一種雙功能抗體、其構建方法及雙功能抗體基因工程藥物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種雙功能抗體及其構建方法。該雙功能抗體包括抗體的重鏈恒定區(qū)、抗體的輕鏈恒定區(qū)、以及分別與所抗體的重鏈恒定區(qū)和抗體的輕鏈恒定區(qū)相連接的第一目的蛋白和第二目的蛋白。該雙功能抗體的構建方法包括：分別獲取抗體的重鏈恒定區(qū)基因、抗體的輕鏈恒定區(qū)基因、第一目的基因和第二目的基因；采用表達載體構建包括上述基因的重組載體穿梭質粒；將重組載體穿梭質粒轉染至表達細胞株中進行培養(yǎng)，表達得到雙功能抗體；以及離心收集上清或細胞進行純化后得到雙功能抗體。本發(fā)明的構建方法在基因水平上對抗體分子進行組裝，構建過程針對性強且易于實現(xiàn)。構建得到的雙功能抗體可具有兩個抗原結合部位，從而可同時針對兩個不同抗原。
【專利說明】一種雙功能抗體、其構建方法及雙功能抗體基因工程藥物

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物制藥【技術領域】，并涉及一種重組抗體。更具體地，本發(fā)明涉及一種 包括兩種目的蛋白的雙功能抗體、其構建方法、以及含有該雙功能抗體的基因工程藥物。

【背景技術】
[0002] 天然存在的抗體分子具有相似的結構，即均具有由兩條相同的重鏈和兩條相同的 輕鏈所組成的對稱結構?；谠搶ΨQ結構，可以設計得到類似于天然抗體結構的重組抗體， 即保留重鏈和輕鏈的保守恒定區(qū)結構，而將可變區(qū)替換成目標抗體的分子。此時，與重鏈的 可變區(qū)和和輕鏈的可變區(qū)相連接的兩種不同基因既具有抗體識別的特異性，又能起到不同 抗體雙重功能的作用。雖然目前已經(jīng)提出了設計上述重組抗體的概念，但現(xiàn)有技術中尚未 建立完善的構建該重組抗體的方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明希望解決的技術問題在于，針對現(xiàn)有技術中尚未建立完善的雙功能重組抗 體的構建方法，提供一種易于實現(xiàn)且針對特定目標抗原的雙功能抗體的構建方法。另外，本 發(fā)明也提供采用上述方法得到的雙功能抗體及包含該抗體的基因工程藥物。
[0004] 本發(fā)明希望解決的技術問題通過以下技術方案得以實現(xiàn)：提供一種雙功能抗體的 構建方法，該方法包括以下步驟：
[0005] A:分別獲取抗體的重鏈恒定區(qū)基因、抗體的輕鏈恒定區(qū)基因、第一目的基因和第 -目的基因；
[0006] B:采用表達載體構建包括所述抗體的重鏈恒定區(qū)基因、所述抗體的輕鏈恒定區(qū)基 因、所述第一目的基因和所述第二目的基因的重組載體穿梭質粒；
[0007] C:將步驟B中形成的重組載體穿梭質粒轉染至表達細胞株中進行培養(yǎng)，表達得到 所述雙功能抗體。
[0008] 在上述雙功能抗體的構建方法中，在所述步驟A中，根據(jù)目標抗原決定簇獲取所 述第一目的基因和所述第二目的基因。
[0009] 在上述雙功能抗體的構建方法中，所述步驟A包括：
[0010] 設計所述抗體的重鏈恒定區(qū)基因的引物、所述抗體的輕鏈恒定區(qū)基因的引物、所 述第一目的基因的引物和所述第二目的基因的引物；

【權利要求】
1. 一種雙功能抗體的構建方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟： A :分別獲取抗體的重鏈恒定區(qū)基因、抗體的輕鏈恒定區(qū)基因、第一目的基因和第二目 的基因； B:采用表達載體構建包括所述抗體的重鏈恒定區(qū)基因、所述抗體的輕鏈恒定區(qū)基因、 所述第一目的基因和所述第二目的基因的重組載體穿梭質粒； C :將步驟B中形成的重組載體穿梭質粒轉染至表達細胞株中進行培養(yǎng)，表達得到所述 雙功能抗體。
2. 根據(jù)權利要求1所述的雙功能抗體的構建方法，其特征在于，在所述步驟A中，根據(jù) 目標抗原決定簇獲取所述第一目的基因和所述第二目的基因。
3. 根據(jù)權利要求1或2所述的雙功能抗體的構建方法，其特征在于，所述步驟A包括： 設計所述抗體的重鏈恒定區(qū)基因的引物、所述抗體的輕鏈恒定區(qū)基因的引物、所述第 一目的基因的引物和所述第二目的基因的引物； 引物 1 :5, -CCC AAG CTT CCA AAA CGA CAC CCC CAT CTG-3,； 引物 2 :5, -AAA AGG GAC TCC CCG GTT CAT CTA GGG CGC TTG CCCAAT CAT-3,； 引物 3 :5, -GTC GCG GCC GC ACT GTG GCT GCA CCA TCT GTC-3,； 引物 4 :5, -GAA GAG AAA TAA ATA AAC AAT CAT ACA CTC TCC CCTTTT GAA GCT-3,； 引物 5 :5, -ATG ATT GGG CAA GCG CCC TAG ATG AAC CGG GGAGTC CCT TTT-3,； 引物 6 :5, -AGA GGA TCC CCA GGT GCC ACT ATC CTG GAG-3,； 引物 7 :5, -TTC AAA AGG GGA GAG TGT ATG ATT GTT TAT TTT CTCTTC-3,； 引物 8 :5, -GAA GGTACC CAA GCC CAC AGA TAT TTCCTG-3,； 基于PCR方法，使用引物1和引物2擴增出所述抗體的重鏈恒定區(qū)基因，使用引物3和 引物4擴增出所述抗體的輕鏈恒定區(qū)基因，使用引物5和引物6擴增出所述第一目的基因， 以及使用引物7和引物8擴增出所述第二目的基因。
4. 根據(jù)權利要求1所述的雙功能抗體的構建方法，其特征在于，在步驟B中，所述表達 載體是 PCDNA3. 1/His C、pCDNA5/FRT/T0 TOPO TA、pEGFP-Nl 或 pBudce4. 1。
5. 根據(jù)權利要求1所述的雙功能抗體的構建方法，其特征在于，在步驟C中，所述表達 細胞株為293細胞、AD293細胞或中國倉鼠卵巢細胞。
6. -種雙功能抗體，包括抗體的重鏈恒定區(qū)和抗體的輕鏈恒定區(qū)，其特征在于，所述雙 功能抗體還包括分別與所述抗體的重鏈恒定區(qū)和所述抗體的輕鏈恒定區(qū)相連接的第一目 的蛋白和第二目的蛋白。
7. 根據(jù)權利要求6所述的雙功能抗體，其特征在于，所述抗體的重鏈恒定區(qū)還包括激 活免疫功能的抗體Fc片段。
8. 根據(jù)權利要求6或7所述的雙功能抗體，其特征在于，所述第一目的蛋白為CD4,第 二目的蛋白為CCR5。
9. 一種雙功能抗體基因工程藥物，其特征在于，含有權利要求6-8中任一權利要求的 雙功能抗體。
【文檔編號】C12N15/85GK104342452SQ201310312220
【公開日】2015年2月11日 申請日期:2013年7月23日 優(yōu)先權日:2013年7月23日
【發(fā)明者】易俊波, 周兆平, 蘇慶寧, 買制剛, 章剛, 王玉樹, 雷明軍, 林楓 申請人:深圳大學