一種靈芝多糖高產(chǎn)工程菌株Rmust及其構(gòu)建方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種靈芝多糖高產(chǎn)工程菌株Rmust及其構(gòu)建方法，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCCNO.8258，本發(fā)明提供的靈芝工程菌，是通過選用靈芝強(qiáng)啟動子P-gpd過表達(dá)編碼PGM-葡萄糖磷酸變位酶（PGM）基因，得到高產(chǎn)靈芝多糖靈芝工程菌Rmust；通過搖瓶發(fā)酵實(shí)驗(yàn)表明，該菌在其細(xì)胞生長不受影響的情況下，轉(zhuǎn)化子菌株產(chǎn)靈芝多糖的含量是野生型菌株（WT菌株）含量的提1.6倍，其中1g干菌絲體產(chǎn)靈芝多糖的量(mg/g)由145.9±1.65mg/g提高到236.95±1.28mg/g，因此，本高產(chǎn)菌株可以作為生產(chǎn)靈芝多糖的工程菌株，具有廣泛的應(yīng)用前景。
【專利說明】一種靈芝多糖高產(chǎn)工程菌株Rmust及其構(gòu)建方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于基因工程和代謝工程領(lǐng)域的，具體涉及一種通過基因工程對靈芝代謝途徑中有關(guān)靈芝多糖合成的PGM (葡萄糖磷酸變位酶)基因過表達(dá)的方法，構(gòu)建了一個靈芝多糖的高產(chǎn)工程菌株。
【背景技術(shù)】
[0002]靈芝(Gano derma I u c i dum )是擔(dān)子菌綱,多孔菌科,靈芝屬真菌。靈芝真菌在我國有20多種，包括赤芝，黃芝，紫芝，黑芝，薄蓋靈芝，樹舌等。我國應(yīng)用靈芝作為藥物已有兩千多年的歷史。靈芝對于增強(qiáng)人體免疫力，調(diào)節(jié)血糖，控制血壓，輔助腫瘤放化療，保肝護(hù)肝，促進(jìn)睡眠等方面均具有顯著療效。由于其特殊的要用價值，靈芝的有效成分分析和藥理學(xué)研究已經(jīng)引起了國際上的廣泛關(guān)注，尤其在日本，美國，韓國等國家。目前，靈芝的研究已經(jīng)深入到了分子水平，一些專著相繼出版，從不同的角度介紹了靈芝的生物學(xué)特性、栽培技術(shù)、藥理學(xué)作用及臨床應(yīng)用等情況。
[0003]靈芝多糖是從靈芝中提取的一種新內(nèi)源活性物質(zhì)，其所含的化學(xué)成分能夠顯著提高吞噬細(xì)胞的吞噬能力，增強(qiáng)體液免疫和細(xì)胞免疫功能，還能提高紅細(xì)胞中超氧化物歧化酶活性，對人體具有多種功能。
[0004]PGM (葡萄糖磷酸變位酶)基因是靈芝多糖合成途徑中的一個較為關(guān)鍵的基因，它能使糖原分子的葡萄糖殘基形成的葡萄糖-6-磷酸轉(zhuǎn)變?yōu)槠咸烟?1-磷酸。葡萄糖-6-磷酸是糖酵解或糖原合成的主流中間代謝產(chǎn)物，在細(xì)胞中的代謝比較快，但是只有葡萄糖-1-磷酸才能夠合成多糖，因此PGM對糖原的合成具有重要的作用。靈芝多糖的合成途徑如下所示:
【權(quán)利要求】
1.一種靈芝多糖高產(chǎn)工程菌株Rmust，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCC N0.8258。
2.權(quán)利要求1所述靈芝多糖高產(chǎn)工程菌株Rmust的構(gòu)建方法,其特征在于包括以下步驟: 將目的片段與表達(dá)載體相連得到重組表達(dá)質(zhì)粒，然后將重組表達(dá)質(zhì)粒通過PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體融合的方法將重組表達(dá)質(zhì)粒傳化進(jìn)靈芝中，從而得到高產(chǎn)靈芝多糖的工程菌株；其中所述的目的片段為葡萄糖磷酸變位酶PGM基因，其核苷酸序列如SEQ ID N0:1所不，其編碼的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所不。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述靈芝多糖高產(chǎn)工程菌株Rmust的構(gòu)建方法，其特征在于:所述的表達(dá)載體為PJW-EX`P。
【文檔編號】C12N15/61GK103865814SQ201410076047
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年3月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月4日
【發(fā)明者】徐軍偉, 任夢飛, 紀(jì)森林, 賀宜龍, 周降生 申請人:昆明理工大學(xué)