專利名稱：一種含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于益生菌飲品技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的制備方法。
背景技術(shù)：
經(jīng)過(guò)眾多專家學(xué)者的不斷探索實(shí)驗(yàn)，已確認(rèn)雙歧桿菌是腸內(nèi)最有益的菌群，雙歧桿菌數(shù)量的減少乃消失是“不健康”狀態(tài)的標(biāo)志，雙歧桿菌是人體健康的晴雨表。雖然雙歧桿菌作為食品中最受關(guān)注、最安全、也是使用最多的一種益生菌，對(duì)人越來(lái)越多的保健作用被證實(shí)。但是雙歧桿菌是一種專性厭氧菌，它對(duì)營(yíng)養(yǎng)條件要求高，對(duì)氧極為敏感，對(duì)低pH的抵抗力差，活性保持較困難，因而目前市場(chǎng)上銷售的雙歧桿菌產(chǎn)品液體或粉體制劑活菌數(shù)下降很快，產(chǎn)品的貯存穩(wěn)定性極差，保健功效損失快。另外，雙歧桿菌要對(duì)人體產(chǎn)生有益作用，首先它必須通過(guò)胃環(huán)境、十二指腸以大量的存活菌到達(dá)腸道病定殖于腸黏膜上。但由于雙歧桿菌耐酸、耐膽鹽能力差，雙歧桿菌的活菌數(shù)在此過(guò)程中也會(huì)大幅度下降。再者，在雙歧桿菌微膠囊的制備過(guò)程中也會(huì)受到氧氣的影響而導(dǎo)致其活菌數(shù)大量下降。因此利用微膠囊技術(shù)最大限度的提高雙歧桿菌在腸道內(nèi)的數(shù)量的研究成為研究的熱點(diǎn)，但是大多數(shù)研究忽略了氧氣對(duì)雙岐桿菌的毒害。除氧劑(FreshPac)又稱為脫氧劑，可用在食品、制藥或其他產(chǎn)品中。通過(guò)使用除氧劑它可以使包裝內(nèi)的含氧量少于O. 1%,并繼續(xù)維持在該水平上。常見的除氧劑有抗壞血酸、抗壞血酸鈉、異抗壞血酸、異抗壞血酸鈉、半胱氨酸鹽酸鹽。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決的問題在于提供一種含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，通過(guò)除氧劑技術(shù)對(duì)雙歧桿菌進(jìn)行保護(hù)，其活菌數(shù)顯著高于不加除氧劑的雙歧桿菌微膠囊。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)一種含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，包括以下步驟I)將雙歧桿菌的菌懸液和海藻酸鈉溶液按照I :5 20的質(zhì)量比例混合，并加入除氧劑至其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為O. 03 O. 09%，充分混均后得到雙歧桿菌膠液；所述的雙歧桿菌的菌懸液是將雙歧桿菌以I. OX IO11Cfumr1的濃度懸浮在質(zhì)量濃度為O. 85 O. 9%的無(wú)菌生理鹽水中；所述的海藻酸鈉溶液中海藻酸鈉的質(zhì)量濃度為I 3% ；2)用壓力噴嘴將雙歧桿菌膠液擠壓入含有乳化劑體積分?jǐn)?shù)為O. 2 I. 0%的大豆油中，雙歧桿菌膠液與大豆油的體積比為I :4 7,充分?jǐn)嚢?乳化5 20min,然后加入質(zhì)量濃度為I 5%的氯化鋇溶液，靜置20min以上；3)待靜置分層后，傾去上層大豆油，離心得到濕膠囊并用生理鹽水充分洗滌，得到含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊。
所述的雙歧桿菌為兩歧雙歧桿菌、長(zhǎng)雙歧桿菌或乳雙歧桿菌中的一種。所述的除氧劑為半胱氨酸鹽酸鹽、抗壞血酸、抗壞血酸鈉、異抗壞血酸、異抗壞血酸鈉中的兩種或兩種以上。所述海藻酸鈉溶液中還含有氯化鈉，其質(zhì)量濃度為O. 85 O. 9%。所述的雙歧桿菌為接種于MRS培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)增殖培養(yǎng)所獲得的。所述的乳化劑為吐溫-80。所述的除氧劑預(yù)先配成濃溶液，并過(guò)濾除菌。 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果本發(fā)明提供的含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，通過(guò)加入了除氧劑，解決了在制備微膠囊過(guò)程中因?yàn)殡p歧桿菌與氧氣的接觸所受到的毒害，加入了除氧劑后其每克膠囊活菌數(shù)明顯提高可達(dá)到IOltl IO11 ;其活菌數(shù)顯著高于不加除氧劑的雙歧桿菌微膠囊。本發(fā)明提供的含益生元的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，在制備雙歧桿菌微膠囊的的過(guò)程中將乳化法和擠壓法結(jié)合，采用壓力噴嘴將含有除氧劑的菌膠液霧化成小液滴噴入大豆油中，比傳統(tǒng)的注射器擠壓法省時(shí)省力。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，所述是對(duì)本發(fā)明的解釋而不是限定。實(shí)施例I含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，包括以下步驟(I)將O. 4g雙歧桿菌凍干菌粉接(兩歧雙歧桿菌)種于18mL MRS液體培養(yǎng)基(購(gòu)買于青島高科園海博生物技術(shù)有限公司)中，在MRS液體培養(yǎng)基中添加占培養(yǎng)基體積O. 05%的半胱氨酸鹽酸鹽，在37°C培養(yǎng)條件下采用此MRS液體培養(yǎng)基活化三次，每次以5%的接種量轉(zhuǎn)接，其中前兩次均在37°C培養(yǎng)條件下培養(yǎng)20 24h，第三次在37°C培養(yǎng)條件下培養(yǎng)18h，然后離心(4000r，15min)棄去上清液得菌泥，將菌泥洗兩次滌后與O. 85 O. 9%無(wú)菌生理鹽水混合配制成濃度為I. OX IO11CfumL-1菌懸液以備使用。(2)配制濃度1%的海藻酸鈉溶液，110°C，滅菌15min。所述的除氧劑為半胱氨酸
鹽酸鹽、抗壞血酸的混合。(3)制備除氧劑，配制除氧劑的濃溶液，過(guò)濾除菌以備使用。(4)將菌懸液和海藻酸鈉溶液按照I :10的比例混合，除氧劑按照菌膠液總量的O. 03%的添加量加入，然后在旋渦混合儀上混合均勻得菌膠液。(5)使用壓力噴嘴，將上述混合液以噴霧的方式噴入大豆油中(含O. 4%的吐溫80),同時(shí)用磁力攪拌器攪拌800rpm,乳化IOmin,然后快速加入濃度為1%的氯化鋇溶液,靜置40min,傾去上層大豆油，離心得到濕膠囊(500rpm, IOmin),用生理鹽水洗漆3次。實(shí)施例2含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，包括以下步驟(I)將O. 4g雙歧桿菌凍干菌粉(長(zhǎng)雙歧桿菌)接種于18mL MRS液體培養(yǎng)基(購(gòu)買于青島高科園海博生物技術(shù)有限公司)中，在MRS液體培養(yǎng)基中添加占培養(yǎng)基體積O. 05%的半胱氨酸鹽酸鹽，在37°C培養(yǎng)條件下采用此MRS液體培養(yǎng)基活化三次，每次以5%的接種量轉(zhuǎn)接，其中前兩次均在37°C培養(yǎng)條件下培養(yǎng)20 24h，第三次在37°C培養(yǎng)條件下培養(yǎng)18h，然后離心(4000r，15min)棄去上清液得菌泥，將菌泥洗兩次滌后與O. 85 O. 9%無(wú)菌生理鹽水混合配制成濃度為I. OX IO11CfumL-1菌懸液以備使用。(2)配制濃度I. 5%的海藻酸鈉溶液，110°C，滅菌15min。(3)制備除氧劑，配制除氧劑的濃溶液，過(guò)濾除菌以備使用。所述的除氧劑為抗壞血酸、異抗壞血酸的混合。 (4)將菌懸液和海藻酸鈉溶液按照I :12的比例混合，除氧劑按照菌膠液總量的O. 05%的添加量加入，然后在旋渦混合儀上混合均勻得菌膠液。(5)使用壓力噴嘴，將上述混合液以噴霧的方式噴入大豆油中(含O. 4%的吐溫80),同時(shí)用磁力攪拌器攪拌800rpm,乳化IOmin,然后快速加入濃度為2%的氯化鋇溶液,靜置40min,傾去上層大豆油，離心得到濕膠囊(500rpm, IOmin),用生理鹽水洗漆3次。實(shí)施例3含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，包括以下步驟(I)將O. 4g雙歧桿菌凍干菌粉(乳雙歧桿菌)接種于18mL MRS液體培養(yǎng)基(購(gòu)買于青島高科園海博生物技術(shù)有限公司)中，在MRS液體培養(yǎng)基中添加占培養(yǎng)基體積O. 05%的半胱氨酸鹽酸鹽，在37°C培養(yǎng)條件下采用此MRS液體培養(yǎng)基活化三次，每次以5%的接種量轉(zhuǎn)接，其中前兩次均在37°C培養(yǎng)條件下培養(yǎng)20 24h，第三次在37°C培養(yǎng)條件下培養(yǎng)18h，然后離心(4000r，15min)棄去上清液得菌泥，將菌泥洗兩次滌后與O. 85 O. 9%無(wú)菌生理鹽水混合配制成濃度為I. OX IO10CfumL-1菌懸液以備使用。(2)配制濃度2%的海藻酸鈉溶液，11 (TC，滅菌15min。(3)制備除氧劑，配制除氧劑的濃溶液，過(guò)濾除菌以備使用。所述的除氧劑為半胱氨酸鹽酸鹽、抗壞血酸鈉、異抗壞血酸鈉中的兩種或三種。(4)將菌懸液和海藻酸鈉溶液按照I :10的比例混合，除氧劑按照菌膠液總量的O. 07%的添加量加入，然后在旋渦混合儀上混合均勻得菌膠液。(5)使用壓力噴嘴，將上述混合液以噴霧的方式噴入大豆油中(含O. 4%的吐溫80),同時(shí)用磁力攪拌器攪拌800rpm,乳化IOmin,然后快速加入濃度為3%的氯化鋇溶液,靜置40min,傾去上層大豆油，離心得到濕膠囊(500rpm, IOmin),用生理鹽水洗漆3次。實(shí)施例4含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，包括以下步驟(I)將O. 4g雙歧桿菌凍干菌粉(長(zhǎng)雙歧桿菌)接種于18mL MRS液體培養(yǎng)基(購(gòu)買于青島高科園海博生物技術(shù)有限公司)中，在MRS液體培養(yǎng)基中添加占培養(yǎng)基體積O. 05%的半胱氨酸鹽酸鹽，在37°C培養(yǎng)條件下采用此MRS液體培養(yǎng)基活化三次，每次以5%的接種量轉(zhuǎn)接，其中前兩次均在37°C培養(yǎng)條件下培養(yǎng)20 24h，第三次在37°C培養(yǎng)條件下培養(yǎng)18h，然后離心(4000r，15min)棄去上清液得菌泥，將菌泥洗兩次滌后與O. 85 O. 9%無(wú)菌生理鹽水混合配制成濃度為I. OX IO11CfumL-1菌懸液以備使用。(2)配制濃度2. 5%的海藻酸鈉溶液，110°C，滅菌15min。(3)制備除氧劑，配制除氧劑的濃溶液，過(guò)濾除菌以備使用。所述的除氧劑為抗壞血酸、抗壞血酸鈉、異抗壞血酸、異抗壞血酸鈉中的兩種或兩種以上。(4)將菌懸液和海藻酸鈉溶液按照I :10的比例混合，除氧劑按照菌膠液總量的O. 09%的添加量加入，然后在旋渦混合儀上混合均勻得菌膠液。(5)使 用壓力噴嘴，將上述混合液以噴霧的方式噴入大豆油中(含O. 4%的吐溫80),同時(shí)用磁力攪拌器攪拌800rpm,乳化IOmin,然后快速加入濃度為3%的氯化鋇溶液,靜置40min,傾去上層大豆油，離心得到濕 膠囊(500rpm, IOmin),用生理鹽水洗漆3次。
權(quán)利要求
1.一種含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 1)將雙歧桿菌的菌懸液和海藻酸鈉溶液按照I:5 20的質(zhì)量比例混合，并加入除氧劑至其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為O. 03 O. 09%,充分混均后得到雙歧桿菌膠液； 所述的雙歧桿菌的菌懸液是將雙歧桿菌以O(shè). I 5. OX IO11CfumL-1的濃度懸浮在質(zhì)量濃度為O. 85 O. 9%的無(wú)菌生理鹽水中； 所述的海藻酸鈉溶液中海藻酸鈉的質(zhì)量濃度為I 3% ； 2)用壓力噴嘴將雙歧桿菌膠液擠壓入含有乳化劑體積分?jǐn)?shù)為O.2 I. 0%的大豆油中，雙歧桿菌膠液與大豆油的體積比為I :4 7，充分?jǐn)嚢?，乳? 20min，然后加入質(zhì)量濃度為I 5%的氯化鋇溶液，靜置20min以上； 3)待靜置分層后，傾去上層大豆油，離心得到濕膠囊并用生理鹽水充分洗滌，得到含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊。
2.如權(quán)利要求I所述的含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于，所述的雙歧桿菌為兩歧雙歧桿菌、長(zhǎng)雙歧桿菌或乳雙歧桿菌中的一種。
3.如權(quán)利要求I所述的含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于，所述的除氧劑為半胱氨酸鹽酸鹽、抗壞血酸、抗壞血酸鈉、異抗壞血酸、異抗壞血酸鈉中的兩種或兩 種以上。
4.如權(quán)利要求I所述的含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于，所述海藻酸鈉溶液中還含有氯化鈉，其質(zhì)量濃度為O. 85 O. 9%。
5.如權(quán)利要求I所述的含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于，所述的雙歧桿菌為接種于MRS培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)增殖培養(yǎng)所獲得的。
6.如權(quán)利要求I所述的含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于，所述的乳化劑為吐溫-80。
7.如權(quán)利要求I所述的含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于，所述的除氧劑預(yù)先配成濃溶液，并過(guò)濾除菌。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，用壓力噴嘴將雙歧桿菌膠液擠壓入含有乳化劑體積分?jǐn)?shù)為0.2～1.0%的大豆油中，雙歧桿菌膠液與大豆油的體積比為1∶4～7，充分?jǐn)嚢?，乳?～20min，然后加入質(zhì)量濃度為1～5%的氯化鋇溶液，靜置20min以上；待靜置分層后，傾去上層大豆油，離心得到濕膠囊并用生理鹽水充分洗滌，得到含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊。本發(fā)明通過(guò)加入了除氧劑，解決了在制備微膠囊過(guò)程中因?yàn)殡p歧桿菌與氧氣的接觸所受到的毒害，加入了除氧劑后其每克膠囊活菌數(shù)明顯提高可達(dá)到1010～1011cfug-1；其活菌數(shù)顯著高于不加除氧劑的雙歧桿菌微膠囊。
文檔編號(hào)A23L1/29GK102960721SQ20121047049
公開日2013年3月13日 申請(qǐng)日期2012年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月19日
發(fā)明者陳合, 王野, 舒國(guó)偉 申請(qǐng)人:陜西科技大學(xué)