專利名稱：甘氨酸在制藥中的應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及甘氨酸的用途，尤其涉及在制藥領(lǐng)域中的用途。
背景技術(shù)：
甘氨酸是已經(jīng)公開了的一種化合物，本品為氨酸乙酸，其結(jié)構(gòu)式為 分子式為C2H5NO2，白色結(jié)晶性粉末；無臭、味甜。分子量為75.07。在水中溶解，在乙醇或乙醚中幾乎不溶。
該化合物已知可以與多種氨基酸混合而成氨基酸注射液(如11種、14種或17種氨基酸注射液)。用于手術(shù)前后、創(chuàng)傷、燒傷、骨折以及急性低蛋白血癥患者；因肝病引起的組織蛋白的合成和利用紊亂的患者；胃腸道功能失調(diào)引起的蛋白質(zhì)攝取不足所致營養(yǎng)不良患者以及傳染病恢復期等腸道外補充營養(yǎng)的患者(見高濯風等編著.營養(yǎng)藥.臨床藥物實用大全.北京中國醫(yī)藥科技出版社，第一版，1996，722～725)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供甘氨酸的新用途，即在制藥中的新應用。
技術(shù)方案本發(fā)明涉及甘氨酸作為制備治療急性和慢性肝炎的藥中的應用。涉及甘氨酸作為制備治療酒精性脂肪肝疾病的藥中的應用。涉及甘氨酸作為制備治療降低各種肝炎、肝病所伴之血漿腸源性內(nèi)毒素的藥物中的應用。涉及甘氨酸在制備防止肝炎慢性化，即肝炎——脂肪肝——肝纖維化——肝硬化的藥中的應用。涉及甘氨酸作為制備治療各種休克患者所伴之血漿腸源性內(nèi)毒素藥中的應用。
為了更好地理解本發(fā)明的實質(zhì)，下面將用甘氨酸的藥理試驗及結(jié)果來說明其在制藥領(lǐng)域中的新用途。
1、甘氨酸對硫代乙酰胺(TAA)所致大鼠急性肝損傷的影響。用常規(guī)藥理試驗觀察了甘氨酸(灌胃劑量為500mg/100g/d)對大鼠血漿轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、內(nèi)毒素與TNFα水平的影響(表1)并作了組織學觀察。發(fā)現(xiàn)TAA組大鼠肝臟肝小葉中央靜脈周圍肝細胞大面積壞死，并有大量炎細胞浸潤，而經(jīng)甘氨酸治療大鼠肝小葉中央靜脈附近僅有少量肝細胞壞死與炎性浸潤。
表1甘氨酸組與TAA組結(jié)果比較

上述結(jié)果表明，經(jīng)甘氨酸防治大鼠肝組織損傷明顯減輕，反映在血漿轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性明顯下降，這與血漿內(nèi)毒素與TNFα水平下降密切相關(guān)。
2、甘氨酸對TAA所致大鼠肝損傷時腸粘膜及腸血管通透性的影響。用常規(guī)藥理試驗觀察了經(jīng)甘氨酸防治后腸道Evans藍含量為0.96±0.47，而TAA組為2.14±0.64ug/ml，P＜0.05；腸粘膜通透性(δ)為1.23±0.47，而TAA組為1.78±0.51，P＜0.05。此結(jié)果說明TAA在損傷肝組織同時也使腸粘膜屏障受損，致使腸粘膜通透性增加，而甘氨酸可抑制TAA所致的腸粘膜通透性增加。
在觀察甘氨酸防治組腸管與血中組胺含量時，發(fā)現(xiàn)分別為4.59±1.47和3.0±0.55ug/g，而TAA組分別為9.39±3.38和6.95±1.96(ug/g)，經(jīng)統(tǒng)計學處理P＜0.05。此結(jié)果提示甘氨酸是通過降低血與腸組織中組胺含量來抑制腸粘膜通透性的，因而腸內(nèi)之內(nèi)毒素不能被吸收入血。
3、甘氨酸對內(nèi)毒素和TAA所致肝細胞直接損傷作用。按常規(guī)進行肝細胞分離和培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)①內(nèi)毒素(LPS)對肝實質(zhì)細胞有直接損傷作用，可使原代培養(yǎng)的肝細胞損傷而漏出ALT。甘氨酸則可減輕LPS對肝細胞的直接損傷作用；②TAA對肝實質(zhì)細胞有直接損傷作用，可使原代培養(yǎng)的肝細胞損傷而漏出ALT，而甘氨酸對TAA所致的直接損傷無作用。上述結(jié)果提示甘氨酸可能通過直接破壞內(nèi)毒素結(jié)構(gòu)或與內(nèi)毒素結(jié)合使內(nèi)毒素失活而減輕其對肝細胞的損傷。
4、甘氨酸對酒精性肝損傷的保護作用。用高脂膳食+酒精灌胃給大鼠一個月，血漿ALT活性內(nèi)毒素與TNFα水平明顯升高，肝組織與血漿甘油三酯含量增高，而經(jīng)過甘氨酸防治均明顯下降(表2)表2甘氨酸組與酒精組血漿各項指標結(jié)果比較(x±s)

以上結(jié)果表明，甘氨酸可以顯著減輕高脂膳食+酒精而引起的脂肪肝，其肝組織的損傷可能與腸源性內(nèi)毒素、TNFα水平升高有關(guān)。
5、甘氨酸對高脂膳食+酒精所致肝組織LBPmRNA、CD14mRNA及CD14蛋白的影響。應用RT-PCR法及Western blot法對LBP(脂多糖連接蛋白)mRNA、CD14mRNA和CD14蛋白表達水平進行檢測。結(jié)果表明，甘氨酸可使高脂膳食+酒精組大鼠肝組織的LBPmRNA與CD14mRNA表達明顯下調(diào)，CD14蛋白合成減少。此結(jié)果提示甘氨酸可阻斷肝細胞的內(nèi)毒素受體(CD14)，從而使內(nèi)毒素不能發(fā)揮其生物學效應。
6、觀察甘氨酸在CCl4引起肝硬化形成過程中對肝組織表達CD14mRNA和CD14蛋白的影響。應用RT-PCR和Western blot法檢測大鼠肝組織的表達。結(jié)果表明在用含甘氨酸食物喂養(yǎng)而形成的脂肪肝和肝硬化大鼠肝組織CD14mRNA和CD14蛋白表達明顯減弱，在實驗第8周末的表達最弱。證明甘氨酸是肝細胞膜CD14(內(nèi)毒素受體)的阻滯劑，使內(nèi)毒素的生物學效應難以發(fā)揮，故可防止脂肪肝與肝硬化的發(fā)生與發(fā)展。
7、靜脈注射甘氨酸對創(chuàng)傷性休克大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥的影響。用骨鉗夾致左側(cè)股骨中下1/3粉碎性骨折，并在頸總動脈放血，使動脈血壓下降至40mmHg，維持1h，然后在20分內(nèi)回輸全部失的血使其復蘇。分別于0h、6h、12h、24h采血測定血漿ALT、內(nèi)毒素、TNFα.休克復蘇后在0h血漿內(nèi)毒素開始增高，6h達到高峰，12h-24h逐漸下降。經(jīng)注射甘氨酸(150mg/kg)動物的各時間組血漿ALT、內(nèi)毒素與TNFα水平均明顯低于對照組。CD14mRNA、LBP mRNA表達明顯降低。通過硝酸鑭染色用透射電鏡觀察腸道通透性經(jīng)甘氨酸防治也明顯降低。
上述結(jié)果表明，經(jīng)靜脈注射甘氨酸可增強腸道的屏障作用，從而抑制腸粘膜對內(nèi)毒素的吸收，致使血漿腸源性內(nèi)毒素水平下降。由于甘氨酸可阻斷肝細胞膜上內(nèi)毒素受體CD14，故內(nèi)毒素無法發(fā)揮其損傷細胞的生物學效應，使肝細胞損傷明顯減輕，這對搶救休克有重要意義。
8、甘氨酸治療慢性病毒性肝炎的臨床研究。研究對象是在山西醫(yī)科大學第一醫(yī)院傳染科住院病人進行的。分為對照組(24例)，應用甘利欣、門冬氨基酸鉀鎂等治療，甘氨酸治療組(24例)在對照組所用藥物基礎(chǔ)上加用甘氨酸治療?？诜拾彼崮z囊(內(nèi)含0.5g甘氨酸)4個，每日3次，共20天。治療前后采血測定血漿內(nèi)毒素、TNFα、IL-6水平。甘氨酸治療組患者血漿內(nèi)毒素、TNFα、IL-6水平均明顯下降(表3、4、5)肝功能明顯改善(表4)表3甘氨酸對慢肝患者血漿內(nèi)毒素水平的影響(x±s，EU/ml)


從表3可看出，經(jīng)甘氨酸治療后與治療前比較血漿內(nèi)毒素水平明顯下降(P＜0.02)，而對照組幾乎未見差異(P＞0.20)。治療組治療前后的差值與對照組治療前后差值比較，經(jīng)統(tǒng)計學處理P＜0.05。由此可見，甘氨酸具有明顯降低患者血漿內(nèi)毒素水平的作用。
表4甘氨酸治療對患者血漿TNFα水平的影響(x±s，ng/ml)

表5甘氨酸治療對患者血漿IL-6水平的影響(x±s，pg/ml)

內(nèi)毒素激活肝枯否細胞后釋放促炎細胞因子TNFα和IL-6等，這些促炎細胞因子的釋放使得肝臟發(fā)生炎癥反應，并同時發(fā)生肝細胞的變性與壞死。表4、5的結(jié)果表明，經(jīng)甘氨酸治療后隨血漿內(nèi)毒素水平降低伴有TNFα和IL-6水平的下降，故使肝臟炎癥反應減輕或受到控制，有利于肝功能的改善與恢復。
表6甘氨酸治療對患者肝功能的影響


表6表明，經(jīng)甘氨酸治療血漿轉(zhuǎn)氨酶(ALT、AST)活性、總膽紅素水平明顯低于治療前、而前白蛋白(PA)則明顯升高。血漿轉(zhuǎn)氨酶活性反映肝細胞壞死程度，故應稱肝損傷指標。AST長期升高表示病變轉(zhuǎn)為慢性，故甘氨酸降低AST活性是很有價值的。肝功能主要有分泌、合成與解毒功能。血漿膽紅素水平降低反映分泌功能的改善；血漿前白蛋白(PA)水平增高反映肝細胞合成能力的恢復，這對慢性肝炎而言是至關(guān)重要的。
9、甘氨酸對失代償肝硬化患者的療效觀察。研究對象是在山西醫(yī)科大學第一醫(yī)院消化內(nèi)科住院病人20例(多為伴有上消化道出血，肝性腦病患者)進行的。采用配對方法，隨機分為兩組，各10例。一組為常規(guī)治療，即治療對照組；一組為甘氨酸治療組，在常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用甘氨酸。治療時間平均7天(4-10日)。結(jié)果表明，經(jīng)甘氨酸治療后血漿內(nèi)毒素水平明顯下降，統(tǒng)計學處理治療前后內(nèi)毒素水平差異顯著。對照組在治療前后未見內(nèi)毒素水平有明顯差異。根據(jù)臨床觀察患者癥狀隨內(nèi)毒素血癥的減輕也有相應改善。
從以上結(jié)果，可以得出本發(fā)明的優(yōu)點在于(1)本發(fā)明對已知化合物甘氨酸發(fā)掘了新的醫(yī)療用途，開拓了一個新的應用領(lǐng)域。
(2)本發(fā)明的甘氨酸安全無毒、藥理作用強，預示著很好的藥用前景。
(3)本發(fā)明的物質(zhì)原料來源豐富、價廉、未見毒副作用，制備工藝簡單，并可作成口服劑型(沖劑、片劑)、注射劑型等，使用方便。注射液能作肌肉注射，可作靜脈點滴。
(4)本發(fā)明的藥物能有效降低血漿腸源性內(nèi)毒素水平，減輕對肝枯否細胞與血竇內(nèi)皮細胞激活，減少TNFα與IL-6的釋放，致使肝損傷與炎癥反應減輕。這些藥理作用使大多數(shù)伴有腸源性內(nèi)毒互血癥的肝病患者得以治愈，從而有效阻斷肝炎的慢性化(急性肝炎→慢性肝炎→肝硬化→肝癌)發(fā)展的危險性。
(5)本發(fā)明的甘氨酸可使各種休克(如創(chuàng)傷、出血等)所伴之腸源性內(nèi)毒素水平下降，有效改善休克的病情與預后，防止向多器官功能衰竭發(fā)展。
(6)經(jīng)臨床試驗，表明甘氨酸治療急、慢性肝炎、脂肪肝與肝硬化均有顯著療效，且無毒副作用。與同時設(shè)立的對照組相比，結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計學處理，兩者呈顯著性差異，明顯優(yōu)于對照組。說明本發(fā)明的療效顯著，藥理作用強。值得提出的是，當前國內(nèi)外尚無理想降低血中腸源性毒素水平的藥物，故預示著有很好的開發(fā)前景。
具體實施例方式實施例1、甘氨酸在制備治療慢性肝炎的藥中的應用。臨床研究在山西醫(yī)科大學第一醫(yī)院傳染科住院病人中進行的，分為對照組，24例，應用甘利欣、門冬氨基酸基酸鉀鎂治療；甘氨酸治療組，24例，在對照組所用藥物基礎(chǔ)上加用甘氨酸治療，口服甘氨酸膠囊(內(nèi)含0.5g甘氨酸)4粒，每日3次，共服20天。經(jīng)甘氨酸治療后與治療前比較血漿內(nèi)毒素水平明顯下降(P＜0.02)；而對照組幾乎未風變化(P＞0.20)。
權(quán)利要求
1.甘氨酸在制備治療急性和慢性肝炎的藥中的應用。
2.甘氨酸在制備治療酒精性脂肪肝的藥中的應用。
3.甘氨酸在制備降低各種肝炎、肝病所伴之血漿腸源性內(nèi)毒素的藥物中的應用。
4.甘氨酸在制備防止肝炎慢性化，即肝炎→脂肪肝→肝纖維化→肝硬化的藥中的應用。
5.甘氨酸在制備治療各種休克患者所伴之血漿腸源性內(nèi)毒素藥中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及甘氨酸在制藥中的應用。該物質(zhì)具有明顯降低血漿腸源性內(nèi)毒素水平,致使細胞因子TNFα、IL－6分泌減少,血漿轉(zhuǎn)氨酶活性明顯下降,肝損傷明顯減輕,肝功能明顯改善。經(jīng)分子生物學方法研究在國內(nèi)外首次證實本藥可明顯下調(diào)肝組織LBP(脂多糖結(jié)合蛋白)mRNA和CD
文檔編號A61K31/185GK1370525SQ0211002
公開日2002年9月25日 申請日期2002年2月11日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月11日
發(fā)明者韓德五, 克明, 劉近春, 陳璽華, 趙龍鳳, 黃彤, 張巍 申請人:韓德五