專利名稱：一種含益生元的雙歧桿菌微膠囊的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于雙歧桿菌制劑技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種含益生元的雙歧桿菌微膠囊的制備方法。
背景技術(shù)：
近年來的大量研究發(fā)現(xiàn)，雙歧桿菌對人體有重要的生理和保健功能，可抑制腐生菌的生長，改善維生素代謝，防止便秘，降低膽固醇，預(yù)防和治療乳糖消化不良，提高人體免疫機(jī)能，并具有抗癌、抗衰老作用。隨著對雙歧桿菌保健功能研究的不斷深入，各種利用雙歧桿菌活性的藥物和食品也相繼推出。雖然雙歧桿菌作為食品中最受關(guān)注、最安全、也是使用最多的一種益生菌，對人越來越多的保健作用被證實(shí)。但是雙歧桿菌是一種專性厭氧菌，對營養(yǎng)條件要求高，對氧極為敏感，對低PH的抵抗力差，活性保持較困難，因而目前市場上銷售的雙歧桿菌產(chǎn)品液體或粉體制劑活菌數(shù)下降很快，產(chǎn)品的貯存穩(wěn)定性極差，保健功效損失快。如雙歧桿菌液體制劑在幾天內(nèi)活菌數(shù)就會下降一個數(shù)量級，凍干菌粉在一般貯存溫度下也只能保存幾個月。另外，雙歧桿菌要對人體產(chǎn)生有益作用，首先它必須通過胃環(huán)境、十二指腸以大量的存活菌到達(dá)腸道病定殖于腸黏膜 上。但由于雙歧桿菌耐酸、耐膽鹽能力差，雙歧桿菌的活菌數(shù)在此過程中也會大幅度下降。再者，在雙歧桿菌微膠囊的制備過程中也會受到氧氣的影響而導(dǎo)致其活菌數(shù)大量下降。益生元(Prebiotics)是這樣一種物質(zhì)它是一種膳食補(bǔ)充劑,通過選擇性的刺激一種或少數(shù)種菌落中的細(xì)菌的生長與活性而對寄主產(chǎn)生有益的影響從而改善寄主健康的不可被消化的食品成分(Gibson and Roberfroid, 1995)。成功的益生元應(yīng)是在通過上消化道時，大部分不被消化而能被腸道菌群所發(fā)酵的。最重要的是它只是刺激有益菌群的生長，而不是有潛在致病性或腐敗活性的有害細(xì)菌。由于雙歧桿菌和乳酸菌被認(rèn)為對人體有很多有益的影響，所以一般的益生元被假設(shè)認(rèn)為能促進(jìn)此兩種菌數(shù)量的增加或是其活性的增強(qiáng)?？梢源龠M(jìn)(生成促進(jìn))雙歧桿菌的物質(zhì)被認(rèn)為為雙歧因子。益生元主要包括各種寡糖類物質(zhì)(Oligosaccharides)或稱低聚糖(由2 10個分子單糖組成)。更概括的說法是功能性低聚糖。常見的雙歧因子有低聚果糖、低聚異麥芽糖、低聚木糖、菊糖、低聚半乳糖。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決的問題在于提供一種含益生元的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，所制備的雙歧桿菌微膠囊能夠促進(jìn)雙歧桿菌的增殖，有利于提高微膠囊內(nèi)雙歧桿菌的活菌數(shù)。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)一種含益生元的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，包括以下步驟I)將雙歧桿菌的菌懸液和含有益生元的海藻酸鈉溶液按照I :5 20的體積比例混合，充分混均后得到雙歧桿菌膠液；所述的雙歧桿菌的菌懸液是將雙歧桿菌以0. I 5. OX IO11Cfumr1的濃度懸浮在質(zhì)量濃度為O. 85 O. 9%的無菌生理鹽水中；所述的含有益生元的海藻酸鈉溶液中益生元量的質(zhì)量濃度為3 9%，海藻酸鈉的質(zhì)量濃度為I 3% ；2)用壓力噴嘴將雙歧桿菌膠液霧化成液滴后，擠壓入含有乳化劑體積分?jǐn)?shù)為
O.2 1.0%的大豆油中，雙歧桿菌膠液與大豆油的體積比為I :4 7，充分?jǐn)嚢瑁榛? 20min，然后加入質(zhì)量濃度為I 5%的氯化鈣溶液，靜置20min以上；3)待靜置分層后，傾去上層大豆油，離心得到濕膠囊并用生理鹽水充分洗滌，得到含有益生元的雙歧桿菌微膠囊。
所述的雙歧桿菌為兩歧雙歧桿菌、長雙歧桿菌或乳雙歧桿菌中的一種。所述的益生元為水蘇糖、低聚異麥芽糖、低聚木糖、低聚果糖、菊糖、低聚半乳糖中的一種或幾種。所述含有益生元的海藻酸鈉溶液中還含有氯化鈉，其質(zhì)量濃度為O. 85 O. 9%。所述的雙歧桿菌為接種于MRS培養(yǎng)基經(jīng)過增殖培養(yǎng)所獲得的。所述的乳化劑為吐溫-80。所述的雙歧桿菌的菌懸液和含有益生元的海藻酸鈉溶液按照I :8 12的質(zhì)量比例混合。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果本發(fā)明提供的含益生元的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，在制備的雙歧桿菌微膠囊產(chǎn)品中加入了益生元，益生元能夠促進(jìn)雙歧桿菌的增殖，在一定程度上提高了微膠囊內(nèi)雙歧桿菌的活菌數(shù)，在未加入益生元之前每克微膠囊的活菌數(shù)大概在8. OX IO9Cfug'在加入了益生元后其每克膠囊活菌數(shù)明顯提高，可達(dá)到I. IXlOiciCfug'本發(fā)明提供的含益生元的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，在制備雙歧桿菌微膠囊的的過程中將乳化法和擠壓法結(jié)合，采用壓力噴嘴將含有除氧劑的菌膠液霧化成小液滴噴入大豆油中，比傳統(tǒng)的注射器擠壓法省時省力。本發(fā)明提供的含益生元的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，由于所制備的微膠囊含有雙歧桿菌益生元，當(dāng)食用了這種雙歧桿菌微膠囊的產(chǎn)品，當(dāng)微膠囊到達(dá)腸道后，在大量雙歧桿菌在腸道釋放的同時，益生元也會在腸道發(fā)揮其增殖作用，可以使腸道內(nèi)的雙歧桿菌活菌數(shù)迅速上升，從而在真正意義上實(shí)現(xiàn)益生菌的保健功能。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體的實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，所述是對本發(fā)明的解釋而不是限定。實(shí)施例I含益生元的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，包括以下步驟(I)將O. 4g雙歧桿菌凍干菌粉(兩歧雙歧桿菌)接種于18mL MRS液體培養(yǎng)基(購買于青島高科園海博生物技術(shù)有限公司)中，在MRS液體培養(yǎng)基中添加占培養(yǎng)基體積O. 05%的半胱氨酸鹽酸鹽，在37°C培養(yǎng)條件下采用此MRS液體培養(yǎng)基活化三次，每次以5%的接種量轉(zhuǎn)接，其中前兩次均在37°C培養(yǎng)條件下培養(yǎng)20 24h，第三次在37°C培養(yǎng)條件下培養(yǎng)18h，然后離心(4000r，15min)棄去上清液得菌泥，將菌泥洗兩次滌后與O. 85 O. 9%無菌生理鹽水混合配制成濃度為I. OX IO11CfumL-1菌懸液以備使用。(2)配制濃度2%且含益生元量為3%的海藻酸鈉溶液，110°C，滅菌15min。所述的益生元為水蘇糖、低聚異麥芽糖、低聚半乳糖中的一種。(3)將菌懸液和含 有益生元的海藻酸鈉溶液按照I :10的比例混合并在旋渦混合儀上混合均勻得菌膠液。(4)用壓力噴嘴將上述菌膠混合液逐滴滴入大豆油中(含O. 4%的吐溫-80)，菌膠液和大豆油的比例為I :4，用磁力攪拌器攪拌800rpm/min,乳化5min,然后快速加入濃度為
I.5%的氯化鈣溶液，靜置30min。其中壓力噴嘴通過類似于噴霧器的方式將菌膠液霧化成液滴，代替了傳統(tǒng)的注射器擠壓法形成液滴狀，省時省力。(5)傾去上層大豆油，通過離心得到濕膠囊(1000r，5min)，用生理鹽水洗滌3次。實(shí)施例2含益生元的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，包括以下步驟(I)將O. 4g雙歧桿菌凍干菌粉(長雙歧桿菌)接種于18mL MRS液體培養(yǎng)基(購買于青島高科園海博生物技術(shù)有限公司)中，在MRS液體培養(yǎng)基中添加占培養(yǎng)基體積O. 05%的半胱氨酸鹽酸鹽，在37°C培養(yǎng)條件下采用此MRS液體培養(yǎng)基活化三次，每次以5%的接種量轉(zhuǎn)接，其中前兩次均在37°C培養(yǎng)條件下培養(yǎng)20 24h，第三次在37°C培養(yǎng)條件下培養(yǎng)18h，然后離心(4000r，15min)棄去上清液得菌泥，將菌泥洗兩次滌后與O. 85 O. 9%無菌生理鹽水混合配制成濃度為5. OX IO11CfumL-1菌懸液以備使用。(2)配制濃度2%且含益生元量為2%的海藻酸鈉溶液，110°C，滅菌15min。所述的益生元為低聚木糖、低聚果糖、低聚半乳糖中的兩種。(3)將菌懸液和含有益生元的海藻酸鈉溶液按照I :12的比例混合并在旋渦混合儀上混合均勻得菌膠液。(4)用壓力噴嘴將上述菌膠混合液逐滴滴入大豆油中(含O. 4%的吐溫-80)，菌膠液和大豆油的比例為I :7，用磁力攪拌器攪拌800rpm/min,乳化IOmin,然后快速加入濃度為2. 5%的氯化鈣溶液，靜置30min。(5)傾去上層大豆油，通過離心得到濕膠囊(1000r，5min)，用生理鹽水洗滌3次。實(shí)施例3含益生元的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，包括以下步驟(I)將O. 4g雙歧桿菌凍干菌粉(乳雙歧桿菌)接種于18mL MRS液體培養(yǎng)基(購買于青島高科園海博生物技術(shù)有限公司)中，在MRS液體培養(yǎng)基中添加占培養(yǎng)基體積O. 05%的半胱氨酸鹽酸鹽，在37°C培養(yǎng)條件下采用此MRS液體培養(yǎng)基活化三次，每次以5%的接種量轉(zhuǎn)接，其中前兩次均在37°C培養(yǎng)條件下培養(yǎng)20 24h，第三次在37°C培養(yǎng)條件下培養(yǎng)18h，然后離心(4000r，15min)棄去上清液得菌泥，將菌泥洗兩次滌后與O. 85 O. 9%無菌生理鹽水混合配制成濃度為5. OX IOltlCfumL-1菌懸液以備使用。(2)配制濃度2%且含益生元量為3%的海藻酸鈉溶液，110°C，滅菌15min。所述的益生元為水蘇糖、低聚果糖、菊糖、低聚半乳糖中的兩種。(3)將菌懸液和含有益生元的海藻酸鈉溶液按照I :10的比例混合并在旋渦混合儀上混合均勻得菌膠液。
(4)用壓力噴嘴將上述菌膠混合液逐滴滴入大豆油中(含O. 4%的吐溫-80)，菌膠液和大豆油的比例為I :6，用磁力攪拌器攪拌800rpm/min,乳化15min,然后快速加入濃度為2%的氯化鈣溶液，靜置30min。(5)傾去上層大豆油，通過離心得到濕膠囊(1000r，5min)，用生理鹽水洗滌3次。實(shí)施例4含益生元的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，包括以下步驟(I)將O. 4g雙歧桿菌凍干菌粉(長雙歧桿菌)接種于18mL MRS液體培養(yǎng)基(購買于青島高科園海博生物技術(shù)有限公司)中，在MRS液體培養(yǎng)基中添加占培養(yǎng)基體積O. 05%的半胱氨酸鹽酸鹽，在37°C培養(yǎng)條件下采用此MRS液體培養(yǎng)基活化三次，每次以5%的接種量轉(zhuǎn)接，其中前兩次均在37°C培養(yǎng)條件下培養(yǎng)20 24h，第三次在37°C培養(yǎng)條件下培養(yǎng)18h， 然后離心(4000r，15min)棄去上清液得菌泥，將菌泥洗兩次滌后與O. 85 O. 9%無菌生理鹽水混合配制成濃度為I. OX IO11CfumL-1菌懸液以備使用。(2)配制濃度3%且含益生元量為3%的海藻酸鈉溶液，110°C，滅菌15min。所述的益生元為低聚異麥芽糖、低聚木糖、低聚果糖、低聚半乳糖中的一種或幾種。(3)將菌懸液和含有益生元的海藻酸鈉溶液按照I :8的比例混合并在旋渦混合儀上混合均勻得菌膠液。(4)用壓力噴嘴將上述菌膠混合液逐滴滴入大豆油中(含O. 4%的吐溫-80)，菌膠液和大豆油的比例為I :5，用磁力攪拌器攪拌800rpm/min,乳化IOmin,然后快速加入濃度為2%的氯化鈣溶液，靜置30min。(5)傾去上層大豆油，通過離心得到濕膠囊(1000r，5min)，用生理鹽水洗滌3次。
權(quán)利要求
1.一種含益生元的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 1)將雙歧桿菌的菌懸液和含有益生元的海藻酸鈉溶液按照I:5 20的體積比例混合，充分混均后得到雙歧桿菌膠液； 所述的雙歧桿菌的菌懸液是將雙歧桿菌以O(shè). I 5. OX IO11CfumL-1的濃度懸浮在質(zhì)量濃度為O. 85 O. 9%的無菌生理鹽水中； 所述的含有益生元的海藻酸鈉溶液中益生元量的質(zhì)量濃度為3 9%，海藻酸鈉的質(zhì)量濃度為I 3% ； 2)用壓力噴嘴將雙歧桿菌膠液霧化成液滴后，擠壓入含有乳化劑體積分?jǐn)?shù)為O.2 I.0%的大豆油中，雙歧桿菌膠液與大豆油的體積比為I :4 7，充分?jǐn)嚢?，乳? 20min，然后加入質(zhì)量濃度為I 5%的氯化鈣溶液，靜置20min以上； 3)待靜置分層后，傾去上層大豆油，離心得到濕膠囊并用生理鹽水充分洗滌，得到含有益生元的雙歧桿菌微膠囊。
2.如權(quán)利要求I所述的含益生元的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于，所述的雙歧桿菌為兩歧雙歧桿菌、長雙歧桿菌或乳雙歧桿菌中的一種。
3.如權(quán)利要求I所述的含益生元的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于，所述的益生元為水蘇糖、低聚異麥芽糖、低聚木糖、低聚果糖、菊糖、低聚半乳糖中的一種或幾種。
4.如權(quán)利要求I所述的含益生元的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于，所述含有益生元的海藻酸鈉溶液中還含有氯化鈉，其質(zhì)量濃度為O. 85 O. 9%。
5.如權(quán)利要求I所述的含益生元的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于，所述的雙歧桿菌為接種于MRS培養(yǎng)基經(jīng)過增殖培養(yǎng)所獲得的。
6.如權(quán)利要求I所述的含益生元的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于，所述的乳化劑為吐溫-80。
7.如權(quán)利要求I所述的含益生元的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于，所述的雙歧桿菌的菌懸液和含有益生元的海藻酸鈉溶液按照I :8 12的質(zhì)量比例混合。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含益生元的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，用壓力噴嘴將雙歧桿菌膠液霧化成液滴后，擠壓入含有乳化劑體積分?jǐn)?shù)為0.2～1.0%的大豆油中，雙歧桿菌膠液與大豆油的體積比為14～7，充分?jǐn)嚢瑁榛?～20min，然后加入質(zhì)量濃度為1～5%的氯化鈣溶液，靜置20min以上；待靜置分層后，傾去上層大豆油，離心得到濕膠囊并用生理鹽水充分洗滌，得到含有益生元的雙歧桿菌微膠囊。本發(fā)明在制備的雙歧桿菌微膠囊產(chǎn)品中加入了益生元，益生元能夠促進(jìn)雙歧桿菌的增殖，在一定程度上提高了微膠囊內(nèi)雙歧桿菌的活菌數(shù)，加入了益生元后其每克膠囊活菌數(shù)明顯提高，可達(dá)到1010～1011cfug-1。
文檔編號A23L1/09GK102960599SQ20121047049
公開日2013年3月13日 申請日期2012年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月19日
發(fā)明者陳合, 王野, 舒國偉 申請人:陜西科技大學(xué)