz，提取4次，合并提取液，以20000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液過已處理好的D101型大孔吸附樹脂柱，先用5倍柱體積的水洗脫，再換用8倍柱體積的75％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，50℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到粉末；將粉末用40倍量的50％乙醇溶解，用色譜柱微粒直徑為5μm的八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的制備型高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離，用60％乙醇溶液洗脫，收集富含三七皂苷成分的洗脫液，50℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到三七總皂苷有效部位1.43kg，得率14.3％。
實(shí)施例2將三七主根10kg，粉碎，過20目篩，加6倍量的水，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時(shí)間為20分鐘，振蕩頻率為80kHz，提取2次，合并提取液，以12000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液過已處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱，先用10倍柱體積的水洗脫，再換用4倍柱體積的95％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，50℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到粉末；將粉末用20倍量的50％乙醇溶解，用色譜柱微粒直徑為15μm的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的制備型高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離，用20％乙醇溶液洗脫，收集富含三七皂苷成分的洗脫液，50℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到三七總皂苷有效部位1.15kg，得率11.5％。
實(shí)施例3將三七支根10kg，粉碎，過40目篩，加8倍量的水，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時(shí)間為40分鐘，振蕩頻率為50kHz，提取3次，合并提取液，以16000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液過已處理好的D101型大孔吸附樹脂柱，先用8倍柱體積的水洗脫，再換用6倍柱體積的85％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，50℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到粉末；將粉末用30倍量的50％乙醇溶解，用色譜柱微粒直徑為10μm的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的制備型高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離，用40％乙醇溶液洗脫，收集富含三七皂苷成分的洗脫液，50℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到三七總皂苷有效部位1.12kg，得率11.2％。
實(shí)施例4將三七葉10kg，粉碎，過40目篩，加9倍量的水，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時(shí)間為30分鐘，振蕩頻率為45kHz，提取4次，合并提取液，以18000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液過已處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱，先用6倍柱體積的水洗脫，再換用7倍柱體積的80％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，50℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到粉末；將粉末用35倍量的50％乙醇溶解，用色譜柱微粒直徑為8μm的八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的制備型高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離，用30％乙醇溶液洗脫，收集富含三七皂苷成分的洗脫液，50℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到三七總皂苷有效部位1.01kg，得率10.1％。
實(shí)施例5將三七莖基(蘆頭、剪口)10kg，粉碎，過20目篩，加7倍量的水，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時(shí)間為45分鐘，振蕩頻率為75kHz，提取2次，合并提取液，以15000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液濃縮為溶液∶藥材為1∶1，用3倍的用水飽和正丁醇萃取3次，合并正丁醇液，50℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到粉末；將粉末用25倍量的50％乙醇溶解，用色譜柱微粒直徑為12μm的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的制備型高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離，用50％乙醇溶液洗脫，收集富含三七皂苷成分的洗脫液，50℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到三七總皂苷有效部位1.46kg，得率14.6％。
實(shí)施例6將三七主根10kg，粉碎，過60目篩，加10倍量的水，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時(shí)間為35分鐘，振蕩頻率為60kHz，提取3次，合并提取液，以17000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液濃縮為溶液∶藥材為1∶1，用0.5倍的用水飽和正丁醇萃取8次，合并正丁醇液，50℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到粉末；將粉末用35倍量的50％乙醇溶解，用色譜柱微粒直徑為6μm的八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的制備型高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離，用35％乙醇溶液洗脫，收集富含三七皂苷成分的洗脫液，50℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到三七總皂苷有效部位1.13kg，得率11.3％。
實(shí)施例7將三七支根10kg，粉碎，過40目篩，加8倍量的水，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時(shí)間為25分鐘，振蕩頻率為30kHz，提取4次，合并提取液，以14000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液濃縮為溶液∶藥材為1∶1，用2倍的用水飽和正丁醇萃取5次，合并正丁醇液，50℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到粉末；將粉末用30倍量的50％乙醇溶解，用色譜柱微粒直徑為9μm的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的制備型高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離，用55％乙醇溶液洗脫，收集富含三七皂苷成分的洗脫液，50℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到三七總皂苷有效部位1.13kg，得率11.3％。
實(shí)施例8將三七葉10kg，粉碎，過60目篩，加9倍量的水，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時(shí)間為40分鐘，振蕩頻率為55kHz，提取3次，合并提取液，以19000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液濃縮為溶液∶藥材為1∶1，用1倍的用水飽和正丁醇萃取6次，合并正丁醇液，50℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到粉末；將粉末用25倍量的50％乙醇溶解，用色譜柱微粒直徑為10μm的八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的制備型高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離，用45％乙醇溶液洗脫，收集富含三七皂苷成分的洗脫液，50℃旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，粉碎，得到三七總皂苷有效部位1.04kg，得率10.4％。
本發(fā)明制備的三七總皂苷不僅可以用于預(yù)防和治療心腦血管疾病，尤其對(duì)腦血管疾病的治療效果最佳，而且可以用于其它出血和淤血性疾病的治療。本發(fā)明制備的三七總皂苷可以制成口服制劑和注射制劑。
權(quán)利要求
1.一種三七總皂苷的制備方法，它是將三七莖基或主根或支根或葉經(jīng)過提取、富集、純化的方法得到三七總皂苷有效部位，其特征在于，制備方法包括以下步驟(1)將上述藥材進(jìn)行超聲振蕩提?。?2)將提取液采用下述a)或b)方法之一對(duì)有效部位進(jìn)行富集；a)將上述提取液過已處理好的非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱，先用5-10倍柱體積的水洗脫，再換用4-8倍柱體積的75％-95％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮，干燥，粉碎，得到粉末；或b)將上述提取液濃縮為溶液∶藥材為1∶1，用0.5-3倍體積的用水飽和正丁醇萃取3-8次，合并正丁醇液，濃縮，干燥，粉碎，得到粉末；(3)將上述粉末用制備型高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行純化；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)為藥材粉末過20-60目篩，加6-10倍量的水，放入超聲提取罐中，進(jìn)行超聲振蕩提取，時(shí)間為20-50分鐘，振蕩頻率為20-100kHz，提取2-4次，合并提取液，以12000-20000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液收集備用；
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)為粉末用20-40倍量的50％乙醇溶解，用制備型高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離，用乙醇溶液洗脫，收集富含三七皂苷成分的洗脫液，濃縮，干燥，粉碎，得到三七總皂苷有效部位。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，三七總皂苷的重量百分含量大于或等于98.5％。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，制備型高效液相色譜系統(tǒng)的色譜柱的填充劑為烷基硅烷鍵合硅膠。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，制備型高效液相色譜系統(tǒng)的色譜柱的填充劑為八烷基硅烷鍵合硅膠或十八烷基硅烷鍵合硅膠。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，制備型高效液相色譜系統(tǒng)的色譜柱的填充劑的微粒直徑為5-15μm。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，乙醇溶液的體積百分比濃度為20％-60％。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的制備方法，其特征在于，濃縮采用旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮技術(shù)，溫度控制在50℃。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種三七總皂苷的制備方法，它是三七莖基或主根或支根或葉經(jīng)過超聲振蕩提取、過大孔吸附樹脂或水飽和正丁醇萃取富集、反相制備型高效液相色譜系統(tǒng)純化的方法獲得，其中的主要活性部位三七總皂苷的純度達(dá)98％以上。本發(fā)明制備的三七總皂苷具有很好的預(yù)防和治療心腦血管疾病的作用。
文檔編號(hào)A61P37/00GK1634970SQ20041009153
公開日2005年7月6日 申請(qǐng)日期2004年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月18日
發(fā)明者張平 申請(qǐng)人:張平